Pemeriksaan Jenis Alel Tripsin Inhibitor Kunitz pada Kedelai dengan Menggunakan Metode Elektroforesis Gel Poliakrilamid Lempengan

(1)

t i q l t i . Juhi 1994. hlm. 18-20 ISSN 0854-8587

Pemeriksaan

Jenis

Ale1

Tripsin

Inhibitor Kunitz

pada

Kedelai

dengan

~ e n ~ ~ u n a k a n

Metode

Elektroforesis

Gel Poliakrilarnid

Lempengan

BRIGITA JANSEN. MI~AHUDIN*, UTUT WIDYASTUTI. DAN MUHAMMAD JUSUF

Juruson Biulngi FMlPA IPB, / I . Raw rr Pajajaan, Bugor 16144

Ditzrimr 16 Mei 1994/Disetujui 12 Juni 1994

Trypsin inhibitor Kunitz protein found in soybean seed is a main antinutrition and inhibit the

animal

growth

if

used

as animal

feed

in raw condition.

This

protein

can

be

dirnimted

by

heating or by creating soybean variety without trypsin inhibitor through plant breeding. Trypsin inhibitor Kunitz protein in

soybean

seeds

controled by

one

_gene, _four_alleles. _Based_on

electroforegr~m

of

trypsin

inhibitor

Kunitz

dele

types from

35

soybean

accesiorrs,

consisted

of

11 local varieties, 14 introduced varieties f m Japan

and

10

mutants,

them are no t,

gem-

$ 4

tipe which indicate protein trypsin inhibitor and

Ti

,

but

32

accesions contain

Ti

and 3

aecsiom

contain

Ti,

(eomistd

of

2

introduced varieties

SP-07

and

JP-20,

and

1

mutan8m-28). I . r V ?

B a d

on electrophoretic

data,

alleles

Ti

,

Ti

b. Pnd

Ti

t had d a t i v e mobility on 0.88, 0.84, and

0.94.

PENDAHULUAN

Clulc et at.. 1970; Hymowitz. 1973; Orf dan Hymowitz.

Kdalai (Glycinr _- m a

(La)

Merrill) selrin dikonsumsi _1a70\ oleh manusir. jug. dikenal scbagri haban pkan L a m a

memiliki kandungm protein ymg cukup tinggi. yritu sampai 38% (Maynard Jan

Looali.

1956; Aykroyd

d m

Doughty, 1964). Namun, kendala yaag memhrtasi pggunaan k d e l i i rrchagai pakan ialah perlunya pro.ses

pemanasan lrehelum dihcrikan kepadr ternak. Hal ini tidak efieien karunr dapat menaikkan biayr produksi

I * I I).

Dengaa mengetahui jenis atel protein SBTI-A2 yaag

lerd.plt

d.lun

kedelai. d a senurgkairn kegiatan

pemu-

limn dapat dilakukan dcngan t u j u n untuk memperoleh

t a ~ m u r ymp ti& menghrurilku, protein t w i n inhibitor kunirz. agar para peternrk dapat menygunakan biji

k 4 . i

meatah

sebgai pakm t e d .

temak. Prows pcmcrnasan dipdr1uk.n untuk rnanghilang- _{BAHAN DAN}

METODE

k.n pengamh protein inhibitor tripsin ymg twdy#t pwtr

biji kdslai mentah. Pmtein tersehut diketahut lebagai

fiktor mtinutrini (Eldridgc rt nl.. 1966).

Protoin u t a m &ri inhibitor tripsin kedclai &I& pro- tein SBTI-A2 yang bcrhalsil Jikristalkan oleh Kunitz (1945) rehingga dikenal uebagai tripsin inhibitor kunir:.

Pewarisan protein ini dikzndalikan oleh srutu ristem gen iungg~l multi ale1 yrng hamifat

k d o m i m n .

Ale1 yang

mcn~~~tulrur jenis protein ttlpJin inhibitor k u ~ i t z di-i

dcngan T i

,

T i , dan Ti

.

Selrin itu jug. tehpat ale1 t i

yang rereGf.

&n

dalamCkcrdun homotigot tidak m a g -

harilkan t r i p i n inhibitor kvnirz (Sinyh er al.. 1969; Orf

dm Hymowitz. 1979). Ale1 t i meruprkan ruatu mutan

huil mutui ~ b a h k c ~ g k a . Jofuku et al. (1989) mcnun- jukkan mutari tarjadi pad. t i y a nukleotida dalam r u a r

p o n y d i antittipin kunitz yaitu

+

48 1.

+

486. J.n

+

487. Dungan Jitcmukan ale1 t i maka dimungkinkan untuk

J i h t u k w t u varietm kalciai t ~ p mtitripain kunitt ldcntifikawi jcnir ale1 y m g terdapat Jalarn hiji kdclai

& p t dillkukrn Jcngur m g p u r u l r l n m d d e elektrofon-

* u d m met(& ini

sis gcl poli&rilrmiJ. Dargur

ale1 rripsin inhibitor kuttirz di tandai dcngan rdanyr pita

protcin yang memiliki keceputan mlgrmsi yrng k r h e J a

untuk maring-maning rlcl;

drn

untuk ale1 hamozipot

reserif tidak Jikntuk pita protein (Stnyh ct nl.. 1969;

IBenul~s untuk Kc~rcsplndcnsl

&ham.

Probin

rriprin inhibitor kunitz diekstmkoi &ri hiji kedslai yang bsr.wl J a r i kolekri PAU Biotaknologi.

IPB yurg t d i r i atmi i t nomor v a r i ~ . 14 nomor intro- duksi drri Jepanp, dan 10 nomor mutan- hasil radiaui

0 a h . I 1). Sebagai kantrol digunakan 5 nomor ksclelai.

yaitu varictrs Harosoy dan Williams untuk ale1 T i

.

Jefferson untuk ale1 T i b

,

Huk tae untuk r i e l T i c

.

d&

Kunitz

unhrlt

ale1

ti.

Ehtmksi Rottin. Ekstraksi protein menggunakan teknik Hymowitz Jan Hadlay (1972) dengan kberapa

modifikasi. Sebanyak 0. I g tepung

kedelri

yang krrarl

Jlri biji yurg diburng kulit bijinyr diampur dengan I

ml

Irnrtan

penyangga

t r i s

HCI

pH

8.1 ( t r i g 0.092

M.

CaCI

0.023 M) dan 0.5

ml

sukrosa 40% (b/v) di atas

bak

er!

Campuran torrebut relrnjutnyr disent r i fugaai dcngan

k s c g r t a n 6500 rpm mlama lima menit p d a .uhu kamrr. Supernatan y m g tcrhentuk diaimpan pad. ruhu 4-8°C J.n d i untuk elcktrofomsir. ~ ~

Pcmisahan Protein. Pemisahrn protein dilakukan

h g m

tdtnik

eldctmfonais m c n ~ a n

gel

p l i l r i l a -

mid t i p lcmpngmn vertikal, rirrtam kontinu dengan konscatrasi gel 10%

.

Lempengrn gel krukuran 20 cm x

IS

cm

r

1

mm.

Untuk penymgga clcktrcdc digunakm

larutan trir-glirina pH 8.3. Setirp luhrny contoh J i i s i J c n p m 4 0 p l campuran

yany

terdiri Jari SO rl larutan contoh dm' 10 Gwrrnr trndr hiru hromofcnol 0.02 9C

(htv).

Pnms

clcktmfon=*is hcrlangsung

yJ.

suhu 2O"C

(2)

(3)