BAB 3
METODE PENELITIAN
3.1. Ruang Lingkup Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian di bidang ilmu penyakit saraf dan genetika
3.2. Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian dilakukan di RSUP Dr. Kariadi Semarang dan Laboratorium Biologi Molekuler Universitas Gajah Mada Yogyakarta mulai bulan April sampai dengan Juni 2012.
3.3. Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian observasional belah lintang / Cross Sectional.
Bagan 3. Rancangan penelitian
Pasca Stroke Iskemik
Genotip ApoE є4
Genotip ApoE Non є4
Skor NIHSS Ringan Skor NIHSS Sedang-Berat Skor NIHSS Ringan Skor NIHSS Sedang-Berat
3.4. Populasi dan Subyek Penelitian 3.4.1. Populasi target
Populasi target adalah pasien pasca stroke iskemik. 1.4.2. Populasi terjangkau
Populasi terjangkau adalah pasien pasca stroke iskemik lebih dari tiga bulan setelah onset serangan yang kontrol ke klinik saraf RSUP Dr. Kariadi Semarang.
3.4.3. Subyek penelitian
Subyek adalah pasien pasca stroke iskemik yang kontrol ke klinik saraf RSUP Dr. Kariadi Semarang yang memenuhi kriteria inklusi. 3.4.3.1. Kriteria inklusi
1. Pasien laki-laki dan perempuan pasca stroke iskemik yang dibuktikan dengan pemeriksaan klinis neurologis, Skor Siriraj (< -1) dan atau CT Scan otak yang dilakukan saat pasien dirawat di RSUP Dr Kariadi.
2. Pasca stroke iskemik onset lebih dari 3 bulan.
3. Pasien tetap mendapatkan obat untuk pengendalian faktor risiko stroke.
4. Pasien setuju untuk diikutsertakan dalam penelitian dan menandatangani surat informed consent.
3.4.3.2. Kriteria eksklusi 1. Pasien stroke ulang
3. Pasien dengan ataksia episodik
3.4.4. Cara pemilihan subyek penelitian
Pemilihan subyek penelitian dilakukan secara konsekutif, yaitu berdasarkan kedatangan penderita untuk dirawat di RSUP Dr. Kariadi Semarang. Penderita yang memenuhi kriteria penelitian digunakan sebagai subyek penelitian.
3.4.5. Besar Sampel
Adapun dasar penentuan besar sampel dihitung dengan formulasi : n = Zα2 PQ / d2
Dimana Q = ( 1 – P ) n : Besar sampel
Zα : Tingkat kepercayaan 95% = 1,96
P : Perkiraan proporsi populasi (16%) = 0,16
d : Tingkat kesalahan yang diperbolehkan(0,15),power penelitian 85%. Berdasarkan rumus tersebut diatas, diperoleh: 23 subyek penelitian.62 3.5. Identifikasi variabel 3.5.1. Variabel bebas Genotip ApoE 1.5.2. Variabel tergantung Skor NIHSS
3.5.3. Variabel perancu Usia Jenis kelamin Jumlah infark Lokasi infark 3.6. Definisi operasional Tabel 3. Definisi operasional
No. Variabel Batasan operasional Instrumen Skala
1. Genotip ApoE
Terdapat enam genotip gen ApoE, yaitu є2/є 2, є3/є3, є4/є4, є4/3, є4/2 ,є3/є2, yang dikelompokkan menjadi :
Genotip carrier є4 yaitu : є4/є4, є4/3, dan є4/2 Genotip carrier non є4 yaitu : є2/є 2, є3/є3 dan є3/є2 Diperiksa menggunakan teknik PCR-RFLP (terlampir) dengan alat pemeriksaan, dilakukan oleh tim laboratorium dari Laboratorium Biologi Molekuler FK UGM Nominal 2. Skor NIHSS
Skala yang digunakan untuk mengukur defisit neurologis, terdiri dari 13 item (lampiran)
Jumlah skor 0 – 3: Ringan Jumlah skor ≥4 : Sedang- Berat
Kuesioner Nominal
3. Lokasi
infark
Lokasi infark adalah kematian jaringan otak yang ditegakkan melalui CT Scan Kepala, terdiri ; •Korteks yaitu : lobus frontalis, lobus parietalis,
lobus temporal, lobus oksipital
•Subkorteks yaitu kapsula eksterna dan interna, ganglia basalis, talamus,globus palidus,nukleus kaudatus, nukleus lentiformis
•Campuran : korteks dan subkorteks
CT Scan kepala Nominal
4. Jumlah infark
Jumlah lesi adalah banyaknya gambaran lesi infark didaerah otak yang ditegakkan dengan CT Scan Kepala, terdiri :
•Tidak ada lesi •Lesi tunggal •Lesi multipel
CT Scan kepala Ordinal
Tekanan darah
Gula darah
Merokok
5.
6.
Jenis kelamin
Usia
Jenis kelamin adalah jenis kelamin penderita saat penelitian berdasarkan pengamatan dan kartu identitas penderita (KTP, SIM). Jenis kelamin ada dua: pria dan wanita
Usia adalah usia penderita saat penelitian dihitung berdasarkan tanggal lahir seperti yang tercantum pada catatan medik. Usia dinyatakan dalam tahun penuh Kuesioner KTP/SIM Catatan medik pasien Kuesioner Nominal Rasio 7. 8. 9. 10. Tekanan darah Gula darah Merokok Profil lipid darah
Tekanan darah (TD) tinggi ditandai dengan TD sistolik ≥ 140 mmHg dan atau diastolik ≥90 mmHg. Dan atau terdapat retinopati hipertensif
dan atau terdapat riwayat hipertensi yang dinyatakan oleh penderita atau keluarga serta mendapat obat antihipertensi
Kenaikan kadar gula darah (GD) yang ditandai dengan:
- GD puasa ≥126 mg/dl dan atau
-GD 2 jam post prandial ≥ 200 mg/dl dan atau -HbA1c ≥7 dan atau
-Riwayat menderita DM yang dinyatakan oleh penderita atau keluarga, serta mendapat terapi DM dan atau
-Adanya retinopati diabetik
Berdasarkan anamnesis, apakah subyek pernah mempunyai kebiasaan merokok
Profil lipid darah diperiksa setelah penderita puasa 6-8 jam.
Profil lipid darah abnormal ditandai dengan kadar kolesterol total > 200 mg/dl dan atau trigliserida > 150 mg/dl dan atau kolesterol LDL > 130 mg/dl dan atau kolesterol HDL < 40 mg/dl dan atau riwayat abnormalitas profil lipid darah
Manometer air raksa Catatan medik Kuesioner Alat diagnostik laboratorium di instalasi patologi klinik RSUP Dr. Kariadi
Hasil dibaca oleh satu orang dokter spesialis patologi klinik Catatan medik Kuesioner Kuesioner Alat diagnostik laboratorium di instalasi patologi klinik RSUP Dr. Kariadi
Hasil dibaca oleh satu orang dokter spesialis patologi klinik Catatan medik Kuesioner Rasio Nominal Nominal Nominal
3.7. Cara pengumpulan data 3.7.1. Data yang dikumpulkan
Data primer diperoleh dari seluruh penderita pasca stroke iskemik dengan beberapa karakter menggunakan kuesioner yang terdiri dari data: usia, jenis kelamin, pendidikan, tekanan darah, denyut nadi per menit, frekuensi pernafasan per menit, suhu tubuh, kadar gula darah, kadar lipid darah, letak dan jumlah infark. Yang diperiksa adalah:
1. Tekanan darah diukur menggunakan manometer air raksa merek Nova Riester.
2. Denyut nadi dan frekuensi pernafasan dihitung menggunakan jam. 3. Suhu tubuh diukur menggunakan termometer air raksa.
4. Lokasi infark diketahui dengan menggunakan CT scan merek Siemens yang terdapat di bagian Radiologi RSUP Dr. Kariadi dan dibaca oleh dokter Spesialis Radiologi.
5. Dilakukan pemeriksaan laboratorium darah rutin dan faktor risiko lain: kadar lipid darah, gula darah puasa dan gula darah 2 jam post prandial, HbA1C
6. Dilakukan pemeriksaan status neurologis dengan menggunakan skor NIHSS
3.7.2. Cara kerja
Terhadap seluruh penderita yang masuk dalam kriteria inklusi dilakukan anamnesis baik secara (autoanamnesis), dan alloanamnesis, pemeriksaan fisik, pemeriksaan neurologis menggunakan skor NIHSS,
pemeriksaan laboratorium darah rutin, gula darah sewaktu, gula darah puasa dan gula darah 2 jam PP, kolesterol total, kolesterol LDL, kolesterol HDL, trigliserida, serta pengambilan sampel darah vena untuk pemeriksaan genotip alel gen ApoE dengan teknik polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP).63,64 Selanjutnya dilakukan pencatatan data dan faktor risiko.
3.8. Alur penelitian
Bagan 4. Alur penelitian
Penderita pasca stroke iskemik yang memenuhi kriteria inklusi
Anamnesis (auto dan alloanamnesis) dan hasil CT Scan Kepala
Pemeriksaan darah untuk genotip gen ApoE dan faktor risiko Pemeriksaan fisik, pemeriksaan neurologi
Analisis data dan laporan penelitian Status Neurologis ( NIHSS )
3.9. Analisis data
Pengumpulan data dilakukan secara manual dengan menggunakan kuesioner penelitian yang telah disediakan. Terhadap data yang telah dikumpulkan, dilakukan cleaning, coding, dan tabulasi data, lalu dimasukkan ke dalam komputer. Hasil disajikan dalam bentuk tabel maupun grafik. Analisis univariat untuk melihat deskripsi seluruh data penelitian. Analisis bivariat untuk menguji hubungan genotip gen ApoE dengan skor NIHSS dilakukan uji Chi-square atau uji Fisher’s Exact dengan tingkat kepercayaan 95%. Data variabel dari faktor-faktor dengan distribusi normal yaitu HbA1C, Kolesterol, Trigliserid, LDL dan HDL diuji menggunakan uji t tidak berpasangan. Data variabel distribusi tidak normal yaitu tekanan darah sistolik, diastolik, Gula darah puasa dan gula darah 2 jam PP diuji menggunakan uji Mann-Whitney. Korelasi antara faktor-faktor risiko tersebut dengan skor NIHSS dianalisis menggunakan uji korelasi Pearson dan uji Spearman’s rho . Penyajian dan analisis dilakukan dengan komputer menggunakan program pengolah data statistik. Nilai p dianggap bermakna apabila < 0,05.
3.10. Etika penelitian
Penelitian ini merupakan bagian dari penelitian “Asosiasi Genotip Gen APOE dengan Profil Lipid dan Ketebalan Tunika Intima-Media Arteri Karotis Interna pada Pasien Pasca Stroke Iskemik” yang telah mendapat ethical clearance dari Komisi Etik Fakultas Kedokteran UNDIP/RSUP Dr. Kariadi Semarang No.005/EC/FK/RSDK/2011 tanggal 17 Januari 2011.
Kesediaan pasien atau keluarga pasien untuk diikutsertakan dalam penelitian dilakukan secara tertulis (informed consent). Sebelumnya diberikan penjelasan mengenai tujuan dan manfaat penelitian.
Seluruh biaya yang berhubungan dengan penelitian merupakan tanggung jawab peneliti. Data identitas pasien akan dirahasiakan dan tidak dipublikasikan tanpa seijin pasien.
