Sampel basah. Dikeringkan dan dihaluskan. Disaring

Lampiran 1 Diagram alir penelitian

Sampel basah

Dikeringkan dan dihaluskan

Ekstrak air

Serbuk kering

Determinasi

Kadar air & kadar abu Maserasi dengan n-heksana

Disaring Ekstrak n-heksana Residu Ekstrak etilasetat Ekstrak metanol Residu

Maserasi dengan etilasetat

Disaring Disaring Disaring

Residu

Maserasi dengan metanol

Residu

Ekstrak terbaik

Maserasi dengan air

Rendemen, total penol, uji fitokimia, uji akfivitas antioksidan & inhibitor α- glukosidase

Diuapkan

Diuapkan

Diuapkan

Lampiran 1 (lanjutan)

Rendemen

Uji aktivitas antioksidan

Uji aktivitas antioksidan

Rendemen

Uji fitokimia Ekstrak teraktif

Pemilihan eluen terbaik Fraksinasi dengan romatografi kolom

Fraksi A Fraksi B Fraksi C _{Fraksi nx}

Fraksi teraktif

Fraksinasi dengan KLTP

Identifikasi senyawa (UV-VIS, IR)

Uji akfivitas inhibitor α-glukosidase

Inhibitor enzimα-glukosidase Fraksi Bx

Fraksi Ax _{Fraksi Cx Fraksi n}

Lampiran 3 Hasil penentuan rendemen ekstrak kasar No Ekstrak Bobot awal

(g) Bobot ekstrak (g) Kadar air (%) Rendemen (%) 1 n-heksan 15,3637 9,59 1,7866 2 Etil asetat 951,15 22,1139 2,5716 3 Metanol 36,3187 4,2234 4 Air 42,2086 4,9083 Contoh Perhitungan:

Rendemen Bobot ekstrak

Bobot kering 1 kadar air X 100% Rendemen 15,3637g

951,1537g 1 0,0959 X 100% Rendemen 15,3637g

859,9381 X 100% 1,7866%

Lampiran 4 Penentuan total fenol

Sampel Ulangan Absorban Total fenol mg asam galat/ 100 g ekstrak Ekstrak n-heksana 1 0,334 38,7500 2 0,335 3 0,335 Rata-rata 0,335 Ekstrak etilasetat 1 1,505 184,9125 2 1,505 3 1,503 Rata-rata 1,5043 Ekstrak metanol 1 3,068 375,5375 2 3,01 3 3,01 Rata-rata 3,0293 Ekstrak Air 1 3,612 460,9125 2 3,612 3 3,913 Rata-rata 3,712 Contoh perhitungan: Y = 0,008x + 0,025 0,335 = 0,008x + 0,025

X = 38,7500, jadi total fenol = 38,7500 mg asam galat /100 g ekstrak y = 0,008x + 0,025 R² = 0,995 0 0.5 1 1.5 0 50 100 150 Absorban Konsentrasi (ppm)

Kurva standar (asam galat)

Series1

Lampiran 5 Contoh perhitungan IC50 ekstrak kasar buah andaliman untuk uji

aktivitas antioksidan dan inhibitor α-glukosidase 1. Antioksidan

% Inhibisi Abs. blanko Abs. sampel

Abs. blanko x 100% % Inhibisi 0,871 0,165 0,871 x 100% % Inhibisi 81,0563 Contoh perhitungan IC50 : Y= 0,087x + 15,99 50= 0,087x + 15,99 X = 390,9195 ppm y = 0,087x + 15,99 R² = 0,950 0 20 40 60 80 100 0 200 400 600 800 1000 % Inhibisi Konsentrasi (ppm)

Ekstrak metanol

Series1 Linear (Series1) Konsentrasi (ppm) Abs. sampel % Inhibisi 800 0,165 81,0563 700 0,2 77,0379 600 0,236 72,9047 500 0,329 62,2273 400 0,374 57,0609 300 0,517 40,6429 200 0,622 28,5878 blanko 0,871 IC50(ppm) 390,92

Lampiran 5 (lanjutan) 2. Inhibitor α-glukosidase Konsentrasi (%) Ekstrak metanol Abs (S0) S1 S1-S0 % Inhibisi U1 U2 U1 U2 U1 U2 1 1,349 1,736 1,695 0,387 0,346 87,1981 88,5544 0,5 0,784 1,224 1,222 0,44 0,438 85,4449 85,5111 0,25 0,435 0,976 0,993 0,541 0,558 82,1039 81,5415 0,125 0,281 1,082 1,128 0,801 0,847 73,5031 71,9815 0,0625 0,181 1,526 1,565 1,345 1,384 55,5078 54,2177 0,0313 0,158 1,744 1,804 1,586 1,646 47,5356 45,5508 Blanko 0,093 3,266 2,966 3,173 2,873 Rerata blanko = 3,023 Rerata IC50 = 0,0323 %

Keterangan : S1= campuran dengan penambahan enzim S0= campuran tanpa penambahan enzim

Contoh Perhitungan: % Inhibisi 3,023 0,387 3,023 x 100% % Inhibisi 87,1981% Y = 12,23 ln(x) + 93,08 50 = 12,23 ln(x) + 93,08 Ln(x) = -3,5225 X = anti ln (-3,5225) = 0,0295 Jadi IC50 rata-rata , , 0,0323 Jadi IC50 rata-rata = 0,0323 % y = 12,23ln(x) + 93,08 R² = 0,907 y = 13,13ln(x) + 93,97 R² = 0,928 0 50 100 0 0.5 1 1.5 % Inhibisi Konsentrasi (%)

Ekstrak metanol

Series1 series 2 Log. (Series1) Log. (series 2)

Lampiran 6 Nilai Rf setiap tabung hasil fraksinasi ekstrak metanol dengan kromatografi kolom Tabung Jlh spot Jarak spot(cm) Jarak eluen (cm) Rf Fraksi Warna 1-31 1 8 8.3 0.93 A Hijau muda 32-45 1 4.5 0.52 B Hijau tua 46-150 1 2.5 0.29 C Hijau 151-185 1 2 0.23 D Coklat 186-238 2 1;0.6 0.12; 0.07 E Kuning 239-358 1 0.3 0.035 F Coklat muda Contoh perhitungan:

Jarak tempuh spot dari garis awal Jarak tempuh eluen dari garis awal

8 cm 8.6 cm 0.93

Lampiran 7 Nilai Rf dan penentuan rendemen setiap fraksi hasil penggabungan setiap tabung dari fraksinasi dengan kromatografi kolom

a. Nilai Rf Fraksi Jumlah spot Jarak spot(cm) Jarak eluen (cm) Rf Warna A 1 6,5 8.3 0,8072 Hijau muda B 2 1,6; 4 0,1928; 0,4819 Hijau tua C 2 1,6; 3,1 0,1928; 0,3855 Hijau D 2 0,6; 1,7 0,0723; 0,3855 Coklat E 1 0,6 0,0723 Kuning F 1 0 0 Coklat muda

b. Contoh perhitungan rendemen fraksi hasil fraksinasi dengan kolom

Fraksi Bobot (g) Bobot ekstrak (g) Rendemen (%) A 0.5274 8.6071 6,1275 B 1.0557 12,2655 C 0.4724 5,4885 D 2.3276 27,0428 E 0.6426 7,4659 F 0.8785 10,2067 Contoh perhitungan:

Rendemen Bobot fraksi g Bobot ekstrak g Rendemen 0.5274 g

8.6071 g x 100% Rendemen 6.1275 %

Lampiran 8 Contoh perhitungan IC50 fraksi hasil fraksinasi ekstrak terbaik

dengan kromatografi kolom untuk uji aktivitas antioksidan dan inhibitor α-glukosidase. a. Antioksidan % Inhibisi 0,56 0,121 0,56 x 100 % %Inhibisi 78,3929 Y = 25,43 Ln(x) – 120,6 Ln x 6,7 x anti Ln 6,7 812,4 ppm Jadi IC50 = 812,4 ppm y = 32,80ln(x) - 150,0 R² = 0,910 -100 -50 0 50 100 0 200 400 600 800 1000 % Inhibisi Konsentrasi (ppm) Series1 Log. (Series1) Konsentrasi (ppm) Fraksi E Absorban % Inhibisi 800 0,121 78,3929 700 0,137 75,5357 600 0,171 69,4643 500 0,266 52,5 400 0,316 43,5714 300 0,498 11,0714 200 0,473 15,5357 100 0,553 1,25 50 0,72 -28,5714 25 0,722 -28,9286 blanko 0,56    IC50 444,7716 ppm

Lampiran 8 (lanjutan) b. Inhibitor α-glukosidase Konsentrasi (%) Fraksi C S S0 S-S0 % Inhibisi U1 U2 U1 U2 U1 U2 0,26 3,711 3,71 3,611 0,1 0,099 95,5556 95,6 0,13 2,417 2,464 2,196 0,221 0,268 90,1778 88,0889 0,065 1,628 1,595 1,251 0,377 0,344 83,2444 84,7111 0,0325 1,103 1,097 0,72 0,383 0,377 82,9778 83,2444 0,01625 0,863 0,846 0,407 0,456 0,439 79,7333 80,4889 0,00812 0,984 0,978 0,278 0,706 0,7 68,6222 68,8889 0,00406 1,322 1,354 0,194 1,128 1,16 49,8667 48,4444 Blanko 2,428 2,326 0,127 Abs.blanko rata-rata = 2,25 IC50 rata-rata = 0,0016 % % Inhibisi K S1 S0 K x 100% % Inhibisi 2,25 0,1 2,25 x 100% % Inhibisi 95,5556 Y = 9,464 Ln (x) + 111 IC50 = anti Ln ( 6,445 0,0016 IC50 rata-rata = , , 0,0016 % y = 9,464ln(x) + 111,0 R² = 0,867 y = 9,485ln(x) + 111 R² = 0,837 0 20 40 60 80 100 120 0 0.1 0.2 0.3 % Inhibisi Konsentrasi (%) Ulangan 1 Ulangan 2 Log. (Ulangan 1) Log. (Ulangan 2)

Lampiran 9 Nilai rendemen dan Rf fraksi C dan E dari hasil KLTP Fraksi C (0,2503 g) Fraksi E (0,2178 g) Fraksi Bobot (g) Rendemen (%) Jlh spot Rf Fraksi Bobot (g) Rendemen (%) Jlh spot Rf FC1 0,0136 5,43 1 0,1219 FE1 0,0481 22,08 1 0,0811 FC2 0,0158 6,31 1 0,2439 FE2 0,0162 7,44 1 0,1216 FC3 0,0058 2,32 1 0,3171 FE3 0,0088 4,04 1 0,2027 FC4 0,0187 7,47 1 0,4268 FE4 0,0059 2,71 2 0,1622; 0,4729 FC5 0,0116 4,63 1 0,5366 FE5 0,0035 1,61 1 0,5135 FC6 0,0100 3,99 1 0,6341 FE6 0,0021 0,96 1 0,6351 FC7 0,0090 3,59 1 0,7073 FE7 0,0037 1,69 2 0,5; 0,7027 FC8 0,0053 2,12 1 0,8049 FE8 0,003 1,38 1 0,8108 FC9 0,0010 0,39 1 0,8902 - - - - - FC10 0,0058 2,32 1 0,9268 - - - - - Contoh Perhitungan: Bobot fraksi Bobot ekstrak X 100 % 0,0136 0,2503 X 100 % 5,43 %

Lampiran 10 Perhitungan nilai IC50 fraksi yang diperoleh dari hasil KLTP

sebagai antioksidan dan inhibitor α-glukosidase a. Antioksidan

FE2 Konsentrasi

(ppm)

Absorbansi sampel % Inhibisi

U1 U2 U1 U2 500 0,143 0,138 79,2453 79,9709 400 0,176 0,181 74,4557 73,7300 300 0,187 0,186 72,8592 73,0044 200 0,193 0,189 71,9884 72,5689 100 0,476 0,432 30,9144 37,3004 50 0,532 0,523 22,7866 24,0929 25 0,707 0,733 -2,6125 -6,3861 blanko 0,715 0,663 Blanko rata-rata 0,689 IC50 (ppm) 122,2034 143,7821 Rerata = 132,9928

% Inhibisi Abs. blanko Abs. sampel

Abs. blanko x 100%

% Inhibisi 0,689 0,143

0,689 x 100% % Inhibisi 79,2453

Lampiran 10 (lanjutan) Y = 29,54 Ln(x) – 91,96 50 = 29,54 Ln(x) – 91,96 Ln x 141,96 29,54 Ln x 4,806 x anti Ln 4,806 ppm IC50 = 122,2034 ppm IC50 rata-rata = , , IC50 rata-rata = 132,9928 ppm b Inhibitor α-glukosida Konsentrasi (ppm) S1 S0 S1-S0 % Inhibisi 500 0,453 0,436 0,017 90,8602 250 0,31 0,276 0,034 81,7204 125 0,27 0,195 0,075 59,6774 62,5 0,229 0,152 0,077 58,6022 31,25 0,216 0,13 0,086 53,7634 15,625 0,221 0,121 0,1 46,2366 7,8125 0,26 0,112 0,148 20,4301 Blanko 0,296 0,11 0,186 y = 28,54ln(x) - 91,96 R² = 0,950 y = 28,39ln(x) - 91,05 R² = 0,943 -20 0 20 40 60 80 100 0 100 200 300 400 500 600 % Inhibisi Konsentrasi (ppm) FE2 DPPH Series1 series 2 Log. (Series1) Log. (series 2)

Lampiran 10 (lanjutan) % Inhibisi K S1 S0 K x 100% % Inhibisi 0,186 0,017 0,186 x 100% % Inhibisi 90,8602% Y = 14,84 Ln(x) – 2,643 50 = 14,84 Ln(x) – 2,643 Ln(x) = 3,5474 X = anti ln (3,5474) = 34,7219 ppm. y = 14,84ln(x) - 2,643 R² = 0,924 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 0 100 200 300 400 500 600 % Inhibisi Konsentrasi (ppm) Series1 Log. (Series1)