GAMBARAN DARAH MENCIT (
GAMBARAN DARAH MENCIT (
M
M us
us mus
musculu
culu s
s albin
albin us
us
) YANG
) YANG
DIBERI SALEP EKSTRAK ETANOL DAN FRAKSI HEXAN
DIBERI SALEP EKSTRAK ETANOL DAN FRAKSI HEXAN
RIMPANG KUNYIT (
RIMPANG KUNYIT (Curcuma l
Curcuma long
onga
a
Linn.) PADA PROSES
Linn.) PADA PROSES
PERSEMBUHAN LUKA
PERSEMBUHAN LUKA
HERY KRISTIANA HERY KRISTIANA
FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN
FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
2008
2008
ABSTRAK
ABSTRAK
HERY KRISTIANA
HERY KRISTIANA. Gambaran Darah Mencit (. Gambaran Darah Mencit ( Mus Mus Musculus Musculus albinusalbinus)) yang Diberi Salep Ekstrak Etanol dan Fraksi Hexan Rimpang Kunyit (
yang Diberi Salep Ekstrak Etanol dan Fraksi Hexan Rimpang Kunyit (CurcumaCurcuma longa
longa LinnLinn..) pada Proses Persembuhan Luka. Dibimbing oleh) pada Proses Persembuhan Luka. Dibimbing oleh IETJEIETJE WIENTARSIH
WIENTARSIH dandanSUS DERTI WIDHYARISUS DERTI WIDHYARI..
Penelitian ini bertujuan mengetahui aktivitas pemberian sediaan topikal Penelitian ini bertujuan mengetahui aktivitas pemberian sediaan topikal dalam bentuk salep dari ektrak rimpang kunyit (
dalam bentuk salep dari ektrak rimpang kunyit (Curcuma longaCurcuma longa Linn.) terhadapLinn.) terhadap persembuhan luka pada mencit putih
persembuhan luka pada mencit putih (( Mus musculus albinus Mus musculus albinus) melalui pengamatan) melalui pengamatan gambaran darah. Sebanyak 40 ekor mencit albino berumur 2 bulan digunakan gambaran darah. Sebanyak 40 ekor mencit albino berumur 2 bulan digunakan dalam penelitian ini. Mencit dibagi menjadi 4 kelompok, yaitu kontrol positif dalam penelitian ini. Mencit dibagi menjadi 4 kelompok, yaitu kontrol positif dengan obat komersial yang mengandung neomycin sulfat 5%, kelompok kontrol dengan obat komersial yang mengandung neomycin sulfat 5%, kelompok kontrol negatif tanpa sediaan, perlakuan dengan ekstrak etanol rimpang kunyit, dan negatif tanpa sediaan, perlakuan dengan ekstrak etanol rimpang kunyit, dan perlakuan
perlakuan dengan dengan fraksi fraksi hexan hexan rimpang rimpang kunyit. kunyit. Kulit Kulit daerah daerah punggung punggung anterior anterior tiap mencit dilukai dengan skalpel sepanjang ±1.5 cm. Aplikasi sediaan salep tiap mencit dilukai dengan skalpel sepanjang ±1.5 cm. Aplikasi sediaan salep dilakukan setiap hari sebanyak dua kali sehari selama 21 hari pasca perlukaan. dilakukan setiap hari sebanyak dua kali sehari selama 21 hari pasca perlukaan. Pengamatan hematologi dilakukan pada hari ke- 2, 4, 7, 14, dan 21. Darah Pengamatan hematologi dilakukan pada hari ke- 2, 4, 7, 14, dan 21. Darah disampling setelah mencit terlebih dahulu dianasthesi dengan eter dosis berlebih disampling setelah mencit terlebih dahulu dianasthesi dengan eter dosis berlebih secara perinhalasi. Parameter yang diamati pada pengamatan hematologi adalah secara perinhalasi. Parameter yang diamati pada pengamatan hematologi adalah butir
butir darah darah merah merah (eritrosit), (eritrosit), butir butir darah darah putih putih (leukosit), (leukosit), hematokrit hematokrit (PCV), (PCV), dandan hemoglobin (Hb). Data diuji menggunakan Analisa Sidik Ragam (ANOVA) dan hemoglobin (Hb). Data diuji menggunakan Analisa Sidik Ragam (ANOVA) dan dilanjutkan dengan dengan Rancangan Acak Lengkap (RAL), dan jika terdapat dilanjutkan dengan dengan Rancangan Acak Lengkap (RAL), dan jika terdapat perbedaan
perbedaan yang yang nyata nyata dilanjutkan dilanjutkan dengan dengan Uji Uji Wilayah Wilayah Berganda Berganda DuncanDuncan (( Duncan’s Multiple Range Test Duncan’s Multiple Range Test ).).
Hasil uji penapisan fitokimia bahwa ekstrak etanol rimpang kunyit Hasil uji penapisan fitokimia bahwa ekstrak etanol rimpang kunyit mengandung senyawa-senyawa kimia dari golongan alkaloid dan kuinon. mengandung senyawa-senyawa kimia dari golongan alkaloid dan kuinon. Sedangkan
Sedangkan fraksi hexan fraksi hexan rimpang rimpang kunyit kunyit mengandung mengandung senyawa-senyawa kimiasenyawa-senyawa kimia dari golongan alkaloid, saponin dan kuinon. Gambaran darah mencit akibat dari golongan alkaloid, saponin dan kuinon. Gambaran darah mencit akibat pemberian
pemberian salep salep fraksi fraksi hexan hexan rimpang rimpang kunyit kunyit memperlihatkan memperlihatkan profil profil yang yang lebihlebih mendekati kelompok mencit yang diberi obat persembuhan luka komersial yang mendekati kelompok mencit yang diberi obat persembuhan luka komersial yang mengandung neomycin sulfat 5% sebagai kontrol positif (K+) daripada kelompok mengandung neomycin sulfat 5% sebagai kontrol positif (K+) daripada kelompok mencit yang diberi ekstrak etanol rimpang kunyit hal ini terlihat dari profil mencit yang diberi ekstrak etanol rimpang kunyit hal ini terlihat dari profil gambaran darah hingga akhir selama pengamatan. Secara umum sediaan salep gambaran darah hingga akhir selama pengamatan. Secara umum sediaan salep ekstrak rimpang kunyit yang dipakai mempunyai manfaat untuk mempercepat ekstrak rimpang kunyit yang dipakai mempunyai manfaat untuk mempercepat persembuhan luka serta dapat digunakan
persembuhan luka serta dapat digunakan sebagai obat luka, sehingga sediaan salepsebagai obat luka, sehingga sediaan salep ekstrak rimpang kunyit ini potensial dikembangkan menjadi obat komersial
GAMBARAN DARAH MENCIT (
GAMBARAN DARAH MENCIT (
M
M us
us mus
musculu
culu s
s albin
albin us
us
) YANG
) YANG
DIBERI SALEP EKSTRAK ETANOL DAN FRAKSI HEXAN
DIBERI SALEP EKSTRAK ETANOL DAN FRAKSI HEXAN
RIMPANG KUNYIT (
RIMPANG KUNYIT (Curcuma l
Curcuma long
onga
a
Linn.) PADA PROSES
Linn.) PADA PROSES
PERSEMBUHAN LUKA
PERSEMBUHAN LUKA
HERY KRISTIANA HERY KRISTIANASKRIPSI
SKRIPSI
Sebagai salah satu syarat memperoleh gelar Sebagai salah satu syarat memperoleh gelar
Sarjana Kedokteran Hewan di Sarjana Kedokteran Hewan di Fakultas Kedokteran Hewan Fakultas Kedokteran Hewan
Institut Pertanian Bogor Institut Pertanian Bogor
FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN
FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
2008
2008
Judul Skripsi : Gambaran Darah Mencit ( Mus musculus albinus) yang Diberi Salep Ekstrak Etanol dan Fraksi Hexan Rimpang Kunyit (Curcuma longa Linn.) pada Proses Persembuhan Luka
Nama : Hery Kristiana
NRP : B04104028
Disetujui
Dr. Dra. Hj. Ietje Wientarsih, Apt. MSc Pembimbing I
Dr. Drh. Sus Derthi Widhyari, MSi Pembimbing II
Diketahui
Dr. Nastiti Kusumorini Wakil Dekan FKH IPB
PRAKATA
Alhamdulillahirabbil'alamiin. Tiada kata terindah selain ucap syukur kehadirat Allah SWT atas Rahmat dan Hidayah-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan penulisan skripsi ini sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar sarjana kedokteran hewan di Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor. Sholawat serta salam semoga terlimpah kapada Rasulallah SAW.
Dengan selesainya penulisan skripsi ini penulis mengucapkan terimakasih yang sebesar-besarnya kepada :
Ayah, Ibu, Kakakku Heny Kristanti, dan Adikku tersayang Sigit Bimo Nugroho yang selalu memberikan do'a, semangat, dan kasihsayangnya kepada penulis.
Dr. Dra. Hj. Ietje Wientarsih, Apt. MSc dan Dr. Drh. Sus Derthi Widhyari, MSi sebagai dosen pembimbing atas didikan, arahan, bimbingan, perhatian, waktu dan kesabaran yang telah diberikan kepada penulis.
Dr. Drh. Hera Maheswari, MSi. Sebagai dosen pembimbing akademik yang telah memberikan semangat, motivasi dan nasehat selama penulis kuliah. Dr. Drh. Wiwin Winarsih. Msi atas bantuan dan arahannya.
Beasiswa GAKA, Beasiswa Bantuan Belajar Mahasiswa (BBM), Beasiswa Gennesis Plus dan Beasiswa Bank Ekspor Indonesia.
Terimakasih kepada semua pihak yang telah membantu dalam penyeleseian skripsi ini. Semoga Allah SWT membalas semua kebaikan yang telah diberikan. Penulis menyadari bahwa banyak kekurangan dalam tulisan ini, oleh karena itu saran dan kritik yang membangun sangat diharapkan. Penulis berharap semoga karya ilmiah ini dapat bermanfaat bagi kita semua.
Bogor, September 2008
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Langsat Hulu (Riau) pada tanggal 8 Juni 1987. Penulis merupakan putri kedua dari tiga bersaudara dari Bapak Parjiyo dan Ibu Sutini. Penulis menempuh pendidikan di SDN 019 Langsat Hulu (1992-1998), kemudian melanjutkan studi di SLTPN 5 Benai (1998-2001) dan SMUN 2 Benai (2001-2002) serta pindah ke SMUN 1 Teluk Kuantan (2002-2004). Setelah lulus dari SMUN 1 Teluk Kuantan (2004) penulis diterima di Fakultas kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor melalui jalur USMI (Undangan Seleksi Masuk IPB). Penulis memilih dan diterima di Program Studi Kedokteran Hewan, Fakultas Kedokteran Hewan.
Selama menjadi mahasiswa, penulis aktif dalam berbagai organisasi intra dan ekstra kampus antara lain: Bendahara ROHIS angkatan 41 FKH periode 2004-2005, Sekretaris ROHIS angkatan 41 FKH periode 2006-2008, staf Departemen Pengembangan Sumber Daya Manusia DKM An-Nahl FKH IPB periode 2004-2005/2006-2007, staf Departemen Pengembangan Sumber Daya
Manusia DKM Al-Hurriyyah IPB periode 2004-2005, sekretaris Departemen Jaringan Kebijakan Umum BEM FKH-IPB periode 2005-2006, staf keuangan IMAKAHI (Ikatan Mahasiswa Kedokteran Hewan Indonesia) periode 2005-2006, staf Departemen Kajian Strategis KAMMI (Kesatuan Aksi Mahasiswa Muslim Indonesia) komisariat IPB periode 2005-2006, staf divisi Dana dan Usaha Himpunan Profesi Ornithologi dan Unggas periode 2006-2007. Dalam bidang akademik, penulis pernah menjadi asisten mata kuliah PAI (Pendidikan Agama Islam) semester genap (2006-2007) dan semester ganjil (2007-2008).
DAFTAR ISI
Halaman
DAFTAR TABEL ... vi
DAFTAR GAMBAR ... vii
DAFTAR LAMPIRAN ... viii
PENDAHULUAN Latar Belakang ... 1 Tujuan Penelitian ... 2 Manfaat Penelitian ... 2 TINJAUAN PUSTAKA Rimpang Kunyit... 3
Sejarah Rimpang Kunyit ... 3
Taksonomi Rimpang Kunyit ... 4
Komposisi Kimia Rimpang Kunyit ... 4
Manfaat dan Khasiat Kunyit ... 5
Zat Aktif Rimpang Kunyit ... 6
Ekstraksi ... 8 Pelarut ... 9 Salep ... 11 Mencit ... 12 Persembuhan Luka ... 15 Definisi ... 15
Proses Persembuhan Luka ... 15
Faktor-faktor yang Mempengaruhi Persembuhan Luka ... 16
Darah ... 17 Eritrosit ... 18 Hematokrit ... 19 Hemoglobin ... 19 Leukosit ... 20 METODOLOGI PENELITIAN Tempat dan Waktu ... 25
Bahan dan Alat ... 25
Hewan Percobaan ... 25 Metode Penelitian ... 25 Ekstraksi ... 25 Penapisan Fitokimia ... 27 Pembuatan Salep ... 28 Pengelompokan Mencit ... 28 Perlukaan Mencit ... 28
Pemberian Ekstrak Terpilih Rimpang Kunyit ... 28
Pengambilan Darah ... 29
Analisa Data ... 31
HASIL DAN PEMBAHASAN Penapisan Fitokimia ... 32 Darah ... 33 Jumlah Eritrosit ... 33 Nilai Hematokrit ... 36 Kadar Hemoglobin ... 38 Jumlah Leukosit ... 40
KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan ... 42
Saran ... 42
DAFTAR PUSTAKA ... 43
DAFTAR TABEL
Halaman
1 Data Biologis Mencit ... 14 2 Hasil penapisan fitokimia ... 32 3 Rataan jumlah eritrosit (juta/µl) pada mencit dalam kondisi luka
diberi ekstrak rimpang kunyit ... 34 4 Rataan nilai hematokrit (%) pada mencit dalam kondisi luka yang diberi
ekstrak rimpang kunyit ... 36 5 Rataan kadar hemoglobin (g/dl) pada mencit dalam kondisi luka yang
diberi ekstrak rimpang kunyit ... 38 6 Rataan jumlah leukosit (µl) pada mencit dalam kondisi luka yang diberi
DAFTAR GAMBAR
Halaman
1 Rimpang kunyit (Curcuma longa Linn.) ... 3
2 Struktur Kimia Kunyit (Curcuma longa Linn.) ... 5
3 Mencit ( Mus musculs albinus) ... 13
4 Diagram alir metode ekstraksi rimpang kunyit ... 26
5 Grafik rataan jumlah eritrosit pada mencit setelah perlakuan ... 34
6 Grafik rataan nilai hematokrit pada mencit setelah perlakuan ... 36
7 Grafik rataan kadar hemoglobin pada mencit setelah perlakuan ... 38
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
1 Analisa data jumlah eritrosit setelah perlukaan ... 51
2 Analisa data nilai hematorit setelah perlukaan ... 52
3 Analisa data kadar hemoglobin setelah perlukaan ... 53
PENDAHULUAN
Latar Belakang
Tanah air Indonesia dikaruniai Tuhan Yang Maha Esa berbagai jenis sumberdaya alam hayati berupa aneka ragam tumbuhan yang dapat dimanfaatkan dan dijaga kelestariaannya untuk kepentingan manusia. Salah satunya adalah tanaman kunyit (Curcuma longa Linn.), yang sudah lama dikenal dan dibudidayakan. Tanaman kunyit merupakan tanaman yang memiliki berbagai manfaat. Kunyit merupakan tanaman asli Asia Tenggara. Di Indonesia, kunyit menyebar secara merata di seluruh daerah (Winarto 2003).
Sudah sejak lama diketahui bahwa nenek moyang kita banyak menggunakan bahan obat tradisional baik berupa bahan asal hewan maupun tumbuhan dalam mengatasi berbagai masalah kesehatan, karena bahan alami asal hewan dan tumbuhan di Indonesia sangat melimpah (Soewita 1995). Diketahui pula bahwa khasiat obat tradisional tidak kalah dibanding obat buatan pabrik.
Harga obat buatan pabrik sekarang ini semakin tidak terjangkau terutama setelah negara kita mengalami krisis ekonomi, sedangkan kebutuhan terhadap pengobatan merupakan sesuatu yang mutlak harus dipenuhi. Kondisi seperti ini semakin mendorong masyarakat untuk mencari alternatif pengobatan, dan penggunaan obat-obatan tradisional merupakan alternatif yang sering digunakan.
Kunyit termasuk tanaman yang memiliki banyak kegunaan. Diantaranya adalah dapat dipakai sebagai bahan obat, bumbu masak, bahan pewarna dan kosmetik. Bagian tanaman terpenting adalah “rimpangnya” (Thomas 1989). Sekarang ini dunia kedokteran dan pengobatan sudah sangat maju, meskipun demikian, obat tradisional atau jamu masih tetap digemari masyarakat, bahkan semakin dibutuhkan. Di perusahaan jamu dan obat-obatan, kunyit termasuk bahan baku utama ramuan obat (Winarto 2003).
Kunyit telah lama dikenal sebagai rimpang yang sangat berkhasiat dan digunakan sebagai obat tradisional salah satunya sebagai obat luka. Oleh karena itu dalam penelitian ini akan dikaji ekstrak rimpang kunyit dalam proses persembuhan luka. Ketersediaan rimpang kunyit yang cukup berlimpah di
yang mudah digunakan dan murah tapi mempunyai khasiat yang baik akan sangat diharapkan. Hasil dari penelitian ini diharapkan menghasilkan alternatif pengobatan untuk persembuhan luka.
Tujuan Penelitian
1. Mengetahui zat-zat aktif dalam kunyit yang dapat ditarik oleh pelarut etanol dan hexan, sehingga salep ekstrak rimpang kunyit dapat digunakan sebagai obat persembuhan luka.
2. Mengetahui profil gambaran darah mencit yang diberi salep ekstrak etanol dan fraksi hexan rimpang kunyit akibat adanya perlukaan.
3. Mengetahui secara umum khasiat pemberian sediaan salep ekstrak rimpang kunyit dengan pelarut etanol dan hexan terhadap proses persembuhan luka.
Manfaat Penelitian
Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi mengenai gambaran darah mencit ( Mus musculus albinus) akibat pemberian salep ekstrak rimpang kunyit (Curcuma longa Linn.) sebagai obat persembuhan luka dengan menggunakan pelarut yang kepolarannya berbeda, sehingga dapat diketahui potensi dan khasiatnya.
TINJAUAN PUSTAKA
Rimpang Kunyit
Sejarah Rimpang Kunyit
Kunyit (Curcuma longa Linn.) adalah tanaman yang termasuk dalam famili Zingiberaceae dan merupakan tanaman asli Asia Tenggara. Di Indonesia, kunyit menyebar secara merata di seluruh daerah. Karena itu, kunyit dikenal dengan nama yang berbeda-beda di setiap daerah (Winarto 2003). Misalnya kunyir, koneng atau koneng temen (Sunda), kunyit (Aceh), kuning (Gayo), unik (Batak), kunyit (Melayu), cahang (Dayak), kunyit (Lampung), kunyit janar (Banjar), kunir (Jawa), konye, temu koneng (Madura), kunyik (Sasak), huni (Bima), alawahu (Gorontalo), kuni (Toraja), kunnyi (Makasar), Unyi (Bugis), uninum (Ambon), dan kandeifu (Irian) (Rukmana 1995).
Tanaman ini tumbuh baik di tanah yang berpengairan baik, curah hujan sekitar 2.000 – 4.000 mm setiap tahunnya, dan di area yang sedikit terlindung. Kunyit merupakan tanaman berbatang semu, tinggi dapat mencapai 1 m. Bentuk batangnya bulat, berwarna hijau keunguan. Rimpang kunyit (Gambar 1) bila tua berwarna jingga dan tunas mudanya berwarna putih, membentuk rumpun yang rapat, berakar serabut dan berwarna cokelat muda. Setiap tanaman mempunyai daun 3 – 8 helai, panjang daun beserta pelepahnya sampai 70 cm, helaian daun berbentuk lanset memanjang, berwarna hijau dan hanya bagian atas dekat pelepahnya berwarna agak keunguan, panjang 28 – 85 cm, lebar 10 – 25 cm. Bunga muncul dari ujung batang semu panjang 10 – 15 cm (Marta Tilaar Innovation Center 2002).
Taksonomi Rimpang Kunyit
Berdasarkan penggolongan dan tata nama tumbuhan menurut Rukmana (1995), tanaman kunyit termasuk ke dalam klasifikasi sebagai berikut:
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta Sub divisi : Angiospermae Kelas : Monocotyledoneae Ordo : Zingiberales
Familia : Zingiberaceae Genus : Curcuma
Spesies : Curcuma longa Linn.
Tanaman yang termasuk suku temu-temuan terdiri dari 45 genus dan lebih kurang ada 500 spesies. Asal kata Zingiberaceae adalah zingiber yang berasal dari bahasa Sanskerta singaberi. Kata singaberi dalam bahasa Sanskerta itu berasal dari bahasa Arab zanzabil atau bahasa Yunani zingiberi. Curcuma berasal dari bahasa Arabkurkum yang berarti kuning (Winarto 2003).
Komposisi Kimia Rimpang Kunyit
Menurut BADAN POM RI (2004), rimpang kunyit mengandung kurkumin, desmetoksikurkumin, bidesmetoksikurkumin, minyak atsiri dan oleoresin. Rimpang kunyit mengandung minyak atsiri yang terdiri dari turmeron, simen, dan artumeron (Marta Tilaar Innovation Center 2002). Menurut Aprilistyawati (2008) kurkuminoid dan minyak atsiri mengandung senyawa kimia yang mempunyai keaktifan fisiologi. Kurkuminoid merupakan tepung kuning dari kunyit. Kandungan kurkuminoid dalam rimpang kunyit sebanyak 3-5%. Kurkuminoid dapat digunakan sebagai zat warna dalam makanan, minuman, atau kosmetik. Komponen kurkuminoid diketahui mempunyai berbagai aktivitas biologik spektrum luas. Kurkuminoid pada rimpang kunyit terdiri dari tiga komponen, yaitu kurkumin, desmetoksikurkumin, dan bisdesmetoksikurkumin. Struktur molekul ketiga kurkuminoid dapat dilihat pada Gambar 2. Gugus hidroksil fenolat yang terdapat dalam struktur kurkuminoid diduga mempunyai aktivitas bakteri (Sidik et al., 1995). Kurkumin dapat berfungsi sebagai anti
oksidan, anti inflamasi, efek pencegah kanker serta menurunkan risiko serangan jantung (Aprilistyawati 2008).
Gambar 2. Struktur Kimia Curcuma longa Linn. (http://www.indsaff.com/images/structure_pic1.gif.)
Menurut Aprilistyawati (2008) minyak atsiri, mempunyai rasa dan bau khas. Minyak atsiri bersifat mudah menguap dan tidak larut dalam air. Kandungan minyak atsiri pada rimpang kunyit yaitu 2-7%. Minyak atsiri bermanfaat untuk memberi aroma harum dan rasa khas pada umbinya. Minyak atsiri ini mengandung senyawa-senyawa kimia seskuiterpen alkohol, turmeron, dan zingiberen. Kandungan kimia minyak atsiri kunyit terdiri atas ar-tumeron, a dan ß-tumeron, tumerol, a-atlanton, ß-kariofilen, linalol, dan 1,8 sineol. Minyak atsiri ini bersifat sebagai pemusnah bakteri dan mengandung sifat anti inflamasi atau anti
radang.
Manfaat dan Khasiat Rimpang Kunyit
Sekarang ini dunia kedokteran dan pengobatan sudah sangat maju, meskipun demikian, obat tradisional atau jamu masih tetap digemari masyarakat, bahkan semakin dibutuhkan. Di perusahaan jamu dan obat-obatan, rimpang kunyit termasuk bahan baku utama ramuan obat (Winarto 2003). Rimpang kunyit dapat dijadikan ramuan untuk pengobatan berbagai penyakit seperti demam, displesia (perut kembung, nyeri, mual, dan tidak nafsu makan), hidung tersumbat akibat flu, eksim, diare/diare dengan lendir berdarah, keputihan, radang rahim, radang usus
buntu, sakit kuning, menghilangkan bau badan, gatal akibat cacar air , radang gusi, radang amandel, tekanan darah tinggi, luka di kaki, sesak nafas, mengembalikan stamina, dan malaria (Winarto 2003). Selain itu menurut Thomas (1989) kunyit juga berkhasiat untuk pengobatan penyakit diabetes mellitus, tifus, haid tidak
lancar, memperlancar ASI, memudahkan kelahiran bayi, menyapih bayi, cangkrang (waterproken), morbili, tukak lambung, sembelit, susah buang air besar, sakit kepala, sariawan, mabuk kendaraan, sakit gigi berlubang, penambah
darah, membersihkan darah, bisul, borok atau koreng, bengkak karena disengat serangga atau bulu ulat, kurap, gatal-gatal, menghilangkan jerawat dan noda-noda hitam di wajah, serta menghaluskan kulit wajah.
Zat Aktif Rimpang Kunyit Alkaloid
Alkaloid merupakan metabolit sekunder yang bersifat basa (Anonim 2008b).Menurut Hidayat (2008) alkaloid merupakan senyawa basa nitrogen asal tumbuhan yg bersifat fisiologi aktif. Alkaloid bagi tumbuhan berfungsi sebagai:
1) Senyawa racun yang melindungi tumbuhan dari serangga & herbivora. 2) Produk akhir reaksi detoksifikasi senyawa-senyawa yang berbahaya bagi
tumbuhan.
3) Regulator faktor pertumbuhan.
4) Senyawa cadangan untuk sumber nitrogen atau elemen lain yang berguna bagi tumbuhan.
Alkaloid sering kali beracun bagi manusia dan banyak yang mempunyai kegiatan fisiologi yang menonjol, jadi digunakan secara luas dalam bidang pengobatan (Harborne 1987). Alkaloid berfungsi sebagai anti demam (anti piretikum), anti cacing (anthelmintikum), aneleptikum, anti parasit (anti plasmodium), anti radang (inflamasi), anti batuk (antitusif), insektisida, narkotikum, merangsang sistem saraf pusat (stimulansia), memacu keluarnya keringat (diaphoretic), merangsang muntah (emetikum), dan merangsang keluarnya urin (diuretikum) (Anonim 2008b).
Flavonoid
Semua flavonoid menurut strukturnya merupakan turunan senyawa induk flavon yang terdapat berupa tepung putih dan semuanya mempunyai sejumlah sifat yang sama. Flavonoid merupakan senyawa yang larut dalam air. Flavonoid mengandung sistem aromatik yang terkonjugasi. Umumnya terdapat pada tumbuhan, terikat pada gula sebagai glikosida dan aglikon flavonoid (Harborne 1987).
Flavonoid berfungsi menurunkan permeabilitas kapiler sehingga perdarahan kapiler dapat dicegah serta kerapuhan dan kerusakan kapiler dapat
diperbaiki (Wardhana et al . 2001). Disamping itu flavonoid juga dapat digunakan sebagai anti alergi dan anti trombik, dimana sebagai anti trombik senyawa ini bekerja dengan membentuk sumbat trombosit dan memperbaiki endotel vaskuler
sehingga dapat menutup robekan kecil pada pembuluh darah (Evans 1989).
Polifenol dan Tanin
Polifenol merupakan kelompok bahan kimia yang ditemukan pada tanaman, yang memiliki karakteristik mengandung lebih dari satu kelompok fenol per molekul. Secara umum subdevisi polifenol terdiri atas tanin dan phenylpropanoid seperti lignin dan flavonoid (Holmann 2005).
Tanin pada tumbuhan sub divisi angiospermae terdapat khusus dalam jaringan kayu. Menurut batasannya, tanin dapat bereaksi dengan protein
membentuk kopolimer mantap yang tak larut dalam air. Dalam industri, tanin adalah senyawa yang berasal dari tumbuhan, yang mampu mengubah kulit hewan yang mentah menjadi kulit siap pakai karena kemampuannya menyambung-silang protein. Salah satu fungsi utama tanin dalam tumbuhan ialah sebagai penolak
hewan pemakan tumbuhan karena rasanya yang sepat (Harborne 1987).
Saponin
Saponin adalah deterjen alami yang ditemukan pada banyak tanaman yang memiliki bahan surfaktan karena mengandung lemak dan air yang mudah terlarut. Komponen struktur saponin terdiri dari gula-gula hexose dengan sejumlah atom karbon, hidrogen dan oksigen. Keberadaan saponin dapat dicirikan dengan rasa
yang pahit, pembentuk busa yang stabil pada larutan cair (busa berbentuk sarang lebah pada air) dan mampu membentuk molekul dengan kolesterol (Cheeke 1999). Selain itu, saponin juga mempunyai kemampuan membunuh kuman (Anonim 2008c).
Kuinon
Kuinon adalah senyawa berwarna dan mempunyai kromofor dasar seperti kromofor pada benzokuinon, yang terdiri atas dua gugus karbonil yang berkonyugasi dengan dua ikatan rangkap karbon-karbon. Warna pigmen kuinon di alam beragam, mulai dari kuning pucat sampai ke hampir hitam, dan struktur yang telah dikenal jumlahnya lebih dari 450. Untuk tujuan identifikasi kuinon dapat dibagi menjadi empat kelompok: benzokuinon, naftokuinon, antrakuinon, dan kuinon isoprenoid. Senyawa kuinon yang terdapat sebagai glikosida larut sedikit dalam air, tetapi umumnya kuinon lebih mudah larut dalam lemak dan akan terekstraksi dari ekstrak tumbuhan kasar bersama-sama dengan karotenoid dan klorofil (Harborne 1987). Senyawa antrakuinon dan kuinon mempunyai kemampuan sebagai anti biotik dan penghilang rasa sakit serta merangsang pertumbuhan sel baru pada kulit (Anonim 2008c).
Extraksi
Sejak zaman dahulu jamu berasal dari tanaman obat. Biasanya sebelum jamu digunakan untuk mengobati manusia dan hewan melalui proses ekstraksi terlebih dahulu. Pada dasarnya ada prosedur yang berbeda untuk membuat sediaan obat tumbuhan yaitu cara peras dan cara ekstraksi.
Ekstraksi adalah pemisahan kandungan aktif dari simplisia menggunakan cairan penyaring yang cocok. Simplisia adalah bahan alami yang digunakan sebagai obat yang belum mengalami perubahan, biasanya bahan yang dikeringkan (Wientarsih dan Prasetyo 2006). Ekstraksi ada beberapa jenis:
1. Ekstrak : sediaan kering, kental/cair dari sampel nabati/hewan. 2. Tingtur : sediaan cair
3. Infus : sediaan cair dari simplisia nabati (90oC selama 15 menit) 4. Dekok : sediaan cair dari simplisia nabati (90oC selama 30 menit)
Sedangkan hal-hal yang harus diperhatikan dalam ekstraksi yaitu jumlah simplisia, penambahan air ekstrak, derajat kehalusan, cara pemanasan, cara penyaringan, dan perhitungan dosis pemakaian.
Pada dasarnya metode ekstraksi ada beberapa macam diantaranya yaitu maserasi (perendaman), perkolasi, digesti, infusi, dan dekoksi (Wientarsih dan Prasetyo 2006). Maserasi adalah cara ekstraksi yang paling sederhana. Bahan jamu yang dihaluskan sesuai dengan syarat Farmakope Indonesia (umumnya
terpotong-potong atau diserbuk-kasarkan) disatukan dengan bahan ekstraksi. Deposisi tersebut disimpan terlindungi dari cahaya langsung (mencegah reaksi yang dikatalisis cahaya ataupun perubahan warna) dan dikocok kembali. Waktu maserasi adalah berbeda-beda, setiap Farmakope mencantumkan 4-10 hari dengan dilakukan pengocokan secara berulang (kira-kira tiga kali sehari). Melalui usaha ini dijamin suatu keseimbangan konsentrasi bahan ekstratif yang lebih cepat ke dalam cairan. Keadaan diam selama maserasi menyebabkan turunnya perpindahan bahan aktif. Semakin besar perbandingan simplisia terhadap cairan ekstraksi , akan
semakin baik hasil yang diperoleh (Voight 1994).
Cara ekstraksi yang tepat secara alami tergantung pada tekstur dan kandungan air bahan tumbuhan yang diekstraksi dan pada jenis senyawa yang diisolasi (Harborne 1973). Pada umumnya, diharapkan supaya jaringan mati sehingga dapat mencegah terjadinya oksidasi ataupun hidrolisis enzimatik. Pencelupan bahan jaringan ke dalam etanol yang mendidih merupakan cara yang cukup baik untuk mematikan jaringan.
Ekstrak kental rimpang kunyit adalah ekstrak yang dibuat dari rimpang tumbuhan Curcuma longa, suku Zingiberaceae, mengandung minyak atsiri tidak kurang dari 3.2% dan kurkuminoid tidak kurang dari 33.9% (BADAN POM RI 2004). Rendemen tidak kurang dari 11%. Ekstrak kental rimpang kunyit berbentuk kental, berwarna kuning, berbau khas dan rasanya agak pahit.
Pelarut
Pelarut adalah suatu cairan yang digunakan dalam proses pemecahan ikatan suatu persenyawaan untuk selanjutnya membentuk suatu larutan. Energi yang dibutuhkan untuk memecahkan ikatan-ikatan ini diambil dari energi yang
dilepaskan karena terbentuknya ikatan antara partikel yang dilarutkan dengan partikel pelarut. Untuk memecahkan ikatan persenyawaan dibutuhkan energi yang cukup besar. Oleh karena itu maka pada umumnya persenyawaan yang berikatan ion hanya larut di dalam air atau pelarut sangat polar lainnya. Begitu juga persenyawaan kovalen polar hanya larut didalam pelarut polar, dan persenyawaan
kovalen non-polar hanya larut didalam persenyawaan non-polar (Winarno et al., 1973).
Etanol
Etanol merupakan senyawa yang mudah menguap, jernih (tidak berwarna). Berbau khas dan meyebabkan rasa terbakar pada lidah. Mudah menguap walaupun pada suhu rendah dan mendidih pada suhu 78o serta mudah terbakar. Larut dalam air dan sumua pelarut organik. Bobot jenis etanol tidak lebih dari 0.7964 (DepKes RI 1995).
Etanol tidak menyebabkan pembengkakan membran sel dan memperbaiki stabilitas bahan obat terlarut. Keuntungan lainnya adalah sifatnya, untuk mengendapkan bahan putih telur dan menghambat kerja enzim. Umumnya berlaku sebagai cairan pengekstraksi adalah campuran bahan pelarut yang berlainan, terutama campuran etanol-air. Dengan etanol (70% volume) sangat sering dapat dihasilkan suatu hasil bahan aktif yang optimal, dimana bahan pengotor hanya dalam skala kecil turut dalam cairan pengekstraksi (Voight 1994).
Hexan
Hexan merupakan senyawa yang mengandung 98.0% - 100.5% C13H6Cl6O2, dihitung terhadap zat yang telah dikeringkan. Berwarna putih agak
cokelat; tidak berbau dan agak berbau fenol. Tidak larut dalam air, namun mudah larut dalam aseton, etanol, kloroform, eter, dan larutan encer alkali hidroksida tertentu (DepKes RI 1995).
Salep
Salep merupakan sediaan setengah padat dan mudah dioleskan. Digunakan sebagai obat luar pada membran mukosa/kulit. Bahan obat haus larut atau terdispersi homogeny dalam dasar salep yang cocok (Wientarsih dan Prasetyo 2006).
Menurut Wientarsih dan Prasetyo (2006), fungsi salep ada tiga macam : 1. Sebagai pembawa (vehicle), substansi obat untuk pengobatan kulit. 2. Sebagai pelumas (emollient ) pada kulit.
3. Sebagai pelindung ( protective), untuk mencegah kontak permukaan kulit dengan rangsangan dari luar.
Agar salep yang dihasilkan berkualitas baik. Ada beberapa syarat yang harus dipenuhi. Syarat-syarat dasar salep menurut Wientarsih dan Prasetyo (2006) adalah sebagai berikut:
- Harus stabil, baik secara fisika/kimia.
- Warna dan bau harus stabil selama penyimpanan/pemakaian. - Harus dapat dicampur dengan semua obat.
- Harus halus dan licin sehingga mudah dioleskan pada kulit. - Daya kerjanya sama baik untuk kulit kering/berlemak. - Tidak mengiritasi kulit.
- Tidak mudah tengik.
- Harus mudah dipakai/dioleskan.
Voight (1994) menjelaskan bahwa salep yang mengandung cairan dalam jumlah besar harus dilindungi terhadap pengenceran cairan jika wadah tidak
terjamin kerapatannya. Ini dilakukan dengan menutup dengan folia logam atau plastik atau bahan lain yang cocok. Menurut Ansel (1989) salep biasanya dikemas baik dalam botol atau dalam tube, botol dapat dibuat dari gelas tidak berwarna, warna hijau, biru atau buram dan porselen putih. Botol plastik juga dapat digunakan. Wadah dari gelas buram dan berwarna berguna untuk salep yang mengandung obat yang peka terhadap cahaya. Kebanyakan salep harus disimpan pada temperatur di bawah 300C untuk mencegah melembek apalagi dasar
memerlukan penambahan pengawet kimia sebagai anti mikroba, pada formulasi untuk mencegah pertumbuhan mikroorganisme yang mengkontaminasi.
Baik dalam ukuran besar maupun kecil, salep dibuat dengan dua metode umum: (1) pencampuran dan (2) peleburan. Metode untuk pembuatan tertentu terutama tergantung pada sifat-sifat bahannya. Dalam metode pencampuran, komponen dari salep dicampur bersama-sama dengan segala cara sampai sediaan yang rata tercapai. Pada skala kecil, ahli farmasi dapat mencampur komponen-komponen dari salep lumpang dengan sebuah alu dengan menggunakan mortar stamphis (gelas yang besar atau porselen) untuk menggerus bahan bersama-sama (Ansel 1989).
Mencit
Mencit ( Mus musculus albinus) merupakan salah satu hewan dalam kelompok rodentia yang mudah dipelihara, praktis juga dapat berkembang biak dengan cepat sehingga dapat diperoleh keturunan dalam jumlah yang banyak dalam waktu yang singkat serta anatomis dan fisiologisnya terkarakterisasi dengan baik (Malole dan Pramono 1998).
Klasifikasi mencit menurut Linnaeus (1758) adalah: Kingdom : Animalia
Phylum : Chordata Sub phylum : Vertebrata Kelas : Mamalia Ordo : Rodentia Sub ordo : Myomorphoa Familia : Muridae Sub familia : Murinae
Genus : Mus
Spesies : Mus musculus
Sub Spesies : Mus musculus albinus
Mencit luar atau mencit rumah adalah hewan semarga dengan mencit laboratorium. Hewan tersebut tersebar di seluruh dunia dan sering ditemukan di
dekat atau di dalam gedung dan rumah yang dihuni manusia. Berat badan bervariasi, tetapi umumnya pada umur empat minggu berat badan mencapai 18-20
g. Mencit liar dewasa dapat mencapai 30-40 g pada umur enam bulan atau lebih. Mencit laboratorium mempunyai berat badan kira-kira sama dengan mencit liar, tetapi setelah diternakkan secara selektif selama delapan puluh tahun yang lalu, sekarang ada berbagai warna bulu dan timbul banyak galur dengan berat badan berbeda-beda (Smith dan Mangkoewidjojo 1988). Data biologis mencit
laboratorium dapat dilihat pada Tabel 1.
Mencit laboratorium (Gambar 3) dapat dikandangkan dalam kotak sebesar kotak sepatu. Kotak dapat dibuat dari berbagai macam bahan, misalnya plastik, aluminium, atau baja tahan karat (stainless steel). Prinsip dasar yang perlu dicamkan kalau memilih kotak mecit ialah bahwa kotak harus mudah dibersihkan dan disterilkan. Kotak mencit harus tahan lama, tahan gigit dan mencit tidak dapat lepas. Apa pun sistem kandang yang dipakai, paling penting untuk diperhatikan adalah persyaratan fisiologis dan tingkah laku mencit. Persyaratan ini meliputi menjaga lingkungan tetap kering dan bersih, suhu yang memadai, dan memberi ruang cukup untuk bergerak dengan bebas dalam berbagai posisi. Seluruh sistem perkandangan harus dirancang sehingga mudah dirawat dan diperbaiki demi kesehatan hewan. Kandang yang baik harus tersedia alas tidur (bedding) dengan kualitas bagus dan bersih. Biasanya di daerah tropis dapat dipakai serbuk gergaji atau sekam padi sebagai alas tidur. Alas tidur harus diganti sesering mungkin, sekurang-kurangnya satu kali tiap minggu (Smith dan Mangkoewidjojo 1988).
Gambar 3 Mencit ( Mus musculs albinus) www.rooj.com/Radioprotection_files/image002.jpg
Mencit laboratorium biasanya diberi makanan berbentuk pelet tanpa batas (ad libitum). Setiap hari, seekor mencit dewasa makan 3 g sampai 5 g makanan. Kalau mencit sedang bunting atau menyusui, nafsu makannya bertambah. Mencit laboratorium tidak boleh dalam keadaan tanpa air minum. Air minum dapat diberikan dengan botol-botol gelas atau plastik dan mencit dapat minum air dari botol tersebut malalui pipa gelas atau pipa logam. Banyak faktor-faktor
lingkungan terutama kualitas makanan berpengaruh pada kondisi mencit secara keseluruhan. Faktor-faktor tersebut dapat mempengaruhi kemampuan mencit mencapai potensi genetik untuk tumbuh, berbiak, umur, atau reaksi terhadap pengobatan dan lain-lain (Smith dan Mangkoewidjojo 1988).
Tabel 1 Data Biologis Mencit
Karakteristik Nilai
Berat dewasa
Jantan 20-40 g
Betina 18-35 g
Berat lahir 1.0-1.5 g
Umur sapih 18-21 hari
Suhu (rektal) 96.4-100 oF Denyut jantung 600/menit
Range 328-780/menit
Pernapasan 84-230/menit
Tekanan darah 113 sistol, 81 diastol
Eritrosit 9.3 x 10 /ul Range 7.7-12.5 x 10 /ul Leukosit 8 x 10 /ul Range 4-12 x 103/ul Hematokrit 41.5 % Hemoglobin 14.8 g/100ml Range 10-19 g/100 ml Volume darah 75-80 ml/kg (sumber : Arrington 1972; Smith 1988)
Persembuhan luka Definisi
Persembuhan luka adalah proses dalam tubuh yang sedapat mungkin memperbaiki bagian luka menjadi bentuk yang paling mendekati kondisi normal tubuh sebelumnya (Vegad 1995). Persembuhan luka dibagi menjadi dua macam berdasarkan keadaan luka yang terjadi, yaitu persembuhan berdasar penyatuan primer ( primary union) dan persembuhan berdasar penyatuan sekunder
( secundary union). Suatu persembuhan luka dapat digolongkan menjadi penyatuan luka primer apabila luka tertutup, mengakibatkan hilangnya sejumlah kecil jaringan, luka berupa suatu garis insisi dengan skalpel yang steril, tidak disertai infeksi sekunder oleh bakteri, dan celah luka segera ditutupi darah beku. Persembuhan berdasar penyatuan luka sekunder ditandai dengan luka yang terbuka dan mengalami kerusakan atau hilangnya jaringan dalam jumlah besar. Selain itu, luka terinfeksi oleh bakteri, banyak pembuluh darah yang terkoyak, serta dapat ditemui jaringan yang mengalami nekrosis dan peradangan di daerah luka.
Proses Persembuhan Luka
Proses persembuhan luka terdiri dari tiga fase yaitu fase inflamasi (peradangan), fase proliferasi (fibroplasia), serta fase maturasi (pematangan dan penutupan kembali) (Vegad 1995). Peradangan merupakan suatu reaksi dari jaringan hidup yang dialiri darah terhadap perlukaan lokal (Vegad 1995). Menurut Rukmono (1979) yang menyebabkan luka/cedera pada jaringan, yang kemudian diikuti oleh radang, ialah kuman, benda (pisau, peluru, dan sebagainya) suhu (panas atau dingin), berbagai jenis sinar (sinar X, sinar ultra-violet), listrik, zat-zat kimia, dan lain-lain). Peradangan dapat akut, yakni umurnya pendek, atau kronik, yakni umurnya yang panjang, tergantung kepada sifat cedera dan keduanya mempunyai pola khas pada peradangan kronik biasanya terdapat fase akut awal dan terkadang terjadi berulang-ulang (Spector 1993). Peradangan ditandai dengan adanya panca radang yaitu rubor (kemerahan), kalor (panas), dolor (nyeri), tumor (pembengkakan), dan function laesa (perubahan fungsi) (Price dan Wilson 1995).
Pada radang, cairan pada jaringan mengandung banyak larutan protein sehingga tekanan osmotik tinggi dan hal ini menyebabkan plasma tidak dapat mengalir kembali ke dalam pembuluh darah sehingga volume darah berkurang. Pembuluh darah menjadi kekurangan plasma dan butir-butir darah terhenti mengalir, yaitu terjadi stasis. Jaringan mengandung banyak cairan sehingga membengkak (tumor). Setelah aliran dalam pembuluh darah lambat, maka leukosit-leukosit melekat pada sel-sel endotel pembuluh (marginasi). Makin lama makin banyak sel leukosit yang melekat. Sehingga mendadak sel-sel endotel pada radang tampak menggelembung. Dengan pergerakan amoeboid (pergerakan seperti amoeba) leukosit menyusup antara sel endotel dan kemudian keluar (emigrasi) (Rukmono 1979).
Terjadinya luka juga menginduksi pelepasan beberapa substansi kimia yang bertindak sebagai mediator dalam perubahan-perubahan yang terjadi pada sistem vascular di daerah luka tersebut (Vegad 1995). Mediator inflamasi yang mempengaruhi persembuhan luka yaitu histamin, enzim-enzim lisosom, faktor pengaktifasi platelet ( Platelet Activating Factor-PAF ), dan Sitokin.
Pada beberapa jenis radang proliferasi sel mencolok sekali. Pada radang akut proliferasi sel tidak seberapa. Kelenjar getah bening yang menerima cairan limfe dari daerah jaringan yang meradang menahun sering menunjukkan proliferasi sel makrofag sehingga limfonodulinya tampak membesar dan jelas.
Kemampuan proliferasi epitel kulit atau sel mukosa mudah sekali sehingga bila sebagian epitel ini rusak, maka akan diganti oleh sel epitel baru. Bila terjadi luka yang steril maka proliferasi tidak akan mulai dan luka tidak akan menyembuh akan tetapi bila luka ini kemasukan sedikit kuman atau bila tersentuh oleh kapas, maka proliferasi dan proses penyembuhan akan mulai (Rukmono 1979). Sebenarnya proses radang dan pemulihan jaringan sukar saling dibedakan, keduanya berlangsung bersama-sama, radang merupakan iritans/stimulans yang menyebabkan proses pemulihan dimulai (Rukmono 1979).
Faktor-faktor yang Mempengaruhi Persembuhan Luka
Persembuhan luka dipengaruhi oleh beberapa faktor, yaitu jaringan yang terlibat, vaskularisasi, infeksi, gizi, umur, suhu, ukuran jaringan yang rusak dan
benda asing (Spektor 1993). Menurut Vegad (1995), beberapa faktor tersebut seperti nutrisi memegang peranan penting pada proses persembuhan luka, misalnya protein, dimana tingkat asupan protein yang rendah akan menyebabkan adanya defisiensi pada asam amino metionin dan sistin, yang menyebabkan sintesis kolagen terhambat. Rukmono (1979), menambahkan bahwa dasar proses persembuhan jaringan sama pada semua jenis luka, yaitu terjadi organisasi yang
menghasilkan jaringan ikat, proses ini dapat mengalami modifikasi yaitu bergantung kepada jumlah nekrosis, infeksi dan keadaan kesehatan pada umumnya, misalnya keadaan gizi. Kekurangan vitamin C akan menghambat pembentukan serabut kolagen sehingga pemulihan jaringan ikat terhambat.
Kortison menghambat terjadinya jaringan ikat. Kekurangan protein dalam diet sangat menghambat proses pemulihan jaringan.
Darah
Darah merupakan media cair yang terdiri dari komponen selular yaitu sel-sel darah dan komponen cairan yang kaya akan protein yaitu plasma darah (Schalm et al., 1975). Darah bagi tubuh sangat penting peranannya terutama sebagai alat pertahanan tubuh dan alat transportasi nutrisi, hormon dan sisa-sisa hasil metabolisme (Sturkie 1976). Darah dianggap sebagai jaringan ikat khusus yang terdiri dari sel-sel bebas dan cairan interseluler atau plasma (Copenhaver et al., 1978). Warna merah pada darah segar disebabkan oleh adanya hemoglobin dalam eritrosit (Dellmann dan Brown 1989).
Unsur seluler dari darah terdiri dari sel darah putih (leukosit), sel darah merah (eritrosit), dan platelet (trombosit) yang tersuspensi di dalam plasma (Ganong 1995). Darah memiliki banyak fungsi, diantaranya sebagai: 1) penyerap dan pembawa nutrisi dari saluran pencernaan menuju ke jaringan, 2) pembawa oksigen (O2) dari paru-paru ke jaringan dan karbondioksida (CO2) dari jaringan ke paru-paru, 3) pembawa produk buangan metabolisme, 4) pembawa hormon yang dihasilkan oleh kelenjar endokrin, dan 5) pengatur kandungan cairan tubuh (Sturkie dan Grimingger 1976). Selain itu darah juga berperan penting dalam pengaturan suhu, menjaga sistem buffer tubuh, serta mengandung faktor penting
Jika tubuh hewan mengalami perubahan fisiologis maka gambaran darah juga akan mengalami perubahan. Perubahan fisiologis ini dapat disebabkan secara internal dan eksternal. Secara internal seperti pertambahan umur, status gizi, latihan, kesehatan, stress, siklus estrus dan suhu tubuh, sedangkan secara eksternal akibat infeksi kuman, fraktura dan perubahan suhu lingkungan (Guyton 1997).
Eritrosit
Eritrosit mamalia dewasa tidak berinti, berbentuk cawan bikonkaf serta tidak memiliki aparatus golgi, sentriol dan sebagian besar mitokondria karena lenyap selama proses pematangan yang berlangsung sebelum memasuki aliran darah (Dellmann dan Brown 1989). Eritrosit normal berdiameter kira-kira 7.8 μm dan dengan ketebalan 1 sampai 2.5 μm. Volume rata-rata sel darah merah adalah 90 sampai 95 μm3 (Guyton 1997). Menurut Ganong (1995), sel darah merah dibentuk di sumsum tulang. Pada mamalia, sel ini kehilangan intinya sebelum memasuki peredaran darah.
Fungsi utama eritrosit adalah mengangkut hemoglobin, dan seterusnya mengangkut oksigen dari paru-paru ke jaringan. Sel darah merah juga banyak mengandung karbonik anhidrase, yang berfungsi untuk mengkatalisis reaksi antara karbon dioksida (CO2) dan air, sehingga akan meningkatkan kecepatan reaksi bolak-balik beberapa ribu kali lipat (Guyton 1997). Tekanan oksigen yang tinggi, temperatur yang lebih rendah dan pH yang lebih tinggi dalam kapiler paru- paru menyebabkan pembentukan oxyhemoglobin. Sebaliknya pada kondisi
tekanan oksigen yang rendah, temperatur yang tinggi dan pH yang lebih rendah di jaringan menyebabkan pelepasan oksigen dari oxyhemoglobin(Ganong 1995).
Jumlah eritrosit dipengaruhi oleh umur, jenis kelamin, hormon, keadaan hipoksia dan berbagai faktor lainnya (Sturkie dan Grimingger 1976). Swenson (1984), menambahkan faktor status nutrisi, volume darah, spesies dan ketinggian juga mempengaruhi jumlah eritrosit. Faktor-faktor ini tidak hanya mempengaruhi jumlah eritrosit tetapi juga kadar hemoglobin, nilai hematokrit dan konsentrasi kandungan darah lainnya. Menurut Ganong (1995), eritrosit juga mengalami lisis karena obat dan infeksi. Bila terjadi perdarahan atau hipoksia, sintesis
haemoglobin akan meningkat, dan pembentukan serta pelepasan sel darah merah dari sumsum tulang (eritropoesis) meningkat.
Hematokrit
Hematokrit atau Packed Corpuscular Volume (PCV) adalah suatu ukuran yang mewakili eritrosit di dalam 100 ml darah, sehingga dilaporkan dalam bentuk persentase (Schalm et al ., 1975). Sedangkan menurut Guyton (1997), hematokrit
adalah fraksi darah yang terdiri dari sel-sel darah merah, yang ditentukan melalui sentrifugasi darah dalam “tabung hematokrit” sampai sel-sel ini menjadi benar- benar mampat pada bagian bawah tabung. Pada hewan normal PCV sebanding dengan jumlah eritrosit dan kadar hemoglobin. Eritrosit berpengaruh terhadap viskositas darah yaitu semakin besar persentase sel darah merah semakin banyak timbul gesekan antar lapisan darah sehingga viskositas darah meningkat yang berakibat pada derajat aliran darah yang malalui pembuluh darah kecil.
Dalam pengukuran nilai hematokrit, darah dibagi menjadi tiga bagian, yaitu eritrosit di bagian dasar, leukosit dan trombosit yang merupakan lapisan berwarna putih sampai abu-abu (buffy coat ) serta plasma darah pada bagian paling
atas (Schalmet al ., 1975).
Pada saat perdarahan jumlah eritrosit yang hilang berbanding lurus dengan plasma darah sehingga nilai hematokrit tidak berubah. Namun anemia
menyebabkan nilai hematokkrit turun (Duncan dan Prase 1977).
Nilai hematokrit sangat bervariasi pada setiap individu. Angka ini bergantung pada apakah individu tersebut menderita anemia atau tidak, derajat aktivitas tubuh dan ketinggian tempat dimana individu tersebut berada (Guyton 1997).
Hemoglobin
Pigmen merah yang membawa oksigen dalam sel darah merah hewan vertebrata adalah hemoglobin, suatu protein yang mempunyai berat molekul 64.450 (Ganong 1995). Fungsi hemoglobin adalah sebagai pengangkut oksigen dimana tiap gram hemoglobin akan mengangkut sekitar 1.34 ml oksigen (Frandson 1996). Menurut Guyton (1997), pigmen merah yang membawa oksigen
dalam sel darah merah mampu mengkonsentrasikan hemoglobin dalam cairan sel sampai sekitar 34 g/dl sel. Bila pembentukan hemoglobin dalam sumsum tulang berkurang, maka persentase hemoglobin dalam sel dapat turun sampai di bawah
nilai ini, dan volume sel darah merah juga menurun karena hemoglobin untuk mengisi sel berkurang. Hemoglobin yang dilepaskan dari sel sewaktu sel darah merah pecah, akan segera difagosit oleh sel-sel makrofag di hampir seluruh tubuh, terutama di hati (sel-sel Kupffer), limpa, dan sumsum tulang.
Pembentukan hemoglobin dimulai dalam eritroblas dalam stadium retikulosit kemudian diteruskan sampai sel eritrosit matang. Jika sel darah merah meninggalkan sumsum tulang dan masuk ke aliran darah maka akan tetap melanjutkan pembentukan sedikit hemoglobin selama beberapa hari atau sesudahnya (Schalm et al.,1975).
Kadar hemoglobin dipengaruhi oleh umur, jenis kelamin dan musim (Jones dan Johansen 1972). Selain itu faktor-faktor yang mempengaruhi eritropoesis dan jumlah sel darah merah juga mempengaruhi kadar hemoglobin misalnya keadaan hipoksia dan anemia (Sturkie 1976).
Leukosit
Sel darah putih (leukosit) merupakan unit yang aktif dari sistem pertahanan tubuh (Guyton 1997). Leukosit ini sebagian dibentuk di sumsum tulang (granulosit dan monosit serta sedikit limfosit ) dan sebagian lagi di jaringan limfe (limfosit dan sel-sel plasma).
Terdapat 3 jenis leukosit, yaitu polimorfonuklir, monosit dam limfosit Rukmono (1979). Menurut Ganong (1995) sebagian besar dari sel polimorfonuklear mengandung granula netrofilik (netrofil), sedangkan sebagian
kecil mengandung granula yang dapat diwarnai dengan zat warna asam (eosinofil), dan sebagian lagi mengandung granula basofilik (basofil). Jumlah leukosit yang beredar ialah antara 4.000 – 12. 000/µl (Rukmono 1979). Persentase normal dari sel darah putih kira-kira 62.0% netrofil polimorfonuklir, 2.3% eosinofil polimorfonuklear, 0.4% basofil polimorfonuklear, 5.3% monosit, dan 30.0% limfosit (Guyton 1997).
Granulosit (Lekosit polimorfonuklear, PMN)
Semua sel granulosit memiliki granula sitoplasmik yang mengandung substansi biologik aktif, yang berperan dalam reaksi peradangan dan alergi (Ganong 1995).
Masa hidup granulosit sesudah dilepaskan dari sumsum tulang normalnya 4 sampai 8 jam dalam sirkulasi darah, dan 4 sampai 5 hari berikutnya dalam jaringan. Pada keadaan infeksi jaringan yang berat, masa hidup keseluruhan
seringkali berkurang sampai hanya beberapa jam, karena granulosit dengan cepat akan menuju daerah infeksi, juga akan melakukan fungsinya, serta akan masuk dalam proses di mana sel-sel itu sendiri dimusnahkan (Guyton 1997).
Neutrofil (mikrofag)
Neutrofil dewasa memiliki nukleus yang bersegmen. Sedangkan neutrofil muda disebut juga Band cell memiliki nukleus yang menggulung atau seperti batang tanpa segmentasi (Swenson 1984). Sel neutrofil berukuran 12-15 mikron. Inti bergelambir 2-5. Sitoplasama bergranul eosinofilik dan basofilik. Setelah 6-10 jam di dalam darah, memasuki jaringan dan tahan 1-2 hari. Waktu paruh rata-rata sel neutrofil di dalam sirkulasi adalah 6 jam. Untuk dapat mempertahankan kadar normal di dalam peredaran darah diperlukan pembentukan lebih dari 100 miliar sel neutrofil per hari (Ganong 1995).
Neutrofil merupakan sel lukosit dengan mobilitas tinggi sehingga menjadi sel pertama yang sampai ke jaringan penghasil substansi kimia yang bersifat kemotaksis (Martini et al., 1992). Substansi kimia tersebut mampu merangsang neutrofil keluar dari pembuluh darah melalui proses diapedesis atau gerakan amuboid (Swenson 1984). Neutrofil yang berhasil migrasi ke jaringan tidak akan kembali ke dalam sirkulasi darah (Jubb et al.,1993).
Sel neutrofil merupakan sel pertahanan pertama terhadap kontaminasi mikroba pada peradangan. Neutrofil bertugas membunuh dan memfagosit partikel-partikel asing yang terdapat pada luka dengan cara fagositosis (Vegad
1995). Setelah menfagosit partikel asing (termasuk sisa nekrosa sel inang), neutrofil akan mati dan akan digantikan oleh makrofag sebagai sel pertahanan
kedua. Menurut Guyton (1997) sebuah sel neutrofil dapat memfagositosis 5 sampai 20 bakteri sebelum sel netrofil itu sendiri menjadi inaktif dan mati.
Lekositosis ialah keadaan bila jumlah leukosit meningkat, yaitu melebihi 10.000/µl. Dalam prakteknya lekositosis berarti meningkatnya jumlah leukosit neutrofil, sehingga melebihi 60% jumlah seluruh leukosit. Lekositosis merupakan suatu reaksi terhadap adanya cidera. Lekositosis ini disebabkan produksi sumsum tulang meningkat, sehingga jumlahnya dalam darah cukup untuk menyelenggarakan emigrasi pada waktu ada jaringan cidera atau radang (Rukmono 1979).
Eosinofil
Eosinofil memiliki nukleus bergelambir dua, dikelilingi butir-butir asidofil yang cukup besar berukuran 0.5-1.0 μm. Diameter eosinofil 10-15 μm dan jangka waktu hidup dalam sirkulasi darah selama 3-5 hari (Dellmann dan Brown 1989).
Eosinofil memiliki waktu paruh yang singkat di dalam sirkulasi. Eosinofil melepaskan protein, sitokin dan kemokin yang mengakibatkan reaksi peradangan tetapi mampu membunuh organisme yang menyusup ke dalam tubuh. Jumlah eosinofil yang beredar dalam sirkulasi akan meningkat pada penyakit alergi, seperti asma serta berbagai penyakit saluran pernapasan dan saluran gastrointestinal lainnya (Ganong 1995).
Eosinofil berperan sebagai sel fagosit tapi bukan terhadap bakteri atau runtuhan-runtuhan sel, melainkan terhadap komponen asing yang telah bereaksi dengan antibodi (Martini et al., 1992). Eosinofil ditarik ke lokasi terjadinya reaksi antigen-antibodi kemudian memakan kompleks antigen-antibodi tersebut (Swenson 1984). Eosinofil mampu membunuh bakteri tapi kurang efisien dibandingkan dengan neutrofil (Jubb et al., 1993). Mobilisasi eosinofil ke dalam jaringan terjadi karena adanya substansi yang bersifat kemotaktik terhadap eosinofil seperti kompleks antigen-antibodi, histamin, interleukin, fibrinogen dan fibrin. Sel eosinofil yang sudah bermigrasi ke jaringan tidak dapat masuk kembali ke dalam darah (Jain 1993).
Basofil
Basofil berdiameter 10-12 μm dengan inti bergelambir dua atau tidak teratur. Butirnya 0.5-1.5 μm berwarna biru tua sampai ungu sering menutupi inti yang berwarna agak cerah. Butir-butir tersebut mengandung heparin, histamin, asam hialuron, kondroitin sulfat, serotonin dan beberapa faktor kemotaktik (Delmann dan Brown 1989).
Basofil di dalam sirkulasi darah mirip dengan sel mast besar yang terletak tepat di sisi luar kebanyakan kapiler dalam tubuh (Ganong 1995). Basofil juga akan masuk ke jaringan dan melepaskan berbagai protein serta sitokin. Basofil mengandung histamin dan heparin. Sel-sel ini melepaskan histamin dan mediator radang lain apabila diaktifkan oleh faktor penglepas-histamin yang disekresi oleh limfosit T, dan penting pada reaksi hipersensitifitas yang berkisar dari urtikaria ringan dan rinitis, sampai syok anafilaktik berat (Ganong 1995). Basofil memiliki fungsi utama dalam membangun reaksi hipersensitif dan sekresi mediator yang bersifat vasoaktif (Delmann dan Brown 1989).
Agranulosit Limfosit
Sel limfosit memiliki dua bentuk, yaitu limfosit besar yang merupakan bentuk belum dewasa, berdiameter 12-15 μm, memiliki lebih banyak sitoplasma, nukleus lebih besar dan sedikit pucat dibandingkan limfosit kecil. Sementara limfosit kecil merupakan bentuk dewasa berdiameter 6-9 μm, nukleus besar dan kuat mengambil zat warna, dikitari sedikit sitoplasma berwarna biru pucat. Lazimnya inti memiliki sedikit lekuk pada satu sisi (Dellmann dan Brown 1989).
Limfosit merupakan unsur kunci pada proses kekebalan tubuh (sistem imun). Limfosit merupakan sel yang memiliki inti bulat besar dan sitoplasma sedikit Limfosit dibentuk di sumsum tulang pasca kelahiran, tetapi sebagian besar dibentuk dalam kelenjar limfe, timus dan limpa dari sel prekursor yang berasal dari sumsum tulang, setelah mengalami pemrosesan di dalam timus atau bursa ekivalen menjadi prekursor sel T atau sel B. Pada umumnya limfosit memasuki sistem peredaran darah melalui pembuluh limfe lebih dari satu kali (resirkulasi) (Ganong 1995).
Limfosit memiliki masa hidup berminggu-minggu, berbulan-bulan, atau bahkan bertahun-tahun, tetapi hal ini bergantung pada kebutuhan tubuh akan
sel-sel tersebut (Guyton 1997).
Monosit
Monosit adalah leukosit terbesar berdiameter 15-20 μm. Sitoplasma lebih banyak daripada sitoplasma sel limfosit. Nukleus seperti ginjal atau mirip tapal kuda. Monosit darah tidak pernah mencapai dewasa penuh sampai bermigrasi ke dalam jaringan menjadi makrofag tetap pada sinusoid hati, sumsum tulang, alveoli paru-paru dan jaringan limfoid (Dellmann dan Brown 1989). Monosit mengandung banyak sitoplasma tidak bergranula dan mempunyai inti berbentuk menyerupai ginjal (Ganong 1995).
Monosit berfungsi mengawasi daerah infeksi dan memfagositosis bakteri, benda asing dan sel-sel mati (Ganong 1995). Menurut Guyton (1997), monosit juga berfungsi melindungi tubuh terhadap organisme penyerang terutama dengan cara fagositosis. Monosit memiliki masa edar yang singkat, yaitu 10 sampai 20 jam, berada dalam darah sebelum mengembara melalui membran kapiler ke dalam jaringan. Begitu masuk ke dalam jaringan, sel-sel ini membengkak dengan ukuran yang sangat besar untuk membentuk makrofag jaringan, dan dalam bentuk ini, sel-sel tersebut dapat hidup berbulan-bulan atau bahkan bertahun-tahun kecuali bila mereka dimusnahkan karena melakukan fungsi fagositik. Makrofag/monosit sering memakan partikel yang sama atau lebih besar darinya. Saat benda asing terlalu besar untuk dicerna, beberapa makrofag bergabung menjadi satu yang dikenal dengan nama phagocytic giant cell sampai cukup besar untuk melakukan tugasnya (Martini et al., 1992).
METODOLOGI PENELITIAN
Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dimulai dari bulan Juli hingga Desember 2007. Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Farmasi dan Laboratorium Patologi Klinik dan Laboratorium Terpadu Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor.
Bahan dan Alat
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain simplisia rimpang kunyit (Curcuma longa Linn.), etanol 96%, hexan, amonia, kloroform, Meyer, pelarut Rx Wagner, metanol, logam Magnesium, NaOH 10%, FeCL3 1%, NaOH 15%, pakan (pelet apung), eter, cairan pengencer (Hayem), cairan pengencer (Turk), larutan HCl 0.01 N dan aquadest steril.
Peralatan yang digunakan antara lain timbangan, sendok tanduk, erlenmeyer, plastik penutup cawan, maserator, batang pengaduk, kertas saring, cawan penguap, oven, evaporator, vacum, corong pisah, mortar, tube tidak berwarna, spatula, tabung reaksi, penangas air, spoit, kandang tikus, skalpel, gunting, pinset, venul jek, tabung kapiler, sentrifuse, mikrohematokrit reader , alat penyumbat tabung kapiler (crestoseal), hemoglobinometer Sahli (hemeometer), pipet tetes (Mohr), gelas objek,cover glass, mikroskop, dan hand counter .
Hewan percobaan
Hewan percobaan yang digunakan pada penelitian ini adalah 46 ekor Mencit putih ( Mus musculus albinus) jantan dengan berat 20-40 gram, berumur 2 bulan.
Metode Penelitian Ekstraksi
Ekstrak diperoleh dengan cara maserasi sesuai dengan farkmakope Indonesia (1995) dengan menggunakan etanol 96% dan hexan. Satu bagian simplisia rimpang kunyit dimasukkan ke dalam maserator, ditambah 10 bagian etanol 96%, direndam selama 6 jam sekali-kali diaduk sampai homogen dan
kemudian ditutup rapat agar tidak terjadi penguapan dan kontaminasi dari luar, kemudian didiamkan sampai 24 jam. Maserat dipisahkan dan diproses ulang 3 kali (triplo) dengan jenis dan jumlah pelarut yang sama. Semua filtrat dikumpulkan dan diuapkan (evaporasi) dengan evaporator hingga diperoleh ekstrak semi padat. Hasilnya kemudian dioven dengan temperatur 40oC hingga diperoleh ekstrak kental. Rendemen yang diperoleh ditimbang dan dicatat.
Rendemen = Berat ekstrak kental x 100% Berat simplisia
Ekstrak kental dilarutkan dengan etanol 96% hingga terbentuk larutan ekstrak. Kemudian ditambahkan larutan hexan (non polar) dengan perbandingan 1:1 dan dimasukkan ke dalam corong pisah. Dikocok dengan kecepatan sedang dan berhati-hati agar tidak terjadi emulsi (busa), sehingga terbentuk dua lapis pelarut. Lapisan di bawah adalah hexan, sedangkan etanol di lapisan atas. Kemudian ditampung secara terpisah. Fraksinasi ini diulangi hingga 3 kali (triplo) agar optimal. Fraksi hexan yang diperoleh dikumpulkan dan diuapkan (evaporasi) dengan avaporator hingga diperoleh ekstrak semi padat. Hasilnya kemudian di oven dengan temperatur 40oC. Rendemen yang diperoleh ditimbang dan dicatat.
Setelah diperoleh ekstrak etanol dan fraksi hexan selanjutnya dilakukan penapisan fitokimia terhadap alkaloid, flavonoid, polifenol, tannin, saponin, dan kuinon. Secara garis besar skema/bagan alur cara ekstraksi rimpang kunyit terlihat pada Gambar 4.
Kunyit
Maserasi ethanol 96% (pelarut polar)
Filtrat etanol Maserat
Diuapkan Ekstrak kental (etanol)
Fraksinasi hexan (pelarut non polar)
Fraksi hexan
Bahan bioaktif terpilih Bahan bioaktif terpilih Uji in vitro pada mencit
Penapisan Fitokimia
Dilakukan penapisan fitokimia dari hasil ekstraksi untuk mengetahui kandungan bahan aktif dengan manggunakan metode Harbone (1987) sebagai berikut :
Uji Alkaloid
Serbuk simplisia dibasakan dengan 3 tetes amonia, kemudian ditambahkan kloroform. Filtrat ditambahkan 10 tetes H2SO4 2M. Hasil positif apabila
ditambahkan Meyer menjadi endapan putih dan coklat dengan penambahan pelarut Rx Wagner.
Uji Flavonoid
Serbuk simplisia dipanaskan dengan campuran metanol dan logam Magnesium. Adanya flavonoid akan menyebabkan filtrat berwarna merah setelah penambahan 5 tetes NaOH 10%.
Uji Saponin
Serbuk simplisia dipanaskan dengan air dalam tabung reaksi. Kemudian dikocok kuat-kuat selama lebih kurang 30 detik. Pembentukan busa 10 menit kemudian menunjukkan bahwa dalam sampel terdapat saponin.
Uji Tanin
Serbuk simplisia ditambahkan dengan air, kemudian dididihkan. Kepada filtrat ditambahkan larutan 5 tetes FeCL3 1%. Sehingga terbentuk warna biru tua
atau hitam kehijauan. Hal ini menunjukkan bahwa sampel tersebut positif mengandung tanin.
Uji Kuinon
Serbuk simplisia ditambahkan air kemudian dididihkan. Kepada filtrat diberi NaOH 15%. Adanya senyawa kuinon ditandai dengan terjadinya warna kuning hingga merah.
Uji Fenol
Serbuk simplisia ditambahkan larutan pereaksi FeCl3 1% sebanyak 5 tetes.
Pembuatan Salep Pembuatan Salep
Fraksi etanol rimpang kunyit dan fraksi hexan rimpang kunyit dibuat Fraksi etanol rimpang kunyit dan fraksi hexan rimpang kunyit dibuat salep. Satu bagian fraksi etanol rimpang kunyit ditambah dengan empat bagian salep. Satu bagian fraksi etanol rimpang kunyit ditambah dengan empat bagian vaselin kuning. Dihomogenkan di mortar dengan stamphis dan kemudian vaselin kuning. Dihomogenkan di mortar dengan stamphis dan kemudian disimpan dalam tube tidak berwarna yang tertutup. Begitu juga dengan fraksi disimpan dalam tube tidak berwarna yang tertutup. Begitu juga dengan fraksi hexan rimpang kunyit. Salep siap digunakan.
hexan rimpang kunyit. Salep siap digunakan.
Pengelompokan Mencit Pengelompokan Mencit
Mencit diadaptasikan
Mencit diadaptasikan selama 10 hari selama 10 hari sebelum diberikan sebelum diberikan perlakuan. perlakuan. MencitMencit dipelihara dalam kandang plastik yang berukuran 20 x 30 cm. Pada bagian atas dipelihara dalam kandang plastik yang berukuran 20 x 30 cm. Pada bagian atas kandang ditutup dengan kawat kasa, hal ini bertujuan agar mencit tidak lepas dan kandang ditutup dengan kawat kasa, hal ini bertujuan agar mencit tidak lepas dan aman dari pemangsa namun udara tetap bebas bersirkulasi. Pada bagian dasar aman dari pemangsa namun udara tetap bebas bersirkulasi. Pada bagian dasar diberi serbuk gergaji/sekam untuk menjaga agar suhu tetap optimal. Mencit diberi diberi serbuk gergaji/sekam untuk menjaga agar suhu tetap optimal. Mencit diberi makan pelet dan minum. Sebanyak 6 ekor mencit digunakan sebagai kontrol makan pelet dan minum. Sebanyak 6 ekor mencit digunakan sebagai kontrol sebelum dilakukan perlukaan. Sedangkan 40 ekor mencit lainnya dikelompokkan sebelum dilakukan perlukaan. Sedangkan 40 ekor mencit lainnya dikelompokkan menjadi 4 kelompok, masing-masing kelompok terdiri atas
menjadi 4 kelompok, masing-masing kelompok terdiri atas 10 ekor.10 ekor. K+
K+ : : kelompok kelompok kontrol kontrol positif, positif, yaitu yaitu kelompok kelompok mencit mencit yang yang diberi diberi obatobat persembuhan luka komersial yang mengandu
persembuhan luka komersial yang mengandung neomycin sulfat 5%.ng neomycin sulfat 5%. K-
K- : : kelompok kelompok kontrol kontrol negatif negatif yang yang tidak tidak diberi diberi sediaan sediaan apapun.apapun. P1
P1 : : kelompok kelompok mencit mencit yang yang diberi diberi salep salep ekstrak ekstrak etanol etanol rimpang rimpang kunyit.kunyit. P2
P2 : : kelompok kelompok mencit mencit yang yang diberi diberi salep salep fraksi fraksi hexan hexan rimpang rimpang kunyit.kunyit.
Perlukaan mencit Perlukaan mencit
Perlukaan dilakukan pada punggung mencit dengan membuat sayatan Perlukaan dilakukan pada punggung mencit dengan membuat sayatan sepanjang ±1.5 cm sejajar os vertebrae dengan menggunakan skalpel steril. sepanjang ±1.5 cm sejajar os vertebrae dengan menggunakan skalpel steril. Sebelum dilakukan perlukaan, bulu disekitar punggung dicukur dan dibersihkan Sebelum dilakukan perlukaan, bulu disekitar punggung dicukur dan dibersihkan dengan alkohol.
dengan alkohol.
Pemberian ekstrak terpilih rimpang kunyit Pemberian ekstrak terpilih rimpang kunyit
Ekstrak yang terpilih akan diberikan dengan cara mengoleskan pada Ekstrak yang terpilih akan diberikan dengan cara mengoleskan pada bagian
bagian luka luka mencit mencit setiap setiap hari. hari. Pemberian Pemberian ekstrak ekstrak dilakukan dilakukan dua dua kali kali sehari sehari daridari hari ke-1 sampai hari ke-21 pasca perlukaan. Sebagai pembanding digunakan hari ke-1 sampai hari ke-21 pasca perlukaan. Sebagai pembanding digunakan
kontrol negatif yaitu mencit yang tidak diberi sediaan apapun serta kontrol positif kontrol negatif yaitu mencit yang tidak diberi sediaan apapun serta kontrol positif yaitu mencit yang diberi obat persembuhan luka komersial yang mengandung yaitu mencit yang diberi obat persembuhan luka komersial yang mengandung neomycin sulfat 5%.
neomycin sulfat 5%.
Pengambilan Darah Pengambilan Darah
Pengambilan darah dilakukan pada hari ke-2, 4, 7, 14, dan 21 setelah Pengambilan darah dilakukan pada hari ke-2, 4, 7, 14, dan 21 setelah perlukaan
perlukaan secara secara intra intra cardial. cardial. Karena Karena volume volume darah darah yang yang diperlukan diperlukan dalamdalam jumlah
jumlah banyak, banyak, pengambilan pengambilan darah darah diperoleh diperoleh dari dari jantung. jantung. Agar Agar tidak tidak menyakitimenyakiti hewan sebelum pengambilan darah dilakukan anasthesi. Eter adalah obat paling hewan sebelum pengambilan darah dilakukan anasthesi. Eter adalah obat paling sering dipakai untuk anasthesi mencit. Eter diberikan dengan cara tetes terbuka, sering dipakai untuk anasthesi mencit. Eter diberikan dengan cara tetes terbuka, misalnya kapas dibasahi dengan eter diletakkan dalam sebuah piala, hewan misalnya kapas dibasahi dengan eter diletakkan dalam sebuah piala, hewan dimasukkan dan piala ditutup sampai terjadi anasthesi. Sistem ini mudah dan dimasukkan dan piala ditutup sampai terjadi anasthesi. Sistem ini mudah dan murah.
murah. Mula-mula Mula-mula mencit dmencit diletakkan iletakkan pada pada punggungnya punggungnya sesudah sesudah dianestesi,dianestesi, bagian
bagian dada dada didesinfeksi, didesinfeksi, lalu lalu dengan dengan jarum jarum sepanjang sepanjang 2.5 2.5 cm, cm, ukuran ukuran 25 25 (25(25
gauge
gauge) dengan spoit 2 ml, jarum ditusukkan sedikit di belakang cartilago) dengan spoit 2 ml, jarum ditusukkan sedikit di belakang cartilago xyphoidea dan sedikit ke bawah dan ke depan sehingga jarum tersebut menusuk xyphoidea dan sedikit ke bawah dan ke depan sehingga jarum tersebut menusuk jantung.
jantung. Darah Darah yang yang telah telah diambil diambil dengan dengan spoit spoit segera segera dimasukkan dimasukkan kedalamkedalam tabung yang sudah berisi antikoagulan EDTA (Ethylendiamine tetraacetic acid). tabung yang sudah berisi antikoagulan EDTA (Ethylendiamine tetraacetic acid). Kemudian dilakukan pemeriksaan aspek hematologis. Parameter yang diamati Kemudian dilakukan pemeriksaan aspek hematologis. Parameter yang diamati adalah jumlah eritrosit, nilai hematokrit, kadar hemoglobin, dan jumlah leukosit. adalah jumlah eritrosit, nilai hematokrit, kadar hemoglobin, dan jumlah leukosit. Sampel darah diambil dari 2 ekor mencit dari setiap kelompok perlakuan.
Sampel darah diambil dari 2 ekor mencit dari setiap kelompok perlakuan.
Pemeriksaan Darah Pemeriksaan Darah
Perhitungan Jumlah Eritrosit (RBC) Perhitungan Jumlah Eritrosit (RBC)
Sampel darah dihisap dengan menggunakan pipet eritrosit hingga Sampel darah dihisap dengan menggunakan pipet eritrosit hingga mencapai tanda tera 0.5 dengan aspirator. Ujung pipet dibersihkan dengan mencapai tanda tera 0.5 dengan aspirator. Ujung pipet dibersihkan dengan menggunakan tissue, kemudian cairan pengencer (Hayem) dihisap hingga menggunakan tissue, kemudian cairan pengencer (Hayem) dihisap hingga mencapai tanda 101. untuk menghomogenkan, pipet diputar dengan membentuk mencapai tanda 101. untuk menghomogenkan, pipet diputar dengan membentuk angka delapan selama tiga menit. Setelah homogen cairan yang tidak terkocok angka delapan selama tiga menit. Setelah homogen cairan yang tidak terkocok pada
pada ujung ujung pipet pipet dibuang dibuang dengan dengan menempelkan menempelkan ujung ujung pipet pipet pada pada tissue. tissue. SetelahSetelah itu dengan hati-hati diteteskan satu tetes ke dalam haemocytometer agar udara itu dengan hati-hati diteteskan satu tetes ke dalam haemocytometer agar udara tidak masuk. Setelah dibiarkan beberapa saat hingga cairan mengendap, tidak masuk. Setelah dibiarkan beberapa saat hingga cairan mengendap,
