HUBUNGAN ANTARA PERTUMBUHAN DENGAN KEBERADAAN GEN
TAHAN PENYAKIT
MAJOR HISTOCOMPATIBILITY COMPLEX
(
MHC
)
PADA
IKAN MAS (
Cyprinus carpio
)
Erm a Pr i m ani ta Hayu ni n gt yas, Di di k Ar i yant o, dan Kh air ul Syah pu tr a
Balai Peneli ti an Pem ul iaan Ikan Jl . Raya 2 Suk am andi , Subang 412 56 E- m ai l : er m a_pr im ani t a@y ahoo.com
(Naskah dit er im a: 9 Apr il 2 0 13 ; Diset uj ui publikasi: 1 2 Septem ber 20 13)
ABST RAK
Wab ah p enyaki t koi herp es vi rus (KHV) di Ind onesia yang t er jadi sej ak t ahun 2 00 2 m erupakan salah satu faktor yang m em icu kem erosotan produksi ikan m as budidaya. Pem bentukan strain unggul ikan m as tahan KHV dapat m enjadi solusi bagi perm asalahan tersebut. Pem ilihan genotip ikan m as tahan KHV dengan m arka m olekuler gen m ajor hist ocom pat ibilit y com plex class II (MHC- II), k hususnya p ada al el Cy ca DAB 1 *0 5 akan m em bant u d al am kegi at an selek si . Penel it i an i ni bert uj uan unt uk m engetahui k eb er ad aan g en MHC- II p ad a p op ul asi d asar G0 i k an m as st r ai n Raj ad anu d an hubung annya d engan p ertum buhan (bobot). Metod e detek si k eberadaan g en MHC- II p ad a d u a k el om p ok i k an d eng an u k ur an b er b ed a d i l ak u k an d eng an t ek ni k PCR. Hubungan antara pertum buhan ikan m as d engan persentase kem unculan gen MHC- II d i anal i si s d eng an m eng g unak an p r og r am SPSS (St at ist ical Pack a ge f or t he Social Sciences), sehingga diperoleh korelasi di antara keduanya. Hasil penelitian m enunjuk-kan bahwa hubungan antara pertum buhan dengan persentase keberadaan gen MHC- II berkorelasi negatif dengan nilai R = - 0,742. Hal ini m engindikasikan bahwa sem akin cepat pertum buhan populasi ikan m as m aka sem akin sedikit persentase individu yang m em p unyai g en MHC- II pada setiap populasi ikan m as. Sehingga populasi ikan m as yang pertum buhannya lam bat m em iliki tingk at persentase positif MHC- II lebih tinggi (85,71%- 100%) dibandingkan populasi ikan m as yang pertum buhannya cepat (42,86%-85,7 1%).
KATA KUNCI: ik an m as, p ertu m bu han , d aya tahan , g en M HC- II, Koi H erp es Virus (KHV)
ABST RACT : A correlation between growth character and presence of M ajor Histocom patibility Com plex (M H C) gene as disease resistance m ar k er in com m on carp (Cy pr inus car pio). By: Er m a Prim ani ta H ayu n i ng t yas, D i d i k Ar i yan t o, and Kh ai r u l Syah p u t r a
Package f or the Social Sciences) sof twar e. The r esult showed that t her e was negat ive
Ikan m as m erupakan salah satu kom oditas an dalan pem bud idaya ikan air t awar. Wab ah penyakit ko i h arp es viru s atau KHV yang ter-j ad i seter-jak tah un 20 0 2 m eru pak an k en d ala dalam kegiatan bu didaya ikan m as seh ing ga prod uk sinya m en galam i k em ero so tan yang sangat signifik an. Penyakit in feksi p ada ik an i n i d ap at m en yeb ab k an k em at i an m assal sekitar 80%- 95%. KHV m ulai m ewabah di Indo-nesia sejak didatangkannya ikan koi im por dan didistribusikan dari Surabaya ke Blit ar, Jawa Tim ur. Hal ini jug a d ipicu oleh ko ndisi cuaca d en gan cu rah h u jan yan g t in g gi seh in g g a m en unjang penyebaran wabah penyakit lebih cepat (Su nart o, 2005 ).
Penyakit KHV m em ilik i p ola penyebaran yang kon sisten dari ikan sakit yang m asuk ke lingk ung an bud idaya d eng an sif at pen yeb a-ran yang infeksius. Pada sistem kolam air deras d i su n g ai, p en yak it i n i m en yeb ar k e h il ir (bawah ) tet ap i t id ak k e h ulu (bag ian atas), sehingga penyakit m enyebar m elalui aliran air. Pen yak i t KHV t er seb ar d en g an cep at k e seluruh perairan t awar Indo nesia, seh ing ga berbagai upaya dilakuk an unt uk m enangani d an m en ceg ah m ewab ah n ya p en yak i t in i. Mulai dari penggunaan imunostim ulan berupa
Cr -yeast yang m am pu m em berikan respo ns positif pada peningkatan daya tahan tubuh dan sintasan ikan m as (Mud jiut am i et al., 20 07 ). Selain itu, ad a p ula upaya pem eliharaan ik an m as d i p erairan bersalin itas 5 ‰, yang relat if lebih tahan terhad ap serang an KHV (Saput ra
et al., 2010). Pem berian vaksin juga m erupakan salah sat u u paya yang dap at dilaku kan unt uk mencegah serangan KHV dan dapat m enambah sintasan di atas 2 0%. Nam un up aya terseb ut pun m asih ada kendala yang dihadapi, di anta-ranya relatif sulit u ntuk diaplikasik an secara massal.
Penan gan an p encegahan yang d ilakuk an terh adap pen yakit infeksi KHV sam p ai saat ini
masih meliputi penambahan sistem pertahanan im un pada ikan mirip dengan sistem im un pada m am alia, m esk ip u n ak ib at p erk em b an g an evolu si m enyeb ab k an ik an m em iliki asp ek im u nitas yang spesif ik (Iriyant o, 200 5).
Sist em p er t ah an an sp esi f i k b er f u n g si m oral, selular, dan organ lim foid. MHC class II term asuk sistem im un spesifik yang bersif at adap tif . Mayor Hist ocom pat ibilit y Com plex
(MHC) ad alah suatu kelo m pok atau kum pu lan g en yang terletak d alam k ro m o som 6 dan berperan dalam pen gen alan d an p em b erian sinyal di antara sel- sel sistem imun. MHC class
II terdiri atas sel- sel im u nok om peten seperti sel B, m o nosit, m akrof ag, ant igen pr esent ing Sel- sel fagositik akan diaktifkan oleh MHC class
class II (MHC- II), khususnya pada alel Cyca DAB 1 * 0 5 d ij ad ik an seb ag ai p en ciri m o l ek u l er sebag ai p enanda ik an m as tah an penyakit.
MHC m erupakan karakter daya tahan tubuh terhadap pen yak it yan g d apat d idet eksi k e-berad aann ya secara gen otip. Selain karakt er daya t ahan terd apat karak ter pertu m b uh an yang dapat d ilihat secara fenotip, karakter ini j u ga b erp eran p ent in g d alam p enin g k at an p rod u k si secara k ualit atif . Men u rut Fu jaya (2 00 4 ), p ert u m b u h an ad alah p ert am b ah an u k u ran b aik p an j an g m au pu n b o b o t . Per-tu m bu han dipen garuhi oleh f akt or gen etik, horm on, dan lingkungan. Sem entara m enurut Hepper & Prugn in (198 4), pertu m bu han ik an dipen garuhi oleh d ua fak tor, yaitu fakto r in-t ern al yan g m elip u in-t i g en ein-t ik d an k o n d i si f isio log is ik an , sert a f ak to r ekst ernal yan g b erhu bu ng an d en gan ling ku ng an . Pert um -buhan yang lam bat merupakan salah satu tanda ku alitas gen etik ikan yang m en urun , selain karakter negatif lainnya yaitu tingkat kem atian yang t inggi, kem atangan gon ad usia din i, dan uk uran in dividu yang k ecil.
Seb ag ai u p aya u n t u k m en an g g u l an g i wabah pen yakit KHV t erh adap ik an m as, Balai Pen elit ian Pem u liaan Ik an Su k am an d i m e-lakukan pem uliaan terhadap ikan m as m elalui p er b ai k an g e n e t i k y ai t u se c ar a se l e k s i pertu m buh an dan seleksi k eberad aan m arka gen etik a MHC class II. Hal ini dilakukan un tuk m em bentu k ikan m as tahan Koi Her pes Vir us
(KHV). Penelitian ini bertu juan un tuk m elih at h u b u n g an d aya t ah an i k an m as m e l al u i Su kam and i, Subang, Jawa Barat. Pen elitian ini m engg unakan ik an uji dari t uru nan pertam a in duk ikan m as strain Raj adanu yan g diseb ut po pulasi ik an m as G0. Ik an m as G0 m erup a-kan populasi dasar pem bentuk ia-kan m as tahan KHV. Ikan m as G0 yang digun akan berum ur tujuh bulan, terdiri atas dua kelom pok ukuran. Ukuran besar (404- 890 g) m erepresentasikan kelom pok ik an den gan pertum buh an cep at dan ukuran kecil (44- 196 g) yang merepresen-tasik an k elo m po k ikan den gan pertum buh an lambat.
Pemijahan
dilak ukan selek si ind ividu ikan un tuk m en-dapat kan pop ulasi ikan d eng an ukuran besar dan k elo m pok ik an den gan uk uran kecil. Ke-lom pok ikan ukuran besar m erepresentasikan ikan- ikan dengan pertum buhan cepat sedang-kan kelom pok ukuran kecil m erepresentasisedang-kan ik an- ikan dengan p ert um b uhan lam bat. Nilai pertumbuhan diinterpretasikan dengan bobot badan ik an. Jum lah sam pel ikan seb anyak 28 ekor, diam bil secara acak dari m asing- m asing kelom pok sebag ai bahan analisis m olekuler
Secara um um , analisis gen MHC dilakukan m elalu i t ig a t ah ap an , yait u ek st rak si DNA m etod e ek straksi DNeasy Bloo d & Tissue Kits (Qiag en). Sirip ikan m as seban yak 5- 10 m g dihancurkan, ditam bahkan 180 buffer ATL, 20 m L pr ot einase K dan di-vor t ex, serta diinkubasi pada suh u 5 6oC selam a tig a j am . Setelah d i-inkubasi, sam pel di-vor t ex kem bali selam a 15 d et ik , lalu d it am b ah k an 2 00 µ L buff er AL di-vor t ex, dit am b ah 200 µL etanol absolut e
(96%- 100%), kemudian di-sentr ifuge 13.000 rpm selam a dua m enit. Larutan tersebut dipindah-kan k e dalam m ini spin colum, di-sent r ifuge
6.000 - 8.000 rp m selam a satu m enit , cairan pada bag ian bawah spin colum d ibuang. Spin col um d ip in d ah k an p ad a t ub e yan g b ar u , ditambah 500 µL Buffer AW1 dan di-sent r ifuge
pada kecepatan 8.000 rpm selama satu menit, bagian bawah t ube d ibuang. Spin colum d i-bersinggu ngan d eng an cairan bag ian bawah
col um. Spi n col um d i p in d ah k an k e d alam
Am plifikasi DNA sam pel pada m esin PCR dilakukan deng an kit Maxim a Hot St ar t Gr een PCR m ast er Mix (2 X) (Ferm entas, Therm o Sci-entific). Prim er yang digu nakan ad alah prim er spesifik untuk MHC- II pada alel Cyca-DAB 1*05
(Rakus et al., 20 08). Kom p osisi p ereaksi PCR d i an t aranya ad alah : 1 µ L pr im er f or war d
(CTAATGGATACTACTGG), 1 µL pr im er r ever se
(ATCGCTGACTGTCTGTT) (Sucipto et al., 2011); 1 µL DNA (450 µg / m L); 12,5 µL kit Mast er m ix PCR, dan nuclease fr ee wat er sam pai total vo-lum e 25 µL.
Optimasi Suhu Annealing
Pada tah ap awal PCR d ilakuk an opt im asi suhu annealing terlebih dahulu m enggunakan
t her m ocycler gr adient (Esco ) d eng an p eng a-turan suhu secara otom atis pada kisaran 47o C-55oC. Sam pel yang digunakan ad alah sam p el g en o m DNA yan g sam a d an r unning pad a m esin PCR secara b ersam aan. Pro gram PCR terdiri atas denat ur asi awal p ada suh u 9 5oC selam a tiga menit, 30 siklus selanjutnya terdiri at as denat ur asi p ada suh u 9 5oC selam a 30 Program diakhiri den gan final ext ension pada su hu 7 2oC selam a tuj uh m en it dan pen gko n-dilan jutkan p ada sam pel yang lainnya d engan m engg unak an pro gram PCR sebagai beriku t:
denat ur asi awal p ada suh u 9 5oC selam a tiga m en i t , 3 0 sik l u s sel an j u t n ya t erd i ri at as
denat ur asi p ada suh u 9 5oC selam a 30 detik,
annealing p ada su hu 49,1oC selam a 30 det ik dan ext ension p ada suh u 7 2oC selam a satu m enit. Program diakhiri dengan final ext ension
pada suhu 72oC selam a tujuh menit dan peng-kondisian akhir pada suhu 4oC. Hasil PCR dapat langsung dielektroforesis atau disim pan dalam
30 0 b p, p rim er yan g digun akan adalah F: 5 CCC TGG CCC CCA GCA CAA TG- 3 ’ d an R: 5 ’-TCT GCG CAG TTG AGT CGG CG- 3’ . Prim er -akt in d id esain d ari dat a b ase d i genebank
den gan n om or aksesi M24 113.1 . Kon trol po-sitif - aktin d iperoleh d ari hasil am p lif ikasi terhadap genom DNA ikan mas dengan kualitas dan kuantitas yang m em adai.
Elek t rof oresis
Elektroforesis dilaku kan pad a g el agaro sa dengan konsentrasi sebesar 1,5% dalam buffer
1x TBE. Sebanyak 5 µL (pad a su m ur kecil) d an 10 µL (pada sum ur besar) pro duk PCR yang su dah terdapat loding dye d i d alam nya, d i-m asukkan ke dalai-m sui-muran agarosa. Deretan produk PCR yang sudah di-loading di-r unning
bersam aan dengan leader m ar ker ukuran 100 bp seban yak 4 µ L. Elektrofo resis d ilakuk an dengan m enggunakan arus listrik 80 V selam a 35 m enit . Setelah di-st aining m engg unak an
et hidium br om ide, selanj utn ya divisu alisasi-kan m engg unaalisasi-kan gel do c UV t ran silim in a-tor.
Analisis Data
Dat a dianalisis m eng gunakan analisis korelasi untuk m elihat hubungan antara pertum -bu han (bob ot) den gan frekuen si kem u nculan g en MHC p ad a m asin g - m asi n g k elo m p o k uk uran ik an. An alisis dat a d ilakuk an d eng an m eng gunakan sof t war e pro gram SPSS (St at is-t ical Pr oducis-t and Ser vice Soluis-t ions).
HASIL DAN BAHASAN
Sebagai t ahap an awal dari k egiatan pen e-litian dilakukan optim asi suhu annealing pada PCR MHC- II unt uk m eng hasilk an am p lif ikasi pada 300 bp. Op tim asi su hu dilakuk an m ulai dari 4 7oC sam p ai 5 5oC. Hasil yan g d iperoleh dari o ptim asi annealing yang dilaku kan yaitu dapat mengamplifikasi pada suhu 47oC sampai 52,8oC; dan diperoleh band p alin g t ebal pada su hu annealing 4 9,1oC (Gam bar 1). Hasil ini berbeda den gan penelitian sebelum nya yang dilak ukan oleh Sucipto et al. (20 11), d eng an m en g g u n ak an p r i m e r yan g s am a Cy ca -DAB1 * 05 d an uru t an seq uence yan g sam a m em iliki suhu annealing un tuk dap at m en g-am p lifik asi adalah pada suhu 55oC.
Berd asarkan hasil deteksi keberadaan gen MHC- II p ada ikan m as, diperoleh hasil am p li-fikasi p ada 300 bp pada ind ividu ikan m as. Kem unculan gen MHC- II p ada b eberapa in di-vidu ditunjukkan pada Gam bar 2.
Ban d b er u k u r an 3 0 0 b p m u n cu l p ad a sam pel nomor 1, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, serta pada kont rol po sit if, hasil ini m enunj ukk an bahwa gen MHC- II pad a alel Cyca DAB-1* 05
terdeteksi p ada tiap sam p el terseb ut. Seb a-liknya p ada sam pel no m or 3, 12 dan ko ntrol negat if, band sam a sekali t idak m u ncu l, hasil in i m en u n j u k k an b ah wa g en MHC- II t id ak terdapat pada sampel tersebut. Konfirmasi dari ketid akm u ncu lan gen MHC- II p ada beb erapa individu ikan m as, telah dilakukan PCR dengan
Gambar 1. Optim asi suhu annealing PCR, m enggunakan prim er Cyca-DAB 1*05
pada m esin t her m ocycler gr adient
Figur e 1. Tem per at ur e m elt ing PCR opt im ized, using Cyca-DAB 1*05 pr im er by t her m ocycler gr adient m achine
3,000 bp
M Suhu (oC)
50 0 bp 30 0 bp 10 0 bp
1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2
m engg unakan prim er - aktin p ada seluruh sampel uji dan hasilnya terlihat pada Gam bar 3.
Jika am plifik asi - aktin m enghasilkan pita DNA p ada 300 bp m aka g eno m DNA dari ik an yang negatif MHC- II terbu kti genom dalam keadaan baik sehingga dapat dipastikan bahwa ketidakm unculan gen MHC- II bukan dikarena-kan atau kualitas dan jumlah genom DNA yang tidak mem adai.
Persentase p ositif MHC- II yang diperoleh dari tiap po pulasi b erdasarkan bo bo t rat
a-ratanya d ivisualisasikan pada Gam bar 4 . Pada populasi 1 4 diinterpretasikan sebagai kelom -po k ikan yang pertum b uhannya lam b at. Pada popu lasi 5- 8 m eru pakan k elom pok ikan yang pertum buh ann ya cepat.
Ji k a d i l i h at se car a d esk r i p t i f t er l i h at perbedaan yang m en colo k b ahwa p ersentase MHC II p ad a kelo m p ok ikan yang p ertu m -buhannya lam bat m em iliki tingkat persentase po sit if MHC leb ih tin ggi (8 5,7 1%- 1 00%) d ib an d in g k an k elo m p o k ik an yan g p ert u m -Gambar 2. Amplifikasi gen MHC- II dengan m etode PCR menggunakan primer Cyca
DAB-1*05 (M = m arker; 1- 2 & 4- 11 = sam pel yang terdeteksi positif MHC- II; 3 & 12 = sampel yang negatif MHC- II; (+ ) = kontrol positif; (- ) = kontrol negatif)
Figur e 2. Am plificat ion of MHC-II gene by PCR using Cyca DAB-1*05 pr im er (M = m ar ker ; 1-2 & 4-11 = det ect ed as positive MHC-II; 3 & 12 = det ect ed as negat ive MHC-II; (+) = posit ive cont r ol; (-) = negat ive cont r ol)
3,000 bp 1,000 bp
50 0 bp 30 0 bp 10 0 bp
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2 (+ ) (-)
Gambar 3. Amplifikasi gen - aktin ikan m as sebagai kontrol internal dengan PCR (1- 12 = sampel, (+ ) = kontrol positif, (- ) = kontrol negatif)
Figur e 3. Am plificat ion of com m on car p -act in as int er nal cont r ol by PCR (1-12 = sam ple, (+) = posit ive cont r ol, (-) = negat ive cont r ol)
3,000 bp
50 0 bp 30 0 bp 10 0 bp
buhannya cepat (42,86%- 85,71%). Rendahnya persentase keberadaan MHC class II pada ikan m as yang m em iliki pert um b uhan yang cep at dipen garu hi oleh f akto r g enetik . Fakto r g e-netik terseb ut dip icu dari keg agalan dalam aktivasi sel efektor T yang dapat m em unculkan gen MHC class II. Sem ent ara respo ns sel T berg antung pada in terleu kin. Gangguan pada m ak rofag un tuk m em p rodu ksi interleu kin- 1, kurangnya kerja sama di antara subset- subset sel T dan produksi interleukin- 2 yang menurun
akan m engurangi respons im u n. Hal t ersebut diakibat kan kin erj a resp ons im un yang th am b at o leth t in g g in ya ak t ivit as g en p er-tu m bu han (Barat awidjaj a, 199 1). Hub ung an antara pertum buhan dengan keberadaan MHC-II diperkuat m elalui analisis korelasi d i antara keduanya (Tabel 1 ).
Berd asark an hasil an alisis k orelasi m e-n u e-n j u k k ae-n ad ae-n ya k o relasi e-n eg at if ae-n t ara bo bot rata- rata per p opu lasi yang m ewakili
*Ni lai korel asi berbeda nyat a pad a t ingkat keper cayaan 0,05 (Cor r elat ion i s signif i cant at t he 0.05 level (2-t ai led))
Tabel 1. Hasil analisis korelasi antara pertum buhan dan persentase MHC- II dengan program SPSS 16
Table 1. Result of cor r elat ion level analysis bet ween gr owt h (weight ) and MHC-II per cent age by SPSS 16 soft war e
Bo b o t rat a-rat a
Aver a g e of weig h t M H C
Bo b o t rat a-rat a
Aver a g e of weig h t
Nilai korelasi
Pear son cor r elat ion (R) 1 - 0.742 *
Nilai signifikan / Sig. (2-t ailed) 0.035
N 8 8
M H C-II (MH C-II) Nilai korelasi
Pear son cor r elat ion (R) - 0.742
* 1
Nilai signifikan / Sig. (2-t ailed) 0.035
N 8 8
Gambar 4. Hubungan antara bobot rata- rata dengan persentase MHC- II pada masing- masing populasi
Figur e 4. Cor r elat ion bet ween gr owt h (weight ) and MHC-II per cent age in each populat ions
Populasi (Populat ion)
g
/
%
M
H
C
(
g
/
%
M
H
C
)
1 7 0 0
2 3 4 5 6 7 8
6 0 0 5 0 0 4 0 0 3 0 0 2 0 0 1 0 0 0
p er t u m b u h an d en g an p er sen t ase MHC- II terhadap kem uncu lan g en MHC- II dit entu kan oleh nilai korelasi yaitu R = - 0,742 atau - 74,2% dengan tingkat ketelitian P< 0,05 atau m em iliki hu bun gan ko relasi yan g b erb eda nyata. Hal ini menandakan bahwa pertum buhan ikan mas (bobot) m em berikan kontribusi sebesar - 74,2% terhadap persen tase ketid akm unculan MHC-II. Keberadaan MHC- II pada ikan m as u kuran d ewasa d ik aren ak an ad anya resp on s im u n spesifik yang sem purna pada ikan dewasa dan hal ini tidak ditem ukan pada ikan m uda. Selain itu, ikan m uda hanya bergantung pada respons selu ler n o n - sp esif ik u n t u k b ert ah an d ari seran gan m ikroba (Ellis, 1988; Suherm anto et al., 2011). Menurut Ottova et al. (2005), MHC- II m erup akan respo ns im un sp esifik pen gik at peptida yang dihasilkan o leh degradasi dari protein lain.
Sebaran titik ko relasi ant ara pertum buhan dengan MHC- II d apat d ilihat pada Gam b ar 5. Pada Gam bar 5 terlihat jelas sebaran popu lasi yang pertum buh an cepat b erada di atas
se-m ese-m iliki persentase MHC- II yang lebih sedikit sedangk an populasi ik an yang pertu m buhan-nya lam bat m em ilik i persentase MHC- II leb ih banyak h ing ga m en cap ai 100 %.
KESIMPULAN DAN SARAN
Hub un gan an tara p ertu m b uh an d en gan g en MHC- II m em ilik i k orelasi yan g negatif dengan nilai korelasi R = - 74,2%. Semakin cepat pertum buhan populasi ikan m as m aka sem akin sedik it persent ase in dividu yang m em p unyai gen MHC- II p ad a setiap po pu lasi t ersebu t. Sehing ga p op ulasi ikan m as yang p ertu m -buhannya lam bat m em iliki tingkat persentase p o sit if MHC- II leb ih t in g g i (85 ,7 1 %- 1 0 0 %)
Ellis, A.E. 1988. General principles of fish vac-cinations. Academ ic Press. London, p. 1-19.
Fujaya, Y. 2004. Fisiologi ikan. Rineka citra. Jakarta, 179 hlm.
Herper, B. & Prugnin, Y. 1984. Com m ercial fish f arm in g , wit h t h e sp ecial ref eren ce t o fish culture in Israel. Jhon Wiley and sons. New York, Chichster, Brisbane, Toronto, 271 pp.
Iriyanto, A. 2005. Patologi ikan teleostei. Gadjah Mada University Press. Yogyakarta, 256 hlm. Mudjiutam i, E., Ciptoroso, Zainun, Z., Sumarjo, & Rahm at. 2007. Pem anfaatan Im unosti-m ulan untuk pengendalian penyakit pada ikan mas. J. Budidaya Air Tawar, 4(1): 1- 9. Ottova, E., Simkova, A., Martin, J- F., de Bellocq,
J.G., Gelnar, M., Allienne, J- F., & Morand, S. 2005. Evolution and tans- spesies polymor-phism of MHC class IIb genes in cyprinid fish. Fish and Shellfish Im m unology, 18: 199- 222.
Rakus, K.L., Wiegertjes, G.F., Adamek, M., Bekh, V., Stet, R.J.M., & Irnazarow, I. 2008. Appli-cation of PCR- RF- SSCP to study m ajor his-tocom patibility class II B polym orphism in com m on carp (Cypr inus car pio L.). Fish & Shellfish Im munology, 24: 734- 744. Saputra, A., Praseno, O., Sudrajat, A., & Prasetio,
A.B. 2010. Pertum buhan beberapa strain ikan m as yang dipelihara pada tam bak ber-salinitas rendah. Pr osiding For um Inovasi
Teknologi Akuakultur. Pusat Riset Perikanan Budidaya. Jakarta, hlm. 79- 86.
Su b o w o . 1 9 9 3 . Im u n o b i o l o g i . An g k as a. Bandung, 232 hlm .
Sucipto, A., Yanti, D.H., Djajanurdjasa, A., & Muharam , C. 2011. Produksi calon induk ikan m as tahan penyakit. J. Budidaya Air Tawar, hlm. 12- 19.
Suherm anto, A., Andayani, S., & Maftuch. 2011. Pem b er i an t o t al f en o l t er i p an g p asi r (Holot hur ia scabr a) untuk m eningkatkan leukosit dan diferensial leukosit Iikan m as (Cypr inus car pio) yan g d iin feksi bakteri
Aer om onas Hydr ophila. J. Kelaut an, 4(2): 49- 56.
Sunarto, A. 2005. Epidem ologi penyakit koi herpes virus (KHV) di Indo nesia. Dalam
