1. Rendemen (AOAC 1995 yang dimodifikasi)
Rendemen adalah persentase bahan baku utama yang menjadi produk akhir atau perbandingan produk akhir dengan bahan baku utama.
% Rendemen (bb) = Berat produk akhir x 100 % (Berat daun + berat pengisi)
2. Kelarutan (Fardiaz et al.1992)
0,5 gram bubuk dilarutkan dalam 100 ml air, kemusidan disaring dengan kertas saring Whatman 42 dengan penyaring vakum. Sebelumnya kertas saring dikeringkan pada suhu 1050C selama 30 menit (di dalam oven), dan ditimbang. Setelah penyaringan dengan vakum, kertas saring dan endapan dikeringkan pada suhu 1050C selama 3 jam, didinginkan dalam desikator selama 15 menit. Kemudian ditimbang.
% Kelarutan = 100 − ( % )
100%
3. Warna (RHS 2001)
Sebanyak 1 gram bubuk dimasukkan ke dalam kantong plastik bening, kemudian diratakan hingga setiap sampel memiliki luas permukaan yang sama. Setiap sampel kemudian dicocokkan dengan warna yang terdapat dalam Colour Chart RHS. Warna-warna yang terdapat dalam Colour Chart RHS dapat dilihat pada gambar berikut.
1A 57A 111A 155A
1B 57B 111B 155B
1C 57C 111C 155C
1D 57D 111D 155D
2A 58A 112A 156A
2B 58B 112B 156B
2C 58C 112C 156C
2D 58D 112D 156D
3A 59A 113A 157A
3B 59B 113B 157B
3C 59C 113C 157C
3D 59D 113D 157D
4A 60A 114A 158A
4B 60B 114B 158B
4C 60C 114C 158C
4D 60D 114D 158D
5A 61A 115A 159A
5B 61B 115B 159B
5C 61C 115C 159C
5D 61D 115D 159D
6A 62A 116A 160A
6B 62B 116B 160B
6C 62C 116C 160C
6D 62D 116D 160D
7A 63A 117A 161A
7B 63B 117B 161B
7C 63C 117C 161C
7D 63D 117D 161D
8A 64A 118A 162A
8B 64B 118B 162B
8C 64C 118C 162C
8D 64D 118D 162D
9A 65A 119A 163A
9C 65C 119C 163C
9D 65D 119D 163D
10A 66A 120A 164A
10B 66B 120B 164B
10C 66C 120C 164C
10D 66D 120D 164D
11A 67A 121A 165A
11B 67B 121B 165B
11C 67C 121C 165C
11D 67D 121D 165D
12A 68A 122A 166A
12B 68B 122B 166B
12C 68C 122C 166C
12D 68D 122D 166D
13A 69A 123A 167A
13B 69B 123B 167B
13C 69C 123C 167C
13D 69D 123D 167D
14A 70A 124A 168A
14B 70B 124B 168B
14C 70C 124C 168C
14D 70D 124D 168D
15A 71A 125A 169A
15B 71B 125B 169B
15C 71C 125C 169C
15D 71D 125D 169D
16A 72A 126A 170A
16B 72B 126B 170B
16C 72C 126C 170C
16D 72D 126D 170D
17A 73A 127A 171A
17B 73B 127B 171B
17C 73C 127C 171C
18A 74A 128A 172A
18B 74B 128B 172B
18C 74C 128C 172C
18D 74D 128D 172D
19A 75A 129A 173A
19B 75B 129B 173B
19C 75C 129C 173C
19D 75D 129D 173D
20A 76A 130A 174A
20B 76B 130B 174B
20C 76C 130C 174C
20D 76D 130D 174D
21A 77A 131A 175A
21B 77B 131B 175B
21C 77C 131C 175C
21D 77D 131D 175D
22A 78A 132A 176A
22B 78B 132B 176B
22C 78C 132C 176C
22D 78D 132D 176D
23A 79A 133A 177A
23B 79B 133B 177B
23C 79C 133C 177C
23D 79D 133D 177D
24A 80A 134A 178A
24B 80B 134B 178B
24C 80C 134C 178C
24D 80D 134D 178D
25A 81A 135A 179A
25B 81B 135B 179B
25C 81C 135C 179C
25D 81D 135D 179D
26B 82B 136B 180B
26C 82C 136C 180C
26D 82D 136D 180D
27A 83A 137A 181A
27B 83B 137B 181B
27C 83C 137C 181C
27D 83D 137D 181D
28A 84A 138A 182A
28B 84B 138B 182B
28C 84C 138C 182C
28D 84D 138D 182D
29A 85A 139A 183A
29B 85B 139B 183B
29C 85C 139C 183C
29D 85D 139D 183D
30A 86A 140A 184A
30B 86B 140B 184B
30C 86C 140C 184C
30D 86D 140D 184D
31A 87A 141A 185A
31B 87B 141B 185B
31C 87C 141C 185C
31D 87D 141D 185D
32A 88A 142A 186A
32B 88B 142B 186B
32C 88C 142C 186C
32D 88D 142D 186D
33A 89A 143A 187A
33B 89B 143B 187B
33C 89C 143C 187C
33D 89D 143D 187D
34A 90A 144A 188A
34B 90B 144B 188B
34D 90D 144D 188D
35A 91A 145A 189A
35B 91B 145B 189B
35C 91C 145C 189C
35D 91D 145D 189D
36A 92A 146A 190A
36B 92B 146B 190B
36C 92C 146C 190C
36D 92D 146D 190D
37A 93A 147A 191A
37B 93B 147B 191B
37C 93C 147C 191C
37D 93D 147D 191D
38A 94A 148A 192A
38B 94B 148B 192B
38C 94C 148C 192C
38D 94D 148D 192D
39A 95A 149A 193A
39B 95B 149B 193B
39C 95C 149C 193C
39D 95D 149D 193D
40A 96A 150A 194A
40B 96B 150B 194B
40C 96C 150C 194C
40D 96D 150D 194D
41A 97A 151A 195A
41B 97B 151B 195B
41C 97C 151C 195C
41D 97D 151D 195D
42A 98A 152A 196A
42B 98B 152B 196B
42C 98C 152C 196C
43A 99A 153A 197A
43B 99B 153B 197B
43C 99C 153C 197C
43D 99D 153D 197D
44A 100A 154A 198A
44B 100B 154B 198B
44C 100C 154C 198C
44D 100D 154D 198D
45A 101A 199A
45B 101B 199B
45C 101C 199C
45D 101D 199D
46A 102A 200A
46B 102B 200B
46C 102C 200C
46D 102D 200D
47A 103A 201A
47B 103B 201B
47C 103C 201C
47D 103D 201D
48A 104A 202A
48B 104B 202B 48C 104C 202C 48D 104D 202D 49A 105A 49B 105B 49C 105C 49D 105D 50A 106A 50B 106B 50C 106C 50D 106D 51A 107A 51B 107B
51C 107C 51D 107D 52A 108A 52B 108B 52C 108C 52D 108D 53A 109A 53B 109B 53C 109C 53D 109D 54A 110A 54B 110B 54C 110C 54D 110D 55A 55B 55C 55D 56A 56B 56C 56D Keterangan:
Fan 1 Green-Yellow (GY): 1, Yellow (Y): 2-13, Yellow-Orange (YO): 14-23, Orange (O):24-30, Orange-Red (OR): 31-35, Red (R): 36-56
Fan 2 Red-Purple (RP): 58-74, Purple (P): 75-79, Purple-Violet (PV): 80-82, Violet (V): 83-88, Violet-Blue (VB): 89-98, Blue (B): 99-110
Fan 3 Blue-Green (BG): 111-124, Green (G): 125-143, Yellow-Green (YG): 144-154
Fan 4 Greyed Yellow-Orange-Red-Purple-Green (160-198), Brown (200), Grey (201), Black (202)
1. Analisis kadar air (Apriyantono et al1989)
Cawan dikeringkan selama 30 menit, didinginkan dalam desikator, kemudian ditimbang. Timbang 2-3 gram sampel dalam cawan. Cawan beserta sampel dipanaskaan dalam oven selama 6 jam pada suhu 1050C, angkat dan dinginkan dalam desikator, kemudian ditimbang.
% kadar air (basis basah) = kehilangan berat (g) x 100% Berat sampel (g)
Kehilangan berat (g)
= Berat sampel (g) – (berat cawan dan sampel akhir (g) –berat cawan (g)) 2. Analisis kadar pH (Apriyantono et al1989)
1 gram sampel dilarutkan dalam 20 ml akuades, diaduk dengan magnetic stirrersampai homogen, kemudian diukur pHnya menggunakan pH meter.
1. Rendemen
Hasil analisis rendemen bubuk Cu-turunan klorofil
Perlakuan Rendemen (%)
0 mol 0,001 mol 0,002 mol 0,004 mol 0,006 mol 0,008 mol Ulangan 1 14,67 15,69 16,13 15,56 15,74 15,84 Ulangan 2 15,14 15,62 15,73 15,59 15,81 16,29
Rata-rata 14,91 15,65 15,93 15,57 15,78 16,06
Hasil sidik ragam rendemen bubuk Cu-turunan klorofil Sumber
Variasi KuadratJumlah df KuadratTengah F hitung Sig.
Perlakuan 1.778 5 .356 5.769 .027
Galat .370 6 .062
Total 2.148 11
Signifikansi < 0,05 berarti berpengaruh nyata
Hasil uji lanjut Duncan rendemen bubuk Cu-turunan klorofil Perlakuan n Subset for alpha = 0.05
1 2 .000 2 14.91 .004 2 15.58 .001 2 15.66 .006 2 15.78 .002 2 15.93 .008 2 16.14 Sig. 1.000 .077
Nilai rata-rata pada kolom berbeda, berbeda nyata 2. Kelarutan
Hasil analisis kelarutan bubuk Cu-turunan klorofil
Perlakuan Kelarutan (%)
0 mol 0,001 mol 0,002 mol 0,004 mol 0,006 mol 0,008 mol Ulangan 1 97,10 94,78 95,99 98,90 98,18 94,74 Ulangan 2 97,50 99,97 98,63 97,33 97,25 97,26
Rata-rata 97,30 97,37 97,31 98,12 97,71 96,00
Hasil sidik ragam kelarutan bubuk Cu-turunan klorofil Sumber
Variasi KuadratJumlah df KuadratTengah F hitung Sig.
Perlakuan 5.064 5 1.013 .278 .909
Galat 21.873 6 3.645
Hasil uji lanjut Duncan kelarutan bubuk Cu-turunan klorofil Perlakuan n Subset for alpha = 0.05
1 .008 2 96.00 .000 2 97.30 .002 2 97.31 .001 2 97.38 .006 2 97.72 .004 2 98.12 Sig. .328
Nilai rata-rata pada kolom berbeda, berbeda nyata
Lampiran 4 Hasil analisis karakteristik kimia bubuk Cu-turunan klorofil 1. Kadar Air
Hasil analisis kelarutan bubuk Cu-turunan klorofil
Perlakuan Kadar Air (%)
0 mol 0,001 mol 0,002 mol 0,004 mol 0,006 mol 0,008 mol
Ulangan 1 3,16 3,64 3,45 4,77 5,36 5,97
Ulangan 2 3,63 4,07 3,96 4,91 5,43 6,00
Rata-rata 3,39 3,86 3,71 4,84 5,40 5,98
Hasil sidik ragam kadar air bubuk Cu-turunan klorofil Sumber
Variasi KuadratJumlah df KuadratTengah F hitung Sig.
Perlakuan 10.769 5 2.154 36.748 .000
Galat .352 6 .059
Total 11.120 11
Signifikansi < 0,05 berarti berpengaruh nyata
Hasil uji lanjut Duncan kadar air bubuk Cu-turunan klorofil Perlakuan n Subset for alpha = 0.05
1 2 3 .000 2 3.39 .002 2 3.70 .001 2 3.86 .004 2 4.84 .006 2 5.40 5.40 .008 2 5.98 Sig. .114 .060 .052
Hasil analisis kelarutan bubuk Cu-turunan klorofil
Perlakuan pH
0 mol 0,001 mol 0,002 mol 0,004 mol 0,006 mol 0,008 mol
Ulangan 1 5,27 7,28 7,68 7,24 7,40 7,35
Ulangan 2 5,25 7,14 7,24 7,25 7,58 7,51
Rata-rata 5,26 7,21 7,46 7,24 7,49 7,43
Hasil sidik ragam pH bubuk Cu-turunan klorofil Sumber
Variasi KuadratJumlah df KuadratTengah F hitung Sig.
Perlakuan 7.534 5 1.507 66.547 .000
Galat .136 6 .023
Total 7.669 11
Signifikansi < 0,05 berarti berpengaruh nyata
Hasil uji lanjut Duncan pH bubuk Cu-turunan klorofil Perlakuan n Subset for alpha = 0.05
1 2 .000 2 5.26 .001 2 7.21 .004 2 7.24 .008 2 7.43 .002 2 7.46 .006 2 7.49 Sig. 1.000 .128
Nilai rata-rata pada kolom berbeda, berbeda nyata 3. Kadar Cu Total
Hasil analisis kadar Cu total bubuk Cu-turunan klorofil
Perlakuan Cu Total (mg/g)
0 mol 0,001 mol 0,002 mol 0,004 mol 0,006 mol 0,008 mol
Ulangan 1 0,00 1,26 2,96 4,77 7,07 8,98
Ulangan 2 0,00 1,01 2,73 4,65 7,96 8,16
Rata-rata 0,00 1,13 2,85 4,71 7,51 8,57
Hasil sidik ragam kadar Cu total bubuk Cu-turunan klorofil Sumber
Variasi KuadratJumlah df KuadratTengah F hitung Sig.
Perlakuan 118.324 5 23.665 77.559 .000
Galat 1.831 6 .305
Total 120.155 11
Perlakuan n Subset for alpha = 0.05 1 2 3 4 .000 2 .00 .001 2 1.13 .002 2 2.85 .004 2 4.71 .006 2 7.51 .008 2 8.57 Sig. .086 1.000 1.000 .105
Nilai rata-rata pada kolom berbeda, berbeda nyata 4. Kadar Cu-Chlorophyllin
Hasil analisis kadar Cu-Chlorophyllinbubuk Cu-turunan klorofil Perlakuan
Cu-Chlorophyllin (mg/g)
0 mol 0,001 mol 0,002 mol 0,004 mol 0,006 mol 0,008 mol Ulangan 1 0,00 13,03 31,60 51,45 80,90 94,94 Ulangan 2 0,00 12,33 30,67 50,42 81,09 89,00
Rata-rata 0,00 12,68 31,14 50,94 80,99 91,97
Hasil sidik ragam kadar Cu-Chlorophyllinbubuk Cu-turunan klorofil Sumber
Variasi KuadratJumlah df KuadratTengah F hitung Sig.
Perlakuan 13595.730 5 2719.146 71.865 .000
Galat 227.022 6 37.837
Total 13822.752 11 Signifikansi < 0,05 berarti berpengaruh nyata
Hasil uji lanjut Duncan Cu-Chlorophyllinbubuk Cu-turunan klorofil Perlakuan n Subset for alpha = 0.05
1 2 3 4 .000 2 .0000 .001 2 12.6799 .002 2 31.1371 .004 2 50.9390 .006 2 80.99 .008 2 91.97 Sig. .085 1.000 1.000 .125
Hasil analisis nilai LC50bubuk Cu-turunan klorofil Perlakuan
LC50
0 mol 0,001 mol 0,002 mol 0,004 mol 0,006 mol 0,008 mol Ulangan 1 1859,94 1655,23 2619,44 1583,61 987,16 735,22 Ulangan 2 1345,74 1184,07 1998,67 970,08 795,24 791,01 Rata-rata 1602,84 1419,65 2309,05 1276,84 891,20 763,11
Hasil sidik ragam nilai LC50bubuk Cu-turunan klorofil Sumber
Variasi KuadratJumlah df KuadratTengah F hitung Sig.
Perlakuan 3088869.302 5 617773.860 5.755 .027
Galat 644061.362 6 107343.560
Total 3732930.664 11 Signifikansi < 0,05 berarti berpengaruh nyata
Hasil uji lanjut Duncan nilai LC50bubuk Cu-turunan klorofil Perlakuan n Subset for alpha = 0.05
1 2 .008 2 763.11 .006 2 891.20 .004 2 1276.84 .001 2 1419.65 .000 2 1602.84 1602.84 .002 2 2309.05 Sig. .053 .075
y = 4.2245x + 1.8925 R² = 0.9977 0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 50.00 60.00 70.00 80.00 90.00 100.00 0 5 10 15 20 25 A b s o r b a n s i
Konsentrasi Vitamin C standar (ppm) terpilih
Kurva standar Vitamin C setelah direaksikan dengan DPPH
Tabel Aktivitas antioksidan vitamin C standar pada berbagai konsentrasi
Konsentrasi Vit C standar (ppm) Absorban % Aktivitas AO
0 0,678 0,00 25 0,655 3,39 50 0,641 5,46 100 0,609 10,18 200 0,546 19,47 300 0,486 28,32 400 0,423 37,61 500 0,365 46,17 750 0,241 64,45 1000 0,103 84,81
Cara perhitungan aktivitas antioksidan
Aktivitas antioksidan (%) = (Abs. blanko– Abs. sampel) x 100% Abs. blanko
Hasil analisis aktivitas antioksidan bubuk Cu-turunan klorofil terpilih Perlakuan Absorban % Aktivitas Antioksidan (AAO)
Blanko 0,678 Ulangan 1 0,369 45,61 0,363 46,43 Ulangan 2 0,344 49,26 0,360 46,96 Rata-rata 47,07
AEAC (mg/ 100 g) = [(% AAO-b) a
x
Volume akhir Vol.yang ditambahkan] x
100 Berat sampelHasil analisis AEAC bubuk Cu-turunan klorofil terpilih Perlakuan sampelBerat
(g) Volume akhir (ml) Volume yang ditambahkan (ml) a b AAO(%) AEAC (mg vitamin C/100g) Ulangan 1 2,5064 5 0,02 4,224 1,892 45,61 103,23 2,5056 5 0,02 46,43 105,20 Ulangan 2 2,5088 5 0,02 49,26 111,75 2,5082 5 0,02 46,96 106,36 Rata-rata 47,07 106,64
Cara perhitungan berat DPPH teredam per gram bubuk Cu-turunan klorofil 100
Berat sampel (g) x (%AAO100 x Berat DPPH per penambahan (mg) x Volume ekstrak (ml)Volume sampel (ml) 100 = 100 2,5073 g x (47,07% 100 x 0,3943 mg x 5 ml 0,02 ml 100 = 18,51 mg/g
Cara perhitungan berat DPPH setiap penambahan = Vol.DPPH per penambahan
1000 x ([DPPH]x BM DPPH) x 1000
= 1 ml
1000 x (0,001 M x 394,3g/mol) x 1000 = 0,3943 mg
Penimbangan daun murbei segar sebanyak
200 g
Etanol 96% sebanyak 800 ml sebagai pelarut
Proses ektraksi klorofil menggunakan blender
Penimbangan Cu-asetat untuk setiap perlakuan
Proses pembuatan larutan Cu-turunan klorofil
Proses homogenasi larutan
