Uji Validasi Dan Estimasi Kandungan Natriumbenzoat Dan Vitamin B6 Pada Minuman Berenergi Secara Spektrofotometri Derivatif

(1)

Lampiran 1. Perhitungan Pembuatan Pelarut HCl 0,1 N

HCl pekat = 37% ~ 12 N

V1 x N1 = V2 x N2

V1 x 12 N = 1000 mL x 0,1 N

V1

12 N

= 8,3 ml

= 8,5 ml

(2)

Lampiran 2. Bagan Alir Prosedur Penelitian

Natrium benzoat BPFI

ditimbang secara seksama 59 mg

dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 mL

dilarutkan dan dicukupkan dengan HCL 0,1N

LIB I Natrium benzoat 500 μg/ml

diambil 10 mL

LIB II Natrium benzoat 50 μg/ml

(3)

Lampiran 2. (Lanjutan)

Vitamin B6 BPFI

ditimbang seksama 50 mg

LIB I Vitamin B6 500 μg/ml

Diambil 10 mL

(4)

Larutan Standar Natrium Benzoat

3 μg/mL, 4μg/mL, 5μg/mL, 6μg/mL dan 7 μg/mL

diukur serapan pada λ 200-400 nm

ditransformasikan ke serapan derivat pertama

ditransformasikan ke serapan derivat kedua

ditentukan zero crossing

ditentukan panjang gelombang analisis

dibuat kurva kalibrasi λ 245,4 nm

Persamaan Regresi

Larutan Standar Vitamin B6

6 μg/mL, 7,5μg/mL, 9,5μg/mL, 10,5μg/mL dan 12 μg/mL

diukur serapan pada λ 200-400 nm

ditransformasikan ke serapan derivat pertama

ditransformasikan ke serapan derivat kedua

ditentukan zero crossing

ditentukan panjang gelombang analisis

dibuat kurva kalibrasi λ 307,4 nm

(5)

Sampel

diambil 20 mL

dimasukkan ke dalam beaker

dipanaskan

disaring

didinginkan pada suhu kamar

diambil 1 mL

diukur pada λ 245,4 nm dan 307,4 nm

Nilai Absorbansi

dihitung

(6)

Lampiran 3. Kurva Serapan Natrium Benzoat pada Berbagai Konsentrasi

Kurva serapan natrium benzoat 3 μg/mL

n m .

2 0 0 ,0 0 2 5 0 ,0 0 3 0 0 ,0 0 3 5 0 ,0 0 4 0

Ab

s.

0 ,3 0 0 0

0 ,2 0 0 0

0 ,1 0 0 0

0 ,0 0 0 0

(7)

n m .

2 0 0 ,0 0 2 5 0 ,0 0 3 0 0 ,0 0 3 5 0 ,0 0 4 0 0

Ab

s.

0 ,6 0 0 0

0 ,4 0 0 0

0 ,2 0 0 0

0 ,0 0 0 0

(8)

Lampiran 4. Kurva Serapan Vitamin B6 pada Berbagai Konsentrasi

Kurva Serapan Vitamin B6 6 μg/mL

Kurva Serapan Vitamin B6 7,5 μg/mL

n m .

2 0 0 ,0 0 2 5 0 ,0 0 3 0 0 ,0 0 3 5 0 ,0 0 4 0

Ab

s.

0 ,4 0 0 0

0 ,2 0 0 0

0 ,0 0 0 0

(9)

Kurva Serapan Vitamin B6 12 μg/mL

n m .

2 0 0 ,0 0 2 5 0 ,0 0 3 0 0 ,0 0 3 5 0 ,0 0 4 0 0

Ab

s.

0 ,5 0 0 0

0 ,0 0 0 0

(10)

Lampiran 5. Kurva Serapan Derivat Pertama Natrium Benzoat pada Berbagai Konsentrasi

Kurva serapan derivat pertama natrium benzoat 3 μg/mL

Kurva serapan derivat pertamanatrium benzoat 5 μg/mL

n m .

2 0 0 ,0 0 2 5 0 ,0 0 3 0 0 ,0 0 3 5 0 ,0 0 4 0

Ab

s.

0 ,0 0 0 0

-0 ,0 2 0 0

-0 ,0 4 0 0

(11)

Kurva serapan derivat pertamanatrium benzoat 7 μg/mL

n m .

2 0 0 ,0 0 2 5 0 ,0 0 3 0 0 ,0 0 3 5 0 ,0 0 4 0 0

Ab

s.

0 ,0 0 0 0

-0 ,0 5 0 0

(12)

Lampiran 6. Kurva Serapan Derivat Pertama Vitamin B6 pada Berbagai Konsentrasi

Kurva Serapan Derivat Pertama Vitamin B6 6 μg/mL

Kurva Serapan Derivat Pertama Vitamin B6 7,5 μg/mL

n m .

2 0 0 ,0 0 2 5 0 ,0 0 3 0 0 ,0 0 3 5 0 ,0 0 4 0 0

Ab

s.

0 ,0 0 0 0

-0 ,0 2 0 0

-0 ,0 4 0 0

(13)

Kurva Serapan Derivat Pertama Vitamin B6 12 μg/mL

n m .

2 0 0 ,0 0 2 5 0 ,0 0 3 0 0 ,0 0 3 5 0 ,0 0 4 0

Ab

s.

0 ,0 0 0 0

-0 ,0 5 0 0

(14)

Lampiran 7. Kurva Serapan Derivatif Kedua Natrium Benzoat pada Berbagai Konsentrasi

Kurva Serapan Derivat Kedua Natrium Benzoat 3 μg/mL

n m .

2 0 0 ,0 0 2 5 0 ,0 0 3 0 0 ,0 0 3 5 0 ,0 0 4 0

Ab

s.

0 ,0 1 0 0

0 ,0 0 5 0

0 ,0 0 0 0

(15)

n m .

2 0 0 ,0 0 2 5 0 ,0 0 3 0 0 ,0 0 3 5 0 ,0 0 4 0

Ab

s.

0 ,0 2 0 0

0 ,0 1 0 0

0 ,0 0 0 0

(16)

Lampiran 8. Kurva Serapan Derivat Kedua Vitamin B6 pada Berbagai Konsentrasi

Kurva Serapan Derivat Kedua Vitamin B6 6 μg/mL

Kurva Serapan Derivat Kedua Vitamin B6 7,5 μg/mL

n m .

2 0 0 ,0 0 2 5 0 ,0 0 3 0 0 ,0 0 3 5 0 ,0 0 4 0

Ab

s.

0 ,0 0 5 0

0 ,0 0 0 0

-0 ,0 0 5 0

(17)

Kurva Serapan Derivat Kedua Vitamin B6 6 μg/mL

n m .

2 0 0 ,0 0 2 5 0 ,0 0 3 0 0 ,0 0 3 5 0 ,0 0 4 0

Ab

s.

0 ,0 0 0 0

-0 ,0 1 0 0

(18)

Lampiran 9. Perhitungan Persamaan Garis Regresi Natrium Benzoat

No. Konsentrasi (μg/mL) (X)

6 (0,840)

−

(25)(0,0156)

6 (135)

−

(25

2

₎

=

6,16216 . 10−4

�� =��+�

�= �� − ��= (2,6. 10−3)−(6,16216. 10−4_{)(4,1667) = 2,6899. 10}−5

Maka persamaan garis regresinya adalah �= (6,16216�+ 0,26899) × 10−4

Perhitungan Koefisien Korelasi :

�

=

�

(

∑ ��

)

−

(

∑ �

)(

∑ �

)

(19)

�

=

6 (0,0840)

−

(25)(0,0156)

�

[6 (135)

−

25

2

_{][6 (5,228. 10}

−5

₎

−

_(0,0156)

2

_]

=

0,9995

Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan derivat kedua natrium benzoat pada panjang gelombang 245,4 nm adalah 0,9995.

Lampiran 10. Perhitungan Persamaan Garis Regresi Vitamin B6

No. Konsentrasi (μg/mL) (X)

6 (0,1330)

−

(45,5)(0,0138)

6 (436,75)

−

(45,5

2

₎

=

3,09132 . 10−4

�� =��+�

�= �� − ��= (0,0023)−(3,09132. 10−4_{)(7,5883) =}₋_{4,425. 10}−5

Maka persamaan garis regresinya adalah �= (3,09132� −0,4425) × 10−4

(20)

�

=

�

(

∑ ��

)

−

(

∑ �

)(

∑ �

)

��

(

∑ �

2

₎

−

₍

∑ �

₎

2

��

₍

∑ �

2

₎

−

₍

∑ �

₎

2

�

=

6 (0,1330)

−

(45,5)(0,0138)

�

[6 (436,75)

−

(45,5)

2

_{][6 (4,052. 10}

−5

₎

−

_(0,0138)

2

_]

=

0,9991

Maka, koefisien korelasi dari data kalibrasi serapan derivat kedua vitamin B6 pada panjang gelombang 307,4 nm adalah 0,9991.

Lampiran 11. Perhitungan Batas Deteksi (LOD) dan Batas Kuantitasi (LOQ) Natrium Benzoat

Persamaan garis regresinya adalah Y = (6,16216X + 0,266899) . 10

(21)

Lampiran 12. Perhitungan Batas Deteksi (LOD) dan Batas Kuantitasi (LOQ) Vitamin B6

Persamaan garis regresinya adalah Y = (3,09132X – 0,4425) . 10

(22)

Lampiran 13. Kurva Serapan Derivat Kedua Penetapan Kadar Sampel

(23)

Sampel 2 Minuman Berenergi Merek K

(24)

Lampiran13. (Lanjutan)

(25)

Lampiran13(Lanjutan)

(26)

Sampel 2 Minuman Berenergi Merek M

(27)

(28)

(29)

No. Vol.

� 565,0750 537,0256 111,3519 16,7028

Lampiran 15. ContohPerhitungan Kadar Natrium Benzoat dan Vitamin B6 dalam Sampel

I. Merek K

Absorbansi (Y) :

Natrium Benzoat = 0,0113 Vitamin B6 = 0,0007

Persamaan regresi pada panjang gelombang analisis maksimum untuk natrium benzoat pada 245,4 nm : Y = (6,16216X + 0,266899) . 10

Persamaan regresi pada panjang gelombang analisis maksimum untuk vitamin B6 pada 307,4 nm : Y = (3,09132X – 0,42526) . 10

-4

Sehingga untuk mendapatkan kadar (X) sampel digunakan subtitusi (Y) terhadap persamaan regresi pada masing-masing panjang gelombang.

-4

1. Natrium Benzoat

Konsentrasi Natrium Benzoat : 0,0113 = (6,16216�+ 0,266899). 10−4

(asam benzoat) �= �

0,0113

10−4� –0,266899

(30)

Kadar Asam Benzoat : �×�×��

C : kosentrasi larutan sampel (μg/mL) V : volume larutan pengenceran (mL) Fp : faktor pengenceran

W : volume sampel (mL)

Maka, 18,2944 ��/�� × 25 �� × 1

1 �� = 457,3603 μg/mL

Kadar yang dihitung merupakan kadar dari asam benzoat. Untuk menghitung kadar natrium benzoat maka digunakan rumus :

=��×��

�� ×��

= 457,3603 ×144 ,1

122 ,1× 100,40% =541,8439 μg/mL

Lampiran 15(Lanjutan)

100 mL sampel merek K setara dengan 105,4542 g. Maka kadar natrium benzoat dalam sampel :

= 541,8439 μg/mL

= 54184,39 μg/100 mL

= 54184,39 μg/105,4542 g = 513,8192 μg/g

3,09132

=

2,4075 μg/mL

(31)

Maka, 2,4075 ��/�� × 25 �� × 1

1 �� = 60,1875 μg/mL

Kadar vitamin B6 dalam sampel:

=��6 ×�� = 60,1875 × 99,95% =60,1588 μg/mL

Jumlah vitamin B6 per sajian sampel :

= ��6 ×�� = 60,1588 μg/mL × 150 ��= 9,0238 mg/sajian

II. Merek M

Panjang gelombang analisis (Y) :

Natrium Benzoat = 0,0117 Vitamin B6 = 0,0014

Persamaan regresi pada panjang gelombang analisis maksimum untuk natrium benzoat pada 245,4 nm : Y = (6,16216X + 0,266899) . 10

Persamaan regresi pada panjang gelombang analisis maksimum untuk vitamin B6 pada 307,4 nm : Y = (3,09132X – 0,42526) . 10

-4

Sehingga untuk mendapatkan kadar (X) sampel digunakan subtitusi (Y) terhadap persamaan regresi pada masing-masing panjang gelombang.

-4

1. Natrium Benzoat

Konsentrasi Natrium Benzoat : 0,0117 = (6,16216�+ 0,266899). 10−4

(asam benzoat) �=

�0,0117

10−4� –0,266899

(32)

Kadar Asam Benzoat : �×�×��

Maka, 18,9435 ��/�� × 25 �� × 1

1 �� = 473,5884 μg/mL

Kadar yang dihitung merupakan kadar dari asam benzoat. Untuk menghitung kadar natrium benzoat maka digunakan rumus :

=��×��

�� ×��

= 473,5884 ×144 ,1

122 ,1× 100,40% =561,0696 μg/mL

100 mL sampel merek M setara dengan 105,2231g. Maka kadar natrium benzoat dalam sampel :

= 561,0696 μg/mL

= 56106,96 μg/100 mL

(33)

Maka, 4,6720 ��/�� × 25 �� × 1

1 �� = 116,8 μg/mL

Kadar vitamin B6 dalam sampel:

=��6 ×�� = 116,8 × 99,95% =116,7406 μg/mL

Jumlah vitamin B6 per sajian sampel :

= ��6 ×�� = 116,7406 μg/mL × 150 ��= 17,5111 mg/sajian

Lampiran 16. Perhitungan Statistik Kadar Natrium Benzoat dalam Sampel

1. Sampel Merek K

Pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01, dk = 5,

(34)

Data diterima jika t hitung < t tabel

Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka semua data tersebut diterima.

Kadar natrium benzoat pada sampel merek K :

(35)

1 561,0696 -4,0054 16,0429

2 561,0696 -4,0054 16,0429

3 565,8761 0,8011 0,6417

4 565,8761 0,8011 0,6417

5 565,8761 0,8011 0,6417

6 570,6825 5,6075 31,6417

maka t_(α/2,dk)

Data diterima jika t hitung < t tabel. = 4,0321

(36)

Kadar natrium benzoat pada sampel merek M :

Lampiran 17. Perhitungan Statistik Kadar Vitamin B6 dalam Sampel

1. Sampel Merek K

3 60,1588 -1,3472 1,8149

4 60,1588 -1,3472 1,8149

5 60,1588 -1,3472 1,8149

6 60,1588 -1,3472 1,8149

ΣX = 369,5060

(37)

maka t_(α/2,dk)

Data diterima jika t hitung < t tabel, = 4,0321

Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung < t tabel, maka semua data tersebut diterima.

Kadar vitamin B6 pada sampel merek K :

μ = � ± (tα/2, dk)

= 61,5060 ± (4,0321 x 3,2999 / √6) x SD / √n)

= (61,5060 ± 13,2758) μg/mL

Jumlah per sajian vitamin B6 pada sampel merek K :

μ = (61,5060 ± 13,2758) μg/mL X 150 mL

= (9,2559 ± 1,9914) mg

(38)

No. X

Kadar (μg/mL) (� − �) (� − �)2

1 116,7406 5,3387 29,0386

2 116,7406 5,3387 29,0386

3 116,7406 5,3387 29,0386

4 92,4913 -18,8606 355,7224

maka t_(α/2,dk)

Data diterima jika t hitung < t tabel. = 4,0321

(39)

Kadar vitamin B6 pada sampel merek M

μ = � ± (tα/2, dk)

= 111,3519 ± (4,0321 x 0,00015 / √6) x SD / √n)

= (111,3519 ± 0,0006) μg/mL

Jumlah per sajian vitamin B6 pada sampel merek M

μ =(111,3519 ± 0,0006) μg/mL X 150 mL

= (16,7028) mg

Lampiran 18. Kurva Serapan Uji Perolehan Kembali

(40)

Kurva serapan perolehan kembali - 2

(41)

Kurva serapan perolehan kembali – 4

(42)

(43)

1. Hasil Uji Perolehan Kembali Natrium Benzoat

Rata-rata 92,28

2. Hasil Uji Perolehan Kembali Vitamin B6

No. Vol.

Rata-rata 100,77

(44)

I. Perhitungan uji perolehan kembali natrium benzoat

Absorbansi (Y) : λ 245,4 nm = 0,0144 λ 307,4 nm = 0,0045

Persamaan regresi pada spektrum derivat kedua :

Natrium Benzoat : Y = (6,16216X + 0,266899) . 10 Vitamin B6 : Y = (3,09132X – 0,42526) . 10

-4

Konsentrasi natrium benzoat :

-4

Y = (6,16216X + 0,266899) . 10

0,0144 = (6,16216X + 0,266899) . 10

-4

X = 23,3251 μg/mL(asam benzoat)

-4

0,0144

10−4 −0,266899 = 6,16216�

Konsentrasi awal setelah ditambahan larutan baku = 23,3251 μg/mL

Kadar = �� (��/��)

�� (��) ×�� (��) ×��

= 23,3251 ��/��

1 �� × 25 ��× 1= 583,1275 μg/mL (asam benzoat)

Kadar natrium benzoat (CF

= ��×��

�� ×��

) :

= 583,1275 ��/��×144 ,1

122 ,1× 100,40%= 690,8433 μg/mL

Kadar analit dalam sampel setelah ditambahkan larutan baku :

(CF

Kadar rata-rata analit dalam sampel sebelum ditambah larutan baku : ) = 690,8433 μg/mL

(CA) = 565,075 μg/mL

(45)

Kadar larutan standar yang ditambahkan (C*A

II. Perhitungan uji perolehan kembali vitamin B6

Absorbansi (Y) : 245,4 nm = 0,0144 307,4 nm = 0,0045

Persamaan regresi pada spektrum derivat kedua :

Natrium Benzoat : Y = (6,16216X – 0,266899) . 10 Vitamin B6 : Y = (3,09132X – 0,42526) . 10

-4

Konsentrasi vitamin B6 :

-4

Konsentrasi awal setelah ditambahan larutan baku = 14,7 μg/mL

Kadar = �� (��/��)

�� (��) ×�� (��) ×��

= 14,7 ��/��

1 �� × 25 ��× 1= 367,5 μg/mL

Kadar vitamin B6 (CF

= ��6 ×�� ) :

(46)

Kadar analit dalam sampel setelah ditambahkan larutan baku :

(CF

Kadar rata-rata analit dalam sampel sebelum ditambah larutan baku : ) = 367,3172 μg/mL

(CA

(47)

Lampiran 21. Perhitungan Simpangan Baku Relatif (RSD) Natrium Benzoat dalam Sampel

No. Persen Perolehan Kembali

(48)

Lampiran 22. Perhitungan Simpangan Baku Relatif (RSD) Vitamin B6 dalam Sampel

No. Persen Perolehan Kembali

(49)

Lampiran 23. Komposisi Sampel Minuman Berenergi

Merek K

(Kemasan botol, volume 150 mL)

Merek M

(Kemasan botol, volume 150 mL)

Taurin 1000 mg Taurin 800 mg

Kafein 50 mg Kafein 50 mg

Inositol 50 mg Inositol 50 mg

Vitamin B3 20 mg Vitamin B3 20 mg

Vitamin B6 5 mg Vitamin B6 5 mg

Provitamin B5 5 mg Vitamin B5 5 mg

Vitamin B12 5 mcg Gula 25 g

Gula 25 g Natrium Benzoat

Ponceau 4R Cl 16255 Pewarna Tartrazin CI 19140

Tartrazine Cl 19140

Asam Sitrat

Trisodium Sitrat

Natrium Benzoat

Perasa BPOM RI SL 03160091

Panjang Gelombang Maksimum Bahan-bahan dalam Sampel :

Bahan Panjang Gelombang

Maksimum (nm) Rujukan

Taurin 570 Draganov, dkk., 2014

Kafein 273 Moffat, dkk., 2005

Inositol 261 Moffat, dkk., 2005

Niasinamid 261 Moffat, dkk., 2005

Vitamin B6 290 Moffat, dkk., 2005

Vitamin B12 361 Moffat, dkk., 2005

Sukrosa 190 Sumantri, dkk., 2013

Natrium Benzoat 230 Moffat, dkk., 2005

Tartrazin 425 Huda, N., 2001

Asam Sitrat 520 Napitupulu, P.M., 2011

Ponceau 506 Kartadarma, dkk., 2007

(50)

Lampiran 24. Gambar Sampel Minuman Berenergi

1. Merek K

(51)

(52)

(53)

(54)

(55)

(56)

(57)

Uji Validasi Dan Estimasi Kandungan Natriumbenzoat Dan Vitamin B6 Pada Minuman Berenergi Secara Spektrofotometri Derivatif

6 (0,840)

−

(25)(0,0156)

6 (135)

−

(25

)

=

�

=

�

(

∑ ��

)

−

(

∑ �

)(

∑ �

)

�

=

6 (0,0840)

−

(25)(0,0156)

�

[6 (135)

−

25

][6 (5,228. 10

)

−

(0,0156)

]

=

6 (0,1330)

−

(45,5)(0,0138)

6 (436,75)

−

(45,5

)

=

�

=

�

(

∑ ��

)

−

(

∑ �

)(

∑ �

)

���

(

∑ �

)

−

(

∑ �

)

���

(

∑ �

)

−

(

∑ �

)

�

�

=

6 (0,1330)

−

(45,5)(0,0138)

�

[6 (436,75)

₎

_{][6 (5,228. 10}

₎

_(0,0156)

_]

₎

��

₎

₍

₎

��

₍

₎

₍

₎

_{][6 (4,052. 10}

₎

_(0,0138)

_]