111. METODE KERJA
3 . 1 . Waktu dun rempat p e n e l i t i a n
P e n e l i t i a n d i l a k u k a n pada l a b o r a t o r i u m B i o k i m i a J u r u s a n Kimia, F a k u l t a s M a t e m a t i k a dan Flmu P e n g e t a h u a n Alam, IPB- Bogor; d a n d i Laboratorium P a t o l o g i V e t e r i n e r F a k u l t a s K e d o k t e r a n Hewan, IPB-Bogor, pada bulan S e p t e m b e r 1999 s a m p a i d e n g a n b u l a n ApriI 2000; dan d i l a n j u t k a n k e m b a l i d i Rumah S a k i t Umum Fakultas Kedokteran Universitas K r i s t e n I n d o n e s i a , J a k a r t a , dan d i Laboratorium Terpndu, Analisa Kimia, l n s t i t u t P e r t a n i a n Bogor, d a r i bulan Mei 200 1 sampai dengan Agustus 2 0 0 1 .
3.2. Bahan dun ACat
Hewan p e r c o b a a n yang dipergunakan d a l a m p e n e l i t i a n i n i a d a l a h marmut ( C a v i a p o r c e l l u s ) j a n t a n , umur 3-6 bulan, b o b o t s e k i t a r 2 0 0 - 500 gram, berasal d a r i B a l a i P e n e l i t i a n V e t e r i n e r , Bogor. M a r m u t m e n j a d i pilihan karena mencit, t i k u s d a n k e l i n c i , produksi urinnya s a n g a t s e d i k i t s e h i n g g a t i d a k c u k u p untuk d i l a k u k a n a n a l i s a .
Asam j e n g k o l a t dimurnikan d a r i buah j e n g k o l yang t u a d a n s e g a r , yang d i b e l i d a r i pasar Bogor. Untuk p e m e l i h a r a a n h e w a n , d i p a k a i k a n d a n g tunggal yang d i l e n g k a p i a l a t p e n a m p u n g urin, d a n makanan hewan b e r u p a rumput, k u l i t j a g u n g m a n i s muda, d a n p e l l e t makanan ayam petelur.
Bahan d a n a l a t l a i n n y a a d a l a h B ~ ( O H ) Z 5 H z 0 , HzS04 2N, NaOH 6 N , a s a m A s e t a t Glasial 9696, HCl I N , r e a g e n s i a N i n h y d r i n , NaOH l o % , Pb-Asetat 5 % , l a r u t a n G i e m s a , p e w a r n a H e m a t o x y l l i n - Eosin, s a r i n g a n Buchner, s e n t r i f u s u l t r a m e r k B e c k m a n , pH m e t e r merk Horiba, n e r a c a a n a l i t i k Ohaus, s e n t r i f u s mikro, m e s i n
p e n g e r i n g , b e j a n a d a n p e l a t K r o m a t o g r a f i L a p i s T i p i s (KLT), m i k r o s k o p b i a s a , a l a t p e m b e s a r f a s e k o n t r a s , m i k r o s k o p k h u s u s b e s e r t a p e r a l a t a n f o t o , k a m e r a m e r k K o d a k , a l a t u k u r k r e a t i n i n m e r k C o b a M i r a P l u s , k e r t a s p H 0 - 1 4 b u a t a n M e r c k . J u g a d i l a k u k a n p e m e r i k s a a n t a m b a h a n , y a i t u p e m e r i k s a a n LD50 d e n g a n m e m a k a i l a r v a u d a n g ( A r r e m i a s a l i n a L e a c h ) ; u j i t o k s i s i t a s u n t u k a s a m j e n g k o l a t , CS2, d a n m e r k a p t o e t a n o l ; p e m e r i k s a a n m a k r o s k o p i k s e d e r h a n a p a d a a l a t g e n i t o u r i n a r i a m a r m u t s a a t d i b e d a h ; d a n p e m e r i k s a a n b a u j e n g k o l p a d a u r i n , f e s e s d a n r o n g g a t u b u h s e t e l a h d i b e d a h . 3 . 3 . T a h a p a n k e r j a 3 . 3 . 1 . Pernurnian a s a m j e n g k o l a t D i l a k u k a n p e m u r n i a n a s a m j e n g k o l a t m e l a l u i m e t o d e e k s t r a k s i y a n g d i k e m b a n g k a n o l e h v a n V e e n d a n H y m a n ( 1 9 3 5 ) , y a n g t e l a h d i m o d i f i k a s i s e p e r l u n y a o l e h d u V i g n e a u d d a n P a t t e r s o n ( 1 9 3 6 ) , d a n k e m u d i a n o l e h O e n , S i m a m o r a , d a n K u s u m a h a s t u t i ( 1 9 7 2 ) d i u b a h s e p e r l u n y a . B a h a n y a n g d i p a k a i a d a I a h j e n g k o l s e g a r , d i b e l i d a r i p a s a r B o g o r . P r o t o k o l k e r j a : . J e n g k o l s e g a r 1 4 b u a h , d i b u a n g k u l i t k e r a s / h a l u s . d i p o t o n g k e c i l - k e c i l , l a l u d i t i m b a n g 1 7 0 - 1 7 5 g r a m . P o t o n g a n i n i d i b i e n d e r s e l a m a 1 5 m e n i t b e r s a m a 5 0 g r a m B a ( O H ) 2 . 5 H z 0 d a n s e d i k i t a i r , s a m p a i j a d i b u b u r h a l u s k e n t z l . C a m p u r a n d i e n c e r k a n d e n g a n a i r s a m p a i m e n j a d i 1 l i t e r , d a n d i p e r i k s a PH ( p H 1 1 ) . B u b u r d i d i a m k a n s e m a l a m d a l a m l e m a r i e s , b e s o k n y a d i s a r i n g p a k a i s a r i n g a n B u c h n e r , f i l t r a t k u n i n g m u d a d i a m b i l , d a n k e d a l a m f i l t r a t d i t a m b a h k a n H2S04 2 N p e r l a h a n s a m p a i
p H m e n j a d i 3.5, l a l u d i d i a m k a n s e m a l a m d a l a m l e m a r i e s . B a s 0 4 a k a n m e n g e n d a p . B e s o k n y a e ~ d a p a n d i p i s a h k a n p a k a i s e n t r i f u s k e c e p a t a n 5000 r p m , s e l a m a 10 m e n i t . F i f t r a t d i a m b i l , d i u a p k a n d i a t a s p e n a n g a s a i r s a m p a i v o l u m e m e n j a d i 100 m l , l a l u d i t a m b a h NaOH 6 N s a m p a i pH 5.5. T e r l i h a t e n d a p a n a s a m j e n g k o l , d a n k e m u d i a n d i d i a m k a n s e m a l a m d a l a m l e m a r i e s B e s o k n y a l a g i , e n d a p a n d i s a r i n g p a k a i s a r i n g a n B u c h n e r . D i c u c i 3 k a l i p a k a i a l k o h o l a b s o l u t , d i k e r i n g k a n d a l a m p e m a n a s d e n g a n s u h u 6 0 O C . H a s i l k r i s t a l y a n g d i p e r o l e h , d i p e r i k s a . 3 . 3 . 2 . P e n g u j i a n hasZl p e m u r n i a n 3.3.2.1. Uji N i n h y d r i n ( H a w a b , 1989) D i a m b i l k e r t a s s a r i n g b e r s i h d a n k e r i n g , d i t a b u r k a n s e d i k i t s e r b u k h a s i l p e m u r n i a n . R e a g e n N i n h y d r i n d i s e m p r o t k a n , l a l u d i m a s u k k a n k e p e m a n a s s u h u 110 O C s e l a m a 5 m e n i t . V i s u a l i s a i w a r n a c o k l a t k e u n g u a n y a n g m u n c u l , m e n u n j u k k a n a d a n y a a s a m a m i n o . 3 . 3 . 2 . 2 . U j i B e l e r a n g ( S u l i s t i y a n i , f 987) D i a m b i l s e r b u k h a s i l p e m u r n i a n s e b a n y a k 4 m g , l a l u d i m a s u k k a n d a l a m b o t o l r e a k s i , d a n k e m u d i a n d i l a r u f k a n d e n g a n HC1 0.1N. D a l a m l a r u t a n d i t a m b a h k a n 5 ml N a O H 10% d a n d i p a n a s k a n d a l a m p e m a n a s s u h u 100 O C s e l z m a 15 m e n i t . S e t e l a h i t u , d i b e r i 2 t e t e s l a r u t a n P b - a s e t a t 5%, d a n p e m a n a s a n d i l a n j u t k a n 15 m e n i t l a g i . E n d a p a n h i t a m m e n u n j u k k a n a d a n y a s u l f u r .
3.3.2.3. U j i K r o m a t o g r a f i L a p i s T i p i s ( A s h w o r t h , 1 9 6 9 ) D i s i a p k a n b e j a n a d a n p e l a t K L T k e r i n g . D i m a s u k k a n k e d a l a m b e j a n a , c a i r a n e l u e n t e r d i r i d a r i n - b u t a n o l , a s a m a s e t a t g l a s i a l d a n a i r , d e n g a n p e r b a n d i n g a n 4 : , Lalu d i t e m p e l k a n k e r t a s s a r i n g p a d a s a l a h s a t u s i s i b e j a n a , d a n d i t u t u p a g a r s u a s a n a b e j a n a j e n u h d e n g a n u a p e l u e n . P e l a t KLT d i a m b i l , d a n d i t a n d a i j a r a k r u n n i n g 1 0 c m m e m a k a i p i n s i l a r a n g . S a m p e l d i t o t o l k a n p a d a t a n d a b a w a h , l a l u p e l a t t e r s e b u t d i m a s u k k a n p a d a b e j a n a d e n g a n g a r i s b a w a h t e p a t d i a t a s p e r m u k a a n e l u e n . P e l a t KLT d i a n g k a t s e t e l a h e l u e n m e r e m b e s s a m p a i p a d a g a r i s a t a s . R e a g e n N i n h y d r i n d i s e m p r o t k a n k e s e l u r u h a r e a l r u n n i n g . B a g i a n y a n g t e r v i s u a l i s a s i y a i t u b a g i a n w a r n a c o k l a t k e u n g u a n d i b e r i t a n d a , l a l u d i u k u r j a r a k n y a t e r h a d a p g a r i s b a w a h . H a s i l n y a m e n u n j u k k a n n i l a i R f . 3 . 3 . 2 . 4 . U j i K e l a r u t a n d a l a m a i r ( O e n
m.
1 9 7 2 ) . D i t i m b a n g h a s i l p e m u r n i a n s e b a n y a k 9 . 8 ; 1 0 . 0 ; 1 0 . 2 ; d a n 1 0 . 4 m g s e r b u k h a s i l p e m u r n i a n , l a l u m a s i n g - m a s i n g d i l a r u t k a n d a l a m 1 0 ml a i r . D i p e r h a t i k a n t a b u n g y a n g s e m u a l a r u t d a n y a n g m a s i h a d a e n d a p a n . K a d a r t e r t i n g g i d a r i y a n g s e m u a l a r u t , m e n u n j u k k a n d a y a l a r u t d a l a m a i r .3.3.3. P e r s i a p a n hewan c o b a M a r m u t (C. p o r c e l l u s ) j a n t a n m u d a , 80 e k o r , u m u r 3 - 6 b u l a n , d i b e l i d a r i B a l a i P e n e l i t i a n V e t e r i n e r Bogor. d i t a r u h s e n d i r i - s e n d i r i d a l a m k a n d a n g t e r p i s a h , k o n d i s i n y a d i s e r a g a m k a n l e b i h d u l u s e l a m a s e b u l a n . D i b e r i m a k a n a n c a m p u r a n y a i t u k u l i t j a g u n g m u d a d a n r u m p u t , d i t a m b a h p e l e t m a k a n a n a y a m p e t e l u r . M i n u m a n d i b e r i k a n s e s u k a n y a (ad l i b i f u r n ) . S e b e l u m p e r l a k u a n , m a r m u t d i t i m b a n g s a t u p e r s a t u d e n g a n t i m b a n g a n m e r k T a n i t a . 3 . 3 . 4 . Penentuan s a t u dosis k e r a c u n a n B u b u k a s a m j e n g k o l a t d i t i m b a n g p a k a i t i m b a n g a n a n a l i t i k m e r k O h a u s , s e s u a i b e r a t b a d a n m a r m u t , s e j u m l a h d o s i s k e r a c u n a n u n t u k m a r m u t b e r s a n g k u t a n . 1 ( s a t u ) d o s i s k e r a c u n a n m e n g a c u p a d a 1 ( s a t u ) d o s i s k e r a c u n a n p a d a m a n u s i a y a i t u a n a k u s i a a n t a r a 4-12 t a h u n , b e r a t r a t a - r a t a 1 5 . 0 0 0 g r a m , m a k a n 2 b u t i r j e n g k o l : P e r h i t u n g a n d o s i s k e r a c u n a n u n t u k t i a p m a r m u t : B t
X
g D =B B
X DK X---
B t PX
B B A k
D : d o s i s t e r t i m b a n g u n t u k i l c e k o k k a n p a d a m a r m u t b e r s a n g k u t a n ( m g ) BB : B o b o t B a d a n m a r m u t ( g ) D K : 1 u n i t d o s i s k e r a c u n a n u n t u k m a r m u t ( m g ) B e s a r n y a d o s i s p e r u n t u k a n n y a m e m a k a i d a s a r : D X a ( a = n 2 + 2 n , n = 0 , 1 , 2 , 3 )P e m b e r i a n d o s i s k e r a c u n a n 0, 1 , 4 , 8, 1 4 d o s i s Bt : B u t i r j e n g k o l r a t a - r a t a d i m a k a n a n a k ( 2 b u t i r ) g : g r a m a s a m j e n g k o l a t h a s i t e k s t r a k s i BtP: B u t i r j e n g k o l u n t u k p e m u r n i a n ( I 4 b u t i r ) BBAk : B o b o t B a d a n A n a k r a t a - r a t a (15.000 g ) 3 . 3 . 5 . Rancangan p e r c o b a a n M a r m u t d i b a g i 5 k e l o m p o k p e r l a k u a n d e n g a n 10 u l a n g a n , l a l u d i l a k u k a n p e n c e k o k a n b u b u k a s a m j e n g k o l a t C h a s i l i s o l a s i : P e r l a k u a n A : d i c e k o k k a n 0 d o s i s d a l a m 2 ml a i r ( k o n t r o l ) P e r l a k u a n B : d i c e k o k k a n 1 d o s i s d a l a m 2 ml a i r P e r l a k u a n C : d i c e k o k k a n 4 d o s i s d a l a m 2 ml a i r P e r l a k u a n D : d i c e k o k k a n 8 d o s i s d a l a m 2 m l a i r P e r l a k u a n E : d i c e k o k k a n 14 d o s i s d a l a m 2 ml a i r . P a r a m e t e r u n t u k m e n y a t a k a n p e r l a k u a n y a n g d i b e r i k a n t e i a h m e n g h a s i l k a n k e r a c u n a n j e n g k o l b i l a d i d a p a t s a t u a t a u Iebih t a n d a - t a n d a s e b a g a i b e r i k u t : 1 . T e r j a d i h e m a t u r i a m i k r o s k o p i k a t a u m a k r o s k o p i k 2. T e r d a p a t k r i s t a l a s a m j e n g k o l a t d a l a m u r i n T i a p j a m , s e l a m a 8 j a m , d i p e r i k s a u r i n m a r m u t : warna d a n kekeruhan s e c a r a k a s a t m a t a , b a u d e n g a n m e n c i u m n y a , p H d e n g a n k e r t a s L a k m u s M e r c k pH 0- 14, butir e r i t r o s i t , k r i s t a l , d a n bentukan l a i n n y a , m e l a l u i p e m e r i k s a a n m i k r o s k o p i k p e m b e s a r a n 10 X 4 5 . R h u s u s u n t u k b u t i r e r i t r o s i t , b i l a d i t e m u k a n e r i t r o s i t d a l a m u r i n , d i l a k u k a n p e m e r i k s a a n m i k r o s k o p i k kanjutan m e m a k a i f a s e k o n t r a s . U n t u k p H d i l a k u k a n u j i s t a t i s t i k .
3 . 3 . 6 . P e m e r i k s a a n h i s t o p a t o l o g i S e t e l a h j a m k e d e l a p a n , m a r m u t d i m a t i k a n d e n g a n p e m b e r i a n k h l o r o f o r m , l a l u d i b e d a h . C a i r a n k a n d u n g k e m i h d a n c a i r a n p e r u t d i a m b i l u n t u k d i u k u r pH; g i n j a l , u r e t e r d a n k a n d u n g k e m i h d i a m b i l u n t u k p e m e r i k s a a n h i s t o p a t o l o g i , p e w a r n a a n h e m a t o k s i l i n - e o s i n . P a d a p e m e r i k s a a n h i s t o p a t o l o g i i n i , u n t u k s e t i a p m a r m u t ( u l a n g a n ) , d a t a p e n g a m a t a n d i b a g i d a l a m 4 g r a d a s i y a i t u : n i l a i 0 (-) , b i l a t i d a k a d a k e l a i n a n ; n i l a i 1 ( + I ) , b i l a k e l a i n a n r i n g a n ( < 2 5 % w i l a y a h ) n i l a i 2 ( + 2 ) , b i l a k e l a i n a n s e d a n g ( 2 5 - 5 0 % w i l a y a h ) n i l a i 3 ( + 3 ) , b i l a k e l a i n a n n y a b e r a t ( > 5 0 % w i l a y a h ) T a b e l 1 1 : C a r a p e m b e r i a n n i l a i u n t u k g l o m e r u l u s G l o m e r u l u s
Bowman
1
a&1
ada1
adahiembran basal
1
utuh1
menebal1
menebal1
menebal Densitas glomerulartuft Enwan di ruang Bowman Eridrosit di ruang N i l a i 0 tidak berubah tidak ada tidak ada ruatlg Bowman + 1 ditemukan pa& ( 2 5 % d a y a h berkurang ada C a t a t a n : g r a d a s i n i l a i 0 - 1 2 sampairusak + 2 ditemukan pada 25-50% wilayah belkmang ada sampairusak+
3 ditanukan pada >SO% wilayab berhrang ada sampairusakTabel 1 2 : Cara pemberian n i l a i untuk kortek g i n j a l Jaringan interstitial Nsak Catatan : gradasi n i l a i 0 - 2 1 ada ada tidak ada ada
Tabel 13: Cara pemberian n i l a i untuk medula ginjal Medula ginjal EpiteI tubulus rusak Vakuola s i t o p l a s m a Inti s e l piknotik, karioreksis, k a r i o l i s i s Endapan h i a l i n dilumen tubulus Debris di lumen tubulus Eritrosit d i l u m e n tubulus Jaringan interstitial rusak N i l a i tidak ada 0 tidak ada tidak ada tidak ada tidak ada ti& ads Catatan : gradasi n i l a i 0-21 tidak ada ada + 1 ditemukan pada
as%-
+Jayah ada ada ada ada ada ada ada + 2 dit- pada 25-50% wilayah ada ada ada ada ada ada ada + 3 ditemukan pada > 5 W ? wilayah ada ada ada ada ada adaT a b e l 1 4 : C a r a p e m b e r i a n n i l a i u n t u k u r e t e r U r e t e r Kerusakan dinding Eritrosit di lumen Endapan hialin di lumen Endapan debris di lwnen T a b e l 15: C a r a p e m b e r i a n n i l a i u n t u k v e s i k a u r i n a r i a C a t a t a n : g r a d a s i n i l a i 0 - 1 2 N i l a i V e s i k a u r i n a r i a K e r u s a k a n d i n d i n g E r i t r o s i t d i l u m e n E n d a p a n h i a l i n d i l u m e n E n d a p a n d e b r i s d i l u m e n 0 tidak ada tidak ada tldak ada ti& ada C a t a t a n : g r a d a s i n i l a i 0 - 1 2 N i l a i + 3 diternukan pada 240% wilayah
+
1 ditemukan pada <25% wilayah 0 tidak ada tidak ada tidak ada tidak ada+
2 ditemukan pada 25-50% wilayah -+ 2 ditemulcan pada 25-5% wilayah ada ada ada ada+
1 ditemukan pada -5% wilayah ada ada ada ada ada ada ada ada + 3 ditemdcan pada >SO?? wilayah ada - ada ada ada ada ada ada ada ada ada ada a&U n t u k t i a p d o s i s p e r l a k u a n , s e t i a p u l a n g a n m a s a l a h h i s t o p a t o l o g i d i j u m l a h k a n . S e l a n j u t n y a , d i l a k u k a n p e n g u j i a n a n t a r p e r l a k u a n u n t u k m e l i h a t p e n g a r u h p e m b e r i a n d o s i s k e r a c u n a n a s a m j e n g k o l a t y a n g b e r t i n g k a t . 3 . 3 . 7 . Pemeriksaan f u n g s i filtrasi P r i n s i p p e m e r i k s a a n : F u n g s i f i l t r a s i d i p e r i k s a d e n g a n m e n g u k u r GFR ( G l o m e r u l a r F i l t r a t i o n R a t e ) , m e l a l u i c a r a m e n g h i t u n g e k s k r e s i b a h a n d i u r i n d a n k a d a r b a h a n d a l a m p l a s m a d a r a h . B a h a n y a n g d i p a k a i h a r u s d e n g a n m u d a h d a p a t m e l a l u i s a r i n g a n g l o m e r u l u s d a n t i d a k d i s e k r e s i m a u p u n d i r e a b s o r p s i o l e h t u b u l u s , d i s a m p i n g t i d a k b e r s i f a t r a c u n , t i d a k d i m e t a b o l i s i r t u b u h , t i d a k m e r u s a k f u n g s i f i l t r a s i / s e k r e s i , d a n r e l a t i f m u d a h d i u k u r d a l a m u r i n d a n p l a s m a . B a h a n y a n g s a n g a t s e s u a i u n t u k i t u a d a l a h I n u l i n , s u a t u p o l i m e r f r u k t o s a d e n g a n b e r a t m o l e k u l 5 2 0 0 , y a n g d i d a p a t k a n p a d a d a u n d a h l i a . B a h a n i n i s u l i t d i p e r o l e h , d a n d a p a t d i g a n t i d e n g a n k r e a t i n i n ( c r e a t i n i n e ) , y a i t u s a m p a h m e t a b o l i s m e t u b u h , y a n g t i d a k d i p e r l u k a n t u b u h s e h i n g g a h a r u s d i k e l u a r k a n d a r i t u b u h . P e m e r i k s a a n k l i r e n s k r e a t i n i n d a p a t d i p a k a i u n t u k m a n u s i a d a n m a m a l i a l a i n s e p e r t i k e l i n c i d a n m a r m u t . P r o t o k o l k e r j a : D i p a k a i 3 0 e k o r m a r m u t , u n t u k 3 p e r l a k u a n ( d o s i s 0, 1, d a n 14 k e r a c u n a n j e n g k o l ) d e n g a n 10 u l a n g a n . M a s u k k a n m a r m u t d a l a m k a n d a n g t u n g g a l , d i b e r i p a k a n y a n g s e s u a i d a n m i n u m a n s e c a r a s e s u k a n y a ( a d l i b i t u m ) , u n t u k p e n y e r a g a m a n k o n d i s i .
T i m b a n g m a r m u t , u n t u k m e n e t a p k a n d o s i s k e r a c u n a n n y a . J a m 0 6 . 0 0 : p e r l a k u a n 1, b e r i k a n 0 d o s i s k e r a c u n a n p e r l a k u a n 2, b e r i k a n 1 d o s i s k e r a c u n a n p e r l a k u a n 3, b e r i k a n 14 d o s i s k e r a c u n a n U n t u k k e t i g a p e r l a k u a n d i l a k u k a n 10 u l a n g a n . P e m b e r i a n a s a m j e n g k o l d i l a k u k a n d e n g a n p e n c e k o k a n b a h a n y a n g t e l a h d i l a r u t k a n d a l a m 2 ml a i r b i a s a . J a m 0 8 . 0 0 : P a s a n g p e n a m p u n g u r i n d i b a w a h k a n d a n g . P e n a m p u n g u r i n d i b u a t d a r i p l a s t i k , b a g i a n t e n g a h n y a d i p a s a n g s a r i n g a n d a n d i t a m p u n g d a l a m g e l a s p i a l a 2 5 m l . J a m 0 8 . 0 0 k e e s o k a n h a r i n y a ( 2 4 j a m ) : a . u r i n d i a m b i l , u k u r v o l u m e n y a , a d u k m e r a t a ( s a m p e l u r i n ) b . a m b i l d a r a h 3-5 m l l a n g s u n g d a r i j a n t u n g p a k a i s p u i t s t e r i l 5 m l , m a s u k k a n ke t a b u n g ( s a m p e l d a r a h ) c . K e d u a s a m p e l u r i n d a n d a r a h d i p e r i k s a k a d a r k r e a t i n i n n y a d a n h a s i l n y a m e n u n j u k k a n k l i r e n s k r e a t i n i n . P e m e r i k s a a n k l i r e n s d i l a k u k a n p a k a i a l a t o t o r n a t i k m e r k C o b a M i r a P l u s b u a t a n R o c h e . B i l a h a s i l n y a t i d a k b e r b e d a n y a t a , b e r a r t i f u n g s i f i l t r a s i t i d a k a t a u h a m p i r t i d a k t e r p e n g a r u h o I e h a s a m j e n g k o l 3 . 3 . 8 . Penentuan LDso D i l a k u k a n m e m a k a i U j i H a y a t i d e n g a n l a r v a u d a n g Artemia salina L e a c h . T e l u r u d a n g d i t e t a s k a n k e d a l a m g e l a s p i a l a b e r i s i a i r l a u t y a n g d i l e n g k a p i a e r a t o r . S e s u d a h 2 4 j a m k e m u d i a n t e l u r a k a n m e n e t a s . S i a p k a n 6 b o t o l k e c i l , d a n k e d a l a m n y a m a s u k k a n a i r l a u t y a n g d i b e r i k a n a s a m j e n g k o l a t
d e n g a n k a d a r 0; 0 . 1 ; 1; 10; 1 0 0 ; 1 0 0 0 p p m . D a l a m m a s i n g - m a s i n g b o t o l d i m a s u k k a n 10 e k o r l a r v a u d a n g . H i t u n g k e e s o k a n h a r i n y a , y a n g m a t i d a n y a n g h i d u p . J u m l a h y a n g m a t i d i h i t u n g d a n d i a n a l i s a r n e n g g u n a k a n P r o g r a m A n a l i s i s P r o b i t F i n n e y d e n g a n s e l a n g k e p e r c a y a a n 95%. P e n g u j i a n d i l a k u k a n d e n g a n t i g a u l a n g a n . 3 . 3 . 9 . U j i t o k s i s i t a s p a d a l a r v a u d a n g A - s a l i n a D i l a k u k a n u j i t o k s i s i t a s d e n g a n b a h a n a s a m j e n g k o l a t . m e r k a p t o e t a n o l d a n C S 2 p a d a Artenzia s a l i n a d a l a m m t d i a a i r l a u t d a n m e d i a P B S ( p h o p h a t buffer s a l i n e ) b e r s a m a a i r l a u t uiltuk m e l i h a t a p a k a h t e r j a d i k e m a t i a n d a n p a d a j a m k e b e r a p a t e p a t n y a t e r j a d i k e m a t i a n p a d a l a r v a u d a n g . B a h a n y a n g d i p a k a i u n t u k u j i t o k s i s i t a s : 1. C S 2 D i d a s a r k a n p e r t i m b a n g a n b a h w a a s a m j e n g k o l a t t e l a h d i k e t a h u i d i h i d r o l i s i r o l e h t a n a m a n t e r t e n t u y a i t u o l e h a k a r t a n a m a n M i m o s a p u d i c a ( P u t r i m a l u ) d a n b a h a n i n i t o k s i s t e r h a d a p a k a r j a m u r , c a c i n g d a n s e r a n g g a , d a n m e n j a d i k o m p o n e n y a n g m e n y e b a b k a n h u j a n a s a m d i b e r b a g a i h u t a n t r o p i s ( P i l u k
w.,
1 9 9 8 ) 2. M e r k a p t o e t a n o l ( M e r c a p t o e t h a n o l , C 2 H s O S ) B e r d a s a r k a n p e r t i m b a n g a n b a h w a b a h a n i n i m e m p u n y a i h a u m i r i p d e n g a n b a u j e n g k o l . B a h a n i n i t o k s i k b i i a t e r k e n a k u l i t , d i t e l a n , d a n m e n g a k i b a t k a n i r i t a s i p a d a m a t a ( k e t e r a n g a n l a b e l b o t o l ) . 3. A s a m j e n g k o l a t h a s i l p e m u r n i a n .3 . 3 . 1 0 . Pengujian hasil D a t a - d a t a y a n g d i p e r o l e h , k e m u d i a n d i t a b u l a s i d a n d i a n a l i s a d e n g a n m e m a k a i u j i s t a t i s t i k s e p e r t i R a n c a n g a n A c a k L e n g k a p m e l a l u i B e d a N y a t a .Jujur ( B N J ) , d a n u j i s t a t i s t i k n o n p a r a m e t r i k K r u s k a l - W a l l i s s a t u a r a h d e n g a n a n a l i s i s v a r i a n m e l a l u i p e r i n g k a t ( D a n i e l 1987). U n t u k m e t o d e K r u s k a l - W a l l i s , l a n g k a h y a n g d i a m b i l : H a s i l p e n g a m a t a n , n l , n2,
