DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL………. i
HALAMAN PENGESAHAN………... iii
MOTTO DAN PERSEMBAHAN……… iv
DEKLARASI………. v
A. Latar Belakang Masalah……...………... 1
B. Perumusan Masalah………..………..………... 3
C. Tujuan Penelitian ……… 4
D. Tinjauan Pustaka…….……….………..……... 4
E. Landasan Teori……….………… 17
E. Hipotesis……….. 17
BAB II. METODE PENELITIAN……….…………. 19
A. Jenis Penelitian……… 19
C. Bahan dan Alat ………... 19
D. Jalannya Penelitian……….. 20
1. Determinasi Tanaman………... 20
2. Preparasi Ekstrak Daun Dewandaru ………. 20
3. Preparasi Fraksi Sitosol Liver Tikus………... 21
4. Penetapan Kadar Fraksi Sitosol ... 23
5. Penentuan Aktivitas GST Liver Tikus………... 24
6. Penentuan IC50Ekstrak Daun Dewandaru ………... 25
E. Cara Analisis……… 26
BAB III. HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN………... 27
A. Determinasi Tanaman………... 27
B. Perolehan Ekstrak Daun Dewandaru……… 27
C. Perolehan Fraksi Sitosol Liver Tikus……….. 29
D. Penetapan Kadar Fraksi Sitosol……….. 30
E. Penentuan Aktivitas GST Liver Tikus... 31
F. Penentuan IC50Ekstrak Daun Dewandaru... 33
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN……… 42
A. Kesimpulan………... 42
B. Saran………... 42
DAFTAR PUSTAKA………. 43
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Struktur Glutation (GSH) ………... 9
Gambar 2. Mekanisme Aktivitas Glutation S-Transferase... 11
Gambar 3. Kerangka Flavonoid... 15
Gambar 4. Struktur Senyawa 1-kloro-2,4- dinitrobenzen(CDNB)... 16
Gambar 5. Reaksi Konjugasi GSH dengan Substrat CDNB... 16
Gambar 6. Struktur Senyawa 1,2-dikloro-4-nitrobenzen (DCNB)... 16
Gambar 7. Reaksi Konjugasi GSH dengan Substrat DCNB... 17
Gambar 8. Skema Ekstraksi Daun Dewandaru... 22
Gambar 9. Profil Linearitas Kurva Baku ... 30
Gambar 10. Kurva Kecepatan Aktivitas GST... 32
Gambar 11. Grafik Penurunan Aktivitas GST pada Pembentukan Produk Konjugat dengan Substrat CDNB ... 35
Gambar12. Grafik Penurunan Aktivitas GST pada Pembentukan Produk Konjugat dengan Substrat DCNB... 35
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Berat dan Rendemen hasil ekstraksi ... 28 Tabel 2. Nilai % Inhibisi dan IC50 Ekstrak Daun Dewandaru pada
Konjugasi GSH – CDNB dengan Katalis GST Liver
Tikus... 36 Tabel 3. Nilai % Inhibisi dan IC50 Ekstrak Daun Dewandaru pada
Konjugasi GSH – DCNB dengan Katalis GST Liver
Tikus... 37 Tabel 4. Perbandingan nilai IC50... 37
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat Keterangan Determinasi Dewandaru ... 48
Lampiran 2. Gambar Tanaman Dewandaru (Eugenia uniflora L.)…… 49
Lampiran 3. Gambar Utrasentrifuge………... 50
Lampiran 4. Gambar Spektrofotometer Genesys 10………... 51
Lampiran 5. Data Perhitungan Rendemen………. 52
Lampiran 6. Pembuatan Reagen Lowry... 53
Lampiran 7. Pembuatan Stok dan seri konsentrasi Standar Bovine Serum Albumin(BSA)... 54
Lampiran 8. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum (λ maks) BSA……….. 55 Lampiran 9. Penentuan Operating TimeBSA………. 56
Lampiran 10. Penentuan Kurva Baku... 57
Lampiran 11. Perhitungan dan Penimbangan GSH 50 mM, CDNB 50 mM, DCNB 50 mM... 58
Lampiran 12. Perhitungan Kadar Fraksi Sitosol Liver Tikus………….. 59
Lampiran 13. Bagan Penetapan Aktivitas GST Perhitungan Kadar Protein Fraksi Sitosol Liver Tikus... 60
Lampiran 14. Perhitungan Aktivitas Enzim GST Fraksi Sitosol Liver Tikus…………...………. 61 Lampiran 15 Perhitungan IC50Ekstrak Etanol dengan Substrat CDNB 62
Lampiran 16. Perhitungan IC50 Ekstrak Etil Asetat dengan Substrat
CDNB... 65 Lampiran 17. Perhitungan IC50 Ekstrak Kloroform dengan Substrat
CDNB... 68 Lampiran 18. Perhitungan IC50Ekstrak Etanol dengan Substrat DCNB 71
Lampiran 19. Perhitungan IC50 Ekstrak Etil Asetat dengan Substrat
DCNB... 74 Lampiran 20. Perhitungan IC50 Ekstrak Kloroform dengan Substrat
DAFTAR SINGKATAN
GST Glutation S-Transferase
GSH Glutation
CDNB 1-chloro-2,4-dinitrobenzene
DCNB 1,2-dichloro-4-nitrobenzene
IC50 Nilai kadar yang mampu menghambat aktivitas GST sebesar 50%.
GS-DNB Produk konjugasi GSH dengan substrat CDNB oleh GST GS-CNB Produk konjugasi GSH dengan substrat DCNB oleh GST
BSA Bovine Serum Albumin
INTISARI
Pada beberapa kasus tumor diketahui terjadi peningkatan Glutation S-Transferase (GST) yang dapat mempercepat biotransformasi obat antitumor. Hal ini mengakibatkan efek terapi menjadi kurang optimal. Senyawa fenol alam, termasuk di dalamnya flavonoid telah terbukti mampu menghambat aktivitas GST. Dewandaru (Eugenia uniflora L.), salah satu tumbuhan asli Indonesia mengandung senyawa sitronela, sineol, terpenin, sesquiterpen, vitamin C, saponin, flavonoid, tanin dan antosianin. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan daya hambat ekstrak daun dewandaru terhadap aktivitas GST secara
in vitro dengan substrat 1-chloro-2,4-dinitrobenzene(CDNB) sebagai substrat umum dan 1,2-dichloro-4-nitrobenzene(DCNB) sebagai substrat spesifik.
Penelitian dilakukan dengan fraksi sitosol hati tikus yang disiapkan dengan metode Lundgren dkk (1987). Ekstrak kloroform, etil asetat dan etanol daun dewandaru diperoleh dengan cara maserasi bertingkat menggunakan pelarut kloroform, etil asetat dan etanol. Kadar protein fraksi sitosol ditentukan dengan metode Lowry (1951) denganBovine Serum Albumin (BSA) sebagai standar baku. Aktivitas GST diukur dari kecepatan pembentukan produk konjugat antara glutation (GSH) dan substrat, secara spektrofotometri menurut metode Habig dkk (1974). Hasil yang diperoleh berupa aktivitas GST dengan dan tanpa ekstrak, kemudian ditentukan nilai IC50 (nilai kadar yang mampu menghambat aktivitas
GST sebesar 50%) dari masing – masing ekstrak.
Hasil penelitian menunjukkan pada ketiga ekstrak memiliki daya hambat terhadap aktivitas GST secara in vitro, baik dengan substrat CDNB maupun substrat DCNB. Nilai IC50 ekstrak kloroform, etil asetat dan etanol pada uji
menggunakan substrat CDNB 316,75; 862,05; 306,47 ȝg/ml, sedangkan dengan substrat DCNB 304,43; 487,56 ;283,16 ȝg/ml.
