PEMERIKSAAN JENIS BAKTERI
2.4 Media Agar
kuning (lebih sedikit asam yang dihasilkan dari fermentasi glukosa) (Gambar 2.15).
Gambar 2.15. Hasil uji tes MR (Tankeshwar, 2023).
Pada Gambar 2.15 warna merah yang stabil pada permukaan media dengan reagen MR menunjukkan produksi asam yang cukup untuk menurunkan pH menjadi 4,4 dan merupakan uji positif. Karena organisme lain dapat menghasilkan asam dalam jumlah yang lebih kecil dari substrat uji, warna oranye menengah antara kuning dan merah dapat berkembang. Itu tidak menunjukkan tes positif. Escherichia coli (uji MR positif):
munculnya warna merah setelah penambahan reagen metil merah. Klebsiella aerogenes (uji MR negatif).
Sebagian besar anggota famili Enterobacteriaceae memberikan reaksi MR dan VP yang berlawanan. Namun, organisme tertentu, seperti Hafnia alvei dan Proteus mirabilis, dapat memberikan reaksi MR positif dan reaksi VP positif. Organisme positif metil merah (MR) yaitu Escherichia coli, spesies Shigella, spesies Salmonella, spesies Citrobacter, Spesies Proteus, dan spesies Yersinia.
Organisme negatif Metil Merah (MR) yaitu spesies enterobakter, spesies Hafnia, Serratia marcescens, Klebsiella pneumoniae (Clinical Microbiology Procedures Handbook, 2016; Tankeshwar, 2023).
laktosa dalam media MacConkey, yang selektif untuk mereka. Bahan utama media MacConkey adalah laktosa, merah netral, garam empedu, dan pewarna kristal violet (indikator pH). Untuk mendorong pertumbuhan bakteri gram negatif, pewarna kristal violet dan garam empedu menghambat pertumbuhan bakteri gram positif dan gram negatif (seperti Neisseria dan Pasteurella). Bakteri enterik gram negatif tidak terpengaruh oleh garam empedu karena memiliki membran luar yang resisten terhadap empedu (Tankeshwar, 2023).
Laktosa terdapat didalam media yang difermentasi oleh bakteri untuk membentuk asam laktat yang dapat menurunkan pH agar, dan mengubah indikator (merah netral) menjadi merah muda, sehingga membedakan fermentor laktosa dari fermentor non-laktosa. Bahan lain seperti gelatin, kasein, nitrogen, vitamin, mineral, dan asam amino yang penting untuk pertumbuhan. Natrium klorida memberikan keseimbangan osmotik dan memasok elektrolit penting untuk transportasi. Gambar 2.16 media MacConkey dibawah ini.
Gambar 2.16. Media MacConkey (Tankeshwar, 2023) Gambar 2.16 agar MacConkey mengandung empat bahan utama (laktosa, garam empedu, kristal ungu, dan merah netral) yang membuatnya menjadi media selektif
dan diferensial. Garam empedu dan kristal violet bertindak sebagai agen selektif yang mampu menghambat pertumbuhan organisme Gram-positif, dan membantu pertumbuhan selektif bakteri gram-negatif.
Laktosa berperan sebagai sumber karbohidrat. Bakteri pemfermentasi laktosa menghasilkan koloni berwarna merah muda-merah, setelah memfermentasi laktosa menjadi asam dan menurunkan pH indikator (merah netral) yang ada di media. Karena non-fermentor tidak dapat menggunakan laktosa, koloni tampak tidak berwarna atau transparan. Bakteri berkapsul seperti Klebsiella dan Enterobacter menghasilkan kapsul menggunakan laktosa. Ini memberikan koloni yang lengket dan tampak basah pada media MacConkey (Jung
& Hoilat, 2021).
Bakteri enterik gram negatif yang tumbuh pada media MacConkey dibedakan berdasarkan kemampuannya memfermentasi laktosa. Jika laktosa difermentasi, produksi asam menurunkan pH media.
Penurunan pH ditunjukkan dengan berubahnya indikator merah netral menjadi merah muda (bacaan netral tampak merah muda dengan pH di bawah 6,8). Bakteri fermentasi laktosa kuat menghasilkan asam yang cukup yang menyebabkan pengendapan garam empedu di sekitar pertumbuhan. Tampak sebagai lingkaran cahaya merah muda yang mengelilingi koloni atau area pertumbuhan konfluen. Halo merah muda tidak terlihat di sekitar koloni bakteri fermentasi laktosa yang lebih lemah seperti pada bakteri E.coli (Gambar 2.12) (Allen, 2005; Jung & Hoilat, 2021).
Bakteri gram negatif yang tumbuh pada agar MacConkey tetapi tidak memfermentasi laktosa tampak tidak berwarna pada media dan agar yang mengelilingi bakteri relatif transparan seperti pada bakteri Salmonella (Gambar 2.12).
Bakteri Gram-positif dihambat dalam agar MacConkey dengan garam empedu dan kristal violet, namun, dalam formulasi yang berbeda di mana garam empedu dan kristal violet tidak tergabung, bakteri Gram- positif juga muncul sebagai fermentor laktosa tetapi ukurannya lebih kecil daripada gram-negatif seperti gambar 2.12 pada bakteri S. aureus.
Agar cetrimide dikenal sebagai agar pseudosel digunakan untuk isolasi selektif dan identifikasi dugaan Pseudomonas aeruginosa. Media ini pertama kali dikembangkan oleh Lowburry dan modifikasi dari Tech Agar (dikembangkan oleh King et al.) dengan penambahan 0,1% cetrimide (cetyl trimethyl ammonium bromide) untuk penghambatan organisme selain Pseudomonas aeruginosa.
Cetrimide adalah garam amonium kuaterner, yang bertindak sebagai deterjen kationik ketika bersentuhan dengan sel bakteri, menyebabkan pelepasan nitrogen dan fosfor yang pada gilirannya memiliki efek denaturasi pada protein membran sel bakteri. Ini menunjukkan tindakan penghambatan pada berbagai mikroorganisme termasuk spesies Pseudomonas selain Pseudomonas aeruginosa.
Pseudomonas aeruginosa menghasilkan sejumlah pigmen yang larut dalam air, termasuk pigmen neon kuning-hijau atau kuning-coklat pyoverdin (fluorescein).
Ketika pyoverdin bergabung dengan pigmen pyocyanin biru yang larut dalam air, karakteristik warna hijau cerah dari Pseudomonas aeruginosa. Cetrimide meningkatkan produksi pigmen pyocyanin dan fluorescein (Gambar 12).
Selain cetrimide, media tersebut juga mengandung gelatin digesta pankreas yang menyediakan nitrogen, vitamin, mineral, dan asam amino esensial untuk pertumbuhan. Gliserol bertindak sebagai sumber karbon.
Magnesium klorida dan kalium klorida meningkatkan produksi pyocyanin dan fluorescein. Agar adalah zat penguat. Cetrimide adalah agen selektif. Ini adalah zat
beracun yang menghambat pertumbuhan banyak bakteri (Andrea, 2016)
Gambar 2.17. Agar cetrimide (A) positif, dan (B) negative.
Media nonselektif yang digunakan dalam bakteriologi anaerob diantaranya:
1. Kaldu daging yang dimasak (seperti Medium Daging yang Dimasak Robertson) termasuk media Non- selektif untuk bakteri anaerobic, dengan penambahan glukosa, yang dapat digunakan untuk kromatografi gas-cair.
2. Agar darah anaerob merupakan media non-selektif untuk isolasi anaerob dan anaerob fakultatif.
3. Agar kuning telur merupakan media Non-selektif untuk penentuan produksi lecithinase dan lipase oleh Clostridia dan Fusobacteria.
4. Kaldu glukosa ekstrak ragi pepton merupakan media Non-selektif kultur bakteri anaerob untuk kromatografi gas-cair.
Media selektif dan diferensial yang digunakan dalam bakteriologi anaerob:
1. Bacteroides bile esculin agar merupakan media selektif dan berbeda untuk kelompok Bacteroides fragilis dan baik untuk identifikasi dugaan.
2. Laked Kanamycin-vancomycin blood agar merupakan media Selektif untuk isolasi Prevotella dan Bacteroides spp.
3. Agar phenylethyl alcohol anaerobik merupakan media selektif untuk penghambatan batang gram negative
4. Cycloserine cefoxitin fructose agar merupakan media selektif untuk Clostridium difficile.
5. Kaldu tioglikolat merupakn media Nonselektif untuk kultur anaerob dan anaerob fakultatif dan aerob.
DAFTAR PUSTAKA
AL-Joda, N. M. S & Jasim, A. H. 2021. Biochemical Testing Revision For Identification Several Kinds of Bacteria.
Journal of University of Babylon for Pure and applied science (JUBPAS). 29 (2);168-176.
Allen, M. E. 2005. MacConkey Agar Plates Protocols.
https://www.asmscience.org/content/education/protocol /protocol.2855
Andrea J. Linscott. 2016. Clinical Microbiology Procedures Handbook, 4th Edition. ASM Press, Washington, DC. doi:
10.1128/9781683670438.
Austrian, R. 1960. The Gram stain and the etiology of lobar pneumonia, an historical note. Bacteriological Reviews. 24 (3): 261–265. PMC 441053.
Beveridge, T. J. 2001. Use of the Gram stain in microbiology.
Biotech Histochem. 76(3):111–118.
Clinical Microbiology Procedures Handbook, Fourth Edition.
2016. In Clinical Microbiology Procedures Handbook, Fourth Edition. American Society of Microbiology.
https://doi.org/10.1128/9781555818814.
Giuliano, C., Patel, C. R., & Kale-Pradhan, P. B. 2019. A Guide to Bacterial Culture Identification and Results Interpretation.
P&T. 44 (4): 192-200.
Jung, B., & Hoilat, G. J. 2021. MacConkey Medium. In StatPearls.
StatPearls Publishing.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK557394/
Khatoon, H., Anokhe, A, & Kalia, V. 2022. Catalase Test: A Biochemical Protocol for Bacterial Identification. AgriCos e- Newsletter. 3 (1): 53-55.
MacWilliams, M. P. 2009, Retrieved 10 February 2023. Indole
Test Protocol.
https://www.asmscience.org/content/education/protocol /protocol.3202
McLaughlin, S & Petersen, J. 2016. Laboratory Exercises in Micr cises in Microbiology: Disco obiology: Discovering the Unseen ering the Unseen World Through Hands-On Investigation.
City University of New York (CUNY): CUNY Academic Works.
Shields, P, & Cathcart, L. 2010. Oxidase Test Protocol. American Society for Microbiology.
Sulfur, Indole, Motility (SIM) Media. University of Wyoming.
Retrieved 8 February 2023, from
http://www.uwyo.edu/molb2021/additional_info/summ_
biochem/sim.html
SIM Medium. Microbugz. Retrieved February 2023, from https://www.austincc.edu/microbugz/sim_medium.php.
Tagesu, A. 2018. Microbiology examination. International Journal of Veterinary Science and Research. 065-077. DOI:
http://dx.doi.org/10.17352/ijvsr.s1.110
Tankeshwar, A. 2023. Sulfide Indole Motility (SIM) Medium:
Principle, Procedure, and Results. Retrieved 8 February 2023, from https://microbeonline.com/sulfide-indole- motility-sim-medium/.
Tankeshwar, A. 2023. Methyl Red (MR) Test: Principle, Procedure, and Results. Retrieved 8 February 2023, from https://microbeonline.com/methyl-red-mr-test-principle- procedure-results/.
Tankeshwar, A. 2023. MacConkey Agar: Composition, Uses, Colony Characteristics. Retrieved 8 February 2023, from https://microbeonline.com/macconkey-agar-mac-
composition-preparation-uses-and-colony-characteristics/
Tankeshwar, A. 2023. Simple Staining: Principle, Procedure, Uses.
Retrieved 8 February 2023, from
https://microbeonline.com/simple-staining-principle- procedure-results/