Timbang 25 g sampel ke dalam Erlenmeyer atau wadah lain yang sesuai yang berisi 225 ml larutan pengencer (1:10) Buat pengenceran. Tuangkan 25 ml alikuot atau timbang 25 g alikuot sampel ke dalam Erlen Meyer atau wadah lain yang sesuai yang berisi 225 ml larutan pengencer hingga diperoleh pengenceran 1:10. Ambil sampel segar sebanyak 2 S g sampel. dipindahkan secara aseptik ke wadah blender.steril setelah dipanaskan sampai 40-.
Timbang 25 g sampel ke dalam mixer dan tambahkan 225 gram larutan pengencer - Homogenkan, kemudian lanjutkan dengan pengenceran seperlunya (seperti pada gambar) Untuk contoh es krim, timbang 25 g sampel dan segera tambahkan menjadi 225 ml larutan pengencer. Pipet 10 ml tiap pengenceran (Cambar ,^) ke dalam wadah pelet sl.eril tunggal dan ganda. Ke dalam setiap tabung reaksi, ambil 12 lb ml pCA medium yang telah dicairkan, dengan suhu 4b t 1og 64"rr., waktu lb menit dari.
Jika salah satu dari dua cawan Petri mempunyai jumlah koloni kurang dari 25 atau lebih besar dari 250, hitung jumlah rata-rata koloni, kalikan dengan tingkat deteksi, dan nyatakan hasilnya sebagai jumlah baklFri per milililit€I atau glam . Pindahkan total 1 pelet dari setiap tabung gas dalam media LST ke tabung berisi 10 ml Triniott Creen LLC'.
Prinsip
PrinsiP
Van biaka.n rrLutni ttut ettt agar mengumpulkan 1 sengi Prinsip P*alatan BSA: Koloni berwarna coklat, abu-abu hingga hitam dan kadang-kadang berkilau metalik, media di sekitar koloni awalnya berwarna coklat kemudian berubah menjadi hitam seiring bertambahnya masa inkubasi. Koloni yang diduga Salmonella dipindahkan ke bedengan benih TSIA yang miring dengan cara menggores bagian yang miring dan menusuk bagian yang tegak. Munculnya warna merah jambu hingga gelap menandakan reaksi positif jika tidak berkembang menjadi reaksi negatif. Terbentuknya warna gelang merah menunjukkan reaksi positif dan bila tidak berubah atau warnanya kuning kecoklatan maka terjadi reaksi negatif. Jika tidak terjadi koagulasi, lanjutkan inkubasi pada suhu kamar selama 24 jam dan amati kembali ada tidaknya koagulasi. Pipet 1 ml masing-masing pengenceran ke dalam 3 tabung reaksi (3 seri) yang berisi kedelai Typticase yang mengandung NaCl 10%. Pindahkan setidaknya 1 koloni dari masing-masing cawan ke tempat tidur benih infus timbal otak dan kemudian lakukan tes konfirmasi. ENTEROCOCCT 1. Prinsip Reagen pewarnaan Gram. ?,4. Cara kerja . A. l, melakukan persiapan dan b. Bunyi bip€t masing-masing 1,0 ml. duPIo. homogenisasi sampel seperti dengan pengenceran A.q sampel dalam cawan petri. Pilih cawan Petri yang berisi 25.250 koloni berwarna hitam dan hitung jumlah koloni Crorriridid per gram sampel. Periksa setiap benih yang diberi pewarna Ciam seperti pada 3 1'4'f' dan amati adanya bakteri berbentuk batang tebal berlapis kasar dan bersifat Gram positif (berwarna ungu). D. Nokulasi setiap benih. .ada [ abung-tabuhg yanE betisi Motility Nilrcle lt|edhun, Sporolalion brcth'dan Cookcit llleat ncdit fl dan inkul;a' sikan pada 3611oc selama 24 jam. Periksa jenis pertumbuhan bakteri pada media bergerak |/Clastridiu'tt pcr' ftirryets tidak bergerak/tidak bergerak) dan kurangi nitrat dengan menambahkannya. Hitung jumlah Clostridi (m per genus setelah uji konfirmasi berdasarkan persentase 0%) koloni yang benar. Jumlah koloni tang berwarna hitam pada pengenceran 10-4 adalah 85, dan 8 dari 10 koloni yang diuji benar-benar Ctostrittiuttt pertri'8exs l\4aka sum-. Di atas Gelatin Aga-t, koloninya transparan, dan "zona keruh di sekitarnya" lebih terlihat setelah beberapa menit disimpan di lemari es. Bagian tengah tas berwarna terang atau merah dan sedikit lilin, tidak berwarna. Inokulasikan kultur dari Nutrient Agar yang berumur 24 jam ke dalam Peptone $*ar Nth, (glukosa, sukrosa, arabinosa, mannose, mannitol dan inositol) Inokulasikan kultur dari nutrisi agar yang berumur 24 tahun ke dalam 3 media asli, amino dan contol. Pilih koloni besar dari. kultur agar atau pertumbuhan pada agar. miringkan, emulsi dengan 1 tetes suspensi Abdcsoxycholote 0 5% pada kaca objek. Inkubasi pada suhu 36°C selama 24 jam. ada pertumbuhan di sekitar disk, sementara yihtio citolcrde Lidak. Suntik bialan dari Hea lnfus.'I l_rrorl, umur 4 jam dt lebih.. lnueller llinron,4aln. Pindahkan jahitan 'phaee IV berikutnya pada permukaan agar yang telah diinokulasi dengan kultur. Inkubasi pada suhu 36°C selama 15-24 jam. Inokulasi kultur dari llea lnf|siott rrorl, berumur 4 jam atau lebih.. lhte et ltinton Agar, biarkan kering. Biotipe El Tor tahan terhadap pol'rynyxyn B.. Inokulasi kultur dari Nutrient Agar dimiringkan selama 24 jam dalam data yang diisi tube_g. Inkubasi pada suhu 2211oC selama 48 jam. pindah 1 mt. biakan dalam tabung reaksi, tambahkan 0,6 ml. Tempatkan sediaan suspensi 2,b% sel darah merah ayam yang telah dicuci dalam larutan garam pada gelas dan mulsa koloni NutrienL Agar secara miring. Dengan menggunakan pensil kaca, tandai dua area kira-kira 1x2 cm di atas kaca yang telah disiapkan dan letakkan sedikit suspensi di atas dua area yang ditandai. Pertumbuhan kapang dan khamir pada media yang sesuai, setelah diinkubasi pada suhu 25oC atau suhu ruangan selama 5 hari. PDA (Potato Dextrose Agar) atau biji lainnya (l\4ycoph, lratt. Agar) ditambah antibiotik chlortetracycline atau chloramphenicol atau stipetomycin (250 ml biji ditambah 1 ml larutan 1 glam antibiotik dalam 100 ml sulingan steril air) . Tuang 15-20 ml lelehan PDA atau biji lainnya (suhu 45-1oC) ke dalam cawan Petri dan kocok cawan Petri hingga merata. sedemikian rupa sehingga campurannya merata. D. Setelah agar-agar tercampur, balikkan cawan Petri dan inkubasi pada suhu 25oC atau suhu kamar selama 5 hari. e. PENGENCER. PERBENIHAN (MEDIA) DAN PEREAKSI Masukkan jumlah tertentu ke dalam botol atau tabung reaksi untuk mengatur isi sterilisasi menjadi kira-kira. 2% dari jumlah yang dibutuhkan (diinginkan). Tambahkan Aseptic Solution A ke dalam Nutrient Agar Paint dan kukus selama 30 menit. Masukkan ke dalam labu, tutup dengan kapas, lalu sterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC selama 5 menit, dinginkan hingga suhu 45 50oC lalu tuangkan ke dalam cawan petri dengan pH akhir 6,9r1. Tambahkan air suling ke dalam 1 liter, kemudian tambahkan 10 ml ke dalam tabung kimia yang berisi tabung Durham terbalik. Larutkan bahan dalam 1 liter air Euling, panaskan hingga larut sempurna, masukkan 5 ml ke dalam tabung benih dan sterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC selama 15 menit. Sesuaikan pH menjadi ?.2, masukkan 10 ml ke dalam tabung atau Sterilkan dengan tutup ulir pada suhu 121oC selama 15 menit. Tuang 3-4 ml tiap porsi ke dalam tabung kecil, lalu sterilkan pada suhu 121oC selama 10 menit. Tuang masing-masing 5ml ke dalam tabung kecil dan sterilkan pada suhu 121oC selama 15 menit. Larutkan bahan dalam air suling dan masukkan masing-masing 10 ml ke dalam tabung Durham terbalik. Tambahkan 1% gula yang diperlukan untuk bahan dasar - Larutkan dan tuangkan ke dalam tabung berisi Duiham terbalik. Masukkan bahan ke dalam 1 liter air, panaskan hingga mendidih sambil diaduk hingga larut. Dinginkan pada suhu ruangan 45' 5ooc setiap 15--20 ml dalam cawan Petri Masukkan bahan ke dalam air suling, aduk dan diamkan selama 2 jam hingga yodium larut. American Public Healti Associatt1 : ':*TdqYT:ds for the Exanlination4 SALMONELLA
STAPHYLOCOCCUS AUREUS
CLOSTRIDIUM PERFRINGENS
VIBRIO CHOLERAE
PUSTAKA