یکششپهایگ شناد نازیا
٠سٚد 50 ٠سبٕؿ ، 2 ، ٖبتؼٔص ٚ ض٥٤بپ 1398
ف(
175 - 159 Vol 50, No 2, Autumn & Winter 2019-2020 (159-175) )
DOI:10.22059/ijpps.2019.275550.1006885
* Corresponding author E-mail:[email protected]
،یفرعم یسررب مسیناکم یاه لمع و فیصوت یمونژ یرتکاب کیتویبورپ یهایگ
Bacillus velezensis
اینوس
1یفیس
، ناویک یدوبهب
2
، *
حور للها یفیرش و3
زمیج گیلپش
4
1
ٍ 2 . یَجطًاد یزتکد
ٍ
،رایطًاد
ٍُزگ
،یکضشپّایگ سیدزپ
یسرٍاطک
ٍ عباٌه یعیبط
ُاگطًاد
،ىازْت جزک
3 .
،رایداتسا
ٍُزگ
،یکضشپّایگ
ُذکطًاد
،یسرٍاطک
ُاگطًاد
،یسار
ُاطًاهزک
4 .
،رایطًاد
ٍُزگ
،یصَلَیبٍزکیه
ُاگطًاد
،لًزک تلایا کرَیَیً
خیرات(
:تفایرد 27 / 11 / 1397 - خیرات :شزیذپ 25 / 3 / 1398 )
هدیکچ
یزتکاب Bacillus velezensis یکی
سا لهاَع کیتَیبٍزپ یّایگ
یه ذضاب
ِک
ًازیخا
ِب ىاٌَع کی ی سا راشبا یاّ
یَق لزتٌکَیب درَه
ِجَت
رازق
ِتفزگ تسا . فذّ
سا يیا صٍّضپ یفزعه
ٍ یسرزب یخزب سا تایصَصخ یزتکاب
B. velezensis یه
ذضاب
ِک سا زفسٍشیر
ِجَگ یگًزف ىاتسزْض
ُاطًاهزک یساساذج ذض . رد يیا صٍّضپ یزتکاب B. velezensis
ِب بیتزت بجَه صیاشفا 86 / 78
، 87 / 56
ٍ 83 / 45
یذصرد لَط
،ُراسخاض لَط
ِطیر
ٍ ىسٍ
کطخ
ُایگ
ِجَگ یگًزف رد
ًِاخلگ
ٍ ذصرد
ًِاَج یًس
ٍ صخاض
ِیٌب رذب رد طیازض
یّاگطیاهسآ .ذیدزگ
ٍُلاع زب
،يیا یخزب سا تایصَصخ یکیتَیبٍزپ
يیا
ِیاذج سا
ِلوج ذیلَت
،رَفرٍذیس ذیًایس
ىصٍرذیّ
ٍ ا لٍذً
کیتسا ذیسا رد
ُاگطیاهسآ درَه
یبایسرا رازق ذٌتفزگ . زثا یگذًرادساب يیا
ِیَس یٍر چراق Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici
ِب شٍر تطک لباقته
ٍ تابیکزت راّزف یچراقذض
ِب بیتزت
ِب اشیه ى 83
ٍ 58 ذصرد .دَب رد یسرزب یاّ
ًِاخلگ یا شیً
ثعاب صّاک سٍزب
5 / 87 یذصرد نئلاع یراویب ذیدزگ . رد تیاًْ
مًَص لهاک یزتکاب اب
ُدافتسا سا یصَلٌَکت اٌیهَلیا
يییعت یلاَت .ذیدزگ سپس رد
ُاگیاپ
ىاکهRAST یاّ
یهًَص
ٍ یلاَت یاّ
ىادزگشهر صخطه ذیدزگ
ُ
ٍ رد
ُاگیاپ ابNCBI یلاَت یاّ
دَجَه
ِسیاقه .ذض جیاتً
ىاطً
داد
ِک
يیا
ِیاذج اب لاوتحا 100 ذصرد قلعته
ِب B. velezensisًَِگ .تسا
ُساذًا مًَص يیا
ِیاذج 4132868 تفج
ساب
ٍ لهاض 4329 یلاَت
ىادزگشهر یه ذضاب . ای ي قحت ی ق تابثا ی زب فزعه ی
ًَِگ B. velezensis
ِب ىاٌَع زتکاب ی بٍزپ ی تَ
ی ک گ ی
ّا ی .تسا
هژاو یاه یدیلک : یگدزهضپ یهَیراسَف
ِجَگ یگًزف
، لزتٌک
،کیصَلَیب Bacillus velezensis
.
Introduction, mechanisms of action and genomic description in plant probiotic bacterium Bacillus velezensis
Sonia Seifi1, Keivan Behboudi1*, Rouhallah Sharifi2 and James. P. Shapleigh3
1, 2. Ph. D. Candidate and Associate Professor, Department of Plant Protection, College of Agirculture & Natural Resources, University of Tehran, Karaj, Iran
3. Assistant Professor, Faculty of Agriculture, Razi University, Kermanshah, Iran 4. Associate Professor, Department of Microbiology, Cornell University, Ithaca, New York, USA
(Received: Feb. 16, 2019 - Accepted: Jun. 15, 2019)
ABSTRACT
Bacillus velezensis is one of the plant probiotic bacteria that has been recently considered as one of the most powerful biocontrol agents. The purpose of this study is to introduce and investigate some of the characteristics of B. velezensis bacterium, which has been isolated from tomato rhizosphere in Kermanshah Province. In this study, B. velezensis increased shoot length, root length and dry weight of tomato plants by 78.86%, 56.68%, and 45.83%, respectively in comparison to uninoculated control; it also promoted seed germination percentage and seed vigor index under in vitro condition.
Furthermore, some of the biocontrol properties of this strain such as the production of siderophore, HCN, and indole-3- acetic acid and solubilization of phosphate were evaluated. Biocontrol bioassay of this strain against Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici under in vitro condition revealed that this strain can inhibit the mycelial growth in both dual culture and volatile compounds methods about 83% and 58%, respectively. The pot experiment results showed that B. velezensis caused a reduction in disease symptoms up to 87%. Finally, the whole genome sequence of this strain was identified using Illumina HiSeq2500 technology. Then genomic locations and coding sequences were identified in RAST database. In addition, the sequencing data were compared with existing sequences in the NCBI database. Results showed that this isolate has high similarity to (%100) B. velezensis. The genome of this isolate contains 4132868bp and 4329 CDs. The results suggest that B.
velezensis has a good potential to be introduced as a plant probiotic bacterium.
Keywords: Biological control, Bacillus velezensis, Tomato fusarium wilt disease.
همدقم
٣٘اشٍ٘
٢بٞ
تؼ٤ص ٣غ٥طٔ
، ٢ازغ
ِٓبػ
ٚ تٔٚبمٔ
ٝث
ْٕٛػ ٣٤ب٥ٕ٥ؿ
ٝخٛت
ٝقٔبخ ٣ّٕف اس
ٝث ؽٚس ٢بٞ
ساذتػٚد ظ٥طٔ
تؼ٤ص صا
ّٕٝخ
ٜدبفتػا صا
ُٔاٛف
ٛ٥ث
َشتٙو فٛغقٔ
ٜدشو .تػا سد
َبػ ٢بٞ
ش٥خا ثطث
ٖبىٔا
َشتٙو ه٤طِٛٛ٥ث
ُٔاٛف ٢اض٤سبٕ٥ث ٣ٞب٥ٌ
بث
ٜدبفتػا صا
٢بٞشتوبثٚض٤س ه٤شطت
ٜذٙٙو ذؿس
ٜب٥ٌ
( )PGPR
ٚ ش٥ثأت تا فٔ
٥ ذ بٟ٘آ شث ذؿس
ٌ ٥
،ٖبٞب سب٥ؼث
دسٛٔ
ٝخٛت ـٔاٛخ ٢شـث ساشل
ٝتفشٌ
.تػا
ٗ٤ا
٢شتوبثٚض٤س بٞ
ش٥ثأت دٛخ اس شث ذؿس
ٜب٥ٌ
ٝث تسٛك
ٓ٥متؼٔ
صا شع ٤ ك ذ٥ِٛت
ٖٛٔسٛٞٛت٥ف
،بٞ
ؾ٤اضفا
ت٥ِلاض شكبٙف
،٣٤ازغ ت٥جثت تصا
ٚ
ٝث تسٛك
ٓ٥متؼٔش٥غ صا
ك٤شع سبٟٔ
ٚ ب٤ ؾٞبو شثا
ُٔاٛف
٢سبٕ٥ث اص بث
ٜدبفتػا صا
ٓؼ٥٘بىٔ
٣٤بٞ
ذٙ٘بٔ
تثبلس شث
شػ ازغ
ٚ
ٖبىٔ
بث شٌسبٕ٥ث
، ٢بمِا تٔٚبمٔ
ه٥ٕتؼ٥ػ
سد
ٜب٥ٌ
ٚ ؾ٤اضفا صغػ
ُٕطت
ٜب٥ٌ
ٝث ؾٙت ٢بٞ
ش٥غ
٣تؼ٤ص ا
َبٕف ٣ٔ
ذٙٙو (
Borriss et al., 2011; Cai et
al., 2013
.) سد
ٗ٥ث
ٗ٤ا ٢شتوبثٚض٤س
،بٞ
ٌٝ٘ٛ
٢بٞ
ش٥غ
سبٕ٥ث ٢ ٢اص عّٛ٥ػبث
ٝث
ٖاٛٙف ه٤ ساضثا ٢ٛل
َشتٙوٛ٥ث
دسٛٔ
ٝخٛت ساشل
ٝتفشٌ
.تػا شثوا
ٌٝ٘ٛ
٢بٞ
غٙخ
عّٛ٥ػبث ث
ٝ ػبطِ
ذ٥ِٛت ت٥ِٛثبتٔ
٢بٞ
٣ِشتٙوٛ٥ث ذٙ٘بٔ
ذ٥تپپٛپ٥ِ
٢بٞ
،٢ٛمّض ؿاٛ٘ا
٣ت٘لا ه٥تٛ٥ث
ٚ 1
٣ت٘آ ه٥تٛ٥ث بٞ
ٚ
ٗ٥ٙسٕٞ
ؾ٤اضفا ذؿس
ٖبٞب٥ٌ
سد
ظ٤اشؿ
ٝ٘بخٌّ
ٚ
ٝفسضٔ
سد
ٜبٍ٤بخ ٣ثّٛغٔ
ساشل ذ٘ساد
(
Liu et al., 2013; Cai et al., 2016
)
ٜٚلاف شث
ٗ٤ا
ت٥ّثبل ذ٥ِٛت سٛپػٚذ٘ا
، تٔٚبمٔ
ٝث ؾٙت ٢بٞ
٣غ٥طٔ
ٚ
٢سبٌصبػ بٟ٘آ
بث ظ٥طٔ
ٗ٤ا غٙخ اس
ٝث
ٖاٛٙف ه٤
٢شتوبث ه٥تٛ٥ثٚشپ ٣ٞب٥ٌ
بث ت٥ّثبل ٢سبدت ٢صبػ
٣فشقٔ
ٜدشو ا تػ (
Borriss et al., 2011; Yang et
al., 2014
.) ؿٛٙت دب٤ص
ٗ٥ث
ٌٝ٘ٛ
٢بٞ
غٙخ عّٛ٥ػبث
ثفبث
ٜذؿ
ٝو تٚبفت بٞ
٢ ٢دب٤ص سد دبد٤ا تبفك
فّتخٔ
سد ٢سب٥ؼث صا
ٌٝ٘ٛ
٢بٞ
ٗ٤ا غٙخ
ٜذٞبـٔ
.ددشٌ
٣تض ٣خشث صا
ٌٝ٘ٛ
بٞ
٢اساد تبلخـٔ
٣پ٥تٛٙف
ٚ ٣ى٤طِٛٛ٤ض٥ف
ٝثبـٔ
بث
ٓٞ
ٜدٛث
ٚ تٟخ ه٥ىفت بٟ٘آ
٣ٕ٘
ٖاٛت
ًبفشك
ٝث ت٥تشت ٣ِاٛت
16S rRNA
بفتوا .دشو
ٕ٘ٛ٘
ٝ صسبث
ٖآ سد
ٌٝ٘ٛ
٢بٞ
B. amyloliquifaciens
،
1. Lantibiotic
B. oryzicola
،
B. siamensis
،
B. methylotrophicus
ٚ
B. vanillea
ٜذ٤د
ٜذؿ تػا
ٝو ظػٛت
Wang et al.
( ) 2007
ٝث
ٖاٛٙف
Bacillus velezensis
دبٟٙـ٥پ ذ٤دشٌ
ٜ
تػا . ٢شتوبث
B. velezensis
ٌٝ٘ٛ
٢ا ش٥غ ٢سبٕ٥ث
،اص
ْشٌ
،تجثٔ
ّٝ٥ٔ
٢ا
ُىؿ
ٚ ٣ى٤ صا ه٥تٛ٥ثٚشپ ٢بٞ
٣ٞب٥ٌ
بث
ُ٥ؼ٘بتپ
َشتٙوٛ٥ث لابث
تػا (
Dunlap et al., 2016
.)
ٗ٤ا ٢شتوبث كّقتٔ
ٝث
Terrabacteria
،
ٝتػاس
Bacillales
،
ٜداٛ٘بخ
Bacillaceae
ٚ كّقتٔ
ٝث
ٜٚشٌ
Bacillus amyloliquefaciens
٣ٔ
ذؿبث (
Wang et al.,
.)2007
صا تب٥كٛلخ صسبث
ٗ٤ا
ٌٝ٘ٛ
٣ٔ
ٖاٛت
ٝث ذ٥ِٛت
٢بٞذ٥تپپٛپ٥ِ
٣فٛٙتٔ
ٖٛسٕٞ
،ٗ٥تىفسٛػ
ٗ٥ٙس٥ِ
،
ٗ٤سٛت٤ا بٞ
فٛلخث
ٗ٤سٛت٤ا
ٚ A
؛E
،ٗ٥ؼ٤بّٔٛ٥ػبث
ٗ٥ّ٥تثٛػٛى٤بٔ
،
،ٗ٥ؼ٤بدٙف
ٗ٥تبتػبپ٥ّپ
، ٣ّپ بٞذ٥تو
ذٙ٘بٔ
،ٗ٥تولاٚشوبٔ
،ٗ٥ئلا٥ػبث
ٗ٤ذ٥ؼ٥ف٤د (
Liu et
al., 2017
)
ٗ٥ػٛ٤شتوبث ٣٤بٞ
ذٙ٘بٔ
ٗ٤ض٥ِّٛ٥ٔآ
ٚ
ٗ٥ّى٤بػّٛ٥ٔآ (
Palazzini et al., 2016
)
ٚ ش٤بػ
ت٥ِٛثبتٔ
٣٤بٞ
ذٙ٘بٔ
٣ت٘لا ذ٥تپپ بٞ
ٚ
ٗپشت بٞ
ٜسبؿا دٕٛ٘
ٝو سد ٢سب٥ؼث صا تبقِبغٔ
شثا ٣ٌذٙٙوسبٟٔ
بٟ٘آ ٢ٚس
شٌسبٕ٥ث ٢بٞ
٣ٞب٥ٌ
تبجثا
ٜذؿ .تػا صا
ٗ٥ث
ٝ٤اذخ ٢بٞ
٢شتوبث
B. velezensis
بٟٙت 47
ٝ٤ٛػ
ٝث سٛع
ُٔبو
ت٥تشت ٣ِاٛت
ٜذ٤دشٌ
تػا
ٝو سد
ٗ٤ا
ٗ٥ث بٟٙت 20
ٝ٤ٛػ
ٝث سٛع
ُٔبو ؾ٤ادشٌ
ٜذؿ 2
.ذ٘ا كجع تبم٥مطت
ْبد٘ا
ٝتفشٌ
،
ٌٝ٘ٛ
B. velezensis
ُ٥ؼ٘بتپ ٣٤لابث سد
َشتٙو سبٕ٥ث
شٌ
٢بٞ
Rhizoctonia solani
،
Glomerella glycines
،
Blumerella graminis
،
Alternaria alternata
،
Fusarium oxysporum f.sp.
graminis
ٚ
Gaeumannomyces graminis
ٝتؿاد
تػا (
Cai et al., 2013; Yang et al., 2014
.)
ٜٚلاف شث ذ٥ِٛت ت٥ِٛثبتٔ
٢بٞ
ؿٛٙتٔ
ٝ٤ٛ٘بث بث
ِبقف ت٥ ٢بٞ
ذض ٣ثٚشى٥ٔ
ٚ ذض
،٣٤ب٤شتوبث ٣خشث
صا
ٝ٤ٛػ ٢بٞ
B. velezensis
٣٤ب٘اٛت
ٖٛ٥ػاض٥ّٙو
ٝـ٤س
ٜب٥ٌ
ٖبثض٥ٔ
اس .ذ٘ساد ٣٤ب٘اٛت
ٖٛ٥ػاض٥ّٙو
ٚ
ُ٥ىـت
ّٓ٥فٛ٥ث ٢ٚس ـ٤س
ٝ
ٜب٥ٌ
ٚ ساشمتػا تػبٙٔ
٢شتوبث ٣ى٤
صا
ٟٓٔ
شت
ٗ٤ قخبؿ ٢بٞ
ت٥ِبقف ٣ِشتٙوٛ٥ث
ه٥تٛ٥ثٚشپ ٢بٞ
٣ٞب٥ٌ
٣ٔ
ذؿبث (
Zhang et al., 2007
).
صا ٢ب٤اضٔ
ُ٥ىـت
ّٓ٥فٛ٥ث
ُ٥ؼ٘بتپ
ٖٛ٥ػاض٥ّٙو
2. Assamble
٣ىؿضپٞب٥ٌ ؾ٘اد
ٖاش٤ا سٚد ، ٠ 50 سبٕؿ ، ٠ 2 ، ٚ ض٥٤بپ ٖبتؼٔص 1398 161
تفبث ٢بٞ
٣ّخاد
ٝـ٤س
ٚ
ٗ٥ٙسٕٞ
ٖب٥ث
ٖط بٞ
٢
ٗ٤سٛت٤ا صبتتٙػA
سد
ٗ٥ث
ْاذ٘ا ٢بٞ
٣ٞب٥ٌ
٣ٔ
ذؿبث
ٝو
ظػٛت
Cai et al.
(2016)
بث
ٜدبفتػا صا
ٖط ؽساضٌ
شٌ
دسٛٔ GFP
٣ػسشث ساشل تفشٌ
. ح٤بت٘
ٖبـ٘
داد
ٝو
٢شتوبث ت٥فٚذ٘ا
B. velezensis
ٜٚلاف شث شٛغػ
٣خسبخ
ٝـ٤س
، ٣٤ب٘اٛت
ٜض٥ّٙو
ٖدشو تفبث ٢بٞ
،غىتسٛو
٢بٞذ٘ٚآ ٣ثٛز
ٚ
ٝ٘اٛتػا ٢ضوشٔ
ٝـ٤س اس ض٥٘
دساد
(
Kang et al., 2018
) صا .
فشع
،شٍ٤د سد
َبػ 2016
٢شتوبث
B. velezensis
ٝث
ٖاٛٙف ؾىزسبل ه٤طِٛٛ٥ث
ٚ
٣ى٤ صا
ٗ٤شتٟث
ٖبٌذٙٙوسبٟٔ
٣ّٔاٛف سبٕ٥ث ٢ ٢اص
٣زسبل ساذتػٚد ظ٥طٔ
تؼ٤ص ظػٛت تساصٚ
٢صسٚبـو
٢سٟٕٛخ كّخ
ٗ٥ز ٣فشقٔ
ذ٤دشٌ
(
Pan, 2017
) .
فذٞ
صا
ٗ٤ا ؾٞٚظپ ٢صبػاذخ
ٚ ٣فشقٔ
ٌٝ٘ٛ
JPS19 B. velezensis
ٝث
ٖاٛٙف ه٤ ٢شتوبث ه٥تٛ٥ثٚشپ
٣ٞب٥ٌ
ٚ ٣ػسشث
ُ٥ؼ٘بتپ ٢بٞ
٣ِشتٙوٛ٥ث
ٚ ؾ٤اضفا
٣ٌذٙٞد ٢ذؿس
ٖآ سد صغػ
ْٛ٘ط
ٚ دشثسبو
ٗ٤ا
ٝ٤اذخ
٣ٔٛث سد
ٝ٘بخٌّ
بٞ
ٚ ؿساضٔ
ٝث
ٖاٛٙف ه٤
ُٔبف
ه٥تٛ٥ثٚشپ ٣ٞب٥ٌ
كّفٛٔ
ٚ ؾم٘
ٖآ سد
ٝقػٛت
٢صسٚبـو ه٥٘بٌسا
٣ٔسٛـو .ذؿبث
داوم و شور اه
ٝث سٛؾٙٔ
٢صبػاذخ شتوبث
٢ ، شث عبػا
َذٔ
ٝ٥كٛت
ٜذؿ
ظػٛت
Baker & Cook
( )1974
100
ْشٌ
صا
ٝـ٤س
ٚ
نبخ فاشعا ـ٤س
ٝ
ٝتٛث ٣٤بٞ
ٝو ٢اساد ذؿس ٢شتـ٥ث
ٜدٛث
ٚ سد تسٛك سٛضض ٢سبٕ٥ث سد
،ٝفسضٔ
٣ٌدِٛآ
شتٕو ب٤ ذلبف ٣ٌدِٛآ
،ذ٘دٛث صا
ٝمغٙٔ
شفػٚض٤س
ٖبٞب٥ٌ
ٝخٌٛ
٣ٍ٘شف
ٖبتػا
ٜبـ٘بٔشو بث
تبلتخٔ
٣٤ب٥فاشغخ
41ﹶ 33˚ ﹶ بت
˚17 35 مشف
ِبٕؿ ٣ ﹶ ٚ
˚24 45 بت
06ﹶ 48˚
َٛع لشؿ ٣ ـٕخ ٢سٚآ
ٚ
ٝث
ٜبٍـ٤بٔصآ
ُمتٙٔ
.ذ٤دشٌ
غپػ
ٕٝ٘ٛ٘
بٞ
٢ نبخ ـٕخ ٢سٚآ
ٜذؿ صا شٞ
ٝمغٙٔ
اس بث شٍ٤ذى٤ طّٛخٔ
ٚ صا شٞ
ٕٝ٘ٛ٘
نبخ ه٤
ْشٌ
ٝتؿادشث .ذؿ
ٕٝ٘ٛ٘
نبخ سد 10 ٣ّ٥ٔ
شت٥ِ
ةآ
شغمٔ
ٖٚشتػ طّٛخٔ
ٚ صا
ٖآ تلس بٞ
٢ فّتخٔ
٣ِب٤شػ
ٝ٥ٟت .ذ٤دشٌ
ذلى٤ شت٥ِٚشى٥ٔ
صا تلس ٢بٞ
حٙپ
ٚ ؾؿ
ٝ٥ٟت
ٚ بث
ٜدبفتػا صا تپ٥پٚشى٥ٔ
٢بٞ
ٖٚشتػ شث ٢ٚس
ظ٥طٔ
تـو سبٌآ
1٢زغٔ
ُمتٙٔ
ٚ تـو
ٜداد .ذؿ
1. NA
ٌبت٤بٟ٘
هتـت ٢بٞ
تـو
ٜداد
ٜذؿ سد ٢بٔد 28
ٝخسد
عٛ٥ؼّػ
ٝث تذٔ
48 تفبػ ٢ساذٍٟ٘
.ذ٘ذؿ
٣ّٙو ٣٤بٞ
ٝو صا شؾ٘
ُىؿ
ٚ
ً٘س سد ظ٥طٔ
سبٌآ
٢زغٔ
تٚبفتٔ
ذ٘دٛث ةبخت٘ا
ٜذؿ
ٚ غپ صا
قِبخ ٢صبػ سد
ِِٝٛ
٢بٞ
ؾ٤بٔصآ ٢ٚبض سبٌآ ٢زغٔ
سد
٢بٔد سبٟز
ٝخسد عٛ٥ؼّػ ٢ساذٍٟ٘
.ذ٘ذ٤دشٌ
سرزب ی ییاناوت نوگاتنآ ی تس ی هیوس یزتکاب رد زبازب
Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici رد
ازش ی ط امسآ ی هاگش
تشک لباقتم
سد ا ٤
ٗ بٔصآ ٤ ؾ
ٝ٤ٛػ شتوبث ٢
ٝث تسٛك
ٝىِ
ا ٢
ٝث
ُكاٛف
ٚبؼٔ
٢ صا ضوشٔ
هتـت شتپ ٢
ٚ
ٝث
ّٝكبف ٤ ه
٣ت٘بػ شتٔ
صا ؿبض ٥
ٝ بٟ٘آ صا سبٟز فشع هتـت شتپ ٢
ٚبض ٢ طٔ
٥ ظ تـو بٔPDA
٤
ٝ
٘ص ٣ .ذ٘ذؿ غپػ ه٤
فشل
ٝث شغل حٙپ ٣ّ٥ٔ
شتٔ
صا ؿبض ٥
ٝ تـو حٙپ
ٜصٚس
ٝ٤اذخ دساذ٘بتػا 004
( ) FOL Fusarium oxysporum
f. sp. lycopersici
ٝث سٛع
ٝ٘بٌاذخ سد ضوشٔ
هتـت
تـو
ٜداد ذؿ
ٚ غپ صا ٢ساذٍٟ٘
هتـت بٞ
٢ شتپ ٢ سد
بٔد ٢ 27
ٝخسد ؼّػ ٥
،عٛ
ُجل صا ػس ٥
ٖذ
ٔ ٥
ّؼ ٥
ْٛ
ذسبل
ٝث
ٝجِ
هتـت شتپ ٢ ذٞبؿ
ّٝكبف
ّٙو ٣ شتوبث ٢ بت
ٝ٥ؿبض
ٌٝٙشپ ذسبل
ٜصاذ٘ا
ٌ ٥ ش ٢ ذؿ (
Hagedorn et al.,
.)1989
سد هتـت ٢شتپ ذٞبؿ
ٝث ٢بخ ٢شتوبث صا ةآ
شغمٔ
ٖٚشتػ
ٜدبفتػا .ذ٤دشٌ
زثا کزت ی تاب راّزف ذض چراق ی
٣ػسشث ش٥ثأت تبج٥وشت ساّشف
ذض ٣زسبل ٢شتوبث سد
٢ش٥ٌّٛخ صا
ذؿس
F. oxysporum f. sp. lycopersici
عبػاشث ؽٚس
Fiddaman & Rossall
( )1993
ْبد٘ا
.ذ٤دشٌ
سد اذتثا ٣٘ٛ٥ؼ٘بپػٛػ
ٝث تؾّغ
CFU/ml
109
× 1 صا تـو
ٜصبت
ٝ٤ٛػ ٢شتوبث
ٝ٥ٟت
ٚ
ٖاض٥ٔ
200
شت٥ِٚشى٥ٔ
صا
ٖٛ٥ؼ٘بپػٛػ ٢ٚس
ظ٥طٔ
تـو سبٌآ
٢زغٔ
تـو
ٜداد .ذؿ غپ صا ٢ساذٍٟ٘
هتـت بٞ
ٝث تذٔ
24 تفبػ سد ٢بٔد 28
ٝخسد
،عٛ٥ؼّػ
٣كشل
ٝث شغل حٙپ ٣ّ٥ٔ
شتٔ
صا ؿبض ٥
ٝ تـو سبٟز
ٜصٚس
ذسبل شٌسبٕ٥ث سد ضوشٔ
هتـت ٢ٚبض ظ٥طٔ
تـو
ساشل PDA
ٜداد .ذؿ بث ت٤بفس ظ٤اشؿ
ٖٚشتػ
هتـت بٞ
٢ ٢ٚبض ذسبل شٌسبٕ٥ث
ٝث تسٛك
ٝ٘ٚساٚ
٢ٚس
هتـت ٢ٚبض ٢شتوبث ساشل
ٜداد ذؿ
ٚ
ّٝكبف جِ
ٝ
هتـت بٞ
ظػٛت
ّٓ٥فاسبپ
ًلأبو دٚذؼٔ
.ذ٤دشٌ
هتـت بٞ
٢ ٢شتپ
ٝث تذٔ
ٝػ صٚس سد ٢بٔد 28
ٝخسد
عٛ٥ؼّػ ٢ساذٍٟ٘
ذ٘ذؿ
ٚ غپػ ذكسد ٣ٌذ٘سادصبث صا
ذؿس
ْٛ٥ّؼ٥ٔ
بث
ٜصاذ٘ا ش٥ٌ
٢ شغل
ٌٝٙشپ ذسبل
ٜصاذ٘ا ٢ش٥ٌ
.ذؿ
ذیلوت تیلوباتم یاه یبوزکیم
ٝث سٛؾٙٔ
٣ػسشث ذ٥ِٛت
،سٛفٚسذ٥ػ صا
ٖٛٔصآ
CAS-AD
ٜدبفتػا ذؿ (
Sharifi et al., 2017
.)
ٗ٤ا
ٖٛٔصآ ٢اساد
ٚد
َّٛطٔ
فشقٔ
Fe-CAS
ٚ
َّٛطٔ
شفبث ٣ٔ
ذؿبث
ٝو
ٝث تسٛك
ٝ٘بٌاذخ
ٝ٥ٟت .ذ٤دشٌ
لولحم فّزعم Fe-CAS
ٗ٤ا
َّٛطٔ
صا طلاتخا 10 ٣ّ٥ٔ
شت٥ِ
FeCl3-6H2
ه٤
٣ّ٥ٔ
سلاٛٔ
سد(
ه٤سذ٤شّوذ٥ػا 10
٣ّ٥ٔ
)سلاٛٔ
بث 50
٣ّ٥ٔ
شت٥ِ
َّٛطٔ
(CAS
21 / 1 ٣ّ٥ٔ
ْشٌ
سد )شت٥ِ
ٝ٥ٟت
.ذ٤دشٌ
َّٛطٔ
٣٘اٛغسا
ٜش٥ت
ّٝكبض
ٝث ٣ٔاسآ
ٖبىت
ٜداد
ٜذؿ
ٚ
ٝث 40 ٣ّ٥ٔ
شت٥ِ
َّٛطٔ
HDTMA
( 82 / 1
٣ّ٥ٔ
ْشٌ
سد )شت٥ِ
ٝفبضا .ذ٤دشٌ
سد ت٤بٟ٘
َّٛطٔ
ٝواس
ٝث
ً٘س ٣ثآ
ٜش٥ت
ُ٤ذجت
ٜذؿ دٛث
ٚلاوٛتا
ٜدشو
ٚ سد
٢بٔد ظ٥طٔ
بت 50
ٝخسد عٛ٥ؼّػ هٙخ
.ذؿ
لولحم زفاب
24 / 30
ْشٌ
شفبث
PIPES
سد 750 ٣ّ٥ٔ
شت٥ِ
َّٛطٔ
٣ىٕ٘
٢ٚبض 3 / 0
ْشٌ
KH2PO4
، 5 / 0
ْشٌ
ٚ NaCl
0 / 1
ْشٌ
NH4Cl
ٝ٥ٟت ذؿ
ٚ
ٖآPH
بث 50 KOH
ذكسد
ٝث 8 / 6
ٜذ٘بػس .ذؿ
ُجل صا
،ٚلاوٛتا
ٝث
َّٛطٔ
قٛف 15
ْشٌ
سبٌآ
ٝفبضا
ٚ بث
ٖدٚضفا ةآ شغمٔ
ٓدض
ٖآ
ٝث 800
٣ّ٥ٔ
شت٥ِ
.ذ٥ػس غپ صا
ٚلاوٛتا
ٖدشو ظ٥طٔ
بت ٢بٔد
50
ٝخسد عٛ٥ؼّػ دشػ
.ذؿ
ذقث صا
ٗتخ٤س ظ٥طٔ
ٖٚسد هتـت
،٢شتپ
هٞبز ٣٤بٞ
ٝث شغل حٙپ ٣ّ٥ٔ
شتٔ
سد هتـت ٢بٞ
٢شتپ
٢ٚبض
CAS-Agar
دبد٤ا .ذؿ ٢شتوبث بٞ
ٝث تذٔ
40
،تفبػ سد ٢بٔد 27
ٝخسد عٛ٥ؼّػ
ُخاد ظ٥طٔ
تـو تبٙ٥ؼوٛػ (
6
ْشٌ
شث شت٥ِ
K2HPO4
، 3
ْشٌ
شث
شت٥ِ
KH2PO4
، 2 / 0
ْشٌ
شث شت٥ِ
MgSO4 7H2O
، ه٤
ْشٌ
شث شت٥ِ
NH4SO4
ٚ 4
ْشٌ
شث شت٥ِ
ه٥ٙ٥ؼوٛػ ذ٥ػا
ٝو بث
ٜدبفتػا صا
KOH 50%
ٝث
،pH
7
ٜذ٘بػس ذؿ )
ذؿس
ٜداد ذ٘ذؿ . غپػ
ٖٛ٥ػبپػٛػ ٢شتوبث
ٝث تذٔ
10
ٝم٥لد بث تفشػ 10000 سٚد شث
ٝم٥لد طٛ٥ف٤شت٘بػ
ذ٤دشٌ
ٚ ـ٤بٔ
٣٤ٚس اذخ .ذؿ 35 شت٥ِٚشى٥ٔ
صا ـ٤بٔ
٣٤ٚس شٞ
ٝ٤ٛػ
ٖٚسد هٞبز بٞ
ٝتخ٤س ذؿ
ٚ ذقث صا
ةزخ
ٖآ
، ساذمٔ
٢ٚبؼٔ
شٍ٤د ٢ صا
ٖبٕٞ
ـ٤بٔ
٣٤ٚس
ٜسبثٚد
ٝث هٞبز بٞ
ٝفبضا .ذؿ هتـت ٢بٞ
٢شتپ
ٝث تذٔ
تـٞ
تفبػ سد ٢بٔد 27
ٝخسد عٛ٥ؼّػ ساشل
ذٙتفشٌ
ٚ شغل ١ِبٞ
٣د٘سب٘
فاشعا هٞبز بٞ
ٜصاذ٘ا ٢ش٥ٌ
ذؿ (
Sharifi et al., 2017
).
تٟخ
ٜصاذ٘ا ش٥ٌ
٢ ساذمٔ
ٖٛٔسٛٞ
َٚذ٘ا ه٥تػا
ذ٥ػا
ٜذؿذ٥ِٛت ظػٛت
،٢شتوبث صا
ؽٚس
٢شتٔٛتفٚشتىپػا
ٜدبفتػا .ذؿ سد
ٗ٤ا ؽٚس 100
شت٥ِٚشى٥ٔ
صا تـو
ٜصبت ٢شتوبث ذؿس
ٝتفب٤ سد ظ٥طٔ
ـ٤بٔ
سبٌآ ٢زغٔ
ٝث
ِٗسا ٢بٞ
100 ٣ّ٥ٔ
٢شت٥ِ
٢ٚبض
30 ٣ّ٥ٔ
شت٥ِ
ظ٥طٔ
تـو
ٜصبت سبٌآ ٢زغٔ
٢اساد 500
ْشٌٚشى٥ٔ
شث ٣ّ٥ٔ
شت٥ِ
ٖبفٛتپ٤شت
ُمتٙٔ
ٚ
ٝث تذٔ
48
تفبػ ٢ٚس شى٥ؿ بث تفشػ 120 سٚد
ٝم٥لد
ٚ ٢بٔد
26
ٝخسد عٛ٥ؼّػ ٢ساذٍٟ٘
.ذؿ غپػ
َّٛػ ٢بٞ
٢شتوبث بث طٛ٥ف٤شت٘بػ
ٖدشو سد تفشػ 5000 سٚد سد
ٝم٥لد
ٝث تذٔ
10
ٝم٥لد ةٛػس
ٜداد .ذ٘ذؿ غپ صا فزض
َّٛػ
،بٞ
ه٤ ٣ّ٥ٔ
شت٥ِ
صا ـ٤بٔ
٣٤ٚس اس بث سبٟز ٣ّ٥ٔ
شت٥ِ
فشقٔ
٣ىؼفٛىِبػ (
150 ٣ّ٥ٔ
شت٥ِ
ذ٥ػا ه٤سٛفِٛػ
،ؼ٥ّغ 250 ٣ّ٥ٔ
شت٥ِ
ةآ
،شغمٔ
5 / 7 ٣ّ٥ٔ
شت٥ِ
ذ٤شّو
ٗٞآ
ٝػ
ٝثآ 5 / 0 )سلاٛٔ
طّٛخٔ
.ذ٤دشٌ
ٗ٤ا طّٛخٔ
ٝث تذٔ
25
ٝم٥لد سد ٢بٔد قبتا ٢ساذٍٟ٘
ذؿ
ٚ غپ صا
تؿزٌ
ٗ٤ا
ٖبٔص بث
ٜدبفتػا صا شتٔٛتفٚشتىپػا
ٖاض٥ٔ
ةزخ ٢سٛ٘
ٖآ سد
َٛع جٛٔ
٢سٛ٘
535 شتٔٛ٘ب٘
تئاشل
.ذ٤دشٌ
ٖاض٥ٔ
ذ٥ِٛت
َٚذ٘ا ه٥تػا ذ٥ػا بث
ٝؼ٤بمٔ
ةزخ
٢سٛ٘
ٖآ بث ٣ٙطٙٔ
دساذ٘بتػا
ٝ٥ٟت
ٜذؿ بث تؾّغ بٞ
٢ 0
،
5
، 10
، 15
ٚ 20
ْشٌٚشى٥ٔ
شث ٣ّ٥ٔ
شت٥ِ
ٝجػبطٔ
ذؿ
(
Patten & Glick, 2002
).
٣٤ب٘اٛت ذ٥ِٛت ذ٥٘ب٥ػ
ٖطٚسذ٥ٞ
بث
ٜدبفتػا صا ؽٚس
Alstrom & Burns
( )1989
ْبد٘ا .ذؿ ٢اشث
ٗ٤ا
سٛؾٙٔ
100 شت٥ِٚشى٥ٔ
صا
ٖٛ٥ؼ٘بپػٛػ ٢شتوبث
شث ٢ٚس
ظ٥طٔ
سبٌآ ٢زغٔ
٢اساد 4 / 4 ٣ّ٥ٔ
ْشٌ
سد شت٥ِ
ٗ٥ؼ٤لاٌ
ص٥مّت .ذ٤دشٌ
غپػ ه٤ زغبو ٣فبك
ٝتـغآ
ٝث فشقٔ
تبٙثشو
ٓ٤ذػ
ٚد ذكسد
ٚ ذ٥ػا ه٤شى٥پ 5 / 0
٣ىؿضپٞب٥ٌ ؾ٘اد
ٖاش٤ا سٚد ، ٠ 50 سبٕؿ ، ٠ 2 ، ٚ ض٥٤بپ ٖبتؼٔص 1398 163
ذكسد سد تٕؼل ةسد ٢شتپ ساشل
ٜداد ذؿ
ٚ سد ت٤بٟ٘
هتـت بٞ
٢ ٢شتپ
ٝث
ّٝ٥ػٚ
ساٛ٘
ّٓ٥فاسبپ دٚذؼٔ
.ذ٤دشٌ
شتپ ٢ بٞ
ٝث تسٛك
ٌٖٛطاٚ
ٝث تذٔ
48 - 72 تفبػ سد
٢بٔد 27
ٝخسد عٛ٥ؼّػ
ٖٚسد سٛتبثٛى٘ا ٢ساذٍٟ٘
.ذ٘ذ٤دشٌ
سد تسٛك ذ٥ِٛت ذ٥٘ب٥ػ
ٖطٚسذ٥ٞ
ظػٛت
،٢شتوبث زغبو ٣فبك
ٝتـغآ
ٝث
َّٛطٔ
فشقٔ
صا
ً٘س
ٝ٥ِٚا دسص
ً٘س
ٝث ت٥تشت
،ْشو
ٜٟٛل ا ٢
،ٗؿٚس
ٜٟٛل ا ٢
ٜش٥ت
ٚ
ًبت٤بٟ٘
٢شخآ ش٥٥غت
ً٘س
ٔ ٣ ٤ ذثب (
Alstrom &
Burns, 1989
).
٣٤ب٘اٛت ذ٥ِٛت صبتبفؼف
ٝث ؽٚس
Pikovskaya
( ) 1948
ْبد٘ا .ذؿ ٢اشث
ْبد٘ا
ٗ٤ا
ٖٛٔصآ صا تـو
ٜصبت ٢شتوبث
ٝث تسٛك
ٝىِ
ا ٢ شث ٢ٚس ظ٥طٔ
ذٔبخ ٣ىؼفٛى٤بپ
٢ٚبض : ضوٌّٛ(
( 10
ْشٌ
سد )شت٥ِ
- سبٌآ ( 15
ْشٌ
سد
)شت٥ِ
-
ٜسبلف شٕخٔ
( 5 / 0
ْشٌ
سد )شت٥ِ
-
ٓ٥ؼّو
تبفؼف ( 5
ْشٌ
سد )شت٥ِ
-
ْٛ٥٘ٛٔآ تبفِٛػ ( 5 / 0
ْشٌ
سد )شت٥ِ
-
ٓ٤ذػ ذ٤شّو ( 2 / 0
ْشٌ
سد )شت٥ِ
-
ٓ٥ػبتپ
ذ٤شّو ( 2 / 0
ْشٌ
سد )شت٥ِ
-
ْٛ٤ض٥ٙٔ
تبفِٛػ تفٞ
ٝثآ
( 1 / 0
ْشٌ
سد )شت٥ِ
-
ٗٞآ تبفاٛػ تفٞ
ٝثآ ( 002 / 0
ْشٌ
سد )شت٥ِ
- ضٍٙٙٔ
تبفِٛػ ساذثآ ( 002 / 0
ْشٌ
سد
)شت٥ِ
تـو .ذ٤دشٌ
غپػ
ٕٝ٘ٛ٘
بٞ
ٝث تذٔ
سبٟز صٚس سد
٢بٔد 27
ٝخسد عٛ٥ؼّػ
ٖٚسد سٛتبثٛى٘ا ٢ساذٍٟ٘
.ذ٘ذؿ ٣٤ب٘اٛت ذ٥ِٛت
ٓ٤ض٘آ بث
ُ٥ىـت
ِٝبٞ
فبفؿ فاشعا
ُطٔ
ذؿس ٢شتوبث ٣ثب٤صسا ذؿ
(Pikovskaya, 1948)
.
ٝث سٛؾٙٔ
ػسشث ٣ ب٘اٛت ٣٤ شتوبث ٢ سد ضا ٥ ب ٢ ٘ ٥
،تاشت
غپ صا
َبمت٘ا تـو
ٜصبت شتوبث ٢
ٝث طٔ
٥ ظ بٔ
٤ ـ
ٚبض ٢
٘٥ تاشت
ٚ ساذٍٟ٘
٢ شتوبث ٢ سد بٔد ٢ 28
ٝخسد
ؼّػ ٥ عٛ
ٚس ٢ ؿ ٥ شى بث تفشػ 120 سٚد لد ٥
ٝم
ٝث تذٔ
48 تفبػ
، حٙپ
ٜشغل صا فشقٔ
بٞ
٢
َّٛطٔ
بٞ
٢
(A
تـٞ
ْشٌ
ػا ٥
٘بفِٛػذ ٥
ّ ٥ ه ساضٞسد ٣ّ٥ٔ
شت٥ِ
ػا ٥ ذ
تػا ٥ ه حٙپ
َبٔش٘
)
ٚ حٙپ(B
ْشٌ
تف٘بفِآ ٥
ُ
ٔآ ٥
ٗ سد
1000 ٣ّ٥ٔ
شت٥ِ
ػا ٥ ذ تػا ٥ ه حٙپ
َبٔش٘
)
ٝث
ٔ ٥
ٖاض
ٚبؼٔ
٢
ٝث ٢شتوبث ٢بٞ
ٝتفب٤ذؿس سد
ظ٥طٔ
تاشت٥٘
ٝفبضا دشٌ
٤ ذ . ا٤
ٗ طّٛخٔ
ٝث تذٔ
ٝػ لد ٥
ٝم سد بٔد ٢
قبتا ساذٍٟ٘
٢ ذؿ
ٚ غپ صا تؿزٌ
ا ٤
ٗ
ٖبٔص ذٞبـٔ
ٜ
ً٘س
٘اٛغسا ٣ سد
ِِٝٛ
،بٞ
شٍ٘بـ٘
دٛخٚ
ِبقف ٥ ت ض٘آ ٤
ٓ
٘٥ تاشت صبتوٚدس سد شتوبث ٢ دسٛٔ
ث ش س ػ ٣
ٜدٛث
ٚ تؼت
تجثٔ
مّت ٣
ٔ ٣ دٛؿ .
ْذف
ٜذٞبـٔ
ً٘س
٘اٛغسا ٣ سد
طٔ
٥ ظ تـو
ٔ ٣ ذ٘اٛت
ٝث تّف
ْذف ضا ٥ ب ٢
٘٥ تاشت
ٚ ٤ ب ذجت
٤
ُ ٘ ٥ تاشت
ٝث تبمتـٔ
د ٤ شٍ
٘ ٥
٘طٚشت ٣ ذؿبث سد .
ذ٥٤أت
ْذف ضا ٥ ب ٢ ٘ ٥ تاشت
ٝث ٘ ٥ شت ٤
،ت ساذمٔ
ؼث ٥ سب ئضخ ٣
دشٌ
ٚس ٢
ٝث
ِِٝٛ
بٞ
ٝفبضا .ذ٤دشٌ
ش٥٥غت
ً٘س ظ٥طٔ
ٝث
،٣٘اٛغسا
َاد شث
ٖاذمف ض٘آ ٤
ٓ ضا ٥ ب ٢ ٘ ٥ تاشت سد شتوبث ٢
دسٛٔ
ٝقِبغٔ
تػا (
Schaad et al., 2001
)
.
هتشغآ یساس رذب اب یزتکاب
سٚزث
ٝخٌٛ
٣ٍ٘شف
ٓلس تلاف
ٝ٥ٟت(
ٜذؿ صا
ٔ ؤ
ٝؼػ
تبم٥مطت
ٚ شلاكا سزث )جشو
ٝث تذٔ
ٝػ
ٝم٥لد بث
ت٤شّوٛپ٥ٞ
ٓ٤ذػ 5 / 2 ذكسد ذض ٣٘ٛفف ٣طغػ
ٚ بث
ٝػ سبث تؼؿ
ٛؿٚ
سد ةآ
،شغمٔ
ٛپ٥ٞ
ت٤شّو
ٖآ
ٜدٚدص
.ذؿ
ٝث سٛؾٙٔ
ٝتـغآ ٢صبػ سٚزث
ٝث
ٝ٤ٛػ تؼ٥ٌ٘ٛبت٘آ صا
ؽٚس
Weller et al.
( )1993
ٜدبفتػا .ذ٤دشٌ
ه٤ حِٛ
ُٔبو صا تـو 48
ٝتفبػ
ٝ٤ٛػ ٢شتوبث ٢ٚس ظ٥طٔ
سبٌآ ٢زغٔ
ٝث هػلاف ٢بٞ
٢ٚبض 100 ٣ّ٥ٔ
شت٥ِ
ظ٥طٔ
ـ٤بٔ
٢زغٔ
ُمتٙٔ
ٜذؿ
ٚ
ٝث تذٔ
48 تفبػ
٢ٚس
ٜبٍتػد شى٥ؿ ( 120 سٚد سد )ٝم٥لد سد ٢بٔد 28
ٝخسد عٛ٥ؼّػ ساشل
.تفشٌ
َّٛػ بٞ
٢ ٢شتوبث بث
ٜدبفتػا صا طٛف٤شت٘بػ (
ٝث تذٔ
10
ٝم٥لد سد 6000 سٚد
سد )ٝم٥لد ةٛػس
ٜداد ذؿ
ٚ ذٙز سبث بث
َّٛطٔ
ْشػ
ه٤طِٛٛ٤ض٥ف ذ٤شّو(
ٓ٤ذػ 9 / 0 )ذكسد ٢اشث فشعشث
ٖذؿ
ٜذ٘بٕ٥لبث ظ٥طٔ
٣٤ازغ تؼؿ
ٛؿٚ
ْبد٘ا تفشٌ
(
Weller et al., 1993
.) غپػ
َّٛػ بٞ
٢ ٢شتوبث بث
ٜدبفتػا صا طٛف٤شت٘بػ دذدٔ
صا
ٗ٤ا
َّٛطٔ
٢صبػاذخ
ٜذؿ
ٚ غپ صا
ٗ٥٥قت ت٥قٕخ
ٖٛ٥ؼ٘بپػٛػ
ٝث تؾّغ
109 ذضاٚ
ُ٥ىـت
ٜذٙٞد ٣ّ٘ٛو سد ٣ّ٥ٔ
شت٥ِ
(
CFU/ml
) سد
َّٛطٔ
ه٤ ذكسد ٣ؼوٛثشو
ُ٥تٔ
ضِّٛػ
ٚ بث
ٜدبفتػا صا ( ٝغثاس 1 )
ٝ٥ٟت .ذ٤دشٌ
ٝغثاس 1 )
D1V1 + D2V2= DT (V1+V2)
D1
; تؾّغ
ٖٛ٥ؼ٘بپػٛػ دٛخٛٔ
V1
;
ٓدض
ٖٛ٥ؼ٘بپػٛػ
ٝ٥ِٚا
D2
; تؾّغ ٢شتوبث سد
َّٛطٔ
ٝفبضا
ٜذؿ سد(
بدٙ٤ا
ٖٛز
َّٛطٔ
ٖٚذثCMC
٢شتوبث
ٝفبضا ذؿ
ٜ
D2=0
٣ٔ
ذؿبث .)
DT
; تؾّغ
ٖٛ٥ؼ٘بپػٛػ بٟ٘
٤ ٣
V2
;
ٓدض
َّٛطٔ
ٝفبضا
ٜذ٘ٛؿ
داذقت 20 سزث
ٝخٌٛ
٣ٍ٘شف
ٖٚسد ؼ٘بپػٛػ
ٖٛ٥
٢شتوبث
ٝتخ٤س
ٜذؿ
ٚ
ٝث تذٔ
30
ٝم٥لد ٢ٚس شى٥ؿ
سٛتبثٛى٘ا ( 70 سٚد
ٝم٥لسد
ٚ ٢بٔد 27
ٝخسد )عٛ٥ؼّػ
ساشل
ٜداد ذ٘ذؿ . سد سبٕ٥ت ذٞبؿ سٚزث
ٖٚسد ةآ شغمٔ
ٖٚشتػ ذلبف ٢شتوبث
ٝعٛغ سٚ
.ذ٘ذؿ سٚزث ص٥مّت
ٜذؿ
تطت ش٥ثأت
ٖب٤شخ
ٓ٤لأ
دبث سد ش٤ص دٛٞ
هـخ .ذ٘ذؿ
زثا زتکاب ی زب صخاش اه ی هناوج ینس رذب هجوگ یگنزف
داذقت 10 سزث
ٜذؿسبٕ٥ت بث
٢شتوبث
ٖٚسد شٞ
هتـت
٢شتپ ٢ٚبض زغبو ٣فبك
ٖٚشتػ
ٚ ةٛعشٔ
ٜذؿ بث ةآ
شغمٔ
ٖٚشتػ
ٝتفشٌساشل
ٚ
ٖٚسد هلبتا ذؿس بث ٢بٔد
±1 25
ٝخسد عٛ٥ؼّػ
ٚ تثٛعس 37 ذكسد ٢ساذٍٟ٘
.ذ٘ذؿ هتـت بٞ
٢ ٢شتپ شٞ
صٚس دسٛٔ
٣ػسشث ساشل
ٝتفشٌ
ٚ داذقت سٚزث
ٝ٘اٛخ
ٜدص تؿاددب٤
ٚ سد ت٤بٟ٘
غپ صا 7 صٚس ؿبفتسا
ٝـ٤س
ٝز
ٚ
ٝلبػ
ٝز
ٜصاذ٘ا ش٥ٌ
٢
ذؿ
ٚ ذكسد
ٝ٘اٛخ
،٣٘ص تفشػ
ٝ٘اٛخ
،٣٘ص ظػٛتٔ
ٖبٔص
ٝ٘اٛخ
،٣٘ص ظػٛتٔ
ٝ٘اٛخ ٣٘ص
ٝ٘اصٚس
ٚ قخبؿ
ٝ٥ٙث سزث
كثبغٔ
ظثاٚس 2 ، 3 ٚ 4
ٝجػبطٔ
.ذ٤دشٌ
ٝغثاس 2 ) تفشػ
ٝ٘اٛخ ٣٘ص :
Ni
: داذقت سزث
ٝ٘اٛخ
ٜدص سد شٞ
،صٚس
Ti
: داذقت
٢بٞصٚس ٢شپػ
ٜذؿ صا ؿٚشؿ ؾ٤بٔصآ .
ٝغثاس 3 ) ذكسد
ٝ٘اٛخ ٣٘ص :
PG = (n/N) 100 n
:n
داذقت سٚزث
ٝ٘اٛخ
ٜدص سد شٞ
،صٚس : N
ُوداذقت سٚزث
.
ٝغثاس 4 ) قخبؿ
ٙث ٥
ٝ سزث
ٔ ٥
ٍ٘ب ٥
ٗ
َٛع
ٌ ٥
ٝسٞب
(
Hampton & Tekrony, 2008
).
100 Pg Vi Ls
امسآ ی تاش هناخلگ ا ی
یبایسرا شیاشفا ذشر هایگ هجوگ یگنزف طسوت یوس ه یزتکاب .
٢اشث ٣ػسشث ؾم٘
،٢شتوبث سد
ٖاض٥ٔ
ؾ٤اضفا ذؿس
،ٜب٥ٌ
ؾ٤بٔصآ سد
ٝػ ساشىت
ٚ سد تِبل ششع نّٛث
ًلأبو
٣فدبلت ظ٤اشؿ
ٝ٘بخٌّ
ْبد٘ا .تفشٌ
300
ْشٌ
نبخ
ٝفسضٔ
ٖٚشتػ
ٜذؿ
ٝث
ٜاشٕٞ
ه٤
ْٛػ ٣ٕدض
ٖآ صا
ت٥ِشپ
ٝث
ٖاذٌّ
بٞ
ٝفبضا .ذؿ
ٝػ دذف سزث
ٝخٌٛ
٣ٍ٘شف
ٝو كجع ؽٚس
ٝتفٌ
ٜذؿ سد لابث بث
ٛػ ٤
ٝ ٢شتوبث ص٥مّت
ٜذؿ ذ٘دٛث سد شٞ
ٖاذٌّ
ٝتؿبو .ذؿ
ٖاذٌّ
بٞ
٢
ٝتؿبو
ٜذؿ سد سد ٢بٔد
±2 25
ٝخسد عٛ٥ؼّػ سد
ظ٤اشؿ
ٝ٘بخٌّ
٢ساذٍٟ٘
ٚ شٞ
ٚد صٚس سبجى٤ ٢سب٥ثآ
ْبد٘ا .ذؿ
35 صٚس ذقث صا
،تؿبو
ٖبٞب٥ٌ
تؿادشث
ٜذؿ
ٚ
بٞسٛتوبف ٢ ٢ذؿس بٟ٘آ
ُٔبؿ
ٖصٚ
هـخ
ْاذ٘ا بٞ
٢ ٣ئاٛٞ
ٚ
ٖصٚ
هـخ
،ٝـ٤س ؿبفتسا
ٝـ٤س
ٚ ؿبفتسا
ٜسبؼخبؿ
ٜصاذ٘ا ش٥ٌ
٢ .ذ٤دشٌ
هیهت هیام حیقلت زگرامیب
ذسبل شٌسبٕ٥ث
Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici
بث
ٜسبٕؿ ـخشٔ
004 ٣٤اذٞا(
شتود ٢ذٟٔ
،ّٛ٘صسا
ٜبٍـ٘اد )ض٤شجت
ٝ٥ٟت .ذ٤دشٌ
ٝ٤اذخ سٛوزٔ
غپ صا
قِبخ ٢صبػ صا ك٤شع هت سٛپػا
ٖدٕٛ٘
ٝث تذٔ
تـٞ
صٚس ٢ٚس ظ٥طٔ
تـو ذؿس PDA
ٜداد .ذؿ غپػ
كثبغٔ
ؽٚس
Maurhofer et al.
( )1994
ٝ٤بٔ
ص٥مّت
٢سبٕ٥ث
ٜدبٔآ .ذ٤دشٌ
ٗ٤ا ٝث ت٥تشت
ٝو 100
ْشٌ
سزث
ٖصسا سد 60 ٣ّ٥ٔ
شت٥ِ
ةآ شغمٔ
سد ه٤
ِٗسا 250
٣ّ٥ٔ
شت٥ِ
٢
ٚ
ٝث تذٔ
24 تفبػ غ٥خ
ٜذؿ
ٚ سد
ٚد
صٚس ٣ِاٛتٔ
ٚلاوٛتا .ذؿ غپػ سبٟز فشل حٙپ
٣ّ٥ٔ
٢شتٔ
صا
ٝ٥ؿبض تـو سبٟز
ٜصٚس ذسبل
ٝث
ٖآ
ٝفبضا
ٜدٕٛ٘
ٚ
ٝث تذٔ
26 صٚس سد ٢بٔد 25
ٝخسد
عٛ٥ؼّػ
ٚ بث
ٜسٚد ٢سٛ٘
12 تفبػ ٣٤بٙؿٚس ٢ساذٍٟ٘
ذ٤دشٌ
(
Maurhofer et al., 1994
.)
یبایسرا ترذق یتسینوگاتنآ هیاذج
یزتکاب رد طیازش هناخلگ .
سد
ٗ٤ا
ّٝضشٔ
ٝـ٤س
ٝسٞب٥ٌ
٢بٞ
4 - 3 ٣ٌشث
ٓلس تلاف
ٖٚسد
ٖٛ٥ؼ٘بپػٛػ
ٝ٤اذخ ٢شتوبث بث ت٥قٕخ
CFU/ml
109
× 1
ٝث تذٔ
ه٤ تفبػ
ٝعٛغ سٚ
.ذ٘ذؿ غپػ
ٝسٞب٥ٌ
بٞ
سد
ٖاذٌّ
بٞ
٣٤ ه٤ ٣ٔشٌّٛ٥و
ٝو
ٚد
ْٛػ
ٓدض
ٖآ بث نبخ
ٖٚشتػ
ٚ ه٤
ْٛػ
ٜذ٘بٕ٥لبث تٕؼل
٣٤لابث
ٖآ بث طّٛخٔ
نبخ
ٖٚشتػ
ٚ تجؼ٘
10:1 ٣٘صٚ
ٝ٤بٔ
ص٥مّت ٢ٚبض ذسبل
F. oxysporum f. sp.
lycopercisi
سٚزث(
ٖصسا
ٜذ٥ؿٛپ
ٜذؿ بث ذسبل )شٌسبٕ٥ث
تـو .ذ٘ذ٤دشٌ
ٝػ صٚس ذقث
ًادذدٔ
ٖٛ٥ؼ٘بپػٛػ
٢شتوبث بث تؾّغ
CFU/gr
108 نبخ
ٝث
ٖاذٌّ
بٞ
٢
٢ٚبض
ٝسٞب٥ٌ
٢بٞ
تـو
ٜذؿ
ٝفبضا
ٚ
ٝ٘بخٌّسد سد
٢بٔد
±2 25
ٝخسد عٛ٥ؼّػ بث
ٜسٚد ٢سٛ٘
16 تفبػ
٣٤بٙؿٚس
ٚ 8 تفبػ ٣ى٤سبت ٢ساذٍٟ٘
ٚ شٞ
ٚد صٚس ه٤
سبث ٢سب٥ثآ ذ٘ذؿ . سٚآدب٤
ٔ ٣ دٛؿ
ٝو
ٖاذٌّ
بٞ
٢ ذٞبؿ
ض٥٘
سد
ٚد
ٜٚشٌ
ٝمجع ٢ذٙث :ذ٘ذؿ 1 )
ٝسٞب٥ٌ
ٜذؿسبٕ٥ت بث
ٝ٤اذخ ٢شتوبث سد نبخ
ٖٚشتػ
ٖٚذث ذسبل
شٌسبٕ٥ث ، 2 )
ٝسٞب٥ٌ
تـو
ٜداد
ٜذؿ سد نبخ
ٜدِٛآ
ٝث
ذسبل شٌسبٕ٥ث
ٖٚذث سبٕ٥ت .٢شتوبث
ٝسٞب٥ٌ
بٞ
شٞ
صٚس
٣ىؿضپٞب٥ٌ ؾ٘اد
ٖاش٤ا سٚد ، ٠ 50 سبٕؿ ، ٠ 2 ، ٚ ض٥٤بپ ٖبتؼٔص 1398 165
دسٛٔ
٣ػسشث ساشل
ٝتفشٌ
ٚ
ٝ٘بـ٘
بٞ
٢ ٢شٞبؽ
ٚ داذقت
ٝسٞب٥ٌ
٢بٞ
ِٓبػ
ٚ سبٕ٥ث
ٚ ذكسد ٣ٌدشٔظپ شٞ
ٝسٞب٥ٌ
تؿاددب٤ ٢سادشث .ذؿ
ٓ٤لاف
ٚ تذؿ ٢سبٕ٥ث
ٝػ
ٝتفٞ
غپ صا
ٝ٤بٔ
٣٘ص شث عبػا
ٓتؼ٥ػ
ٜشٕ٘
٣ٞد
Kamal et al.
(2009)
ٚ
Amini (2009)
بث سد شؾ٘
ٗتفشٌ
قٔ
٥ بٞسب ٢ ش٤ص دسٛٔ
٣ثب٤صسا ساشل تفشٌ
:
0
;
ٜب٥ٌ
ِٓبػ
ٚ
ٖٛلٔ
صا
ٌٝ٘ٛشٞ
ٓ٤لاف
1
; سٟٛؽ
ٓ٤لاف سد يشث بٞ
ٓفا صا
،صٚشّو
،٣ٌذ٥س٥پ ...
سٟٛؽ
ٓ٤لاف
ٝث
ٖاض٥ٔ
25 ذكسد
2
; سٟٛؽ
ٓ٤لاف
ٝث
ٖاض٥ٔ
50 - 26 ذكسد
3
; سٟٛؽ
ٓ٤لاف
ٝث
ٖاض٥ٔ
75 - 51 ذكسد
4
; سٟٛؽ
ٓ٤لاف
ٝث
ٖاض٥ٔ
100 - 76 ذكسد
ٜٚلاف شث
،ٗ٤ا
ٖصٚ
هـخ
،ٝـ٤س
ْاذ٘ا بٞ
٢ ٣٤اٛٞ
ٚ
ض٥٘
ؿبفتسا
ٝـ٤س
ٚ
ٜسبؼخبؿ ض٥٘
ٜصاذ٘ا ش٥ٌ
٢ .ذ٤دشٌ
ییاسانش و
بیتزت یلاوت لک مونص یزتکاب
جاشختػا
،ُوDNA
صا 10 ٣ّ٥ٔ
شت٥ِ
تـو 48
ٝتفبػ
٢شتوبث سد ظ٥طٔ
ـ٤بٔ
سبٌآ ٢زغٔ
ظػٛت ت٥و
ٖطب٥و
بى٤شٔآ كثبغٔ
بث
ُٕقِاسٛتػد توشؿ
ٜذ٘صبػ
ْبد٘ا .ذؿ
غپػ ت٥ٕو
ٚ تؾّغ تػبٙٔ
ذ٥ػا ه٥ئّوٛ٘
بث ؽٚس
٢شتٔٛتفٚشتىپػا
ٚ بث
ٜدبفتػا صا
ٜبٍتػد حاسدٛ٘ب٘
َذٔ
ND800
ٗ٥٥قت .ذ٤دشٌ
جاشختػا DNA
ٜذؿ سد ٢بٔد
20 -
ٝخسد عٛ٥ؼّػ ٢ساذٍٟ٘
.ذ٤دشٌ
ت٥تشت ٣ِاٛت
ُو
ْٛ٘ط ٢شتوبث تختٙٔ
بث
ٜدبفتػا صا ٢طِٛٛٙىت
Illumina Hiseq2500
تسٛك .تفشٌ
تٟخ
ْبد٘ا
ُضاشٔ
ٜدبٔآ ٢صبػ
ٕٝ٘ٛ٘
بث و ٥ ت بٞ
٢ بٙ٥ّٔٛ٤ا (
TruSeq
DNA free- PCR
،) ٢سازٌذوسبث
،٣كبلتخا فزض
٣ِاٛت سٛتپادآ
ٚ
ًبت٤بٟ٘
٣ِاٛت ٣ثب٤
ُو
،ْٛ٘ط
ٕٝ٘ٛ٘
ٝث
ؾخث
َشتٙوٛ٥ث
ٜبٍـ٘اد
ُ٘شو
ُمتٙٔ
.ذؿ ذقث صا
ْبٕتا
ُضاشٔ
قٛف
ِاٛت ٣ بٞ
٢ ٢ذ٥تٛئّوٛ٘
ْبخ بث
ٜدبفتػا صا
٢بٞشتٛ٥پٔبوشثا 64
ٝتؼٞ
ا ٢
Intel Xeon E7-Dell
ؾخث ٢طِٛٛٙىتٛ٥ث
ٜبٍـ٘اد
ُ٘شو تٟخ ؽصادشپ
ُضاشٔ
٢ذقث ٣ِاٛت ٢ذ٥تٛئّوٛ٘
دسٛٔ
ٜدبفتػا ساشل
.ذٙتفشٌ
غپػ ٣ِاٛت ٢بٞ
،ٜبتٛو ٣ِاٛت ٢بٞ
تفخ
ٜذـ٘
ٚ
سٛتپادآ بٞ
سد(
تسٛك )دٛخٚ
بث
Trimmomatic Vo.30
ٚ
Vo. 2013-12-17 seqPrep
صا
ٜداد ٢بٞ
ْبخ
ٌسبث ز ٢سا
ٜذؿ فزض .ذ٘ذ٤دشٌ
تٟخ
ٓٞ
٣ف٤دس
ٜداد بٞ
صا
ْش٘
ساضفا
dimond Vo. 0.9.24
ٚ غپػ تٟخ فزض
ّٝكبف ٢بٞ
دٛخٛٔ
سد ٣ِاٛت ٢بٞ
ٓٞ
ف٤دس
ٜذؿ صا
GapFiller 1.11
ٜدبفتػا .ذ٤دشٌ
ؾ٤ادشٌ
ٜداد ٢بٞ
ُضاشٔ
ُجل ظػٛت
ْش٘
ساضفا ٢بٞ
Vo. 3.13.1 SPAdes
تسٛك .تفشٌ
غپػ ٣ِاٛت ٢بٞ
ٜذؿشتّ٥ف سد
ٜبٍ٤بپ ٢بٞ
ٚ RAST PATRIC
٢سازٌسبث
ٜذ٤دشٌ
ٚ سد تٕؼل
PGAAP
(
Prokaryotic Genomes Automatic
Annotation Pipeline
) ش٥ؼفت
ٚ غپػ ؾ٥پ ٣ٙ٥ث
ٗ٥ئتٚشپ تسٛك
.تفشٌ
٣ٔبٕت
ْش٘
بٞساضفا سد ٢بٕ٘سبت
ؾخث ٢طِٛٛٙىتٛ٥ث
ٜبٍـ٘اد
ُ٘شو دٛخٛٔ
تػا
(
BioHPC cloud, 2017
).
هیشجت و لیلحت یرامآ
٣ٔبٕت
ٖٛٔصآ بٞ
سد تِبل ششع
ًلأبو ٣فدبلت بث
ٝػ
ساشىت اشخا .ذ٘ذؿ
ٝ٤ضدت غ٘ب٤ساٚ
ٚ
ٝؼ٤بمٔ
ٗ٥ٍ٘ب٥ٔ
تبفك بث
ْش٘
ساضفا
MSTATC
ٚ
ٜٚشٌ
٢ذٙث بٞسبٕ٥ت بث
ٜدبفتػا صا
ٖٛٔصآ ذٙز
ٝٙٔاد ٢ا
ٗى٘اد
ْبد٘ا تفشٌ
ٚ
ٗ٥ٍ٘ب٥ٔ
بٞ
سد صغػ
َبٕتضا ه٤
ٚ حٙپ ذكسد صا
شٍ٤ذى٤ اذخ .ذ٤دشٌ
جیاتن
ٝث سٛؾٙٔ
٣ثب٥تػد
ٝث ٢شتوبث ه٥تٛ٥ثٚشپ ٣ٞب٥ٌ
بث ٣٤ب٘اٛت
َشتٙوٛ٥ث ٢سبٕ٥ث
٣ٌدشٔظپ ٣ٔٛ٤ساصٛف
ٝخٌٛ
٣ٍ٘شف
ٕٝ٘ٛ٘
سادشث ٢ بٞ
٢ ٢دذقتٔ
صا شفػٚض٤س
ٚ
ٝـ٤س
ٝخٌٛ
٣ٍ٘شف
ٝث
ُٕف .ذٔآ صا
ٗ٥ث دٚذض 547
ٝ٤اذخ داذقت
25
ٝ٤اذخ تخٛٔ
ؾ٤اضفا قخبؿ ٢بٞ
٢ذؿس
ٜب٥ٌ
ٝخٌٛ
٣ٍ٘شف ذ٤دشٌ
ٜ
ٚ
ٝث سٛع
ُثبل
ٝؾضلأ
٢ا ذكسد
ٝ٘اٛخ ٣٘ص سزث
ٚ
ٗ٥ٙسٕٞ
َٛع
ٝـ٤س
ٝز
ٚ
ٝلبػ
ٝز اس سد
ٖٛٔصآ تـو
ٝسٞب٥ٌ
بٞ
ٖٚسد هتـت ٢شتپ ؾ٤اضفا ذ٘داد
ح٤بت٘(
شـتٙٔ
.)ٜذـ٘
شث عبػا
ٖٛٔصآ ٢شٍِبثشغ
ٝ٥ِٚا
٤اذخ
ٝ تختٙٔ
ٝو
JPS19
٢سازٍٔب٘
،ذ٤دشٌ
شثواذض
ٖاٛت
ذ٥ِٛت ذ٥٘ب٥ػ
ٖطٚسذ٥ٞ
ُىؿ(
-C
1
،) ؾ٤اضفا قخبؿ ٢بٞ
٢ذؿس سزث
ٚ
ٜب٥ٌ
ٚ
ٗ٤شتـ٥ث
ٖاض٥ٔ
تق٘بٕٔ
٣ٌذٙٙو صا
ٌٝٙشپ ذسبل
ُٔبف ٣ٌدشٔظپ ٣ٔٛ٤ساصٛف
ٝخٌٛ
٣ٍ٘شف اس سد
٢شٍِبثشغ
ٝ٤ٛ٘بث تؿاد
.
یسرزب ییاناوت نوگاتنآ ی تس ی هیاذج JPS19 رد ازش ی ط
امسآ ی هاگش
سد
ٖٛٔصآ تـو
،ُثبمتٔ
ٝ٤اذخ
JPS19 Bacillus
velezensis
ش٥ثأت
ُثبل ٣ٟخٛت سد
ذسبل بتؼ٤ا ٤ ٣
F. oxysporum f.sp. lycopercisi
ٝتؿاد
ُىؿ(
-A
1 )
ٚ ثفبث تق٘بٕٔ
83 ٢ذكسد ذسبل
شٌسبٕ٥ث
ٖٚسد
هتـت ٢شتپ .ذ٤دشٌ
سد ٣ػسشث ش٥ثأت تبج٥وشت ساّشف ذض
٣زسبل ٤اذخض٥٘
ٝ
JPS19
تؼ٘اٛت
ٝث
ٖاض٥ٔ
69 ذكسد
تخٛٔ
٣ٌذ٘سادصبث صا
ذؿس
ٌٝٙشپ ذسبل شٌسبٕ٥ث
ٖٚسد
هتـت ٢شتپ ددشٌ
ُىؿ(
-B
1 .)
لوت ی ذ لوباتم ی ت اه ی م ی بوزک ی
سد صسا ٤ ثب ٣
ِٛت ٥ ذ ػ ٥
،سٛفٚسذ
ٔ ٥
ٍ٘ب ٥
ٗ
ٔ ٥
ٖاض
ِٝبٞ
د٘سب٘
٣
ً٘س ا ٤ دبد
ٜذؿ سد فاشعا هٞبز بٞ
٢ طٔ
٥ ظ
CAS-AD
،
6
ٔ ٥
ّ ٣ شتٔ
ٜصاذ٘ا
ٌ ٥ ش ٢ ذؿ
ُىؿ(
-A
2 ).
بت٘
٤ ح
ُكبض صا
ِٛت ٥ ذ ػ ٥
٘ب ٥ ذ
ٞ ٥
ٖطٚسذ
ٖبـ٘
داد
ٝو اذخ ٤
ٝ
JPS19
بث غت
٥٥ ش
ً٘س زغبو فشقٔ
صا دسص
ٝث شخآ ٢ اساد ٢ شثواذض
ٖاٛت
ِٛت ٥ ذ ػ ٥
٘ب ٥ ذ
ٞ ٥
ٖطٚسذ
ٔ ٣ ذؿبث
ُىؿ(
-C
1 ).
دب٤دصا
ِٛت ٥ ذ س٤
ٝـ فشف ٣
ُىؿ(
-C
2 ) سد
ُضاشٔ
ِٚا ٥
ٝ س٤
ٝـ اص ٣٤
ٚ
ٙسٕٞ
٥
ٗ اضفا ٤ ؾ ذؿس
ٌ ٥
ٜب
،
َّٛقٔ
ِٛت ٥ ذ
َٚذ٘ا ه٥تػا
ذ٥ػا
ٔ ٣ ذؿبث
ٝو
ٔ ٥
ٖاض
ٖآ سد ا ٤
ٗ اذخ ٤
ٝ سبٟز
ٔ ٥
ّ ٣
ْشٌ
سد ِ ٥ شت
ٜصاذ٘ا
ٌ ٥ ش ٢ ذؿ .
بت٘
٤ ح
ُكبض صا
ِٛت ٥ ذ ض٘آ ٤
ٓ بٞ
ٖبـ٘
داد
ٝو ا ٤
ٗ
شتوبث ٢ ب٘اٛت ٣٤
َلاط٘ا تبفؼف
٘ذقٔ
٣ سد طٔ
٥ ظ
كبلتخا ٣ ٣ىؼفٛى٤بپ
ُىؿ(
-B
2 ) اس .تؿاد
ِبقف ٥ ت
ض٘آ ٤
ٓ ٘ ٥ تاشت صبتوٚدس
ٚ ب٘اٛت ٣٤ ضا ٥ ب ٢ ٘ ٥ تاشت ض٥٘
بث
ذٞبـٔ
ٜ
ً٘س
٘اٛغسا ٣ غپ صا
ٝفبضا
ٖدشو فشقٔ
بٞ
٢
