1
نژ مسیفروم یلپ یسررب یدنرم یموب ناغرم رد دشر تافص اب نآ طابترا و GJA1
هدازیلع نلاسرا یمشاه یلع ،1
و2
یرافغراتخم
3
1 - یماد مولع هورگ دشرا یسانسراک یوجشناد -
یزرواشک هدکشناد -
هاگشناد )ناریا(هیمروا
2 - یماد مولع هورگ رایشناد -
یزرواشک هدکشناد -
)ناریا(هیمروا هاگشناد
3 - یماد مولع هورگ رایداتسا -
یزرواشک هدکشناد -
)ناریا(هیمروا هاگشناد
:هبتاکم لوئسم [email protected]
هدیکچ : نژ مود نوزگا هیحان رد دوجوم یللآ عونت ییاس انش روظنم هب رض اح قیقحت اب یقرش ناجیابرذآ یموب ناغرم ردGJA1
هریجنز شنکاو زا هدافتسا یلپ یا
ارم (PCR) ز هتشر ییاضف مرف توافت و
درفم یاه (SSCP)
دادعت زا روظنم نیا یارب .تفرگ ماجنا
222 بویت رد و دش یریگنوخ دنرم ناتس رهش داژن حلاص ا هاگتس یا یموب غرم هعطق نوخ داقعنا دض هدام یواح یاه
هبEDTA
آ لقتنم هاگش یامز جارختس ا زا سپ .دیدرگ
هعطق ،DNA یا هزادنا هب 252bp
نژ مود نوزگا هیحان زا کینکت زا هدافتس ا ابGJA1
.دیدرگ ریثکتPCR تلاوصحم
شور هب هدمآ تسد هبPCR رد توافتم یراون یاهوگلا ییاسانش هب رجم هک دندش هیزجتSSCP
هنومن یدومع زروفورتکلا .دیدرگ هعلاطم دروم ناغرم دیملایرکآ لژ یور اه
12 دصرد هب تدم 11 اب تعاس 112 فرگ تروص تلو .ت
تارتین شور هب لژ یزیمآ گنر نآ هجیتن رد هک ددددش ماجنا هرقن
یوگلا جنپ یناوارف اب بیترت هب یپیتونژ
( یاه 2 / 21 ) 1 ( ، 22 ) 2 ،
( 2 / 11 ) 3 ( ، 2 / 5 ) 2 ( و 7 ) 5 .دش هدهاش م دص رد یم شهوژپ نیا زا هدمآ تس د هب جیاتن ساس ا رب
هیحان یکیتنژ عونت هک تفگ ناوت
نژ مود نوزگا اوت هک یروط هب هدوب لااب اتبس ن یموب غرمGJA1
همانرب رد دن طابترا ،روش ک یموب رویط داژن حلاص ا و ینیزگهب یاه
یلکش دنچ نیا .دریگ رارق یبایزرا دروم یداصتقا تافص اب اه
هژاو یدیلک یاه نژ :
یدنرم غرم ،GJA1 رگناشن ،
یاه یلوکلوم دشر تافص ، PCR-SSCP ،
1 . همدقم : هیامرددس روددشک ره یموب غرم تیعمج یم روددشک نآ یلم ی
دددشاب یم و .دور راکب یدیلک لوددصحم کی ناونع هب دناوت
هدوت همادا شیوخ تایح هب نانچمه یعیبط باختنا و عناوم یمامت رب هبلغ اب و دعاسمان طیارش لمحت لاس نارازه زا دعب یموب یاه
هداد هیامرس و ریاخذ ناونع هب و دنا یم حرطم یلم یکیتنژ مهم ی
(دنشاب ینایک اضر نیسح اراکمه و شنم
ن 1312 .) ریخا یاهلاس رد
هدرتس گ دربراک یلوکلوم یاهرگناش ن هدش تظافح تاناویح و اه تیعمج یکیتنژ عونت نییعت تهج هدرک ادیپ یا
ازیم اذل .دنا دنچ ن
تیعمج یبایزرا لباق یاهرتماراپ زا یکی اهرگنادددشن نیا زا هدمآ تدددسدب یلکدددش توافت کرد و اه
بودددصحم اهنآ نیب یکیتنژ یاه
یم دوش ( ناراکمه و سیرپپرذآ یزابهش 1312
.) یم اراد تش وگ تعنص رد ار تیمها نیرتش یب دش ر تافص
،دنش اب نژ لرتنک یاه
یم ثعاب هناگدنچ هنوگ یکیتنژ دوبهب هب رجنم نیا و میشاب هتشاد دشر تافص اب طابترا رد ار یدنمزاین زا یرتهب کرد دوش
ه ماد یا
2
رگناش ن کمک هب باختنا قیرط زا غرم هلمج زا (
)MAS یم ددرگ ( Sun Y, et al. 2013 نیا رد هک هدش یدایز دیکات نیاربانب .)
یلپ هک یلوکلوم کیتنژ زا عیرس تفرشیپ یارب نینچمه و یکیتنژ یاهرگناشن زا تاقیقحت ( یدیتوئلکن کت یاه مسیفروم
) SNPs
ددرگ هدافتسا دنتسه اهنآ زا یکی Vignal A, et al. 2002(
.) یلپ نژ نیدنچ یلبق تاعلاطم دشر تافص اب طابترا رد ار مسیفروم
هداد ناش ن غرم رد یرت زایپیل زا یعاونا .دنا
اهدیرس یلگ (ATGL)
اهزادیس کارپ دیئوریت و1
(TPO) نژ2
رد غرم ندب نزو اب هک ییاه
طابترا دنتس ه 2010( Nie QH, et al.
.) هبش دش ر روتکاف رد شهج نیلوس نا
(IGF1)1 غرم هش لا نزو تفص یارب هک ینژ3
هدش صخش م تس ا
( Sato S, et al. 2012 .)
یم دنراد شقن تافص دش ر رد هک ییاهنژ نایم زا هب ناوت
نژ Gap junction
protein alpha1 (GJA1) .درک هراددشا
نژ ردGJA1 هدددش هتخانددش )ییاونددش نداد تددسد زا( ناددسنا یموردنددس اب طابترا
تس ا Amano K, et al.2012( )
ناراکمه و ناهج هاش ( یقیقحت رد . 2215
،)
،نوزگا هیحان نژ روتومورپ و نورتنیا
ردGJA1
یلپ ار پاک یراجت و ینیچ یموب غرم دندرک شرازگ مسیفروم
هیحان یلکش دنچ ییاسانش قیقحت نیا فده ، نوزگا
2 GJA1 نژ
یکیتنژ عونت یسررب و اب یدنرم یموب غرم رد
هتشر ییاضف یلکش دنچ شور زا هدافتسا یم درفنم یاه
.دشاب
2 . شور و داوم اه
:
شهوژپ نیا یارجا یارب دادعت
222 هعطق یدنرم غرم زا
زکرم تاقیقحت یزرواددشک شزومآ و
یعیبط عبانم و ناجیابرذآ
یقرددش اختنا .دددش ب زا یریگنوخ هیحان
دیرو ریز یلاب پویت ورکیم لخاد رد یاه
5 / 1 م یلی داقعنا دددض هدام یواح یرتیل EDTA
ماجنا دیدرگ . هنومن اه ی نوخ ات نامز جارختسا ردDNA
یامد 22 - هجرد یتناس دارگ یرادهگن دش
. یارب یسررب یلکشدنچ نژ
هعطقGJA1 یا زا نژ هب هزادنا 252 تفج زاب اب هدافتس ا زا یاهرگزاغآ هک هدش یحارط
بیترت یلاوت نآ اه رد لودج 1 هدمآ تس ا
ریثکت دیدرگ .
لودج 1 - آ اهرگزاغ هدش یحارط ی
یلاوت رگزاغآ مان
3'
- CCTGTCGTAACTACAATAAGC
'- 5 Forward primer
5'-CTCCAGGTCATCAGGTCGAG-3' Reverse primer
رلکیاس ومرت زا یترارح بیش زا رگزاغآ هنیهب لاص تا یامد نییعت تهج (T Gradient)
ییاهن شنکاو و هدش هدافتس ا
مجح ردPCR 22
رتیلورکیم رفاب (
PCR 1X ،
5 / 1 یلیم لوم MgCl2
، 222 طولخم رتیلورکیم dNTPs
، 12 ره زا لوموکیپ
،رگزاغآ 1 دحاو Taq DNA Polymerase ،
75 مرگونان )هدددش جارختددساDNA
. شنکاو تیک زا هدافتددسا ابPCR
Master
(PCR Cinagen,IRAN )
رب ساددسا رب و تیک لمعلاروتددسد قباطم و یترارح همان
هتددشرددساو یامد رد هیلوا یزاددس
15 هجرد
یتناس تدم هب دارگ 3
نآ لابند هب و هقیقد 35
هتشرساو لماش هخرچ رد یزاس
15 یتناس هجرد تدم هب دارگ
22 لاصتا یامد ،هیناث
رگزاغآ 11 یتناس هجرد تدم هب دارگ
32 یامد رد رگزاغآ طسب ،هیناث 72
یتناس هجرد تدم هب دارگ
12 اث ییاهن طسب ماجنارس و هین
یامد رد رگزاغآ 72
یتناس هجرد تدم هب دارگ
5 هقیقد .دندش هنیهب تلاوصحم صیخشت روظنم هب
اب یقفا زروفورتکلا زاPCR
1adipose triglyceride lipase
2thyroid peroxidase
3insulin-like growth factor
3
زراگآ لژ زا هدافتسا 5
/ 1 یزیمآ گنر اب دصرد DNA Safe Stain
یقفا زروفورتکلا ،دیدرگ هدافتسا )نولک انیس تکرش لوصحم(
تدم هب 1 ژاتلو اب تعاس 12
.دیدرگ ماجنا قاتا یامد رد تلو
3 . ثحب و جیاتن :
زروفورتکلا زراگآ لژ یور رب هدش جارختساDNA
1 راون دوجو دصرد .دهد یم ناشن ار بوخ رایسب تیفیک اب ییاه
جیاتن
تلاوص حم یس ررب زراگآ لژ یور ربPCR
2 هیحان ریثکت هب طوبرم یدناب یوگلا هک داد ناش ن دص رد نوزگا
2 نژ هعطق هبGJA1
252 یبوخ هب یزاب تفج یم اهرگ زاغآ تفج ندوب یص اص تخا دیوم هک یفاض ا تاعطق ریثکت نودب و
.دش اب یاهراون لیلحت و هیزجت
دیمآ لیرکآ لژ اب زروفورتکلا زا لص اح 1
% اب یزیمآ گنر و کت ییاض ف یلکش دنچ زا هدافتس ا اب هرقن تارتین
هتش ر SSCP( یا
رد )
ینژ هاگیاج نوزگا
2 نژ یموب غرمGJA1
اب (ددددش ماجنا تیقفوم لکدددش
1 .) یوگلا جنپ نآ هجیتنرد هب توافتم یپیتونژ
بیترت اب
یناورف 2 / 21
، 22
، 2 / 11
، 2 / 5 و 7 هدهاددشم دددصرد یوگلا .دددش
1 یوگلا و یناوارف نیرتددشیب یاراد 2
نیب رد یناوارف نیرتمک یاراد 5
.دندوب فلتخم یوگلا وگلا نیب طابترا
تفرگ رارق یددسررب دروم فلتخم نینددس رد دددشر تافددص و یپیتونژ یاه
،دن وگلا همه رثا یاه
رد ندب نزو یارب هدددش هدهاددشم 12،32،15
و 12 ( تددسا هدددش راد ینعم یگزور 25
/ 2 P<
نزو رد فلتخم یاهوگلا نیب و .) 125
،
135 ، 122 و 152 ینعم فلاتخا یگزور درادن دوجو یراد
( 25 / P˃2 .) نژ یرامیب اب نوزگا هقطنم ردGJA1
ناسنا رد فلتخم یاه
Jamsheer et al., 2014( )
یلپ .دش شرازگ مس یفروم طس وت هک یا هعلاطم رد
Shahjahon.M et al. 2015( )
غرم یور رب
نژ مددسیفروم یلپ یارب پاک یراجت و نکپ یموب عون راهچ دددش ماجناGJA1
هتخانددشانSNP (CA, TC, CC, AC)
نژ زا
ینعم طابترا هکGJA1 شور اب ،دنتش اد غرم رد دش ر تافص اب یراد
PCR-SSCP ییاس انش
زا لص اح جیاتن یلک روطب .دیدرگ
یم ناش ن قیقحت نیا شور هک دهد
PCR-SSCP هیحان یس ررب رد دوجوم یلکش دنچ هعلاطم یارب
نوزگا 2 GJA1 نژ و طابترا
یم بسانم دشر تافص اب اهنآ .دشاب
لکش 1 پیتونژ یوگلا : نژ یارب هدش هدهاشم یاه
یدنرم یاه غرم تیعمج ردGJA1
4
4 . عبانم
1 - (،یمیحر للها تردق،یمراوج یتاجن ریش درا،شنم ینایک اض ر نیس ح 1312
یموب ناغرم رد یدیلوت تافص یداص تقا یاه شزرا دروآرب .) .ناریا
دلج ییاتسور نارمع و یزرواشک هلجم 3
هرامش 1 صص 11 - 53 .
2 - یزابهش رذآ سیرب
،ص 1312 . یسررب عونت یکیتنژ جنپ تیعمج زا ناغرم یموب ناریا اب هدافتسا زا رگناشن یاه دنچ یلکش زیر هراوهام . یاپ نا
همان یسانشراک
،دشرا هدکشناد یزرواشک هاگشناد .نلایگ
3- Amano K, Ishiguchi M, Aikawa T, Kimata M, et al. (2012). Cleft lip in oculodentodigital dysplasia suggests novel roles forconnexin 43. J. Dent. Res. 91: 38S-44S.
4- Sato S, Ohtake T, Uemoto Y, Okumura Y, et al. (2012). Polymorphism of insulin-like growth factor 1 gene is associated withbreast muscle yields in chickens. Anim. Sci. J. 83: 1-6.
5- Shahjahon et al. (2015).Polymorphisms in GJA1 and their association with growth traits in chicken. Genetics and Molecular Research 14 (4): 18839-18850.
6-Sun Y, Liu R, et al. (2013). Associations of polymorphisms in four candidate genes with carcass and/or meat-quality traits in two meat-type chicken lines. Anim. Biotechnol. 24: 53-65.
7- Nie QH, Fang MX, Xie L, Shen X, et al. (2010). Associations of ATGL gene polymorphisms with chicken growth and fat traits.J.
Appl. Genet. 51: 185-191.
8-Vignal A, Milan D, SanCristobal M and Eggen A (2002). A review on SNP and other types of molecular markers and their use in animal genetics. Genet. Sel. Evol. 34: 275-306.
5
Investigation of GJA1 gene polymorphism and its association with body growth traits in native birds Marandi.
3. Gaffari M
2and , Hashemi A
*
Alizadeh A1
1- MSc, Department of Animal Science, University of Urmia, Urmia, Iran
2- Associate Professor, Department of Animal Science, University of Urmia, Urmia, Iran 3- Assistant Professor, Department of Animal Science, University of Urmia, Urmia, Iran
*Corresponding author: [email protected]
ABSTRACT
This study was conducted to identify the variation of (GJA1) gene exon 2 of the East Azerbaijan native chickens using, polymerase chain reaction (PCR) and single strand conformation polymorphism (SSCP) marker. A number of 200 chickens were randomly chosen from Marandi Native Chickens Breeding Station and blood samples were collected.
DNA were extracted from blood samples in order to amplify a fragment of 254 bp in size from GJA1 gene exon 2.
PCR products were subjected to SSCP analysis. For this purpose, vertical electrophoresis of PCR products was performed on 10% acrylamide gel and 110 V, for 18h. Silver-staining of gels, resulted five genotypic patterns with frequencies of 1(48/2), 2(20), 3(19/2), 4(5/4) and 7.0 respectively. On the basis of obtained results it was revealed that the GJA1 gene had high degree of polymorphism and the relationship between these polymorphisms of ghrelin gene and native chickens economic traits could be assessed in chickens breeding programs.
Keywords: GJA1 gene, Chicken Marandi, Molecular marker, Growth traits, PCR-SSCP
