Всем больным 1 и 2 этапа клинического исследования, которые госпитализированы в экстренном порядке, с острыми хирургическими заболеваниями органов брюшной полости, таких 199 больных в момент поступления в стационар и в ходе предоперационного обследования выполняли стандартный набор лабораторных исследований, согласно клиническим протоколам МЗ РК, включающий в себя клинический анализ крови, группу крови и резус-фактор, RW, биохимический анализ крови, коагулограмму и общий анализ мочи. Пациенты из группы контроля – 5 человек с варикозным расширением вен нижних конечностей, госпитализированы в плановом порядке, обследованы в амбулаторных условиях.
1 Клинический анализ крови
Клинический анализ крови определялся по унифицированной методике.
Подсчет гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, лейкоцитарной формулы, скорости оседания эритроцитов производились на аппарате «Sysmex XS 500i» с автоматическим подсчётом лейкоцитарной формулы (рисунок 4).
Рисунок 4 – Автоматический гематологический анализатор Sysmex XS 500i
2 Биохимический анализ крови
Все биохимические исследования выполнялись на анализаторе турбидиметрический ВА400 (рисунок 5). Производства фирмы BioSystems (Испания). Определяли уровень общего белка, аланин-аминотрансферазы (АЛТ), аспартат-аминотрансферазы (АСТ), билирубина, мочевины, креатинина, амилазы, глюкозы, электролитов (калий, натрий).
Рисунок 5 – Анализатор биохимический турбидиметрический ВА400 3 Коагулограмма
Определение фибриногена в плазме крови, протромбинового времени (ПВ) с последующим расчетом протромбинового индекса (ПТИ) и международного нормализованного отношения (МНО) в плазме крови (ПВ- ПТИ-МНО), активированного частичного тромбопластинового времени (АЧТВ) в плазме крови на анализаторе (рисунок 6).
Рисунок 6 – Автоматизированная система исследования гемостаза ACL ELITE в комплекте с принадлежностями и реагентами производства
фирмы Instrumentation laboratory (США)
4 Исследование общего анализа мочи на анализаторе OLYMPUS (физико- химические свойства с подсчетом количества клеточных элементов мочевого осадка).
2.3.2 Инструментальные методы
К обязательным методам инструментального исследования входили электрокардиограмма, рентгенологическое исследование органов грудной клетки и брюшной полости, ультразвуковое исследование органов брюшной полости, забрюшинного пространства и органов малого таза, эндоскопическое исследование пищевода, желудка и двенадцатиперстной кишки (ДПК), фиброколоноскопия и компьютерная томография органов брюшной полости.
1 Электрокардиограмма (ЭКГ) выполнялась всем пациентам с хирургической патологией участвовавших в исследовании (рисунок 7).
Рисунок 7 – Электрокардиограф 12-канальный с регистрацией ЭКГ в ручном и автомат. режимах мини ЭК 12 Т01-"Р-Д" (141 мм)
2 Обзорное рентгенологическое исследование органов брюшной полости для выявления острой хирургической патологии у больных производились на стационарном цифровом рентген-аппарате с дистанционным управлением Mercury 332 (рисунок 8).
Рисунок 8 – Цифровой рентгенограф Mercury 332
3 Ультразвуковое исследование гепато-дуоденальной зоны, органов брюшной полости, забрюшинного пространства и органов малого таза выполняли на ультразвуковом приборе ALOKA 5000 (рисунок 9).
Рисунок 9 – Аппарат для ультразвукового исследования ALOKA 5000 4 Компьютерную томографию органов брюшной полости выполняли с использованием спирального компьютерного томографа фирмы PHILIPS (рисунок 10).
Рисунок 10 – Компьютерный томограф PHILIPS
5 Эндоскопическое обследование пациентов проводилась на аппарате Olympus EVIS EXERA 180 (рисунок 11).
Рисунок 11 – Видеоэндоскопическая стойка Olympus EVIS EXERA 180 2.4 Специальные методы исследования
Иммуноферментный анализ (ИФА) определялся всем 100 пациентам 2 этапа клинического исследования. Определение sCD14 крови методом хемолюминесцентного ИФА проводилось в лаборатории коллективного пользования НАО «МУК» (Директор НИЦ, PhD Бабенко Д.Б.). Для измерения уровня пресепсина использовали цельную кровь или плазму, собранные стандартной процедурой в пробирки предпочтительно с этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА) или с гепарином. Сыворотка для анализа не использовалась. Образцы цельной крови взятые у пациентов из групп исследования были проанализированы в течение 4 часов после сбора (в течение этого времени пробы находились во льду). Непосредственно перед внесением образца цельной крови в лунку на картридже, кровь аккуратно смешивали в пробирке. Сразу после нанесения образца загружали картридж в прибор и начинали определение уровня пресепсина. Перед использованием образца убеждались, что он не содержит фибриновых нитей и других нерастворимых частиц, в противном случае образец осветляли центрифугированием или фильтрацией. Образцы плазмы хранили до 3 дней при +2-8°C и до 9 месяцев при –20°C или ниже. Если тестирование не предполагалось проводить в течение 3 дней, образцы плазмы замораживали при
–20°C или ниже. Размороженные образцы повторно не замораживались.
Размороженные образцы и образцы, хранившиеся более 12 часов, центрифугировались при 2500-3000 g в течение 10 минут перед тестированием.
Для диагностики уровня D-димера также использовали метод ИФА, так как данный метод является наиболее чувствительным (порог чувствительности ниже 60 нг/мл) и проводился с использованием моноклональных антител и используется в клинике для исключения тромбоза и мониторинга антитромботической терапии, определялось с помощью портативного флуоресцентного анализатора i-CHROMA Reader в условиях КДЛ Областной клинической больницы (рисунок 12).
Рисунок 12 – Портативный флуоресцентный анализатор i-CHROMA Reader Для определения D-димера разработаны антитела к неоантигенным эпитопам на них. Это моноклональные антитела ДД-3В6, DD5, MA8D3, MAb 8- 8G, 54H9 к эпитопам гамма-связей в Д-доменах молекул фибрина. Указанные антитела связываются с D-димерами, содержащими Д-Д-ковалентные связи, но не вступают в реакцию с фибриногеном и растворимыми фибрин-мономерами.
Определение D-димера при помощи таких антител показывает, что в процессе фибринолиза расщепляется именно фибрин, а не фибриноген и фибрин- мономеры. На определение D-димера практически не оказывают влияния техника взятия крови, наличие примеси тромбоцитов, не требуется использование ингибиторов для подавления других факторов. Концентрация D-димера пропорциональна активности фибринолиза и количеству лизируемого фибрина. Этот тест позволяет судить об интенсивности процессов образования и разрушения фибриновых сгустков. D-димеры достаточно долго циркулируют в крови; время их полувыведения составляет более 24 ч.
Повышенная концентрация D-димера может сохраняться в течение нескольких недель после острого тромбоза.
Для определения уровня D-димера использовали цельную кровь или
плазму собранные стандартной процедурой в пробирки с Na3-цитратом (109 ммоль/л или 3,2%) в соотношении 9 частей крови и одной части
антикоагулянта. Непосредственно перед нанесением крови в лунку, кровь аккуратно смешивали в пробирке. Сразу после нанесения образца загружали картридж и начинали тестирование. Пробы хранили в течение 12 месяцев при температуре – 24-27°С.
2.5 Исследование КОС и газов крови
Анализ кислотно-основного состояния (КОС) относится к категории экспресс – диагностики, выполнялась в клинической лаборатории КГП «ОКБ»
УЗ КО. Проводилась в срочном порядке, от результатов которого зависят процедуры, определяющие жизнь или гибель пациента. Современные анализаторы успешно справляются с задачей максимально быстрого получения точных результатов исследования газов крови, электролитов, параметров оксиметрии, метаболитов. Параметры КОС определялись в артериальной крови в течении 2-5 минут. На анализаторе кислотно-щелочного состояния (КЩС) Gem Premier проводились исследования газового (рО2, рСО2, рН), электролитного (К, Na, Ca) и метаболитного (глюкоза, лактат) состава крови у всех 100 пациентов 2 этапа клинического исследования (рисунок 13).
Рисунок 13 – Анализатор КЩС Gem Premier