© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2018 УДК 616.61-089.881
М. М. Тусупбекова1, Н. Т. Абатов1, К. Р. Абугалиев2, И. Н. Альбертон3, А. Н. Абатова1, Е. М. Асамиданов1
МОРФОМЕТРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ОКРУЖ АЮ Щ ЕЙ ТКАНИ ПОЧКИ С ПРИМЕНЕНИЕМ ДЕЦЕЛЛЮ ЛЯРИЗИРОВАННОЙ КСЕНОБРЮШИНЫ И БРЮШИНО-ФАСЦИОНАЛЬНОГО ЛОСКУТА ПРИ МОДЕЛИРОВАНИИ НЕФРОПЕКСИИ У КРЫС
^Карагандинский государственный медицинский университет (Караганда, Казахстан), 2Национальный научный центр онкологии и трансплантологии (Астана, Казахстан), 3Медицинский центр Шаарей Цедек (Иерусалим, Израиль)
В статье представлен анализ окружающей ткани почки с применением децеллюляризированной ксе- нобрюшины и брюшино-фасционального лоскута при моделировании нефропексии путем проведения морфо- метрического анализа на лабораторных животных. Приведенные в статье результаты наглядно демонстрируют, что наиболее рациональным методом хирургического лечения больных является нефропексия с использованием децеллюляризированной ксенобрюшины.
Ключевые слова: децеллюляризированная ксенобрюшина, морфометрия, имплантат, брюшино-фасцио- нальный лоскут, нефропексия
Нефроптоз является весьма распростра- ненным патологией забрюшинного простран- ства, выявляется у 1,54% женщин и 0,12%
мужчин [4]. Широкое распространение полу- чил метод нефропексии по методу Ривуара - Пытеля - Лопаткина [1]. Однако нефропексия по данному методу имеет свои недостатки, по- мимо высокой травматизации во время прове- дения операции пациенты предъявляют жало- бы на боли в пояснично-подвздошной области.
Перспективными являются биологиче- ские имплантаты, получаемые из донорского материала животного и человека с применени- ем технологий тканевой инженерии, которая представляют собой внеклеточный матрикс (ехігасеііиіаг таігіх) (ЕСМ) [7]. Несмотря на прогресс изучения биосовместимых материа- лов [1, 2] в реконструктивной урологии, оста- ются открытыми вопросы постимплантацион- ных осложнений, таких как болевой синдром и фиброз. В доступной литературе не встрети- лось данных о применении децеллюляризиро- ванной ксенобрюшины при нефропексии, что обусловило проведение представленного ис- следования.
Цель работы - сравнительный анализ морфометрических показателей имплантации децеллюляризированной ксенобрюшины и брю -шино-фасционального лоскута в околопочеч- ную ткань крыс в поздние сроки эксперимента.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Проведен сравнительный анализ резуль- татов экспериментального исследования ис- пользования биологического имплантата де- целлюляризированной ксенобрюшины крупно- го рогатого скота и брюшино-фасционального лоскута на экспериментальных животных - 48
белых крысах обоего пола одинаковой массой.
Животные были распределены в 2 группы по 24 особи случайным образом, каждая группа соответствовала применяемому имплантату.
Внутри каждой группы животных делили на 3 равные подгруппы в зависимости от срока экс- позиции и выведения животного из экспери- мента - 30, 90 и 180 сут. После завершения эксперимента материал забирался для пато- морфологического исследования и проводился по общепринятой методике для обработки ги- стологического материала [5, 9]. После прове- дения парафиновых срезов толщиной 4-5 мик- рон материал окрашивали гематоксилином и эозином.
Морфометрический анализ клеточного инфильтрата осуществлялся с помощью мик- роскопа Атсіити5 ХТ с лазерным микродиссек- тором в 300 клетках при 400-кратном увеличе- нии в репрезентативном участке между вне- клеточным матриксом ксенобрюшины и тканя- ми почки, вне шовного материала.
Статистическую обработку данных про- водили методом вариационной статистики с вычислением для каждого показателя средней величины (М), стандартного отклонение (5й).
Значимость различий между исследуемыми группами определена статистическими метода- ми с помощью непараметрическим критериев:
однорангового дисперсионного анализа (А^О-
^А), критерия Манна-Уитни для независимых выборок. Уровень значимости различий - р<0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Как известно, основную массу юной со- единительной ткани составляют гранулоцитар- ные лейкоциты, лимфоциты, макрофаги, плаз-
Таблица 1 - Средняя и стандартное отклонение значений в морфометрии децеллюляризованной ксенобрюшины
Срок Децеллюляризованная ксенобрюшина
(сут) гранулоциты лимфоциты плазматические Макрофаги фибробласты ангиогенез (М±5Э) (М ± 5Э) клетки (М ± 5Э) (М ± 5Э) /фиброциты
(М ± 5Э)
(М ± 5Э) 30 24,25 ±8,76 58,25 ±1,15 15,37± 5,65 40,625±16,54 123,8±40,2 5,0±2,2 90 7,37±3,37 23,875±8,30 7,75±3,88 51±6,78 173,50±12,92 8,0±2,3 180 6,12 ± 3,18 17,125±3,68 3,125± 1,88 35,75±8,58 193,37±8,89 11,25±2,12 Таблица 2 - Средняя и стандартное отклонение значений в морфометрии брюшинно-фасциальный лоскут
Срок Брюшинно-фасциальный лоскут
(сут) гранулоциты лимфоциты плазматические Макрофаги фибробласты ангиогенез (М±5Э) (М ± 5Э) клетки (М ± 5Э) (М ± 5Э) /фиброциты
(М ± 5Э)
(М ± 5Э) 30 24,25±8,76 58,25±21,15 13,5±5,23 44,12± 14,9 165,25± 20,91 23,0±5,2 90 7,37±3,37 23,875± 8,30 8,75±1,28 37,12 ±12,9 189,87± 10,73 13,5±4,2 180 6,12±3,18 17,125± 1,30 3,37±2,13 39,50±8,33 194,25±9,88 15,0±4,4 матические клетки и стромальные клетки, так-
же новообразованные сосуды капиллярного типа. Проведен морфометрический анализ ре- зультатов оценки средних значений клеточно- го инфильтрата в репрезентативных участках контакта ткани почки децеллюляризованной ксенобрюшины (ДеКБ) и брюшино-фасцио- нального лоскута (БФ-л) (табл. 1, 2).
При морфометрическом анализе средних значений клеточных инфильтратов в месте контакта использованных материалов с окру- жающей тканью почек крыс установлено, что в группе с использованием брюшинно-фасци- ального лоскута крыс отмечается незначитель- ное увеличение всех видов клеточных инфиль- тратов по сравнению с группой животных, у которых применялся гетерогенный биологиче- ский имплантат - децеллюляризованная ксе- нобрюшина.
На 30 сут экспозиции в основной группе с применением децеллюляризованной ксено- брюшины происходило увеличение количе- ственного эквивалента стромальных клеток, синтезирующих коллагеновые волокна, с по- степенным увеличением количества новообра- зованных сосудов, отмечена стадийно- специфическая смена этапов регенерации по сравнению с брюшинно-фасциальным лоску- том, что свидетельствует о завершении созре- вания молодой соединительной ткани на 30 сут экспозиции в группе с имплантацией био- логического материала (рис. 1). При морфо- метрическом анализе в двух исследуемых группах достоверных отличий в среднем коли- честве плазматических клеток (рис. 2) не вы-
явлено.
На 30 сут в контрольной группе регис- трировалось достоверное различие средних значений гранулоцитов (рис. 3), лимфоцитов (рис. 4), стромальных клеток (рис. 1) и сред- них значений количества новообразованных сосудов в месте контакта брюшинно-фасци- ального лоскута и ткани почек крыс (табл. 1, табл. 2), что свидетельствует о прогрессии пролиферативной реакции.
Данный факт свидетельствует, что кон- такт макрофагов с чужеродным материалом приводит к их активации. Макрофаги, помимо противовоспалительных свойств, обладают также репаративными свойствами, вырабаты- вая ^ЕСҒ, который стимулирует процесс ан- гиогенеза и образование грануляционной тка- ни [8]. Соответственно, в группе с применени- ем децеллюляризованной ксенобрюшины наблюдался пик количества средних значений макрофагов на 90 сут экспозиции с последую- щим их уменьшением (рис. 5), что свидетель- ствует об окончании пролиферации стромаль- ных клеток, то есть на границе ткань - им- плантат не происходило образования фиброза и не отмечалось процесса инкапсулирования почки крыс. Снижения количества средних значений макрофагов после 90 сут и на 180 сут экспозиции свидетельствует о биодеграда- ции биоимплантата в месте контакта с тканью почек с образованием полноценной соедини- тельной ткани.
По мнению некоторых авторов, макро- фаги тормозят активацию и пролиферацию Сй4+ лимфоцитов и способствуют элиминации
Рисунок 1 - Среднее значение стромальных Рисунок 3 - Среднее значение гранулоцитов в клеток в группах сравнения (р=0,00003) группах сравнения (р=0,00001).
лим ф оц ит
Рисунок 2 - Среднее значение плазматических Рисунок 4 - Среднее значение лимфоцитов в клеток в группах сравнения (р=0,00000) группах сравнения (р=0,0005).
Т-клеток [6]. Соответственно, в группе с при- менением децеллюляризованной ксенобрюши- ны на 90 сут отмечено перекрестное увеличе- ние инфильтрации макрофагов и снижение лимфоцитарной инфильтрации. Антигенная стимуляция прямо пропорциональна количе- ству лимфоцитов, другими словами, не генери- рует геперэргические иммунные реакции на имплантацию.
В отличие от основной группы с приме- нением биологического имплантата, уже на 180 сут экспозиции с использованием брюшин- но-фасциального лоскута количество стро- мальных клеток (рис. 1), лимфоцитов (рис. 5) и ангиогенеза (рис. 6) достоверно преоблада- ет над другими клетками инфильтрата, что характерно для хронического процесса и про- лиферации стромальных клеток.
Результаты исследования показали, что в группе с применением децеллюляризован- ной ксенобрюшины наблюдался наиболее ран- ний и равномерный переход с достоверно меньшим количеством клеток воспалительного инфильтрата вокруг ткани почки к 30 сут, в отличие от другого использованного материа- ла - брюшинно-фасциального лоскута, где ин- тенсивность клеточного инфильтрата отмече- на к 90 сут. По сравнению с группой, в кото- рой использовался брюшинно-фасциальный лоскут, наибольшее количество новообразо- ванных сосудов регистрировалось на 30 сут экспозиции, что характеризует выраженный процесс регенерации с инфильтрацией стро- мальных клеток.
В обеих исследуемых группах отмечены значимые отличия в среднем количестве плаз- матических клеток и лимфоцитов. Известно, что плазматические клетки продуцирует гамма -глобулины и антитела, участвующие в имму- ногенезе, что обусловливает физиологический процесс регенерации. Результаты, полученные в обеих группах свидетельствуют, что имплан- таты являются биосовместимыми и не прово- цируют геперэргической иммунной реакции в ткани.
Результаты морфометрического исследо- вания показали, что при использовании биоло- гического имплантата - децеллюляризованной ксенобрюшины - в фиброзной капсуле почки крыс происходит с временно-стадийной сме- ной этапов регенерации формирование нежной волокнистой ткани с последующим формированием зрелой полноценной соедини- тельной ткани в ее начальных стадиях в отли- чие от контрольной группы с использованием брюшинно-фасциального лоскута, где эти про- цессы происходят на 180 сут и характеризуют- ся хроническим процессом пролиферации. Од- нако как при имплантации брюшинно-фасци- ального лоскута, так и децеллюляризованной ксенобрюшины, не выявлены деструктивные и воспалительные изменения в контакте ткань - имплантат. Результаты исследования свиде- тельствуют, что имплантаты являются биосов- местимыми и не провоцируют процесса гепер- эргической иммунной реакции у крыс.
Конфликт интересов. Конфликт инте- ресов не заявлен
ЛИТЕРАТУРА
1 Абатов Н. Т. Особенности патоморфо- логии окружающей ткани с применением био- логических имплантатов в эксперименте /Н. Т.
Абатов, М. М. Тусупбекова, И. Н. Альбертон //
МесісаІ іе ш м . - 2016. - №3 (164). - С. 129.
2 Абугалиев К. Р. Биологическое покры- тие ран и ожогов /К. Р. Абугалиев, В. Б. Огай, Г. А. Данлыбаева Патент №30382 от19.08.2015
3 Пытель А. Я. Об операции іігоіг и ее модификации наиболее физиологичных спосо- бах нефропексии /А. Я. Пытель, Н. А. Лопат- кин //Урология и нефрология. - 1966. - №1. - С. 3-7.
4 Урология /Под ред. Н. А. Лопаткина. - М.: Медицина, 1995. - 496 с.
5 Тусупбекова М. М. Клиническая пато- морфология.- Алматы:Эверо,2012.- С.115-120.
6 А^сіс 5. Нитап суіотедаіо^іги5 іпіегіеи- кіп-10 роіагі2е5 топосуіе5 іош гс а сеасіш іес М2с рһепоіуре іо герге55 һо5і ітти п е ге5роп5- е5 /5. А^сіс, 3. 2. Сао, В. Мс5һаггу //Р. 3. ^!ІОЬ - 2013. - V. 87 (18). - Р. 10273-10282.
7 Ьоре2-Сапо М. ВіоІодісаІ 5саҒҒоіс5 іп ге- рагаіме 5игдегу Ғог аЬсотіпаІ таІІ һегпіа5 /М.
Ьоре2-Сапо, М. АгтепдоІ-Сагга5со //Ат. 3. 5игд.
- 2012. - V. 203. - Р. 555.
8 5ріІІег К. Ь. Тһе гоіе оҒ тасгорһаде рһе- поіуре іп ^а5сиіагі2аііоп оҒ іі55ие епдіпеегіпд 5саҒҒоіс5 /К. Ь. 5ріІІег, і. і. АпҒапд, К. 3. 5ріІІ- ег //ВіотаіегіаІ5.-2014.-^.35(15).-Р.4477-4488.
9 Ти55ирЬеко^а М. Тһе тогрһотеігіс апаіу5і5 оҒ іһе сесеііиіагі2ес Ьо^іпе-сегмес регі- іопеит іп іһе перһгореху аі іһе еагіу 5іаде5 оҒ іһе ехрегітепі /М. Ти55ирЬеко^а, N. АЬаіо^, 3.
N. АІЬегіоп //Еиг. 5игд. Іе5.- 2017.^.58.-Р. 45.
КЕҒЕКЕМСЕ5
1 АЬаІхм N. Т. О5оЬеппо5іі раіотогҒоІо- діі окги2һа]и5һһе] ікапі 5 ргітепепіет Ьіоіод- ісһе5кіһ ітріапіаіхм V ^ек^регітепіе /^ Т. АЬа- іо^, М. М. Ти^ирЬекш, I. N. АІ'Ьегіоп //МесісаІ іе^іет. - 2016. - №3 (164). - 5. 129.
2 АЬидаІіе^ К. і. Віоіодісһе5кое рокгуііе гап і о^һодо^ /К. і. АЬидаІіе^, V. В. Ода], С. А.
^апІуЬае^а Раіепі №30382 оі 19.08.2015
3 РуіеІ' А. За. ОЬ орегасіі ім оіг і ее тос- іҒікасіі паіЬоІее Ғі2іоіодісһпуһ 5ро5оЬаһ пеҒго- рек5іі /А. За. РуіеІ', N. А. Ьораікіп //Угоіоді]а і пеҒгоІоді]а. - 1966. - №1. - 5. 3-7.
4 Угоіодгіа /Рос гес. N. А. Ьораікіпа. - М.; Месісіпа, 1995. - 496 5.
5 Ти5ирЬеко^а М. М. КІіпісһе5ка]а раіо- тогҒоІоді]а.- АІтаіу; Зе^его, 2012. - 5. 115-120.
6 А^іс 5. Нитап суіотедаіомги5 іпіег- Іеикіп-10 роіагі2е5 топосуіе5 іотагс а сеас- іш іе с М2с рһепоіуре іо герге55 һо5і ітти п е ге5роп5е5 /5. А^іс, 3. 2. Сао, В. Мс5һаггу //Р. 3.
VІіО^. - 2013. - V. 87 (18). - Р. 10273-10282.
7 Ьоре2-Сапо М. ВіоІодісаІ 5саҒҒоіс5 іп герагаіме 5игдегу Ғог аЬсотіпаІ таІІ һегпіа5 /М.
Ьоре2-Сапо, М. АгтепдоІ-Сагга5со //Ат. 3. 5игд.
- 2012. - V. 203. - Р. 555.
8 5ріІІег К. Ь. Тһе гоіе оҒ тасгорһаде рһепоіуре іп ^а^сиіагі2аііоп оҒ іі55ие епдіпеегіпд 5саҒҒоіс5 /К. Ь. 5ріІІег, і. і. АпҒапд, К. 3. 5ріІІ- ег //ВіотаіегіаІ5.-2014.-^.35(15).-Р.4477-4488.
9 Ти55ирЬеко^а М. Тһе тогрһотеігіс апаіу5і5 оҒ іһе сесеііиіагі2ес Ьош е-сегш с регі- іопеит іп іһе перһгореху аі іһе еагіу 5іаде5 оҒ іһе ехрегітепі /М. Ти55ирЬеко^а, N. АЬаіо^, 3.
N. АІЬегіоп //Еиг. 5игд. Іе5.- 2017.^.58.-Р. 45.
Поступила 24.04.2018 М. М. Ти^^ирЬеко^а1, N. Т. АЬаіо\1 К Р. АЬидаИуеV2, I. N. АІЬегіоп3, А. N. А Ь а о а 1, Үе. М. А5атіс1апо\1
МОРРНОМЕТНСА^АІ. Ү55 О Ғ 1550Е О Ғ ТНЕ КЮ^ЕҮ Ш ТНАРРПСА ТЮ^ О ҒО ЕСЕІШ ІАН ІЕО ВОҮШ -ОЕИҮЕО РЕНТО^ЕІІМА^й РЕЯТО^ЕАІ-ҒА5аАІ ҒІАРАТ^ ЕРН ЯО РЕХҮМ О Ә ЕІШN РАТ5
1 Кагадапс/а 5 іа е тес/ісаі ипКег5ііу (Кагадапс/а, КаIаI<һ5іап),
2Ш ііопаІ 5сіепііИс сепіег оҒ опсоіоду апс! ігапзріапіоіоду (Азіапа, Каакһ^іап), 3Мес!ісаІ сепіег 5һаагеі Тесіек р е гта /е т, 5гаеі)
Тһе рарег рге5епі5 ап апаіу5і5 оҒ іһе 5иггоипсіпд іі55ие оҒ іһе кіспеу иііһ іһе и5е оҒ а СесеІІиІа^іIеС ЬоҮпе-йегмей регііопеит апс а регііопеаі-Ға5сіаі Ғіар іп тойеііпд перһгореху Ьу регҒогтіпд то гр һ о те ігіс апаіу5і5 оп ІаЬогаіогу апітаІ5.
Тһе ге5иіі5 рге^епіей іп іһе агіісіе сіеагіу Йетоп5ігаіе іһаі іһе т о 5 і гаііопаі т е іһ о с оҒ 5игдісаі іг е а іт е п і оҒ раііепі5 і5 перһгореху иііһ іһе и5е оҒ СесеІІиІа^іIеС ЬоҮпе-йегмей регііопеит.
Кеу иогй5; СесеІІиІа^іIеС ЬоҮпе-йегмей регііопеит, т о гр һ о те ігу , ітріап і, регііопеаі-Ға5сіаі ҒІар, перһгореху
М. М. Тусупбекова1, Н. Т. Абатов1, К Р. Абугалиев2, И. Н. АльбертонГ, А. Н. Абатова1,Е М. Асамиданов1 ЕГЕУҚҰЙРЫҚТАРДАҒЫ НЕФРОПЕКСИЯНЫ МОДЕЛДЕУ КЕЗІНДЕДЕЦЕЛЛЮЛЯРЛЫ КСЕНОІШПЕРДЕ МЕН ІШПЕРДЕ-ФА СЦИОНАЛДЫ КЕСІНДІНІҚОЛДАНУМЕН БҮЙРЕК МАҢЫНДАҒЫ ТІНГЕ МОРФОМЕТРИЯЛЫҚ ТАЛДАУ
^Қарағанды мемлекеттік медицина университеті (Қара
ғ
анды, Қазақстан),2Онкология және трансплантология ұлттық ғылыми орталығы (Астана, Қазақстан), 3Медициналық орталық Шаарей Цедек (Иерусалим, Израиль)
Мақалада зертханалық жануарларға морфометриялық талдау жүргізу жолымен нефропексияны моделдеу кезінде децеллюляризирлы ксеноішпердені және ішперде-фасционалды кесіндіні қолданумен бүйрек маңындағы тінге талдау ұсынылған. Мақалада келтірілген нәтижелер науқастарды хирургиялық жолмен емдеудегі барынша оңтайлы әдіс децеллюляризирлы ксеноішпердені қолданумен нефропексия болып табылатынын анық көрсеткен.
Кілт сөздер: децеллюлярланған ксенобрюшина, морфометрия, имплантат, брюшино-фасционалды лоскут, нефропексия
