___________________________________________________________________________________________
Kaedah penentuan Glifosat dan Ampa dalam minyak sawit
Loh Saw Hong1, Md. Pauzi Abdullah1 dan Ainie Hj. Kuntom2
1Pusat Pengajian Sains Kimia & Teknologi Makanan, Fakulti Sains & Teknologi, Universiti Kebangsaan Malaysia, 43600 Bangi, Selangor
2Malaysian Palm Oil Board (MPOB), 43000 Kajang, Selangor
(Received 6 September 2000)
Abstract. A method of analysis of glyphosate (gly) and its metabolite aminomethylphosphonic acid (AMPA) in palm oil was developed with the emphasis on optimization of HPLC conditions and clean-up procedure. Temperature of post column, flow rate and concentration of hypochlorite were optimized in analysing glyphosate and AMPA. The method involved extracting the residue from oil using water and chloroform and C18cartridge clean-up. Glyphosate and AMPA were eluted with 5 ml 80%
methanol and the sample was concentrated followed by high performance liquid chromatography (HPLC) analysis using fluorescence detector. The average recovery for both components from spiked oil samples were more than 80% for levels between 0.01 - 1.00 µg/g . The detection limit and estimated method detection limit were 0.025 µg/g and 0.005 µg/g respectively.
Abstrak. Satu kaedah analisis glifosat (gly) dan metabolitnya asid aminometilfosfonik (AMPA) dalam minyak sawit telah diperkembangkan dengan penekanan kepada pengoptimuman keadaan kromatografi cecair prestasi tinggi (KCPT) dan kaedah penyediaan sampel. Suhu pos-turus, kadar alir dan kepekatan hipoklorit telah dioptimumkan untuk analisis gly dan AMPA.
Lapisan minyak dalam sampel dikeluarkan melalui pengekstrakan dengan kloroform dan kemudian dijerapkan kepada katrij C18 yang sebelum itu telah dibilas dengan metanol. Sebanyak 5 ml 80% metanol digunakan sebagai pengelusi untuk mengeluarkan gly dan AMPA yang terjerap pada katrij itu. Hasil elusi ini kemudian dipekatkan dan ditentukan dengan KCPT melalui proses tindakbalas pos-turus dengan reagen o-ftalaldehid-merkaptoetanol (OPA-MERC) dengan menggunakan pengesan pendarfluor. Purata pengembalian semula bagi sampel 0.01 - 1.00 µg/g untuk gly dan AMPA masing-masingnya adalah > 80%. Had pengesanan untuk kaedah KCPT adalah 0.025 µg/g dan had pengesanan kaedah dijangka akan mencapai 0.005 µg/g.
___________________________________________________________________________________________
Key words: glyphosate, AMPA, palm oil, HPLC
Pendahuluan
Glifosat atau N-(fosfonometil)glisina merupakan bahan aktif dalam racun rumpai Roundup (jenama perdagangan) yang diperkenalkan oleh Monsanto (M) Sdn. Bhd. pada tahun 1971. Pada tahun 1975, Roundup mula dijualkan di seluruh Malaysia khususnya bagi tujuan pengawalan rumpai dalam ladang kelapa sawit dan getah [1].
Glifosat adalah racun rumpai yang mempunyai spertrum yang luas, tidak selektif dan digunakan pada peringkat pos-muncul untuk pengawalan rumpai.
Racun rumpai ini bersifat sistemik dimana ia diserap dengan cepat terutamanya melalui daun dan diangkut ke seluruh tumbuhan partikel tanah, dengan dan seterusnya membunuh tumbuhan ini. Apabila glifosat bergabung dengan cepatnya ia akan diserap oleh partikel tanah dan seterusnya mengalami penguraian mikrob kepada metabolit, ammonia dan karbon dioksida. Oleh hal demikian, glifosat yang digunakan pada peringkat pos muncul tidak akan menimbulkan masalah fitotoksik kepada tanaman [2]. Sifat-sifat
tersebut serta ketoksikan mamalia yang rendah telah menjadikan glifosat semakin banyak digunakan sebagai racun rumpai. Penggunaannya dalam ladang kelapa sawit dijangka akan meningkat daripada 7.7 million liter pada 1998 kepada 11.9 million liter pada 2020 [3]. Metabolit utama apabila glifosat terurai dalam tanah adalah asid aminometilfosfonik (AMPA) yang juga terbiodegradasi.
Glifosat merupakan herbisid yang sangat aktif;
ia berupaya mencacatkan tanaman dengan amaun yang kecil sahaja [4]. Ia dapat mengawal rumpai baik sebelum penanaman mahupun selepas penuaian dalam ladang khususnya ladang kelapa sawit [5]. Pada tahun 1978, EPA telah menyarankan had sisa maksimum glifosat dan AMPA yang dibenarkan dalam minyak kelapa sawit sebesar 0.1 ppm atau 0.1 µg/g [1]. Oleh itu, perhatian harus diambil untuk mengelakkan herbisid ini daripada terdapat pada kelapa sawit. Di samping itu, kesan dan tahap sisa yang tertinggal pada persekitaran pertanian selepas penggunaannya juga harus dikaji untuk memastikan ia tidak membawa sebarang masalah pencemaran.
Pencemaran glifosat di alam sekitar selalunya rendah dan susah dikesan. Hal ini menyebabkan analisis sisanya menjadi susah. Glifosat mempunyai sifat berkutub dan kelarutan dalam air yang tinggi.
Kekutubannya yang tinggi mewujudkan masalah dalam pemilihan reagen kimia untuk meningkatkan kemeruapannya bagi tujuan analisis kromatografi gas (KG). Begitu juga bagi AMPA yang mempunyai 2 kumpulan berfungsi berkutub. Banyak pendekatan yang diambil untuk menganalisis glifosat dan AMPA telah dihad oleh sifat kedua-duanya yang hanya larut dalam air [7]. Hal ini telah menjadikan kaedah kromatografi cecair prestasi tinggi (KCPT) semakin popular digunakan untuk menganalisis sisa glifosat dan AMPA dalam sampel alam sekitar. Teknik KCPT boleh digunakan melalui teknik terbitan pra-turus ataupun pos-turus. Teknik pra-turus tertumpu kepada terbitan berpendarflour dengan reagen 9-fluro-2,4- dinitrobenzena dan p-toluena sulfoniklorida. Bagi teknik pos-turus, pembentukan terbitan dengan reagen o-ftalaldehid-merkaptoetanol sering digunakan.
Kesemua teknik ini memerlukan pengesanan di dalam julat nampak dan pendarfluor. Daripada teknik-teknik di atas, teknik menggunakan terbitan berlabel flurogenik pos-turus dengan pengesanan pendarflour paling digemari [6].
Pelbagai kaedah penentuan glifosat dan AMPA telah dikaji dan ini termasuklah penentuan kedua-dua bahan ini dalam sampel air, tanah dan tanaman.
Memandangkan glifosat telah banyak digunakan dalam ladang kelapa sawit, satu kaedah bagi penentuan glifosat dan AMPA dalam matrik minyak sangat diperlukan. Setakat ini, hanya 2 kajian yang pernah melaporkan kaedah penentuan gly dan AMPA dalam minyak. Ainie Hj. Kuntom et al.[3] pernah melaporkan kaedah ini dan mencapai pemulihan semula glifosat dalam julat yang besar iaitu antara 68.5 - 101.1% dengan menggunakan KCPT pra-turus.
Manakala Alferness, P. L. et al. [2] pula mencapai pemulihan gly dan AMPA setinggi 86% dengan menggunakan KG dimana terbitan meruap perlu dihasilkan terlebih dahulu sebelum disuntik ke dalam KG. Objektif utama dalam kajian ini adalah untuk memperkembangkan satu kaedah yang senang dan sensitif dalam penentuan glifosat dan AMPA dalam matrik minyak dengan penekanan pada proses pengekstrakan dan pembersihan. Penentuan secara kuantitatif akan dijalankan dengan menggunakan KCPT melalui tindakbalas pos-turus dengan reagen o- ftalaldehid-merkaptoetanol (OPA-MERC) dan pengesan pendarfluor.
Bahan Dan Kaedah Bahan-bahan Kimia.
Hablur glifosat (gly) dengan ketulenan 97.5%
diperolehi dari Labor Dr. Ehrenstorfer-Schäfers.
AMPA dengan ketulenan 99% diperolehi dari Sigma.
Bahan-bahan kimia lain yang digunakan adalah potasium dihidrogen ortofosfat (AJAX Chemicals), natrium klorida (J.T. Baker), dinatrium tetraborat (BDH Chemicals), ftalaldehid (Fluka), 2- merkaptoetanol (MERCK) dan kalsium hipoklorit (MERCK). Pelarut-pelarut yang digunakan adalah metanol (J.T. Baker), kloroform (B&J) dan diklorometana (MERCK). Semuanya daripada gred KCPT. Katrij C18 yang digunakan adalah jenis 200 mg daripada Chromabond.
Instrumen.
Dua sistem KCPT telah digunakan dan dibandingkan prestasinya. Pertama, sistem KCPT Waters yang terdiri daripada tiga pam model 510, 501 dan 590, dua gegelung tindakbalas (RC1 dan RC2), dua penyambung berbentuk T (MT1 dan MT2), pemanas turus, injap Rheodyne (Model 7060) dengan gelung sampel 100 3l, pengesan pendarfluor (Waters 470), satu sistem reagen pos-turus dan satu injap pengsuisan. Sistem ini dikawal sepenuhnya oleh pengisian komputer Waters Maxima 820 melalui suatu modul antaramuka (SIM). Fungsi injap pengsuisan turus adalah untuk membenarkan kemasukan hipoklorit semasa kehadiran glifosat supaya ianya dapat dioksidakan. Injap ini juga berfungsi untuk menahan kemasukan hipoklorit semasa kehadiran AMPA untuk mengelakkan ianya dioksidakan.
Kedua, sistem KCPT Waters ini termasuklah pam dari Waters Reagent Manager, pam model 600E, injap Rheodyne dengan gelung sampel 20 µl, pengesan pendarfluor model 474, pemanas turus dan satu sistem reagen pos-turus. Sistem ini juga dikawal oleh pengisian komputer Waters Maxima 820 tanpa melalui SIM. Turus analisis yang digunakan bagi kedua-dua sistem ini terdiri daripada turus penukar kation PRP-X400 (7 µm), 250 mm x 4.1 mm (i.d) yang diperolehi daripada Hamilton. Pengesanan pendarfluor adalah pada 340 nm (pengujaan) dan 455 nm (pemancaran). Perbezaan ketara kedua-dua sistem KCPT ini ialah ketiadaan injap pengsuisan bagi sistem kedua. Ini bermakna larutan hipoklorit dialirkan sepanjang analisis gly dan AMPA dijalankan.
Penyedian Larutan untuk Analisis KCPT.
Larutan fasa bergerak, larutan pengoksida / hipoklorit dan larutan OPA-MERC yang disediakan adalah mengikuti kaedah Abdullah et al. [6] kecuali dinatrium tetraborat yang terkandung dalam larutan OPA-MERC yang disediakan dalam kajian ini adalah 19.0685 g. Larutan yang telah disediakan perlu dituras melelui 0.45 µm penuras membran dan dinyahgaskan.
Penyediaan Larutan Piawai.
Gly dan AMPA masing-masingnya sebanyak 0.0100g, dilarutkan dalam 50 ml air suling ternyahion untuk menghasilkan kepekatan 200 µg/g. Satu siri larutan campuran Gly dan AMPA dengan kepekatan 1.000 µg/g, 0.500 µg/g, 0.250 µg/g, 0.100 µg/g, 0.050 µg/g dan 0.025 µg/g disediakan dengan kaedah pencairan biasa.
Pemulihan Semula Glifosat dan AMPA daripada Minyak Sawit.
Sampel minyak kelapa sawit yang mengandungi gly dan AMPA disediakan dengan memasukkan larutan stok piawai gly dan AMPA dalam metanol. Larutan piawai sebanyak 40 µg/g disediakan dalam metanol.
Sebanyak 500 µl, 50 µl dan 5 µl daripada larutan piawai 40 µg/g tersebut dimasukkan ke dalam 20 g minyak sawit untuk menghasilkan masing-masingnya 1.00, 0.10 dan 0.01 µg/g sampel terpaku. Sampel ini kemudian digoncang selama 30 minit untuk memastikan pencampuran yang seragam.
Ekstraksi.
Minyak sawit yang telah dipakukan diekstrak dengan menggunakan 20 ml air suling ternyahion. Setelah penambahan air suling ternyahion ini, sampel ini digoncang selama 1 jam untuk memastikan segala gly dan AMPA telah lengkap diekstrak ke dalam air.
Sebanyak 25 ml kloroform ditambah ke dalam sampel tersebut dan dikacau selama 20 minit dan diputar selama 10 minit pada kelajuan 1000 ppm. Lapisan
akueus kemudian dipisahkan untuk pembersihan yang selanjutnya.
Pembersihan.
Ekstrak lapisan akueus tadi dijerapkan ke dalam katrij C18 yang sebelum itu telah dibilas dengan 4 ml metanol. Sebanyak 5 ml 80% metanol digunakan sebagai pengelusi untuk mengeluarkan gly dan AMPA yang terjerap pada katrij itu. Hasil elusi ini kemudian dipekatkan dengan penyejat berputar untuk mengeluarkan pelarut yang berlebihan sebelum ditentukan dengan KCPT.
Penggunaan Semula Katrij C18.
Katrij C18 boleh diguna semula selepas elusi dengan melalukan 10 ml diklorometana untuk mengeluarkan lapisan minyak yang terjerap pada katrij.
Hasil Dan Perbincangan
Pengoptimuman keadaan KCPT untuk analisis glifosat dan AMPA .
Kaedah KCPT yang digunakan untuk menganalisis glifosat dan AMPA berasaskan kepada kaedah yang telah dikembangkan oleh Abdullah et al. [6]. Walau bagaimanapun, suhu pos-turus, kadar alir dan kepekatan hipoklorit telah dioptimum semula dalam penyelidikan ini untuk memperolehi peleraian dan had pengesanan yang lebih baik.
0 200000 400000 600000 800000 1000000 1200000 1400000
40 41 42 43 44 45 46
Suhu (oC)
Keamatan pendarfluor (uvs)
Gly AMPA
Rajah 1: Graf keamatan pendarfluor vs suhu bagi sistem KCPT kedua.
Jadual 1: Kadar alir yang dioptimumkan untuk analisis glifosat dan AMPA.
Parameter yang dioptimumkan Sistem Pertama Sistem Kedua
Kadar alir fasa bergerak (ml/min) 0.4 0.5
Kadar alir pengoksida / hipoklorit (ml/min) 0.3 0.2
Kadar alir OPA-MERC (ml/min) 0.2 0.3
0 1000000 2000000 3000000 4000000 5000000 6000000
0 5 10 15 20
Kepekatan hipoklorit (ug/g)
Keamatan pendarfluor (uvs)
Gly AMPA
Rajah 2: Graf keamatan pendarfluor vs kepekatan hipoklorit bagi sistem KCPT kedua.
Suhu pada gegelung tindak balas pertama (RC1) Sistem KCPT pertama dan kedua sama-sama menunjukkan keputusan yang lebih kurang sama terhadap kepentingan suhu yang diperlukan untuk mengoksidakan glifosat kepada glisina. Rajah 1 iaitu graf keamatan pendarfluor bagi sistem KCPT kedua melawan suhu merupakan satu bentuk plato dimana keamatan pendarfluor kedua-dua komponen tidak banyak berbeza atau berubah dalam julat 41 - 43oC.
Bagi sistem pertama keadaan plato ini dicapai pada julat 38 -39oC. Keputusan ini menunjukkan bahawa suhu dalam julat tersebut adalah sesuai untuk mengoksidakan glifosat dalam analisis ini. Dalam julat suhu tersebut, keamatan pendarfluor adalah cukup tinggi untuk memperolehi peleraian dan pengesanan yang baik. Suhu optimum yang akan digunakan dalam analisis ini adalah 39oC untuk sistem pertama dan 42oC untuk sistem kedua.
Kadar alir fasa bergerak, pengoksida dan OPA- MERC
Di samping suhu gegelung tindakbalas pertama, kadar alir- kadar alir fasa bergerak, larutan pengoksida dan larutan OPA-MERC turut dioptimumkan untuk memberikan pemisahan yang lebih baik dan puncak yang lebih tajam. Hasil pengoptimuman tersebut disenaraikan dalam Jadual 1.
Kepekatan hipoklorit
Rajah 2 menunjukkan hubungan kepekatan hipoklorit dengan keamatan pendarfluor glifosat dan AMPA yang diperolehi daripada sistem kedua. Keamatan pendarfluor AMPA didapati menurun sebanyak 6.75% dan 35.58% apabila kepekatan hipoklorit masing-masing pada 5 dan 10 µg/g. Sementara itu, keamatan pendarfluor glifosat adalah tertinggi pada kepekatan hipoklorit 10 µg/g. Keamatan pendarfluor AMPA menurun disebabkan oleh tindak balas AMPA dengan hipoklorit untuk menghasilkan kloroamina dan ammonia yang tidak berpendarfluor. Ini menunjukkan bahawa larutan hipoklorit sememangnya tidak diperlukan untuk menganalisis AMPA malah merosakkan. Maka dalam sistem pos- turus ini, suatu injap pengsuisan automatik akan digunakan dan dicubakan dengan menggunakan sistem KCPT pertama untuk membandingkan kedua- dua sistem.
Dalam analisis ini, 10 µg/g hipoklorit telah ditentukan sebagai kepekatan yang sesuai untuk kedua-dua komponen kerana pada kepekatan ini, puncak AMPA masih 43.79% lebih tinggi daripada puncak glifosat sedangkan kita masih boleh memperolehi keamatan pendarfluor yang paling tinggi untuk glifosat.
0 500000 1000000 1500000 2000000 2500000
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4 0.45 0.5 0.55 0.6 0.65 0.7 0.75 0.8 0.85 0.9 0.95 1 Kepekatan (ug/g)
Keamatan pendarfluor (uvs)
Gly AMPA
Rajah 3: Graf keamatan pendarfluor vs kepekatan gly dan AMPA bagi sistem KCPT kedua.
0 100000 200000 300000 400000 500000 600000
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4 0.45 0.5 0.55 0.6 0.65 0.7 0.75 0.8 0.85 0.9 0.95 1 Kepekatan (ug/g)
Keamatan pendarfluor (uvs)
Gly AMPA
Rajah 4: Graf keamatan pendarfluor vs kepekatan gly dan AMPA bagi sistem KCPT pertama
Kelinearan pengesan
Pengesan pendarfluor yang dipilih dalam penyelidikan ini beroperasi pada 340 nm untuk pengujaan dan 455 nm bagi pemancaran. Kepekaan pengesan ini telah diselidiki dengan memplotkan keamatan pendarfluor glifosat dan AMPA masing- masing untuk 6 suntikan. Keluk yang diperolehi menggambarkan kepekaan yang linear dalam julat 0.025 - 1.000 µg/g dengan korelasi koefisien antara 0.99 - 1.00 seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 3 (sistem KCPT kedua yang tiada injap pengsuisan) dan Rajah 4 (sistem KCPT pertama yang menggunakan injap pengsuisan).
Masalah ditemui
Apabila injap pengsuisan digunakan, garis tapak menaik dengan cepat apabila suis dipusingkan ke arah pam tanpa hipoklorit. Masalah ini masih tidak dapat diatasi walaupun kekuatan ionik kedua-dua larutan iaitu larutan hipoklorit dan larutan tanpa hipoklorit telah disamakan. Oleh itu, kemungkinan besar keadaan ini disebabkan oleh perubahan kadar alir semasa suis diputarkan. Walau bagaimanapun, kelinearan pengesan masih dapat diperolehi dengan garis puncak yang menaik.
Rajah 5: Kromatogram gly dan AMPA pada 1 µg/g bagi sistem KCPT pertama yang mana masa penahanan gly dan AMPA masing-masingnya adalah 12.37 dan 17.61 minit.
Rajah 6: Kromatogram gly dan AMPA pada 1 µg/g bagi sistem KCPT kedua yang mana masa penahanan gly dan AMPA masing-masingnya adalah 8.80 dan 12.39 minit.
Jadual 2: Pengembalian Gly daripada minyak sawit.
Kepekatan (µg/g) Purata pengembalian semula (%) Sisihan piawai Sisihan piawai relatif (%)
1.00 106.03 3.70 3.49
0.10 83.78 1.22 1.46
0.01 99.63 1.82 1.82
Jadual 3: Pengembalian AMPA daripada minyak sawit.
Kepekatan (µg/g) Purata pengembalian semula (%) Sisihan piawai Sisihan piawai relatif (%)
1.00 98.07 8.70 8.88
0.10 83.40 0.78 0.94
0.01 99.12 2.11 2.13
Apabila satu sampel yang mengandungi gly dan A
ajah 5 dan 6 masing -masing menunjukkan kromat
emgembalian semula Gly dan AMPA daripada inyak sawit yang digunakan dalam kajian ini
Pengembalian purata 1.00, 0.10 dan 0.01 µg/g gly da
Kesimpulan
Daripada kajian ya , didapati bahawa kaedah yang diperkembangkan ini adalah peka dan
Penghargaan diberi enterian Sains dan Teknologi di atas peruntukan Penyelidikan IRPA 08-
Rujukan
1. Wong, P. W. 1979. nt of Roundup herbicide for Imperata cylindrica control in oil palm. Kuala 2.
Sons.
4.
dition. Brisbane: Department of 5.
. on of
7.
don: Butterworths.
hosphonic acid in MPA dalam kepekatan yang sama disuntik
untuk memperolehi kepekatannya melalui keluk kelinearan yang diperolehi, sistem KCPT kedua yang tidak menggunakan injap pengsuisan memberikan kepekatan yang sama dengan kepekatan yang sebenarnya, tetapi sistem KCPT pertama yang menggunakan injap pengsuisan memberikan kepekatan gly yang lebih rendah daripada sebenar. Ini mungkin disebabkan tindakbalas gly dan hipoklorit tidak lengkap apabila pengsuisan dilakukan. Jadi, sistem pertama yang menggunakan injap pengsuisan tidak akan digunakan dalam penyelidikan ini sehingga satu penyelesaian diperolehi supaya garis tapak tidak akan menaik apabila suis dipusingkan.
Rogram gly dan AMPA pada kepekatan 1 µg/g yang diperolehi melalui sistem KCPT pertama dan kedua.
P
minyak sawit M
diperolehi daripada pasaran sebagai minyak masak.
Matrik dengan kandungan minyak atau lemak yang tinggi selalunya menimbulkan masalah semasa proses pembersihan dan analisis. Selain itu, masalah juga timbul ketika menyediakan sampel terpaku. Ini disebabkan gly dan AMPA yang sangat larut dalam air tidak boleh dipakukan ke dalam minyak dengan pelarut air. Oleh hal yang demikian, metanol digunakan sebagai pelarut untuk membawa gly dan AMPA memasuki minyak sawit.
ripada matrik minyak adalah 106.03, 83.78 dan 99.63% masing-masingnya manakala bagi AMPA pula adalah 98.07, 83.40 dan 99.12% masing- masingnya seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 2 dan 3. Had pengesanan kaedah ini dijangka akan mencapai 0.005 µg/g.
ng dijalankan
berupaya menentukan gly dan AMPA dalam minyak sawit. Kaedah ini akan diulangi dengan menggunakan minyak sawit mentah sebagai sampel.
Penghargaan kan kepada Kem
02-02-0042 dan Malaysian Palm Oil Board (MPOB) yang membiayai penyelidik dan projek ini. Terima kasih juga ditujukan kepada Pusat Pengajian Sains Kimia dan Teknologi Makanan yang sudi menyediakan makmal yang mempunyai kelengkapan yang memuaskan.
Developme
Lumpur: The Incorporated Society of Planters.
Ashton, F. M. & Crafts, A. S. 1981 Mode of action of herbicides. 2nd edition. New York: John Wiley &
3. Ainie Hj. Kuntom, Hamirin Kifli & Tan, Y. A. 1999.
Method for the determination of glyphosate in oil matrix. 5th International Conference on Plant Protection in the Tropics. 15-18 March 1999, Kuala Lumpur, Malaysia.
Gage, J. F. & Munro, H. E. 1987. Herbicide effects in crop plants. 2nd e
Primary Industries, Queensland Government.
Fletcher, W. W. & Kirkwood, R. C. 1982. Herbicides and plant growth regulators. London: Granada
6. M. P. Abdullah, J. Daud, K. S. Hong & C. H. Yew.
1995. Improved method for the determinati glyphosate in water. Journal of Chromatography A.
697: 363-369.
Atkinson, D. & Grossbard, E. 1985. The herbicide glyphosate. Lon
8. Alferness, P. L. & Yutaka Iwata. 1994. Determination of glyphosate and (aminomethyl)p
soil, plant and animal matrices, and water by capillary gas chromatography with mass-selective detection. J.
Agric. Food Chem. 42: 2751-2759.
