海马生物能量分析仪 实验程序 贴壁细胞。将每孔所需的细胞悬浮在 100 μl 培养基中。一般来说，每个孔所需的细胞范围为20,000至60,000个细胞。中等的。将细胞培养板放入二氧化碳培养箱中培养。
加入培养基后，将细胞培养板置于二氧化碳培养箱中培养过夜。将探针放入装有校准溶液的 24 孔板中，并在使用前放入无二氧化碳培养箱中过夜。 3、子页面切换工具可以让用户完整记录细胞、培养基、实验流程等相关完整背景信息。
使用你最好的朋友：显微镜观察实验中使用的样品，以确认细胞确实均匀地附着在培养皿底部。添加所需的药物，并要求海马系统将这些药物注射到细胞中。在指定的时间，将625μl测试介质添加到含有介质中，使得每个孔的最终体积为675μl。
Ctrl 将分析介质添加到相应位置的加药槽中。
Day 2
- Preparation of XF Assay Templates, XF Cartridges and Mitochondria
- Mitochondria attachment to the bottom of the plate well
- Preparing initial buffer conditions for the assay
- Examples of results and data analysis
- Obtaining State III and State IV respiration values and RCR values
- Notes, Suggestions and Comments
- References
悬浮细胞分析程序原则上是对固定细胞程序进行修改的。首先使用Cell-Tak制备培养板，然后使用Cell-Tak添加细胞后，研究人员可以将分析的悬浮细胞样品附着到培养板的底部，并比较附着细胞的处理情况。计算使用量：Cell-Tak 的使用量为每平方厘米 3.5 微克。 XF专用细胞培养板每孔底部面积为0.32平方厘米，处理体积为50 µL。对于XF24细胞培养板，每个培养板应准备1.5 ml Cell-Tak溶液。
将涂有涂层的培养板置于无菌操作台上干燥20分钟，然后吸收多余的溶液，加入200μl无菌水，然后吸收洗去多余的碳酸氢盐，然后在无菌表面上干燥。手术台20分钟。干燥后的培养板应用保鲜膜或密封膜包裹。使用前将处理过的培养板置于商业温度下 20 分钟。小心不要将其加热至 37°C，否则 Cell Tak 将失去活性。
在实际操作过程中，操作者可以考虑将探头校准步骤与电池连接步骤结合起来，以提高实验的顺利性。离心细胞，除去普通培养基，同时在背景对照组孔中加入100 ul分析培养基。
离心后，从细胞中除去上清液并将其重悬于测定介质中。注意细胞体积和浓度的控制。并向其余孔中添加 100 µl 含有细胞的培养基。合并细胞和培养基。将基础培养板放入无二氧化碳的培养箱中，37℃，培养25-30分钟，原则上25分钟后细胞应该贴在培养皿上，但形状不能相差太大，如果差异较大，操作员可以同时开始校准探头。
缓慢而轻柔地向每个孔中添加 500 ul 测定培养基。然后放入无二氧化碳培养箱中培养20-25分钟。探头完成校准后，将电池放入仪器中。分析表明，其余部分与贴壁细胞没有什么不同。
Furthermore, the amount of mitochondria per µg of total protein also depend on the overall purity of the mitochondrial preparation. As with states III and IV, this is the value of the slope of [O2] vs.
Isolate Islets
Islet Assay Flow Chart
While creating turbulence in the tube with a 20 ul pipette, take 20 ul aliquots and place as a drop on 35 mm culture dish – use 3 drops total to isolate ~3% of the islets for counting. Count islets under a dissecting microscope to obtain an average number of islets per unit volume from which the total number of islets can be estimated. Add 400 ul of Seahorse XF Assay Medium to each well of the XF24 Island plate.
Add 50 ul of islet suspension to each well and repeat until the well receives a total of 100 ul of islet suspension. When islets are seeded, use a 20 µl pipette to move all islets into the pressurized chamber in the middle of the well. This step can be tricky - use a dissecting microscope to make sure the islets are in the middle chamber.].
Prepare the screens by pre-wetting them in XF Assay Medium in a small Petri dish to remove any air bubbles. Carefully place the islet catch rings at the bottom of each well using the catch ring insert tool. Make sure that the island catch rings are firmly seated at the bottom of the well.
Caution: Ensure that all wells contain an islet capture ring, even if there are no cells in the well.
Run on the XF24 Analyzer
