BA HAN, ALAT DAN MKTODE K j SRJA - PENETAPAN KADAR STEROID PADA DAUN TANAMAN SOLANUM WRIGHTII B

BAB I I I

1 • B a h a n .

1 .1 . B ahan P e n e l i t i a n .

B ahan p e n e l it ia n ya n g d igu n a ka n a d a la h daun ta

naman Solanu m w r i g h t i i B en th ya n g d ip e r o le h d a r i Ke-

bun Ra ya Cabang Pu rw od a d i p a s u ru a n . 1 .2 . Bahan K im ia . - p e tr o le u m e t e r p . a - A s eton - K lo r o r o r m p .a - M eta n ol p .a - A

3

am s u l f a t p ek a t - Asam k l o r id a 2 N - N a triu m h ia r o k s id a 10% - H eksa na p .a - i£ til a s e ta t - K a ls iu m k a r o o n a t p e r e a k s i D r a g en d o r f S p ra y - K ie s e l G el 60 F 2 . A l a t - a l a t . - S a tu s e t a l a t r e flu k s - TLC S ca n n er S himadzu CS-930 - B eja n a k r o m a to g r a fi ____ - - B o to l tim b a n g Oven

3* C a ra k e r .ia *

3.1

. p en yia p a n bahan p e n e l it ia n .

- pengu mpu lan daun : d i p i l i h daun den ga n C r i t e r i a :

- Daun muda : 4 sa m pa i 5 daun d a r i daun p a

l i n g u ju n g .

- Daun tu a :

6

s a m p a i 10 daun d a r i daun pa l i n g u ju n g .

- W aktu p en ga m b ila n : Daun d ia m b il s e c a r a a ca k d a r i

dua tanaman pa da i n t e r v a l w a ktu s b b . ;

- S ampel p erta m a d ia m b il pu ku l 0 6 *00 - S ampel kea u a d ia m b il p u ku l 0 9 .0 0 - S ampel k e tig a d ia m b il p u ku l 1 2 .00 - S ampel keem pa t d ia m b il p u ku l 15*00 - S ampel k eliin a d ia m b il p u ku l 1 3 .00 - S ampel keenam d ia m b il p u ku l 2 1 *00

B a ha n- b a ha n ya n g te la h diku rapu lkan kemu dian d i

k e r in g k a n dengan s in a r m a ta h a r i, kemu dian d i g i l i n g

a ta u d is e r b u k dan d ia y a k .

3 * 2 . C a ra e k s t r a k s i.

D itim b a n g denga n t e l i t i

3,000

gram s erb u k k e -

r in g , kemu dian dim a su kka n ked a la m la b u d e s t i l a s i

>0

m l. D ir e flu k s denga n 23 ail p etr o leu m e t e r s ela m a dua

ja m . S e te la h it u d is a r in g denga n cor on g B u ch n er, U l tr a t ya n g d id a p a tk a n diku m pu lka n s ed a n gka n r e s id u d i r e flu k s k em b a li denga n 25 oil p etr o leu m e t e r . E k s tr a k - d iu la n g m a s in g - a a s in g tig a k a l i s ela m a dua jam#

E l l t r a t ya n g d id a p a tk a n ( r a s e p e tr o le u m e t e r )

d ila k u k a n u j i k u a l i t a t i f dan d ila n ju tk a n u j i k u a n ti-

t a t i f , s ed a n gka n r e s id u n ya d ir e fl u k s k em b a li dengan

25

ml a s e to n . E k s tr a k s i d iu la n g m a s in g - m a s in g s ela m a

dua ja m .

P i l t r a t ya n g d id a p a tk a n ( fa s e a s e to n ) d ip is a h

kan s ed a n gka n r e s id u n ya d ih id r o l is a den ga n asam k lo r i.

da 2 N , d id ih k a n dan s e la n ju tn y a d in e tr a lk a n denga n

n a tr iu m h ia r o k s id a 10%. S e te la h n e tr a l d is a r in g d e

ngan co r o n g B u ch n er dan f i l t r a t ya n g d id a p a tk a n d ie k s tr a k s i denga n k lo r o fo r m menggu nakan co r o n g p is a h . j^ks tr a k s i den ga n k lo r o fo r m d ila k u k a n p u la ter h a d a p r e s i du h a s il h i d r o l i s a . R es id u h a s il h id r o l is a i n i d ita rn -

b ah s eju m la h te r te n tu k lo r o fo r m s e h in g g a r e s id u t e r

s eb u t teren d a m . S e te la h d ie ^ s tr a k s i s ela m a dua jam ma ka d is a r in g m e la lu i co r o n g B u cn n er. J j l l t r a t ya n g d id a

p a tk a n d ica m p u r den ga n f i l t r a t h a s il h id r o l is a dan

a k h ir n ya campu ran f i l t r a t i n i ( fa s e k lo r o fo r m ) d i l a ku kan u j i k u a l i t a t i f dan s e la n ju tn y a u j i k u a n t i t a t i f . U ntu k l e b ih je la s n y a e k s tr a k s i te r s e b u t d a p a t d i l i h a t

pa da L a m p ira n H I . (3 3 )

3.3^ P en eta p a n s u s u t p e n g e r in g a n .

B i tim b a n g

0,500

gram s erb u k dau n, kem u dian dirna su kkan ked a la m k ru s p o r s e lin ya n g su dah d itim b a n g

k o n s ta n . S e te la h i t u d ip a n a s k a n d i le m a r i p e n g e r in g

3 * 4 « P en eta p a n k a d a r k l o r o f i l *

D itim b a n g

0,100

gram s erb u k daun dan dimasu kkan ked a la m b ek er g la s

100

m l, kemu dian tamb ahkan a s e to n ked a la m n ya sa m pa i semua w arna pa da ja r in g a n t e r l e p a s .

Tambahkan k a ls iu m k a r b o n a t, s a r in g e k s tr a k d en ga n co

ron g B u ch n er, masukkan ked a la m la b u u ku r 100 m l* B i-

l a s d en ga n a s e to n sa m pa i ta k b e'rw arna dan tambahkan

a s e to n sa m pa i g a r is ta n d a . Kemu dian d iu k u r a b s o r p s i-

n ya p a d a p a n ja n g gelom b a n g

663

nm dan

645

nm denga n

s e l s a tu cm. Ka d a r k l o r o f i l d a p a t d ih itu n g denga n p er samaan : T o ta l k l o r o f i l (m g/ 1 ) = 2 0 ,2 + 8 ,0 2 dim a na : ' ^Lan ^ 645 a d a la h a b s o r p s i p a d a p a n ja n g gelom b a n g 663 nm dan 645 nm* (

26

) 3 « 5 » U .ii k u a l i t a t i f denga n K r o m a to g r a fi L a p is a n T i p i s .

L a r u ta n fa s e g er a k dimasu kkan ked a la m b e ja n a

k r o m a to g r a fi ya n g d in d in g n ya te la h d i l a p i s i den ga n

k e r ta s s a r in g , b e ja n a d itu tu p dan d io ia r k a n s a m pa i j e nu h.

F l i t r a t h a s il e k s tr a k s i d ito to lk a n pa da lem p en g

K ie s e l G el 60 F 254 den ga n menggu nakan m ik r o p ip e t, ke

m u oia n lem p en g dim asu kkan b e ja n a k r o m a to g r a fi, d ie l u -

a s i den ga n fa s e g e r a k ya n g te la h d ijen u h k a n . S e te la h

fa s e g e r a k m en ca p a i b a ta s ya n g te la h d ite n tu k a n lem

a g a r fa s e g er a k n ya mengu ap. S e te la h i t u d is em p r o t d e n ga n penampak n od a . U ntu k penampak n od a b i l a ya n g d i

gu nakan asam s u l f a t p ek a t ; m e ta n o l, s e te la h d is em -

p r otk a n lem p en g d ip a n a s k a n pa da suhu 105° C s ela m a l e

b ih ku ra n g

10

m e n it. B ia m a ti w a rn a noda ya n g . tarnpak

dan d ih itu n g h a rg a H f n ya . U ntu k m en geta h u i j e n is s e nyawa s te r o id a d igu n a k a n p em b a n d in g. U j i k r o m a to g r a fi

la p is a n t i p i s d ila k u k a n ter h a d a p :

- F a s e p e tr o le u m e t e r , fa s e g e r a k ya n g d igu n a ka n ;

h eks a n a : e t i l a s e ta t =

7:3

penampak noda = Asam s u l f a t p ek a t : m eta n ol = 1:1

- Fa s e k lo r o fo r m , fa s e g e r a k ya n g d igu n a k a n ;

K lo r o fo r m ; m eta n o l = 19:1

penampak noda = p e r e a k s i D r a g en d o r f S p ra y

3 . 6 . C a ra p en eta p a n k a d a r s t e r o l t o t a l den ga n D en s itom e -

t r i .

3 . 6 . 1 . Pemb u atan la r u ta n baku k o l e s t e r o l 1000 ppm.

D itim b a n g den ga n seksama 0 ,1 0 0 gram k o l e s t e

r o l , kem u dian d ila r u tk a n denga n k lo r o fo r m dalam b e -

k er g l a s s , la r u ta n d ip in d a h k a n ked a la m la b u u ku r

100

ml l a l u d ita m b a h k lo r o fo r m sa m pa i g a r is ta n d a .

3 . 6 . 2 . P en yia p a n la r u ta n s a m p el.

E k s tr a k k e r in g d a r i s a m p el d ila r u tk a n dengan

K lo r o fo r m s ecu ku p n ya kemu dian d ip in d a h k a n ked a la m

la b u u ku r

5

s e c a r a k u a n t i t a t i f , s e la n ju tn y a d i

3 * 6 . 3 » P en en tu a n pan.iang gelom b a n g maksimum k o l e s t e r o l d e

ngan D e n s ito m e tr i,

N oda d a r i s ta n d a r t k o l e s t e r o l y«tng d ih a s ilk a n

d a r i p en yia p a n k r o m a to g r a fi la p is a n t i p i s s e p e r t i

3

5

* te r s e b u t d ia ta s d ila k u k a n p en gu ku ra n h a r g a a b - s o r p s in y a pa da p a n ja n g gelom b a n g 370 nm sa m pa i

700

nm. P a n ja n g gelom b a n g maksimum cJi tun ju kka n o le h h a r

ga a b s o r p s i t e r t i n g g i a ta u pu ncak krom a togra m ya n g

p a lin g t i n g g i .

3 . 6 . 4 * P en eta p a n k a d a r s t e r o l t o t a l dengan D e n s ito m e tr i,

Pa da s e tia p lem p en g d ito to lk a n la r u ta n pemban

d in g k o l e s t e r o l s eoa n ya k empat t i t i k dan la r u ta n

s a m p el s eb a n ya k enam t i t i k . S e te la h d ie l u a s i den ga n

e lu e n h eks a n : e t i l a s e ta t =

7

3

, a ik e r in g k a n pada

suhu kamar dan d is e m p r o t den ga n penampak noda asam

s u l f a t p ek a t ; m eta n ol = 1 : 1 . S e la n ju tn y a d ik e r in g -

kan da la m le m a r i p e n g e r in g , kemu dian d ia m a ti lu a s

a r e a d a r i m a s in g- m a s in g n od a krom a togra m pa da pan

ja n g gelom b a n g maksimum den ga n k o e f is ie n (S X ) = 3

dim a na meru pakan h a s il p e n e l it ia n

11

p o s is i l i n i a r i -

z e r " u n tu k m enda pa tka n hu b u ngan ya n g l i n i e r a n ta r a k o n s e n tr a s i dengan lu a s a r e a k u r va .

3 . 7 . C a ra p en eta p a n k a d a r s o la s o d in a denga n D e n s ito m e tr i.

3 * 7 . 1 . Pemb u atan la r u ta n baku s o la s o d in a 1000 ppm.

D itim b a n g d en ga n seksama 0 ,1 0 0 gram s o la s o d i

3 . 7 . 2 . P en yia p a n la r u ta n s a m p el.

D ila k u k a n s e p e r t i 3 * 6 . 2 .

3 . 7 . 3 . P en en tu a n pan.lang gelom b a n g maksimum s o la s o d in a d e

n ga n D e n s ito m e tr i.

D igu n a ka n s ta n d a r t s o la s o d in a , s e la n ju tn y a d i

la k u k a n s e p e r t i

3

6

3

7

4

. p en eta p a n k a d a r s o la s o d in a denga n D e n s ito m e tr i.

Pa d a s e t ia p lem p en g d ito to lk a n la r u ta n pemban

d in g s o la s o d in a s eb a n ya k empat t i t i k dan la r u ta n

s a m p el enam t i t i k . S e te la h d ie l u a s i d en ga n elu en

k lo r o fo r m ; m eta n ol = 1 9:1 , d ik e r in g k a n pada suhu

kamar dan d is e m p r o t den ga n penampak n od a D r a g e n a o r f

S p r a y. Kemu dian d ia m a ti lu a s a r e a d a r i m a sin g- m a s in g noda krom a togra m pa da p a n ja n g gelom b a n g m a k s i mum.

3 * 8 * A n a lis a d a ta .

D a r i d a ta lu a s a r a e Krom a togra m la r u ta n baku

ya n g d id a p a t, d ite n tu k a n p ersa m a a n g a r is n y a dimana

x = ju m la h ( u g ) la r u ta n baku dan y a lu a s a r e a kroma togr a m . p ersa m a a n g a r is ya n g d id a p a t y = Bx + A . Jum la h ( u g ) la r u ta n s a m p el d a p a t d ic a r i s e te la h dim a su k kan ked a la m p ersa m a a n g a r is i n i , dimana y = lu a s a r e a

la r u ta n s a m p el s e h in g g a d id a p a tk a n ju m la h ( u g ) la r u

Gambar 1 . Daun dan Bunga d a r i tanaman Solanu m w r ig h t ii B en th .

BAB IV

Dalam dokumen PENETAPAN KADAR STEROID PADA DAUN TANAMAN SOLANUM WRIGHTII BENTH DALAM BERBAGAI INTERVAL W AKTU (Halaman 38-47)