Tempat dan Waktu
Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Bioteknologi Tanah, Departemen Ilmu Tanah dan Sumberdaya Lahan, Fakultas Pertanian IPB sejak bulan April 2010- Januari 2011.
Bahan dan Alat
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini terdiri dari bahan pembuat MOL
yaitu bonggol pisang Apu (Mussa paradisica linn), keong mas (Pomacea
canaliculata) dan urin kelinci, air sisa cucian beras, gula merah dari kelapa (gula
Jawa). Media untuk pertumbuhan mikrob yaitu Nutrient Agar (NA), Potato
Dextrosa Agar (PDA), Pikovskaya, Nitrogen Free Media (NFM), Nitrogen Free Bromthymol Blue (NFB), dan Carboxymethyl Cellulose (CMC) serta bahan-bahan kimia habis pakai untuk analisis kimia. Alat yang digunakan terdiri dari alat-alat laboratorium untuk analisis mikrob dan kimia.
Metode Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan dengan menggunakan rancangan acak lengkap (RAL) dengan satu faktor (waktu) dan 3 ulangan. Selanjutnya penyeleksian berdasarkan nilai tengah tertinggi dari peubah menggunakan uji jarak berganda Duncan. Analisis data dilakukan dengan menggunakan Program SAS 9.1.
Model matematisnya adalah:
Yij = µ + αi + εij
dimana:
Yij = pengamatan pada perlakuan ke-I dan ulangan ke-j
µ = rataan umum
αi = pengaruh perlakuan waktu ke-i
Pelaksanaan Penelitian
Pembuatan MOL
1. Persiapan
Bahan yang digunakan masing-masing adalah bonggol pisang Apu (Musa
paradisiaca Linn) yang diiris-iris dengan ukuran ± 0,5 – 1 cm sebanyak 5 kg,
keong mas (Pomacea canaliculata) yang ditumbuk beserta cangkangnya
sebanyak 5 kg, urin kelinci 5 l, air sisa cucian beras 10 l (didapat dari 5 l beras yang dicuci dengan 10 l air) dan gula merah dari kelapa (gula Jawa) 1 kg yang kemudian diiris halus. Alat yang diperlukan adalah penumbuk, pisau, kayu pengaduk dan drum ukuran 18 l.
2. Cara pembuatan MOL
Air sisa cucian beras dicampur dengan gula merah (gula Jawa) yang telah diiris halus dimasukkan dalam drum kemudian diaduk sampai gula larut (air sisa cucian beras berubah warna menjadi coklat) kemudian dimasukkan keong mas, diaduk kembali sampai tercampur merata kemudian tutup drum dengan penutupnya. Begitu juga langkah-langkah untuk pembuatan MOL bonggol pisang dan MOL urin kelinci (NOSC, 2008).
Pengambilan sampel MOL
1. Pengambilan sampel MOL untuk analisis mikrob
Pengambilan sampel dilakukan pada 1x24 jam( hari 1), 7x24 jam (hari ke-7), 14x24 jam (hari ke-14) dan 21x24 jam (hari ke-21). Sampel MOL diambil dengan menggunakan pipet pada 3 kedalaman yang berbeda, yaitu 4 cm, 14 cm dan 23 cm.
2. Pengambilan sampel MOL untuk analisis kimia
Pengambilan sampel dilakukan setelah pengambilan sampel yang digunakan untuk analisis mikrob. Pengambilan sampel dilakukan dengan terlebih dahulu MOL diaduk kemudian sampel diambil melalui kran yang ada dibagian bawah drum. Untuk pengukuran Eh dilakukan dengan alat Eh meter pada kedalaman 9 cm dari permukaan larutan MOL.
Pengamatan
Analisis mikrob
Analisis mikrob dilakukan untuk mengetahui populasi mikrob total, fungi,
Azotobacter-like, Azospirillum-like, MPF dan Mikrob Selulolitik. Parameter penelitian, metode dan media tumbuh mikrob disajikan pada Tabel 1.
Tabel 1 Parameter penelitian, metode dan media tumbuh mikrob
Parameter Metode Media
Mikrob total Cawan hitung Nutrient Agar(NA) (Rao, 1982)
Fungi Cawan hitung Potato Dextrosa Agar (PDA) (Anas,
1989)
Azotobacter-like Cawan hitung Nitrogen Free Media (NFM) (Rao, 1982)
Azospirillum-like MPN Nitrogen Free Bromthymol Blue
(NFB) (Okon et al. 1977)
MPF Cawan hitung Pikovskaya (Rao, 1982)
Mikrob Selulolitik Cawan hitung Carboxymethyl Cellulose (CMC)
(Coronel dan Joson, 1986)
Seri pengenceran dibuat dengan terlebih dahulu menyiapkan erlenmeyer 250 ml yang berisi 90 ml larutan garam fisiologis (8,5 g NaCl per liter) dan tabung reaksi yang berisi 9 ml larutan garam fisiologis. Semua erlenmeyer dan tabung reaksi ditutup dengan kapas, penutupan ini dilakukan dengan hati-hati agar jangan sampai basah sewaktu diautoklaf. Erlenmeyer dan tabung reaksi yang berisi
larutan garam fisiologis diautoklaf selama 20 menit pada suhu 121oC dan
didinginkan sebelum digunakan lebih lanjut. Setelah dingin, 10 ml sampel larutan MOL dimasukkan ke dalam 90 ml larutan garam fisiologis steril tersebut,
selanjutnya dibuat seri pengenceran sampai 10-7. Seri pengenceran yang
digunakan untuk menetapkan populasi masing-masing parameter berbeda. Untuk mikrob total digunakan seri pengenceran 10-5, 10-6, 10-7, Azotobacter-like,
10-5, fungi dan MPF digunakan pengenceran 10-4, 10-5, 10-6. Sebanyak 1 ml larutan dari masing-masing seri pengenceran dipindahkan ke cawan petri yang kemudian dituang ke media biak sesuai dengan mikrob yang akan ditumbuhkan. Bahan dan komposisi media tumbuh mikrob yang digunakan disajikan pada Tabel Lampiran 1. Setelah itu cawan petri digoyang secara perlahan-lahan agar media dan suspensi tercampur sempurna, lalu diinkubasi pada suhu 25-30oC. Populasi
mikrob total, MPF, Azotobacter-like dan Mikrob Selulolitik dihitung setelah 3-5
hari, sedangkan untuk Azospirillum-like inkubasi dilakukan selama 7 hari.
Keseluruhan proses dilakukan secara steril untuk menghindari kontaminasi yang dapat mengganggu parameter yang ditetapkan.
Pemurnian
Pemurnian dilakukan dengan tujuan untuk memperoleh biakan murni yang diinginkan tanpa ada kontaminan dari mikrob lain. Pada tahap pemurnian untuk
Azotobacter-like dipilih koloni tunggal yang mempunyai bentuk paling besar,
moist dan bening. Untuk Azospirillum-like koloni yang dipilih berasal dari pelikel yang paling jelas sedangkan untuk MPF dan Mikrob Selulolitik dipilih koloni yang mempunyai zona bening paling luas. Koloni yang terpisah tersebut dipisahkan dengan cara pengoresan kuadran ke media yang baru.
Identifikasi
Identifikasi mikrob terpilih dilakukan berdasarkan ciri-ciri morfologi koloni seperti elevasi, pinggiran, warna, bentuk dan jenis Gram. Identifikasi secara fisiologis dilakukan dengan menggunakan alat KIT API NE 20 yaitu sistem
standar untuk identifikasi mikrob non-enterik. Untuk fungi identifikasi
berdasarkan karakter morfologi koloni secara makroskopi dan mikroskopi.
Analisis kimia
Analisis kimia dilakukan untuk mengetahui kandungan unsur hara, pH, EC dan Eh pada larutan MOL. Pengamatan untuk pH, EC dan Eh dilakukan pada
hari ke-1, 7, 14 dan 21 sedangkan untuk unsur hara pada hari ke-14. Parameter dan metode untuk analisis kimia disajikan pada Tabel 2.
Tabel 2 Parameter dan metode/alat untuk analisis kimia
Parameter Metode/Alat
pH pH meter/Fisher accumet® model 230A
Eh Eh meter/TOA
EC EC meter/wtw inolab cond level 1
N-NO3-, N-NH4+ Kjeldahl
C organik Walkey & Black
P2O5 Bray-1/Spektrofotometer Spectonic 20 Bausch &
Lomb
K2O Ekstrak HCl 25%/Flamefotometer Corning 405
Ca.Mg, Fe,Zn,Cu,Mn
NH4OAC pH 7/AAS Shimadzu AA-6300
Ekstrak HCl 0,05 N/AAS Shimadzu AA-6300
Analisis Data
Data yang terkumpul dianalisis dengan menggunakan analisis sidik ragam untuk mengetahui pengaruh perlakuan dan dilanjutkan dengan uji jarak berganda Duncan taraf 0,05 untuk mengetahui beda nyata antar perlakuan (Mattjik dan Sumertajaya, 2006).
Tahapan kegiatan penelitian
Gambar 1 Diagram alir penelitian. Pembuatan MOL
MOL bonggol pisang
MOL keong mas
MOL urin kelinci
Isolasi mikrob Mikrob total, fungi,
Azotobacter-like,
Azospirillum-like, MPF dan Mikrob Selulolitik
Kajian sifat kimia pH, EC, Eh, Analisis unsur hara
Pembuatan seri pengenceran
Pembuatan media
Isolasi mikroba
Pengukuran
pH, EC, Eh dan unsur hara makro dan mikro
Perhitungan populasi mikrob, pemurnian dan identifikasi mikrob