4 SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan
Penyuntikan ikan sidat yang berukuran 100-150 g dengan kombinasi 10 IU PMSG/kg + 0,01 mg AD/kg + 150 µg MT/kg ikan dengan delapan kali penyuntikan dapat mempercepat pematangan testis mencapai TKG II. Penambahan MT dalam premiks hormon PMSG dan AD dapat lebih mempercepat pematangan gonad jantan.
Saran
Penelitian ini menggunakan kombinasi hormon PMSG, AD, dan MT pada ukuran ikan 100-150 g dan dapat mempercepat pematangan testis mencapai TKG II sehingga untuk mendapatkan hasil yang maksimal, diperlukan waktu pemberian hormon yang lebih lama (lebih dari delapan minggu) pada ikan sidat ukuran 100-150 g. Selain itu, waktu penyuntikan hormon disarankan setiap dua minggu sekali untuk mengurangi tingkat stres pada ikan sidat.
DAFTAR PUSTAKA
Affandi R. 2005. Strategi pemanfaatan sumberdaya ikan sidat Anguilla spp. di Indonesia. Jurnal Ikhtiologi Indonesia. 5(2): 77-81.
Ahlina HF. 2015. Induksi maturasi gonad ikan sidat (Anguilla bicolor bicolor) secara hormonal dengan menggunakan PMSG, AD, dan rGH [tesis]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Amin M. 1998. Observation of reproduction techniques applicable to the European eel Anguilla anguilla. Alexandria (EG): National Institute of Oceanography and Fisheries. (Zaragoza: Ciheam n. 34). P: 223-234.
23 Aoyama J, dan Miller MJ. 2003. The silver eel. Di Dalam:Aida K, Tsukamoto K.
(eds). Eel Biology. Springer-Verlag, Tokyo. Hlm 107-117.
Beullens K, Eding EH, Gilson P, Oliver F, Komen J, dan Ritcher CJJ. 1997. Sex differentiation, changes in length, weight and eye size before and after metamorphosis of European eel (Anguilla anguilla L.) maintained in captivity.
Aquaculture. 153: 151-162.
Bieniarz K, Epler P, Malczewski B, dan Passakas T. Development of european eel (Anguilla anguilla L.) gonads in artificial conditions. Aquaculture. 22: 53-66. Colombo G, Grandi G, dan Rossi R. 1984. Gonad differentiation and body growth
in Anguilla anguilla L. Journal of Fish Biology. 24: 215-228.
Colombo G, dan Grandi G. 1996. Histological study of the development and sex differentiation of the gonad in the European eel. Journal of fish biology. 48: 493-512.
Devlin RH, dan Nagahama Y. 2002. Sex determination and sex differentiation in fish: an overview of genetic, physiological, and environmental influences.
Aquaculture. 208: 191-364.
Effendie MI. 2002. Biologi perikanan. Yayasan Pustaka Nusantara, Yogyakarta. [FAO] Food and Agriculture Organization. 2012. FAO Yearbook: Fishery and
aquaculture statistics commodities [internet]. [diacu 2014 ]. Tersedia dari: www.fao.org/3/a-i3740t.pdf.
[FAO] Food and Agriculture Organization: Fisheries and Aquaculture Department a. 2015. Species fact sheets: Anguilla anguilla (Linnaeus, 1758) [internet]. [diacu 2015]. Tersedia dari: www.fao.org/fishery/culturedspecies/Anguilla_ anguilla/en.
[FAO] Food and Agriculture Organization: Fisheries and Aquaculture Department b. 2015. Species fact sheets: Anguilla japonica (Temmick & Schlegel, 1847) [internet]. [diacu 2015]. Tersedia dari: www.fao.org/fishery/culturedspecies/ Anguilla_japonica/en.
Fingerman M. 1997. Roles of neurotransmitter in regulating reproductive hormone release and gonadal maturation in decapods crustacean. Invertebrate Reproduction Development. 31: 47-54.
Gallego V, Mazzeo I, Vílchez MC, Peñaranda DS, Carneiro PCF, Pérez L, dan Asturiano JF. 2012. Study of the effect of thermal regime and alternative hormonal treatment on the reproductive performance of European eel males (Anguilla anguilla) during induced sexual maturation. Aquaculture. 7(16): 354-355.
Hachfi L, Couvray S, Simide R, Tarnowska K, Pierre S, Gaillard S, Richard S, Coupé S, Grillasca JP, dan Prévot-D’Alvise N. 2012. Impact of endocrine disrupting chemicals (EDCs) on hypothalamic-pituitary-gonad-liver (HPGL) axis in fish. World Journal of Fish and Marine Sciences. 4(1): 14-30.
Hafez ES. 2000. Reproduction in farm animals 7th. Ed Lea & Febiger. Philadelphia. (US): 385-393.
Ijiri S, Kabaya T, Takeda N, Tachiki H, Adachi S, dan Yamauchi K. 1998. Pretreatment reproductive stage and oocyte development induced by salmon pituitary hormogenate in the Japanese eel Anguilla japonica. Fisheries Science. 64: 531-537.
Kocaman EM, Yanik T, Erdoǧan O, Ҫiltaș AK. 2005. Alterations in cholesterol, glucose, and triglyceride levels in reproduction of rainbow trout
24
(Oncorhynchus mykiss). Journal of Animal and Veterinary Advances. 4(9): 801-804.
Lokman PM, dan Young G. 1998. Gonad histology and plasma steroid profiles in wild New Zealand freshwater eels (Anguilla deffenbachi and Anguilla australis) before and at the onset of the natural spawning migration. II. Males.
Fish Physiology and Biochemistry. 19: 339-347.
Meliá P, Bevacqua D, Crivelli AJ, Panfilis J, De Leo GA, dan Gatto M. 2006. Sex differentiation of the European eel in brackfish and freshwater environments: a comparative analysis. Journal of Fish Biology. 69: 1228-1235.
Miura T, Yamauchi K, Takahashi H, dan Nagahama Y. 1991. Hormonal induction of all stages of spermatogenesis in vitro in the male Japanese eel (Anguilla japonica). Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88: 5774-5778.
Miura C, dan Miura T. 2011. Analysis of spermatogenesis using an eel model.
Aqua-Bioscience Monographs. 4(4): 105-129.
Miura C, Shimizu Y, Uehara M, Ozaki Y, Young G, dan Miura T. 2011. Gh is produced by the testis of Japanese eel and stimulates proliferation of spermatogonia. Reproduction. 142: 869-877.
Monticini P. 2014. Eel (Anguilla spp.): production and trade according to Washington convention legislation. Globefish Research Programme, Vol. 114. Rome. 78 P.
Ohta H, dan Takano K. 1996. Testicular maturation induced by methyltestosterone in elvers of the Japanese eel Anguilla japonica. Fisheries Science. 62(6): 990-991.
Peñaranda DS, Pérez L, Gallego V, Jover M, Tveiten H, Baloche S, Dufour S, dan Asturiano JF. 2010. Mollecular and physiological study of the artificial maturation process in European eel males: from brain to testis. General and Comparative Endocrinology. 166: 160-171.
Prat F, Sumpter JP, dan Tyler CR. 1996. Validation of immunoassays for two salmon gonadotropins (GTH I and GTH II) and their plasma concentrations throughtout the reproductive cycle in male and female rainbow trout (Onchorhynchus mykiss). Biology of Reproduction. 54: 1375-1382.
Rovara O. 2007. Karakteristik reproduksi, upaya maskulinisasi, dan pematangan gonad ikan sidat betina (Anguilla bicolor bicolor) melalui penyuntikan ekstrak hipofisis [disertasi]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Saksena DN, Miura T, Jiang J, dan Nagahama Y. 1995. A rapid activation of immature testis of Japanese eel (Anguilla japonica) by a single injection of human chorionic gonadotropin. J. Biosci. 20: 675-689.
Schultz RW, dan Miura T. 2002. Spermatogenesis and its endocrine regulation.
Fish Physiology and Biochemistry. 26: 43-56.
Schultz RW, dan Nóbrega RH. 2012. Regulation of spermatogenesis. Dalam: Farrell AP (Ed). Encyclopedia of fish Physiology: from genome to environment. P: 627-634. San Diego: Academic Press.
Sulistyo I, Fontaine P, Rinchard J, Gardeur J-N, Migaud H, Capdeville B, dan Kestemont P. 2000. Reproductive cycle and plasma levels of steroids in male Eurasian perch Perca fluviatilis. Aquat. Living Resour. 13(2): 99-106.
`Triajie H. 2008. Efektivitas ekstrak teripang pasir yang telah diformulasikan terhadap maskulinisasi udang galah [tesis]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
25 Tzeng WN, Lin HR, Wang CH, dan Xu SN. 2000. Differences in size and growth
rates of male and female migrating Japanese eels in Pearls River, China.
Journal of Fish Biology. 57: 1245-1253. doi: 10.1006/jfbi.2000.1387.
Wahyuningsih H. 2012. Induksi buatan pada perkembangan gonad ikan Tor soro
[disertasi]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Weltzien F-A, Andersson E, Andersen Ø, Shalchian-Tabrizi K, dan Norberg B. 2004. The brain-pituitary-gonad axis in male teleost, with special emphasis on flatfish (Pleurronectiformes). Comparative Biochemistry and Phisiology Part A. 137: 447-477.
Yamazaki F. 1983. Sex control and manipulation in fish. Aquaculture. 33: 329-354.
Yokouchi K, Sudo R, Kaifu K, Aoyama J, dan Tsukamoto K. 2009. Biological characteristics of silver-phase Japanese eels, Anguilla japonica, collected from Hamana Lake, Japan. Coastal Marine Science. 33(1): 1-10.
26
27 Lampiran 1 Prosedur pembuatan histologi gonad
1. Ikan dibedah dan diambil gonadnya, gonad dicuci dengan NaCl fisiologis 0,65%, selanjutnya difiksasi dalam larutan bouin campuran asam piktrat, formalin dan asam asetat dengan perbandingan (15:5:1) selama 24 jam. Gonad yang sudah difiksasi dipindahkan ke dalam alkohol 70% beberapa kali hingga kuning telur hilang.
2. Gonad didehidrasi ke dalam alkohol dengan konsentrasi bertingkat yaitu (80%, 85%, 90%, dan 95%) masing-masing selama 2 jam kemudian pindahkan ke dalam alkohol berkonsentrasi 100% sebanyak 4 kali masing-masing selama satu jam.
3. Organ dibersihkan, didalam alkohol 100% + xylol (1:1) selama 45 menit, kemudian ke dalam xylol I, II dan III masing – masing selama 45 menit. 4. Organ direndam kembali kedalam xylol + parafin (1:1) selama 45 menit
pada suhu 60°C. Kemudian direndam ke dalam parafin I, II dan III masing-masing selama 45 menit dalam suhu 65°C.
5. Selanjutnya organ ditanam dalam blok parafin cair pada suhu 60°C selama 24 jam sampai parafin mengeras.
6. Spesimen dipotong setebal 6-7 μm, ditempel pada gelas obyek yang telah ditetesi dengan Ewid, selanjutnya ditaruh di atas pemanas dan dikeringkan selama 24 jam pada suhu 45°C.
7. Untuk deparafinasi, preparat berturut-turut direndam dengan menggunakan xylol I, II, alkohol 100% I, 100% II, 95%, 90%, 85%, 80%, 70% dan 50% dan dicuci sampai warna putih.
8. Pewarnaan preparat dilakukan dengan merendam kedalam cairan hemotoxylin selama 2 menit selanjutnya dibersihkan dengan mencuci dengan air kran mengalir.
9. Dehidrasi terhadap preparat dilakukan dengan merendam secara berturut-turut dalam alkohol 70%, 80%, 85%, 90%, 95% I, 95% II, 100% I dan 100% II masing – masing selama satu menit.
10.Penjernihan warna objek preparat dilakukan dengan merendam di dalam xylol I dan xylol II masing-masing selama 1 menit.
11.Preparat diberi zat perekat Canada balsem, selanjutnya ditutup dengan gelas penutup, dikeringkan selama 10 menit dan diberi label sesuai dengan perlakuan sehingga didapatkan preparat permanen histologi gonad yang dapat diamati di bawah mikroskop setiap saat.
12.Pengamatan histologi dan pengambilan file gambar dilakukan menggunakan mikroskop binokuler Olympus BH-2 perbesaran lensa 400x dan 1000x, gambar dikoneksikan dengan kamera Canon 600D ke komputer. Selanjutnya ditampilkan pada monitor dengan menggunakan Windows 7 melalui program software bawaan dari Canon. Objek amatan terbaik divisualisasi dan disimpan dalam komputer.
28
Lampiran 2 Prosedur pengukuran profil hormon dengan ELISA (Enzym-Linked Immuno Sorbent Assay)
a. Semua ikan yang akan diukur profile hormonnya harus dipuasakan dahulu selama 24 jam.
b. Saat pengambilan darah ikan dibius dengan memasukan ke dalam wadah berisi air laut yang ditambahkan stabilizer dengan dosis 1 mL/0,5 L air. Ikan sidat didiamkan selama 2-3 menit. Darah diambil sebelum hormon disuntikan, pengambilan dilakukan secara intramuskular sebanyak 2 ml menggunakan syringe bervolume 2,5 ml, selanjutnya darah disentrifuse dengan kecepatan 5000 rpm selama 15 menit (Crime et al. 1983). Plasma yang sudah diambil disimpan pada freezer bersuhu –20°C selama 12 jam. c. Sebelum dilakukan pengukuran, semua plasma dan reagen harus dibiarkan
pada suhu kamar (18-25°C).
d. Sebelum digunakan, terlebih dahulu dipersiapkan larutan standar dengan kosentrasi 12,5 ; 25 ; 50 ; 100 ; 250 ; 1000 ; 2000 pg/ml dan larutan QC (quality control).
e. Selanjutnya, dimasukan sebanyak 25 μl larutan standar, sampel dan QC (quality control), kedalam masing-masing sumur.
f. Ditambahkan 200 μl konjugat enzim HRP (Estradiol Enzym Conjugate) ke dalam setiap sumur, kemudian dikocok perlahan selama kurang lebih 10 detik.
g. Plasma yang sudah dicampur reagent dan HRP diinkubasi selama 2 jam. h. Setelah diinkubasi , larutan pada pelat dibuang dan dicuci dengan larutan
pencuci (washing solution) dengan volume 300 μl setiap sumur, selanjutnya dilakukan pencucian sebanyak 4 kali menggunakan alat
Microplate Strip Washer Elx50TM. Setelah pencucian selesai, sumur dikeringkan dengan cara dibanting secara perlahan pada kertas penyerap. i. Ditambahkan 100 μl larutan substrat (TBM Substrate) pada masing-masing
sumur pelat
j. Selanjutnya inkubasi dengan larutan substrat. Reaksi enzimatis dihentikan dengan menambahkan 50 μl larutan penyetop (Stop Solution, H2SO4 0,5 M) ke dalam setiap sumur pelat.
k. Absorbans dapat dibaca dengan menggunakan ELISA reader (absorbance microplate reader Elx808TM) yang telah dilengkapi dengan program Gen 5 (BioTek® Instruments, Inc.) pada panjang gelombang 450 nm. Pembacaan dilakukan tidak lebih dari 10 menit setelah penambahan larutan penyetop reaksi
29 Lampiran 3 Dokumentasi prosedur penelitian
Proses persiapan wadah Pengangkatan ikan sidat dari kolam pembudidaya
Ikan sidat dikemas dan diberi oksigen dan es
Ikan sidat siap dibawa ke laboratorium
Ikan sidat siap dikeluarkan dari plastik
Ikan sidat siap diaklimatisasi
Ikan sidat yang sudah dibius diukur bobot
tubuhnya
Ikan sidat diukur panjang tubuhnya
Penyuntikan hormon ikan sidat
Pembedahan ikan sidat untuk diambil gonad dan
30
