Adi LT. 2006. Tumbuhan Obat dan Khasiatnya. Depok: Swadaya.
Agustini NLP, Nining H. 2006. The production of jembrana virus recombinant protein for elisa antigen (J Gag 6). Manual Diagnosa Laboratorik Penyakit Jembrana. Denpasar: Balai Penyidikan dan Pengujian Veteriner. hlm 117– 119.
Ali BH, Blunden G, Tanira MO, Nemmar A. 2008. Some phytochemical, pharmacological and toxicological properties of ginger (Zinggiber officinale
Roscoe.). A review of recent research.
Food ChemTox 46:409-420.
Altinier G. 2007. Characterization of topical antiinflammatory compounds in
Rosmarinus officinalis L.. J Agric. Food Chem 55:1718-1723.
[Anonim]. 2007. COX Inhibitor screening assay. Catalog No. 560131. Cayman chemical company. Proc Natl Acad Sci USA 88:2692-2696.
[AOAC] Association of Official Analitycal Chemist. 1984. Official methods of analysis. Virginia: AOAC.
Ayu R. 2006. Kecenderungan lama pengeringan terhadap kerusakan antioksidan dari simplesia jahe (Zingiber officinale Roscoe.) [skripsi]. Bandung: Program Studi Teknik Kimia, Institut Teknologi Bandung.
Behera BC, Adawadkar B, Makhija U. 2003. Inhibitory activity of xanthine oxidase and superoxidase-scavenging activity in some taxa of the lichen family Graphidaceae.
Phytomedicine 10:536-543.
[BPOM RI] Balai Penelitian Obat dan Makanan, Republik Indonesia. 2004.
Fitofarmaka dan Obat Herbal Terstandar. Jakarta: BPOM RI.
Brouwer N et al. 2005. An
ethnopharmacological study of medicinal plants in New South Wales. Molecules
10:1252–1262.
Cho, Suk H, penemu; Melaleuca, Inc. 30 Maret 2004. Dietary supplements and methods for treating pain and inflammation. US Patent 6713096.
Dalimartha S. 2001. 96 Resep Tumbuhan Obat untuk Reumatik. Jakarta: Penebar Swadaya.
Dannhardt G, Laufer S. 2000. Structural approach to explain the selectivity of COX-2 inhibitors. European Medicines
14
Darlina dan Wahyuni S. 2004.
Radiosinovektomi Sebagai Alternatif Pengobatan Radang Sendi Tanpa Operasi.
Volume ke-5. Jakarta: Alara.
Drazen JM, Nissen SE, Topol EJ. 2005. COX-2 inhibitors-a lesson in unexpected problems. J Biol Chem 286:954-959. Ekaprasada MT. 2006. Isolasi senyawa
antioksidan kulit batang kayu manis (Cinnamomum burmannii Nees ex Blume) [tesis]. Jakarta: Program Pascasarjana Kimia, Universitas Indonesia.
Enroth C, Eger BT, Okamoto K, Nishino T, Nishino T. 2000. Crystal structure of bovine milk xanthine dehydrogenase and xanthine oxidase: structurebased mechanism of conversion. Proc Natl Acad Sci USA 97:10723–10728.
Evi S. 2006. Khasiat ekstrak buah mengkudu dan rimpang jahe merah sebagai obat penunjang dalam penanganan tuberkulosis [skripsi]. Bandung: Sekolah Farmasi, Institut Teknologi Bandung.
Filha ZSF, Vitolo IF, Fietto LG, Lombardi, Guimaraes S. 2006. Xanthine oxidase inhibitory activity of Lychnophora species from Brazil (“Arnica”). Journal of Ethnopharmacology 107:79-82.
Hakim L. 2005. Inhibisi formula ekstrak sidaguri (Sida rhombifolia) dan seledri (Apium graveolens) pada enzim xantin oksidase serta efek antiinflamasi [skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor.
Hegazy MF. 2008. Cycooxygenase 1 (COX-1) and 2 inhibitory labdane diterpenes from
Crassochepalum mannii. J. Nat. Prod
71:1070-1073.
Heinicke R dan Olsen AK. 1985. Understanding the Miracle: An Introduction to the Science of Noni. Hawai: Universty of Hawaii. http://www.hawaiiannoni.com/noni/magic fruit.html [14 Agustus 2008]
Iswantini D. 2005. Sidaguri (Sida rhombifolia
L.) and seledri (Apium graveolans L.) as anti-gout: in vitro, in vivo assays and bioactive compounds. International
Conference On Medicinal Plants: Sustainable Management and Utilization of Medicinal Plant Resources. Kuala Lumpur, 5-7 Des 2005. Malaysia: Universiti Putra Malaysia dan Jabatan Perhutanan Semenanjung Malaysia. hlm 242-253.
Jang DS, Cuendet M, Fong HHS, Pezzuto JM, Kinghorn AD. 2004. Constituent of
Asparagus officinalis evaluated for inhibitory activity against cyclooxygenase 2. J Agric. Food Chem 52: 2218-2222. Julius RL, Omar KF, Janet C, Jeanne P,
Frederick H. 2007. Synthesis and evaluation of transthyretin amyloidosis inhibitors containing carborane pharmacophores. National Academy of Science 10:4808–4813.
Kartasasmita RE. 2002. Perkembangan obat antiradang bukan steroid. Laporan Unit bidang ilmu kimia medisinal/farmasi analisis. Bandung: Institut Teknologi Bandung. hlm 75-82.
Khanom F, Kayahara H, Hirota M, Tadasa K. 2003. Superoxide scavenging and tyrosinase inhibitory active compound in ginger (Zingiber officinale Roscoe.).
Pakistan Journal of Biological Sciences
6(24):1996-2000.
Khare CP. 2007. Indian medical plants. Library of Congress Control 92:24-46. Kong LD, Cai C, Huang W, Cheng CHK, Tan
RX. 2000. Inhibitions of xanthine oxidase by some Chinese medicinal plants used to treat gout. J Ethnopharm 73:199-207.
Krumhar KC, penemu; Metagenics, Inc. 27 September 2005. Method for treatment of inflammation and pain in mammals. US Patent 6949260.
Lantz RC. 2007. The Effect of extract from ginger rhizome on inflammatory mediator production. Phytomedicine 14:123-128. Lee HJ et al. 2005. In vitro anti-inflammatory
and anti-oxidative effects of Cinnamomum camphora extracts. Elsevier Ireland
Lelo A, Hidayat DS, Ichwan M. 2004. Peran sediaan COX-2 inhibitor dalam modulasi nyeri. Repository 2:1-5.
Lin LZ, Lindenmaier M, Yang J, Cleary M, Qiu SX. 2000. LC/ESI/MS study of the flavonoid glycoside malonates of red clover (Trifolium pratense). J Agric Food Chem 48: 354-356.
Luthana YK. 2008. Jahe dan senyawa antioksidannya [skripsi] Bandung: Sekolah Farmasi, Institut Teknologi Bandung.
Ma’mun, Sukmasari M, Bermawie N. 2006. Perbandingan teknis ekstraksi dalam analisis gingerol jahe merah (Zingiber officinale Rocoe). Prosiding Seminar Nasional dan Pameran Pengembangan Tanaman Obat Menuju Kemandirian Masyarakat dalam Pengobatan Keluarga; Jakarta, 7 September 2006.
Marrero E. 2006. COX-2 and sPLA2 inhibitory activity of aqueous extract and polyphemnols of Rhyzophora mangle (red mangrove). Fitoterapia 77:313-315. Matondang I, Rahimy A. 2007. Zingiber
officinale L. (Jahe). Jakarta: Pusat penelitian dan pengembangan tumbuhan obat.
Morshet AC et al. 2009. Synthesis of celecoxib analogues possessing a n -difluoromethyl-1,2-dihydropyrid-2-one 5-lipoxygenase pharmacophore: biological evaluation as dual inhibitors of cyclooxygenases and 5-lipoxygenase with anti-inflammatory activity. J Med Chem
52:1525–1529.
Muflihat DA. 2008. Inhibisi ekstrak herba kumis kucing dan daun salam terhadap aktivitas xantin oksidase [skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor.
Murwanti R, Edy M, Arief N, Susi AK. 2004. Efek ekstrak etanol rimpang temu putih
(Curcuma zedoaria Roscoe.) terhadap
pertumbuhan tumor paru fase post inisiasi
pada mencit betina diinduksi Benzo[a]piren. Farmasi Indonesia
15(1):7-12.
Noro T, Oda Y, Miyase T, Ueno A, Fukushima S. 1983. Inhibition of xanthine oxidase from the flowers and buds of
Daphne genkwa. Chem Pharm Bull
31(11):3984-3987.
Pacher P, Nivorozhkin A, Szabo C. 2006. Therapeutic effects of xanthine oxidase inhibitors: renaissance half a century after the discovery of allopurinol. Pharmacol Rev 58:87–114.
Pan BS, Ying YK, Tsui YC, Yeuk CL. 2005. Anti-oxidative and anti-inflammatory activities of two different species of a Chinese herb I-Tiao-Gung. European Journal of Pharmalogy 451:111-1118. Rhamdani TH. 2004. Isolasi dan identifikasi
senyawa bioaktif seledri (Apium graveolens) dalam menghambat aktivitas xantin oksidase [skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor.
Rina W. 1995. Uji efek antiradang ekstrak etanol rimpang jahe merah (Zingiber officinale var Rubrum), rimpang jahe putih kecil (Zingiber officinale var Amarum), dan rimpang jahe putih besar (Zingiber officinale Rosc.) pada tikus putih jantan galur [skripsi]. Bandung: Sekolah Farmasi, Institut Teknologi Bandung.
Rosidah. 1999. Uji aktivitas antiradang pada tikus galur wistar dan telaah fitokimia ekstrak daun babadotan dan ekstrak rimpang jahe [skripsi]. Bandung: Sekolah Farmasi, Institut Teknologi Bandung.
Samsudin S. 2006. Efektivitas kombinasi ekstrak rimpang jahe merah (Zingiber officinale Rosc. Var. Sunti. Val.) dan ekstrak buah mengkudu (Morinda
citrifolia Linn.) sebagai obat
komplementer penanganan tuberkulosis [skripsi]. Bandung: Sekolah Farmasi, Institut Teknologi Bandung.
Steinmeyer J. 2000. Pharmacological basis for therapy of pain and inflammation with nonsteridal antiinflammatory drugs.
Arthritis Res 2:379-385.
Sudjadi. 1985. Penentuan Struktur Senyawa Organik. Jakarta: Ghalia Indonesia.
Tamta H, Sukirti K, Anup KM. 2005. Biochemical chacarterization of some
16
pyrazolopyrimidine-based inhibitors of xanthine oxidase. Biochemistry 71:49-50. Thompson M. 2002. The use of ginger
(Zingiber officinale Roscoe.) as a potential antiinflammatory and antithrombcagent.
Prostagland Leukotrien Essent Fat Acid
67:475-478.
Tjendraputra E, Tran VH, Liu-Brennan D, Roufogalis BD, Duke CC. 2001. Effect of ginger constituents and synthetic analogues on cyclooxigenase 2 enzyme in intact cells. Bioorganic Chemistry 29:152-163.
Tran QK et al. 2003. In vitro antiplasmodial activity of antimalarial medicinal plants used in Vietnamese traditional medicine.
Journal of ethnopharmacology 86:249-52. Trivadila. 2008. Daya inhibisi ekstrak
rimpang jahe merah (Zingiber officinale
Linn. var Rubrum) terhadap aktivitas enzim siklooksigenase 2 (COX-2) secara
in vitro. Laporan hibah penelitian internal. Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Tsujii M, Kawano S, Dubois RN. 1997. Cyclooxygenase-2 expression in human colon cancer cells increases metastatic potential. Medicine 94(7):3336-40.
Umaheswari M et al. 2007. Xanthine oxidase inhibitory activity of some Indian medical plant. Journal Ethnopharmacological Communication 109:547-551.
Widowati L, Dzulkarnain B, Sundari D, Sampurno OD. 1996. Penelitian Tanaman Obat di Beberapa Perguruan Tinggi di Indonesia VIII [bibliografi]. Jakarta: Pusat Penelitian dan Pengembangan Farmasi. Winarno FG. 1997. Kimia Pangan dan Gizi.
Jakarta: PT Gramedia Pustaka Utama. Yu KH. 2006. FebuXOstat: a novel
non-purine selective inhibitor of xanthine oxidase for the treatment of hyperuricemia in gout. 70 recent patents on iInflammation & allergy drug discovery
18
Lampiran 1. Bagan alir penelitian
Ekstraksi Jahe Merah (Zingiber Officinale), dan Kulit Kayu Manis (Cinnamomum burmannii)
Uji Sitotoksin Ekstrak Terhadap A. salina Leach
Uji Daya Inhibisi ekstrak Air dan Alkohol dari rimpang
jahe merah terhadap enzim COX-2
Uji Daya Inhibisi ekstrak Air dan Alkoholdari rimpang jahe merah dan
kulit kayu manis terhadap enzim XO Uji Fitokimia
• Uji Alkaloid
• Uji Triterpenoid dan Steroid
• Uji Saponin dan Flavonoid
Lampiran 2. Ekstrak air dan etanol Ektrak air
Ekstrak etanol
Serbuk rimpang jahe merah dan kulit kayu manis
Ekstrak air
dipekatkan dengan rotavavor
diekstrak dengan air disaring
Serbuk rimpang jahe merah dan kulit kayu manis
Ekstrak etanol
dipekatkan dengan rotavavor
diekstrak dengan etanol disaring
20
Lampiran 3. Uji toksisitas dengan larva udang Penetasan kista A. salina L
Pembuatan ekstrak 5000 ppm Pembuatan ekstrak 1000 ppm Aerator 48 jam Lampu neon Larva udang 50 mg telur
Artemia salina Leach
Air laut
Diisi 4000 l air laut 10 larva A. salina
1000 l ekstrak Vial ukuran 5000 l
Biarkan selama 24 jam
0,2500 g ekstrak Air laut
Lampiran 4. COX Inhibitor Sreening Assay Kit (Cayman Chemical Catalog No. 560131)
Preparasi Larutan Untuk Uji Aktivitas COX-2
Untuk menguji aktivitas enzim COX-2 dengan metode ELISA, perlu disiapkan larutan-larutan sebagai berikut:
Larutan Background. Sebanyak 0,02 ml COX-2 dipindahkan ke dalam tabung mikrofuge 0,5 ml dan ditempatkan pada air mendidih selama 3 menit untuk dinonaktifkan. Enzim tidak aktif ini akan digunakan untuk menghasilkan nilai latar belakang (background). Sebanyak 0,97 ml bufer reaksi, 0,01 ml heme, dan 0,01 ml COX-2 nonaktif dicampurkan dalam tabung reaksi. Selanjutnya diinkubasi selama 10 menit pada 37°C dan ditambahkan 0,01 ml substrat asam arakidonat. Selanjutnya diinkubasi kembali selama 2 menit pada 37°C. Sebanyak 0,05 ml HCl 0,01 ml SnCl2 dan ditambahkan ke dalam campuran dan diinkubasi selama 5 menit dalam suhu ruang. Kemudian larutan background diencerkan 100x dengan mencampurkan 0,01 ml larutan background dengan 0,99 ml bufer EIA.
Larutan aktivitas awal COX-2 100%. Sebanyak 0,95 ml bufer reaksi, 0,01 ml heme, dan 0,01 ml COX-2 dicampurkan dalam dua tabung reaksi dan ditambahkan 0,02 ml bufer reaksi atau solven, lalu dihomogenasi. Larutan tersebut diinkubasi selama 10 menit pada temperatur 37°C. Reaksi diinisiasikan dengan ditambahkan larutan SnCl2 sebanyak 0,01 ml pada semua larutan, dihomogenasi dan diinkubasi selama 2 menit pada temperatur 37°C. Sebanyak 0,05 ml HCl 0,01 ml SnCl2 dan ditambahkan ke dalam campuran dan diinkubasi selama 5 menit dalam suhu ruang. Selanjutnya larutan tersebut diencerkan 100x dengan mencampurkan 0,01 ml larutan aktivitas awal COX-2 100% dengan 0,99 ml bufer EIA, kemudian larutan tersebut diambil 0,05 ml dan ditambahkan 0,95 ml bufer EIA untuk pengenceran 2000x. Pengenceran 4000x dilakukan dengan pencampuran 0,5 ml bufer EIA dengan 0,5 ml larutan dari pengenceran 2000x.
Larutan inhibitor COX-2/ekstrak etanol rimpang jahe merah. Sebanyak 0,95 ml bufer reaksi, 0,01 ml heme, dan 0,01 ml COX-2 dicampurkan dalam enam tabung reaksi dan ditambahkan 0,02 ml sampel, lalu dihomogenasi. Setiap tabung reaksi tersebut diinkubasi selama 10 menit pada temperatur 37°C. Reaksi diinisiasikan dengan ditambahkan larutan SnCl2 sebanyak 0,01 ml pada semua tabung reaksi, dihomogenasi dan diinkubasi selama 2 menit pada temperatur 37°C. Sebanyak 0,05 ml HCl 0,01 ml SnCl2 dan ditambahkan ke dalam campuran dan diinkubasi selama 5 menit dalam suhu ruang. Selanjutnya larutan inhibitor COX-2 tersebut diencerkan 2000x dan 4000x.
Standar Prostaglandin (PG). Standar PG yang telah diliofilisasi dilarutkan dalam 1 ml bufer EIA. Konsentrasi larutan akan menjadi 10 ng/ml (the bulk standard). Larutan disimpan pada temperatur 4°C dan akan stabil kira-kira enam minggu. Persiapan standar yang digunakan dalam EIA: disiapkan sebanyak 8 tabung reaksi bersih dan diberi nomor 1-8. Sebanyak 0,8 ml hasil ekstraksi bufer EIA dimasukkan ke dalam tabung satu dan 0,5 ml bufer EIA dimasukkan ke dalam tabung 2-8. Sebanyak 0,2 ml bulk standard (10 ng/ml) dipindahkan ke dalam tabung satu dan dicampurkan secara menyeluruh. Secara berurutan, standar diencerkan dengan memindahkan sebanyak 0,5 ml larutan dari tabung satu ke tabung dua dan dicampurkan secara menyeluruh. Lalu, sebanyak 0,5 ml larutan dari tabung dua dipindahkan ke tabung tiga dan dicampurkan secara menyeluruh. Perlakuan tersebut diulang untuk tabung 4-8. Larutan standar tersebut stabil selama 24 jam.
Konsentrasi masing-masing standar yang diperoleh adalah 2000, 1000, 500, 250, 125, 62,5, 31,3, dan 15,6 (pg/ml).
Pengujian
Uji ELISA dilakukan dengan mengisi sumur-sumur yang disediakan dengan larutan-larutan yang telah direaksikan.
Bufer EIA. Sebanyak 0,10 ml bufer EIA ditambahkan ke dalam sumur-sumur (wells) Non-specific Binding (NSB) dan sebanyak 0,05 ml bufer EIA ditambahkan ke dalam sumur-sumur Maximum Binding (B0).
Larutan Standar Prostaglandin (PG). Tabung reaksi yang diberi label 8, sebanyak 0,05 ml ditambahkan ke dalam sumur-sumur standar terendah (S8). Sebanyak 0,05 ml larutan dari tabung reaksi 7 ditambahkan ke dalam sumur-sumur standar berikutnya (S7). Prosedur tersebut diteruskan hingga semua standar telah diekstraksi (S6-S1). Ujung pipet yang sama digunakan untuk hasil ekstraksi semua standar. Ujung pipet harus dikalibrasi pada standar yang akan dipipet sebelum digunakan.
22
Larutan Background. Setiap sumur BC ditambahkan contoh dari tabung reaksi BC sebanyak 0,05 ml. Pengujian contoh tersebut dilakukan dengan dua ulangan.
Larutan Aktivitas Awal COX-2 100%. Setiap sumur (‡) ditambahkan sebanyak 0,05 ml contoh dari tabung reaksi IA2 dan IA3. Pengujian contoh tersebut dilakukan dengan dua ulangan.
Larutan Inhibitor COX-2. Sebanyak 0,05 ml contoh dari tabung C2 dan C3 ditambahkan ke dalam masing-masing sumur (). Pengujian contoh tersebut dilakukan dengan dua ulangan. Selanjutnya sebanyak 0,05 ml PG AChE tracer ditambahkan pada setiap sumur kecuali sumur Aktivitas Total (TA) dan sumur Blanko (Blk). Setiap sumur ditambahkan sebanyak 0,05 ml antiserum prostaglandin kecuali sumur Aktivitas Total (TA), sumur Non-specific Binding (NSB), dan sumur Blanko (Blk).
Plat yang berisi contoh-contoh tersebut ditutup dengan film plastik dan diinkubasikan selama 18 jam pada temperatur ruang.
Setelah diinkubasi, sumur-sumur dikosongkan dan dibilas lima kali dengan bufer pencuci, lalu setiap sumur ditambahkan dengan pereaksi Ellman sebanyak 0,2 ml, dan tracer sebanyak 0,005 ml ditambahkan pada sumur Aktivitas Total (TA). Plat ditutup dengan film plastik.
Reaksi optimal diperoleh dengan menggunakan suatu alat pengocok orbital yang dilengkapi dengan suatu tutup datar besar, dan dibiarkan bereaksi pada keadaan gelap selama 60-90 menit.
Pembacaan plat dilakukan dengan ELISA reader pada panjang gelombang 405 dan 420 nm. Bagian bawah dari plat yang akan dibaca diseka dengan tisu untuk menghilangkan sidik jari, kotoran dan sebagainya karena dapat mempengaruhi hasil pembacaan. Pereaksi Ellman juga tidak boleh mengotori tutup dari plat karena dapat mempengaruhi hasil pembacaan absorbansi.
Plat diperiksa secara bertahap hingga diperoleh nilai minimum dari 0,3 A.U. pada sumur B0. Pembacaan plat dilakukan saat diperoleh nilai absorbansi sumur B0 berada pada rentang 0,3-0,8 A.U. Bila nilai absorbansi dari sumur-sumur lebih dari 1,5 maka plat dicuci, lalu ditambahkan pereaksi Ellman segar dan dibiarkan bereaksi lagi.
Perhitungan Hasil
Absorbansi yang terbaca dari sumur-sumur NSB dirata-ratakan. Absorbansi yang terbaca dari sumur-sumur B0 dirata-ratakan.
Perhitungan diulang untuk S2-S8 dan semua sumur contoh. Kurva Standar
Kurva %B/B0 diplot antara nilai S1-S8 dengan konsentrasi PG (pg/ml) pada kertas semi-log. Penentuan Konsentrasi Prostaglandin Dalam Contoh
Nilai %B/B0 untuk masing-masing contoh dihitung.
Konsentrasi dari masing-masing contoh ditentukan dengan mengidentifikasi %B/B0 pada kurva standar dan membaca nilai koresponden pada sumbu x. Nilai %B/B0lebih besar dari 80% dan kurang dari 20% harus diuji ulang karena memiliki jangkauan linear di luar kurva standar. Perbedaan sebesar 20% atau lebih besar antara konsentrasi yang nyata dari dua pengenceran yang berbeda pada contoh yang sama akan menunjukkan adanya gangguan yang dapat dihapuskan dengan cara pemurnian. Contoh COX harus dikalikan dengan faktor pengenceran yang sesuai (BC = 100, IA2 dan C2 = 2000, IA3 dan C3 = 4000).
Contoh aktivitas awal COX-2 100% dan contoh inhibitor COX-2 dikurangi nilai background (BC).
B0 koreksi = nilai rata-rata B0 - nilai rata-rata NSB %B/B0 =
B0 koreksi
x100 absorbansi S1 - nilai rata-rata absorbansi NSB
contoh aktivitas awal COX-2 100% - contoh inhibitor COX-2 % Inhibitor = x 100
b – c
a
47,8392 – 47,6154 3,0458
Lampiran 5. Kadar air rimpang jahe merah dan kulit kayu manis Penentuan Kadar Air
Jenis Bobot cawan (g) Bobot cawan + Sampel (g) Sebelum Pemanasan 3 Jam 105°C (b) Bobot cawan + Sampel (g) Setelah Pemanasan 3 Jam 105°C (c) Bobot Sampel (g) (a) Kadar Air (%) Rataan Kadar Air (%) Jahe Merah 44,7934 47,8392 47,6154 3,0458 7,4780 7,34 33,4575 36,4965 36,2730 3,0390 7,3544 44,3087 47,3423 47,1208 3,0336 7,3016
Kulit Kayu Manis
38,7454 41,7774 41,4944 3,0320 9,3338 9,37 33,3824 36,4060 36,1117 3,0236 9,7334 44,7063 47,7316 47,4578 3,0253 9,0503
Contoh perhitungan (ulangan pada rimpang jahe merah): Kadar Air = x 100 %
dengan
a = bobot sebelum dikeringkan (g) b = bobot setelah dikeringkan (g)
Kadar Air = x 100 %
24
Lampiran 6. Aktivitas ekstrak rimpang jahe merah dan kulit kayu manis terhadap larva udang setelah 24 jam
Uji Toksisitas Larva Udang Dalam Ekstrak Air Rimpang Jahe Merah [ppm] Ulangan Jumlah
Udang
Jumlah Udang Mati
%
Mortalitas Rerata Probit Log Konsentrasi (mg/L) 0 1 10 0 0,00 0 - 0 2 10 0 0,00 3 10 0 0,00 10 1 10 0 0,00 3 3,12 1 2 10 1 10,00 3 10 0 0,00 100 1 10 4 40,00 39 4,72 2 2 11 4 36,36 3 10 4 40,00 1000 1 12 11 91,67 94 6,56 3 2 11 10 90,91 3 10 10 100,00
Uji Toksisitas Larva Udang Dalam Ekstrak Etanol 70% Rimpang Jahe Merah [ppm] Ulangan Jumlah
Udang
Jumlah Udang Mati
%
Mortalitas Rerata Probit Log Konsentrasi (mg/L) 0 1 11 0 0,00 0 - 0 2 10 0 0,00 3 11 0 0,00 10 1 11 1 9,10 3 3,12 1 2 11 0 0,00 3 12 0 0,00 100 1 10 6 60,00 56 5,15 2 2 10 5 50,00 3 12 7 58,33 1000 1 10 10 100,00 97 6,88 3 2 10 9 90,00 3 10 10 100,00 Uji Toksisitas Larva Udang Dalam Ekstrak Air Kulit Kayu Manis
[ppm] Ulangan Jumlah Udang
Jumlah Udang Mati
%
Mortalitas Rerata Probit Log Konsentrasi (mg/L) 0 1 10 0 0,00 0 - 0 2 10 0 0,00 3 10 0 0,00 10 1 11 1 9,09 3 3,12 1 2 10 0 0,00 3 10 0 0,00 100 1 10 4 40,00 38 4,70 2 2 11 4 36,36 3 11 4 36,36 1000 1 10 10 100,00 97 6,88 3 2 10 10 100,00 3 11 10 90,91
Uji Toksisitas Larva Udang Dalam Ekstrak Etanol 70% Kulit Kayu Manis [ppm] Ulangan Jumlah Udang Jumlah Udang Mati %
Mortalitas Rerata Probit Log Konsentrasi (mg/L) 0 1 11 0 0,00 0 - 0 2 10 0 0,00 3 10 0 0,00 10 1 12 1 8,33 5 3,35 1 2 12 1 8,33 3 10 0 0,00 100 1 11 4 54,55 52 5,05 2 2 10 5 50,00 3 10 5 50,00 1000 1 10 10 100,00 97 6,88 3 2 11 11 100,00 3 10 9 90,00
Lampiran 8. Pembuatan Kurva standar Kurva standar siklooksigenase 2
y = -13.681Ln(x) + 123.49 R2 = 0.9819 0 20 40 60 80 100 0 500 1000 1500 2000 2500 Prostaglandi (pg/ml) %B /B 0
Kurva hubungan [Prostaglndin] (pg/mL) dengan %B/B0 Kurva standar xantin oksidase
Konsentrasi Xantin (mM) Absorban
0,0 0,000 0,1 0,482 0,2 0,805 0,3 1,076 0,4 1,197 0,5 1,323 0,6 1,446 0,7 1,510 = 264 nm y = 2.0315x + 0.2688 R2 = 0.9071 0 0.5 1 1.5 2 0 0.2 0.4 0.6 0.8 Konsentrasi Xantin (mM) Ab so rb an
28
Lampiran 9. Data hasil uji xantin oksidase berbagai ekstrak Blanko
Ulangan Serapan Aktivitas (mM/L Menit)
1 0,846 92,4167
2 0,802 97,2297
3 0,618 117,3572
Rerata 102,3345
Ektrak air rimpang jahe merah Konsentrasi (ppm) Ulangan Serapan Aktivitas (mM/L menit) Rerata Aktivitas (mM/L menit) Persen Inhibisi (%) 20 1 1,000 75,5709 75,0239 26,69 2 1,006 74,9145 3 1,009 74,5864 40 1 1,021 73,2737 74,9874 26,72 2 1,006 74,9145 3 0,989 76,7741 60 1 0,982 77,5399 76,8471 24,91 2 1,005 75,0239 3 0,978 77,9774 80 1 0,978 77,9774 78,4879 23,30 2 0,969 78,9619 3 0,973 78,5244 100 1 0,954 80,6027 80,2016 21,63 2 0,956 80.3839 3 0,963 79,6182 Ektrak etanol rimpang jahe merah
Konsentrasi (ppm) Ulangan Serapan Aktivitas (mM/L menit) Rerata Aktivitas (mM/L menit) Persen Inhibisi (%) 20 1 1,026 72,7268 74,2582 27,44 2 1,000 75,5709 3 1,010 74,4770 40 1 1,058 69,2264 68,6794 32,89 2 1,076 67,2574 3 1,055 69,5545 60 1 1,134 60,9129 66,8563 34,67 2 1,060 69,0076 3 1,045 70,6484 80 1 1,118 62,6631 64,0122 37,45 2 1,095 65,1790 3 1,104 64,1945 100 1 1,100 64,6321 65,2884 36,20 2 1,096 65,0696 3 1,086 66,1635
Ektrak air Kulit Kayu Manis Konsentrasi (ppm) Ulangan Serapan Aktivitas (mM/L menit) Rerata Aktivitas (mM/L menit) Persen Inhibisi (%) 20 1 1,136 60,6941 62,5537 38,87 2 1,106 63,9757 3 1,115 62,9912 40 1 1,172 56,7561 57,7771 43,54 2 1,164 57,6312 3 1,152 58,9439 60 1 1,221 51,3961 51,2138 49,96 2 1,221 51,3961 3 1,226 50,8491 80 1 1,236 49,7552 47,8592 53,23 2 1,263 46,8018 3 1,261 47,0205 100 1 1,286 44,2858 46,4159 54,64 2 1,301 42,6450 3 1,304 42,3168 Ektrak etanol Kulit Kayu Manis
Konsentrasi (ppm) Ulangan Serapan Aktivitas (mM/L menit) Rerata Aktivitas (mM/L menit) Persen Inhibisi (%) 20 1 1,152 58,9439 58,1782 43,15 2 1,168 57,1937 3 1,157 58,3969 40 1 1,187 55,1153 55,5893 45,68 2 1,194 54,3496 3 1,167 57,3030 60 1 1,221 51,3961 52,3076 48,89 2 1,207 52,9275 3 1,210 52,5993 80 1 1,254 47,7863 48,4061 52,70 2 1,250 48,2238 3 1,241 49,2083 100 1 1,292 43,6295 44,2129 56,80 2 1,292 43,6295 3 1,276 45,3797 Alopurinol Konsentrasi (ppm) Ulangan Serapan Aktivitas (mM/L menit) Rerata Aktivitas (mM/L menit) Persen Inhibisi (%) 70 1 1,504 20,4392 20,5121 79,96 2 1,506 20,2204 3 1,500 20,8767 100 1 1,656 3,8122 2,1349 97,91 2 1,686 0,5305 3 1,672 2,0620 Ektrak etanol kumis kucing
Konsentrasi (ppm) Ulangan Serapan Aktivitas (mM/L menit) Rerata Aktivitas (mM/L menit) Persen Inhibisi (%) 70 1 1,072 67,6949 65,8718 35,63 2 1,083 66,4917 3 1,111 63,4288 100 1 1,231 50,3021 49,4635 51,67 2 1,244 48,8801 3 1,241 49,2083
30
% Inhibisi = Biouric Konsentrasi (ppm) Ulangan Serapan Aktivitas (mM/L menit) Rerata Aktivitas (mM/L menit) Persen Inhibisi (%) 70 1 0,983 77,4305 77,9045 23,87 2 0,974 78,4150 3 0,979 77,8680 100 1 1,069 68,0231 64,3039 37,16 2 1,134 60,9129 3 1,106 63,9757 contoh perhitungan Y = a +bXY = rata-rata absorban hasil pengukuran X = konsentrasi xantin setelah bereaksi blanko
Y = 0,2688 + 2,0315X 0.846 = 0,2688 + 2,0315X X = 0,2841
xantin total 0.7 mM xbereaksi = xmula-mula – xsisa xbereaksi = 0,7 – 0,2841 = 0,4159
= 92,4167
Ekstrak air rimpang jahe merah (ulangan 1 konsentrasi 10 ppm)
(Aktivitas Xantin Oksidase blanko–Aktivitas xantin oksidase sampel) x 100% Aktivitas xantin oksidase blanko
= (102,2935 – 75,0239) / 102,2935 x 100% = 26,69%
Aktivitas xantin oksidase =
Xantin yang bereaksi (mM) Volume enzim (L) x Waktu Inkubasi
Aktivitas xantin oksidase = 0,4159 mM 1.10-4 x 45 menit