August EG. 2000. Kajian lipase amobil dari Aspergillus niger pada pembuatan MAG yang bersifat antibakteri dati minyak kelapa [tesis]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Anggirasti. 2008. Gliserolisis RBDPO (refined bleached deodorized palm oil) dengan lipase untuk sintesis MDAG (mono-diasilgliserol) [tesis]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Benson, H.J. 2001. Microbiological application: Laboratory manual in general microbiology. New York (US): The Mc Graw Hills Company.
Blain JA, Patterson JDE, Shaw CEL. 1978. The nature of mycelial lipolytic enzyme in filamentous fungi. Microb Lett. 3(1): 85-87.
Bradford MM. 1976. A rapid and sensitive method for the quantitation of microorganisms quantities of protein in utilizing the principle of protein dye binding. Anal Biochem 72 (1): 248‐254.
Bussamara R, Fuentefria AM, Oliveira ED, Broetto L, Simcikova M, Valente P, Schrank A, Vainstein. 2010. Isolation of a lipase-secreting yeast for enzyme production in a pilot-plant scale batch fermentation. Bioresour Technol. 101(1): 268-275.
Colin VL, Baigori MD, Pera LM. 2010. Effect of environmental conditions on extracellular lipases production and fungal morphology from Aspergillus niger MYA 135. J Basic Microbiol. 50 (1):52–58.
Crueger W, Crueger A. 1984. Biotechnology: A Textbook of Industrial Microbiology. Brock TD, editor. Madison (US): Science Tech.
Damaso MCT, Passianoto MA, Freitas SCD, Freire DMG, Lago RCA, Couri S. 2008. Utilization of Agroindustrial Residues for LipaseProduction by Solid-State fermentation. Brazil J Microbiol. 39 (1): 676-681.
Dosanjh NS, Kaur J. 2002. Immobilization, stability and esterification studies of alipase from Bacillus sp. J Biotechnol Appl Biochem. 36(1): 7-12.
Faloni G, Armas JC, Mendoza CD, Hernandez JLM. 2006. Production of extracelluler lipase from Aspergillus niger by solidstate fermentation. Biotech. 44 (2): 235-240.
Fardiaz, Srikandi. 1988. Fisiologi Fermentasi. Bogor (ID): Pusat Antar Universitas IPB.
Gandjar I, Samson RA, Van K, Vermeulen T, Oetari A, Santoso I. 1999. Pengenalan Kapang Tropik Umum. Jakarta (ID): Yayasan Obor Indonesia. Gardilo MA, Sanz A, Sanchez A, Valero F, Montesinos JL, Lafuente J, Sola C.
1998. Enhancement of Candida rugosa lipase production by using different control fed batch operational strategies. J Biotechnol and Bioeng. 60(1): 156-168.
Gupta R, Rathi P, Gupta N, Bradoo S. 2003. Review lipase assays for conventional and molecular screening. Biotechnol Appl Biochem.37(1): 63-71. Hiol A, Jonzo MD, Druet D, Comaea L. 1999. Production, purification and
characterization of an extracellular lipase from Mucor hiemalis, F.hiemalis. J. Enzyme and Microbiol. 25(1): 80 - 87.
Hou CT, Johnston TM. 1992. Screening of lipase activities with culture from agricultural research services culture collection. JAOCS. 69(1): 1088-1097.
33 Illanes A, editor. 2008. Enzyme Biocatalysis. de Valpara ıso: Springer Science,
Business Media B.V.
Ilyas M. 2006. Isolasi dan identifikasi kapang pada relung rizosfir tanaman di kawasan cagar alam gunung Mutis, Nusa Tenggara Timur. Biodiver. 3(l): 216-220.
Joseph B, Ramteke PW, Thomas G. 2008. Cold active microbial lipases: some hot issues and recent developments. Biotechnol Adv.26 (1): 457–70.
Kouker G, Jaeger KE. 1987. Specific and sensitive plate assay for bacterial lipases. Appl Environ Microb. 3(1): 211-213.
Kristanti ND. 2001. Pemurnian parsial dan karakterisasi lipase ekstraselular dari kapang R.oryzae TR 32 [tesis]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Kurnia DRD. 2010. Studi aktivitas enzim lipase dari Aspergillus nigersebagai biokatalis pada proses gliserolisis untuk menghasilkan monoasilgliserol [tesis]. Semarang (ID): Universitas Diponegoro.
Kwon DY, Rhe JS. 1986. A simple and rapid colorimetric method for determination of free fatty acids for lipase assay. JAOCS. 63 (1): 89-92 Lehninger. 1995. Dasar-Dasar Biokimia Jilid 1. Terjemahan: Suhartono MT.
Jakarta (ID): Erlangga.
Lima VMG, Krieger N, Sarquis MIM, Mitchell DA, Ramos LP, and Fontana JD. 2003. Effect of nitrogen and carbon sources on lipase production by Penicillium aurantiogriseum. Food Technol Biotechnol. 41(2): 105-110. Macrae. 1983. Extracellular microbial lipase. Di dalam: Fogarty WM. editor.
Microbial Enzym and Technology. London (GB): Applied Science.
Ming LO, Ghazali HM, Let CC. 1998. Effect of enzymatic transesterification on the fluidity of palm stearin-palm kernel olein mixtures. Food Chem 63(2): 155-159.
Mishra S, Gupta N. 2014 . Inducers for the enhanced production of lipase by Streptomyces isolated from mangrove ecosystem. Int J Curr Microbiol App Sci. 3(11): 370-376
Murni SW, Kholisoh SD, Tanti DL, Petrissia EM. 2011. Produksi, karakterisasi, dan isolasi lipase dari Aspergillus niger. Di dalam: Murni SW, Kholisoh SD, Tanti DL, Petrissia EM, editor. Prosiding Seminar Nasional Tenik Kimia “Kejuangan”Pengembangan Tenologi Kimia untuk Pengolahan Sumber Daya Alam Indonesia; 2011 Feb 22; Yogyakarta, Indonesia. Yogyakarta (ID): UPN. hlm 1-7.
Nuraida L, Dewanti R, Hariyadi P, Budijanto S. 2000. Eksplorasi, karakterisasi dan produksi lipase dengan aktivitas esterifikasi tinggi dari kapang Indigenus. Laporan Tahun Pertama Penelitian Hibah Bersaing VIII/I Perguruan Tinggi. Bogor (ID): Instiut Pertanian Bogor.
Nuraida L, Dewanti R, Hariyadi P, Budijanto S. 2003. Karakterisasi Reaksi Lipase dari Kapang Indigenus dan Aplikasinya untuk produksi minyak bernilai tinggi. Laporan Tahun Pertama Penelitian Hibah Bersaing Perguruan Tinggi. Bogor (ID): Instiut Pertanian Bogor.
Ota Y, Yamada K. 1996. Lipase from Candida paralipolytica: part 1 Anionic surfactant as the essential activator in the systems emulsified by polyvinyl alcohol. Agric Biol Chem. 30(1): 351-358.
34
Pandey A, Benjamin S, Soccol CR, Nigam P, Krieger N, Soccol VT. 1999. The realm of microbial lipases in biotechnology. Biotech Appl Biochem. 29(1): 119-131.
Pandiangan P. 2008. Studi proses interesterifikasi enzimatik (EIE) campuran minyak sawit dan minyak kelapa untuk produksi bahan baku margarin bebas asam lemak trans [tesis].Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Panji T, Suharyanto, Arini N. 2008. Lipase spesifik 1,3-gliserida dari fungi lokal untuk biokonversi CPO menjadi diasilgliserol. Menara Perkeb. 76(1): 11-22. Pramitasari ND, Kuswytasari DN, Shovitri. 2012. Seleksi isolat kapang tanah
Wonorejo penghasil enzim lipase [tesis]. Surabaya (ID): Institut Teknologi Sepuluh Nopember Surbaya.
Rajesh EM, Arthez R, Rajendran R, Balakumar C, Pradeepa N, Anitha S. 2010. Investigation of lipase production by Trichoderma reesei and optimization of production parameters. EJEAF Che. 9(7) : 1177-1189.
Saktiwansyah E. 2001. Karakterisasi enzim lipase intraseluler dengan aktivitasesterifikasi dari kapang Rhizopus oryzae TR 32 [tesis]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Salihu A, Alam MZ, Karim MIA, Shalleh HM. 2012. Lipase production: An insight in the utilization of renewable agricultural residues. Resour Conserv Recy. 58 (1): 36-44.
Sharma R, Chisti Y, Banerjr UC. 2001. Production, purification, characterization, and applications of lipases. Biotechnology Advances. 19(1) : 627-662.
Silva WOB. 2005. Production and extraction of an extracellular lipase from the entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae. Process Biochem. 40(1): 321-326.
Stergiou PY, Foukis A, Filippou M. Koukouritaki M, Parapauli M, Theodorou LG, Hatziloukas E, Afendra A, Pandey A, Papamichael EM. 2013. Advances in lipase-catalyzed esterification reactions. JBT. 31 (1): 1846–1859.
Suhartono MT. 1989. Enzim dan Bioteknologi. Bogor (ID): Pusat Antar Univesitas IPB.
Suharyanto, Tri P, Urip P. 2011. Optimasi produksi diasilgliserol dari crude palm oil menggunakan lipase spesifik 1,3-gliserida dari Rhizopus oryzae TP-2. Menara Perkebunan. 79(1): 23-29.
Sumathy R, Vijayalakshmi M. 2014. Lipase production from Aspergillus niger by solid state fermentation and its applications. Int J Pharm Bio Sci. 5(3) : 559-569.
Sumathy R, Vijayalakshmi M, Deecaraman M. 2012. Studies on Lipase production from fungal strains by different inducers at varied concentrations - A comparative study. IJEST. 3 (3): 1072-1078.
Suryanto E, Soetarto ES, Cahyanto MN. 2015. Produksi lipase kapang lipolitik pada lipase ampas kelapa. Bioeksperimen. 1(1): 12-17.
Suzuki Y, Mushiga Y, Yamane T, Shimizu S.1988. Mass production of lipase by fed-batch culture of Pseudemonas fluorescens. Appl. Microbial. Biotechnol. 27 (1): 417-422.
Teng Y, Xu Y, Wang D. 2009. Changes in morphology of Rhizopus chinensis in submerged fermentation and their effect on production of mycelium bound lipase. Bioprocess Biosyst Eng. 32 (1): 397–405.
35 Treichel H, Oleivera D, Mazzuti MA, Luccio MD, Oleivera JV.2010. A review on
microbial lipases production. Food Bioproses Technology. 3(1): 182-196. Vorderwiilbecke T, Kieslich K, Erdmann H. 1992. Comparison of lipases by
different assays. Enzyme Microb Technol. 14 (1) :631–639.
Watanabe T. 1937. Pictorial Atlas of Soil and Seed Fungi, Morphologies of Cultured Fungi and Key to Species. London (GB): CRC Press.
Yang H, Mu Y, Chen H, Chunyang S, Tiankui Y, Xiu Z. 2014. Sn-1,3-specific Interesterification of Soybean Oil with Medium-chain Triacylglycerol Catalyzed by Lipozyme TL IM. Chin J Chem Eng. 22 (9): 1016-1020.
Yang JG, Wang YH, Yang B, Mainda G, Guo Y. 2006. Degumming of vegetable oil by a new microbial lipase. Food Technol and Biotechnol. 44(1): 101-104.
36
Lampiran 1 Alur kegiatan penelitian Isolasi Kapang
Sumber: Isolat koleksi BPPT, margarin, tempe, dan oncom
SCREENING / Pemurnian
Identifikasi Morfologi Kapang - Makroskopis
- Mikroskopis
Penentuan media produksi : - PDB + Olive Oil 2% - PDB + Crude Palm Oil 2% - Blain (1978)
Uji aktivitas lipase : Metode Silva (2005), Metode Yang et al. (2006) Uji kadar protein : Metode Bradford (1976) Aktivitas spesifik
Pembuatan original, stock dan working culture
Identifikasi molekuler kapang terpilih
Uji Aktivitas Lipase (Kualitatif): Metode Kouker dan Jaeger (1987)
Penentuan jumlah spora: Perhitungan jumlah spora isolat kapang
Penentuan waktu produksi enzim:
- Kurva pertumbuhan kapang (berat kering misellia)
- Titik optimum aktivitas enzim
Produksi Enzim
Pemekatan Enzim(Polietilen Glikol dan Aseton) Pengaruh pH, Suhu dan
Stabilitas Enzim pH : 4, 5, 6, 7, dan 8
Suhu : 25, 30, 35, 40, dan 45oC Stabilitas enzim suhu 55oC
37 y = 0.9138x + 0.0449 R² = 0.9903 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 Absor ba nsi Konsentrasi (mg/mL) y = 0.755x + 0.0181 R² = 0.9958 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 Absor ba nsi Konsentrasi (mg/mL) Lampiran 2 Kurva standar p-Nitropenol (pNP)
Lampiran 3 Kurva standar bovine serum albumin (BSA) Konsentrasi (mg/mL) Absorbansi 0 0 0.1 0.200 0.2 0.222 0.3 0.321 0.4 0.402 0.5 0.490 0.6 0.584 0.7 0.702 0.8 0.780 0.9 0.860 Konsentrasi (mg/mL) Absorbansi 0 0 0.2 0.201 0.4 0.312 0.6 0.464 0.8 0.623 0.9 0.698
38
Lampiran 4 Perbandingan aktivitas enzim dari ketiga isolat terhadap berbagai media produksi dari jam ke 24 sampai dengan jam ke 96
Isolat Jam ke
PDB dan Olive Oil 2%
PDB dan Crude
Palm Oil 2% Blain (1978) Aktivitas Enzim (U/mL) Kadar Protein (mg/mL) Aktivitas Enzim (U/mL) Kadar Protein (mg/mL) Aktivitas Enzim (U/mL) Kadar Protein (mg/mL) R 24 0.43 0.07 0.81 0.05 0.32 0.17 48 1.24 0.02 0.43 0.07 0.38 0.10 72 0.46 0.20 0.19 0.07 0.33 0.15 96 0.17 0.08 0.48 0.07 0.33 0.15 T 24 0.38 0.05 0.87 0.05 0.24 0.17 48 1.24 0.02 0.53 0.07 0.33 0.11 72 0.51 0.16 0.63 0.06 0.35 0.12 96 0.52 0.02 0.68 0.08 0.34 0.12 O 24 0.39 0.09 1.29 0.10 0.22 0.18 48 1.49 0.02 0.52 0.06 0.43 0.09 72 0.50 0.02 0.42 0.03 0.40 0.13 96 0.39 0.05 0.56 0.05 0.35 0.14
Lampiran 5 Perbandingan aktivitas enzim dari ketiga isolat terhadap berbagai kondisi pH dan suhu inkubasi dengan metode titrasi dan metode Silva
Isolat Kondisi pH
Aktivitas Enzim
(U/mL) Isolat Suhu
Aktivitas Enzim (U/mL)
Titrasi Silva Titrasi Silva
R 4 2.75 0.39 R 25 2.38 0.23 5 2.63 0.25 30 2.88 0.19 6 1.38 0.22 35 4.13 0.19 7 1.75 0.20 40 4.75 0.26 8 0.63 0.17 45 3.63 0.25 T 4 5.63 0.36 T 25 3.88 0.20 5 3.50 0.34 30 5.50 0.16 6 3.13 0.30 35 6.13 0.13 7 1.88 0.27 40 6.38 0.25 8 1.50 0.24 45 5.88 0.23 O 4 6.13 0.36 O 25 4.63 0.24 5 4.25 0.36 30 6.00 0.33 6 3.50 0.31 35 6.50 0.21 7 3.13 0.28 40 7.75 0.29 8 2.88 0.24 45 6.25 0.29
39
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan pada tanggal 8 Juni 1992 di Bangunsari Sumatra Selatan dari bapak Supandi dan Ibu Isbadriyatun, SP. Penulis merupakan anak pertama dari dua bersaudara. Tahun 2009 penulis menyelesaikan pendidikan Sekolah Menengah Atas di SMA Negeri 1 Belitang, kemudian penulis melanjutkan pendidikan strata satu (S1) di Universitas Muhammadiyah Yogyakarta (UMY) Program Studi Agroteknologi Fakultas Pertanian dengan lama studi 3.5 tahun dan dinyatakan lulus pada bulan Maret 2013. Penulis pernah menjadi asisten praktikum beberapa mata kuliah (Teknik Isolasi dan Perbanyakan Agens Hayati, Teknik Formulasi dan Perbanyakan Biofarming, Ilmu Tanah, Teknologi Budidaya Tanaman) dan pernah menjadi Assistan Dosen dalam Penelitian Hibah Bersaing DIKTI 2012. Selain itu, penulis juga pernah mendapat dana penelitian dari Program Kreatif Mahasiswa (PKM-P) DIKTI tahun 2011. Selama kuliah, penulis juga aktif dibidang organisasi Dewan Mahasiswa (DEMA) Fakultas Pertanian dan Himpunan Mahasiswa Agroteknologi (HIMAGRO) dan menjabat sebagai sekertaris selama 2 periode. Beberapa penghargaan yang telah diraih yaitu lulusan termuda wisuda III periode 2012/2013 UMY, lulusan terbaik Fakultas Pertanian, lulusan cumlaude Fakultas Pertanian, dan lulusan terbaik Program Studi Agroteknologi. Pada tahun 2013 penulis melanjutkan pendidikan strata dua (S2) pada program studi Bioteknologi di Sekolah Pascasarjana Institut Pertanian Bogor. Sebagian data dari tesis ini telah dipublikasi pada Jurnal Mikrobiologi Indonesia dengan judul Isolation, Characterization and Production of Lipase from Indigenous Fungal for Enzymatic Interesterification Process.