Albert, B., D. Bray, J. Lewis, M. Raff, K. Robert, and J. D.Watson. 1994. Biologi Molekular Sel, edisi kedua, Jilid I. Alih Bahasa oleh Alex Tri Kantjono W. PT. Gramedia Pustaka Utama. Jakarta. Halaman 278-281. Alina, A. 2003. Isolasi Bakteri Penghasil Enzim Protease Alkalin Termostabil.
Bulletin Flasma Nutfah, Vol 9, No.2.
Anonim. 2006. Profil Mangrove Center Lampung.
Http://Mangrove.Unila.Ac.Id/Index/Php. Dibuka pada 17 September 2009, pukul 11.00 WIB
Anson, M.L., (1938) J. Gen. Physiol. 22, 79-89
Basuki, W. 1997. Enzim dalam industri deterjen. Proceeding the first
Conference on Industrial Enzyme and Biotechnology; Technology, Strategy and Finance, September 10–11, Jakarta.
Bergmann M, 1942. A classification of proteolytic enzymes. Adv. Enzymol. Beynom, R. J., J. S. Bond. 1989. Proteolytic enzymes: A Practical Approach.
Academic Press. Oxford. Halaman 128-131.
Bronikowski, A. M. 2001. Evolutionary Adaptation to Temperature. VIII. Effects of Temperature on Growth Rate in Natural Isolates of Escheria coli and Salmonella enterica From Different thermal Environments. Evolution. Volume 55, Nomor 1, Halaman 33-40.
Crill, W. D., R B. Huey., G. W.Gilchrist. 1996. Within and
Between-Generation Effects of Temperature on The Morphology and Physiology of Drosophila melanogaster. Evolution. Volume 50, Halaman 1205-1218. Daniel ICW, 1979. Fermentation and Enzyme Technology. John Willey and Sons,
New York.
Darkuni, M. Noviar. 2001. Mikrobiologi (Bakteriologi, Virologi, dan Mikologi). Universitas Negeri Malang. Malang.
Darwis, A. A. dan Sukara. 1990. Teknologi Mikrobial. Pusat Antar Universitas. IPB. Bogor.
Davidson, Michael. 2007. "Bacteria Cell Structure." Molecular Expressions: Cell Biology and Microscopy--Structure and Function of Cells and Viruses. Florida State University. Florida.
Gumbira, S. E. 1989. Biokonversi. Departemen Pendidikan dan Kebudayaan. Dirjen Dikti, PAU Bioteknologi IPB. 124-126.
Irwanto, 2007. Suksesi Hutan Mangrove Pulau Marsegu.
Http://Irwantoshut.Com/ .Dibuka pada 14 Februari 2008, pukul 11.00 WIB Judoamijojo, R. M., S. E. Gumbira, L. Hartato. 1989. Biokonversi.
Departemen Pendidikan dan kebudayaan. Dirjen Dikti, PAU Bioteknologi IPB. Bogor.
Lehninger, A. L. 1988. Dasar-Dasar Biokimia. Alih Bahasa oleh Maggy Thenawijaya. Erlangga. Jakarta.
Lina, F. G. 2009. Isolasi dan Seleksi Actinomycetes Penghasil Enzim Selulase dari Lumpur Hutan Bakau Pantai Ringgung Perairan Teluk Lampung. [Skripsi]. Universitas Lampung. Bandar Lampung.
Lowry, O.H., Rosenbrough, N.J., Farr, A.L. & Randall, R.J., 1951, Protein Measurement with the Folin Phenol Reagent, J. Biol. Chem, 193: 265-275 Magarvey, N.A., J.M. Keller, V. Bernan, M. Dworkin, and D.H. Sherman. 2004. Isolation and Characterization of Novel Marine-Derived Actinomycete Taxa
Rich in Bioactive Metabolites†. Applied and Environmental Microbiology, Dec. 2004, P. 7520–7529 Vol. 70, No. 12
Mangunwidjaja.D,Suryani.A. 1994. Teknologi Bioproses. Penebar Swadaya. Jakarta. Halaman 72-79.
Michael, J., Pelczar, Jr., E. C. S. Chan. 2008. Dasar-Dasar Mikrobiologi 1. Alih Bahasa oleh Ratna Siri Hadioetomo. UI-Press. Jakarta.
Mubarik NR., A. Suwanto dan MT. Suhartono. 2000. Isolasi dan karakterisasi protease ektraseluler dari isolat bakteri termofilik ekstrim. Prosiding Seminar Nasional Industri Enzim dan Bioteknologi II. Mikrobiologi, Enzim dan Bioteknologi Dalam Perspektif Ekonomi dan Industri. Badan Pengkajian dan Penerapan Teknologi, Jakarta, 151–158.
Montegomery, R., T. W. Conway., A. A. Spector. 1993. Biokimia Berorientasi Pada Kasus Klinik. Alih Bahasa oleh Mohammad Sadikin. Bina Rupa Aksara. Jakarta.
Murray, R. K. 1997. Biokimia Harper. Alih Bahasa oleh dr. Andri Hartono. Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta.
Noor, R. M., M. Khazali., N. Suryadiputra. 1999. Panduan Pengenalan Mangrove di Indonesia. Direktur Jendral PKA / Wetlands International Indonesia Programme. Bogor.
Orten, J. M., O. W Neuhaus. 1970. Biochemistry. C. V. Mosby Company. Saint Louis.
Rahayu, K. 1990. Enzim Mikroba. Universitas Gajah Mada. Yogyakarta. Rao, N. 1994. Mikrooganisme Tanah dan Pertumbuhan Tanaman. UI press.
Jakarta. Halaman 17-18.
Rifaat, H.M., O.H. El-Said, S.M. Hassanein and M.S. M. Selim. 2007. Protease Activity of Some Mesophilic Streptomycetes Isolated from Egyptian Habitats. Journal of Culture Collections Vol. 5, 2006-2007, Pp. 16-24 Salas, J. A. 2009. Marine Actinomycetes: A New of Natural Product. Fakultas
Kedokteran. Universitas Oviedo. Spanyol. [Paper]
Sanchez, MC. 2009. Peran Kelautan Actinomycetes dalam Drug Discovery pada PharmaMan. Mikrobiologi R & D Dpt. PharmaMan. Spanyol. [Paper] Soedigdo. 1988. Metode Penelitian Biokimia. PAU Bioteknologi Institut
Teknologi Bandung. Bandung.
Soemitro, S. 2005. Pengaruh Modifikasi Kimiawi Selektif Terhadap Kestabilan Enzim Amilase dari Saccharomycopsis fibuligera. J. Bionatura. Vol. 7 (3): 259-273
Spalding, M. D., F. Blasco and C. D. Field (Eds). 1997. World Bakau Atlas. The International Society of Bakau Ecosystem. Okinawa, Japan. 179 pp. Stefani, Dwi. 2005. Isolasi dan Karakterisasi Enzim Protease dari Bakteri Isolat
Lokal. [Skripsi]. Universitas Lampung. BandarLampung.
Suhartono MT, 2000. Eksplorasi protease bakteri asal Indonesia untuk aplikasi industri dan riset bioteknologi. Prosiding Seminar Nasional IndustriEnzim dan Bioteknologi II. 125–133.
Suryanto, D., E.M. dan Yurnaliza. 2005. Eksplorasi Bakteri Kitinolitik : Keragaman Genetik Gen Penyandi Kitinase pada Berbagai Jenis Bakteri dan Pemanfaatannya. USU
Thomas DB, 1984. A Textbook of Industrial Microbiology. Sinaver Associates Sunderland, USA.
Van Soest, R.W.M. 1994. “Demosponge distribution pattern, In: Van Kompen, T.M.G, Braekman, J.C. (Eds), Sponge in Time and Space”, A.A. Balkema. Rotterdam.
Vonothini, G et al. 2008. Optimization of protease production by an actinomycete Strain, PS-18A isolated from an estuarine shrimp pond. African Journal of Biotechnology.Vol. 7 (18), pp. 3225-3230.
Winarno, F.G. 1986. Enzim Pangan. PT. Gramedia. Jakarta. Halaman 79-82. Wolfe, Stephen L. 1993. Molecular and Cellular Biology. Wadsworth
DAFTAR ISI
Halaman
DAFTAR TABEL ... iv
DAFTAR GAMBAR ... v
PENDAHULUAN ... 1
Latar Belakang Penelitian ... 1
Tujuan Penelitian ... 3 Manfaat Penelitian ... 4 TINJAUAN PUSTAKA ... 5 Hutan Bakau ... 5 Mikroorganisme ... 6 Sel ... 6 Bakteri ... 7 Actinomycetes ... 10 Enzim ... 12 Penggolongan Enzim ... 12
Fungsi dan Cara Kerja Enzim ... 13
Faktor-Faktor Yang Mempengaruhi Reaksi Enzimatik ... 15
Protein ... 16
Protease ... 18
Isolasi dan Pemurnian Enzim ... 20
Lisis Dinding Sel ... 20
Sentrifugasi (Pemusingan) ... 21
Fraksinasi ... 21
Dialisis ... 22
METODE PENELITIAN ... 23
Waktu dan Tempat Penelitian ... 23
Alat dan Bahan ... 23
Pembuatan Media dan Larutan Pereaksi ... 24
Peremajaan dan Pengamatan Actinomycetes………... ... 25
Uji Proteolitik ... 26
Penentuan Kondisi Optimum Pertumbuhan Isolat Actinomycetes ... 26
Penyiapan Inokulum ... 27
Isolasi dan Pemurnian Enzim ... 27
Fraksinasi dengan Amonium Sulfat ... 27
Dialisis ... 28
Karakterisasi Enzim ... 29
Uji Aktivitas Protease dan Penentuan Kadar Protein ... 30
HASIL PENGAMATAN DAN PEMBAHASAN ... 33
Peremajaan Isolat Actinomycetes dan Uji Proteolitik ... 33
Penentuan Kondisi Optimum Pertumbuhan Isolat Actinomycetes ... 34
Isolasi dan Pemurnian Enzim ... 37
Fraksinasi dengan Ammonium Sulfat ... 38
Dialisis………... ... 49
Karakterisasi Enzim ... 41
Penentuan Waktu Inkubasi Optimum Enzim Protease ... 41
Penentuan pH Optimum Enzim Protease ... 42
Penentuan Temperatur Optimum Enzim Protease... 44
Konstanta Michaelis-Menten ... 45 SIMPULAN ... 47 Simpulan ... 47 Saran ... 48 DAFTAR PUSTAKA ... 49 LAMPIRAN ... 53
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
1. Hasil pemurnian enzim protease ... 40
2. Pengaruh waktu inkubasi terhadap pertumbuhan isolat Actinomycetes ... 56
3. Pengaruh variasi pH terhadap pertumbuhan isolat Actinomycetes. ... 56
4. Hasil dialisis setelah fraksinasi ... 56
5. Penentuan waktu inkubasi optimum enzim protease ... 57
6. Penentuan pH optimum enzim protease ... 57
7. Penentuan temperatur optimum enzim ... 57
8. Penentuan nilai Km dan Vmax ... 58
9. Data standar Tirosin ... 59
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
1. Bentuk-bentuk sel bakteri ... 9
2. Isolat Actinomycetes pada media ISP-2 ... 11
3. Pembentukan kompleks enzim-substrat berdasarkan teori kunci gembok (Lock and Key Theory) dan teori kecocokan induksi (Induced Fit Theory). ... 14
4. Struktur tersier protein ... 18
5. Skema proses fraksinasi enzim dengan penambahan amonium sulfat ... 28
6. Diagram alir penelitian ... 32
7. Isolat actinomycetes ... 33
8. Uji proteolitik dari isolat actinomycetes ... 34
9. Hubungan antara jumlah sel (OD600) dan aktivitas unit (U/mL) dengan waktu inkubasi pertumbuhan Actinomycetes ... 35
10. Kurva Hubungan pH dengan jumlah sel pada OD600 ... 37
11 Kurva Hubungan antara AUP dengan tiap fraksi setelah dialisis. ... 40
12. Kurva Hubungan antara waktu inkubasi optimum dengan AUP ... 42
13. Kurva Hubungan antara pH optimum dengan AUP ... 43
15. Kurva Hubungan antara konsentrasi substrat dengan AUP ... 45 16. Kurva Lineweaver - Burk hasil Penelitian ... 46
