Affandi R, Yunizar E, Setyo W. 2003. Studi Bio-Ekologi Belut Sawah
(Monopterus albus) Pada Berbagai Ketinggian Tempat Di Kabupaten Subang, Jawa Barat. Jurnal Iktiologi Indonesia. 3: 49-55.
Alam MA, Bhandari RK, Kobayashi Y, Soyano K, Nakamura S, Soyano K, Nakamura M. 2006. Changes in Androgen-producing Cell Size and Circulating 11-Ketotestosterone Level During Female–Male Sex Change of Honeycomb Grouper Epinephelus merra. Moleculer Reproduction Dev. 73: 206–214.
Arfah H, Mariam S, Alimuddin. 2005. Pengaruh Suhu Terhadap Reproduksi dan Nisbah Kelamin Ikan Gapi (Poecilia reticulata Peters). Jurnal Akuakultur Indonesia. 4: 1-4.
Athauda S, Trevor A, Rockyde N. 2012. Effect of Rearing Water Temperature on Protandrous Sex Inversion in Cultured Asian Seabass (Lates calcarifer). General and Comparative Endocrinology. 176: 416-423.
Babiak J, Igor B, Solveig van N, Torstein H, Trine H, Birgitta N. 2011. Induced Sex Reversal using an Aromatase Inhibitor, Fadrozole, in Atlantic Halibut (Hippoglossus hippoglossus L). Aquaculture Journal. 324: 276-280.
Bahri F. 2000. Studi Mengenai Aspek Biologi Ikan Belut Sawah (Monopterus albus) di Kecamatan Parung Kabupaten Bogor Jawa Barat. Skripsi. Institut Pertanian Bogor.
Baroiller JF, Guiguen Y, Fostier A. 1999. Endocrine and Environmental Aspect of Sex Differentiation in Fish. CMLS Cell. Molecular Life Science. 55: 910-931.
Beullens K, Eding EH, Gilson P, Ollevier F, Komen J, Richter CJJ. 1997. Gonadal differentiation, intersexuality and sex ratios of European eel (Anguilla anguilla L.) maintained in captivity. Aquaculture Journal. 153: 135–150.
Bhandari RK, Higa M, Nakamura S, Nakamura M. 2003. Sex Inversion of Sexually Immature Honeycomb Grouper (Epinephelus merra) By Aromatase Inhibitor. Zoology Science. 21: 305-310.
Callard GV, Tchoudakova AV, Kishida M, Wood E. 2001. Differential tissue distribution, developmental programming, estrogen regulation andpromoter characteristics of cyp19 genes in teleost fish. Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology. 79: 305-314.
Chan STH, Phillips JG. 1969. The Biosynthesis of Steroids by the Gonads of the Ricefield Eel Monopterus albus at Various Phases During Natural Sexreversal. General and Comparative Endocrinology. 12: 619–636. Chen H, Yang Z, Li S, Lin M, Shi Y, Sang Q, Liu M, Zhang H, Lu D, Meng X,
Lin H. 2011. Molecular Cloning , Characterization and Expression Profiles of Three Estrogen Receptor in Protogynous Hermaphroditic Orange-spoutted Grouper (E. coides). Aquaculture journal. 287 : 152-157.
D’cottae H, Fostier A, Guiguen Y, Govoroun A. 2001. Aromatase Plays a Key Role During Normal and Temperature-induced Sex Differentiation of Tilapia (Oreochromis niloticus). Molecullar Reproduction Development. 276: 265-276.
Direktorat Jenderal Pengolahan dan Pemasaran Hasil Perikanan. 2012. Statistik Ekspor Hasil Perikanan 2011. Kementerian Kelautan dan Perikanan, Jakarta.
Dufour S, Sun TL, Crishtoper HK, Cheng K, Lin H, Jacquez B. 2004. Effects Induction of Sex Steroid, Aromatase Inhibitors and Antiestrogens in Protandrous Black Porgy Acanthopagrus schlegeli Bleeker. Zoology Study. 29: 173-179.
Garcia CEO, Bruno CA, Paulo HM, Amanda MN, Jandir ARF, Andreone TM, Ricardo AZ, Lucile MFW, Renata GM. 2013. Involvement of Pituitary Gonadotropins, Gonadal Steroids and Breeding Season in Sex Change of Protogynous Dusky Grouper, Epinephelus marginatus (Teleostei: Serranidae), Induced by a Non-Steroidal Aromatase Inhibitor. General and Comparative Endocrinology. 192: 170-180.
Gong S, Guobin Z, Lei Z, Yongchao Y, Hanwen Y. 2011. Effects of Estradiol Valerate on Steroid Hormones and Sex Reversal of Female Rice Field Eel, Monopterus albus (Zuiew). Journal of The World Aquaculture Society. 42: 96-104.
Guiguen Y, Alexis F, Francess P, Ching-Fong C. 2010. Ovarian Aromatase and Estrogens : A Povital Role for Gonadal Sex Differentiation and Sex Change in Fish. General and Comparative Endocrinology. 165: 352-366.
Gunarso W. 1989. Mikroteknik. PAU Ilmu Hayat. Institut Pertanian Bogor. Bogor. Eny H. 2012. Sex Reversak Ikan Nila Menggunakan Madu dan Analisis Ekspresi
Gen Aromatase. Tesis. Institut Pertanian Bogor.
Iversen NK, Henrik L, Do TTH, Nguyen VC, Hans G, Rasmus B, Mark B, Michael P, Tobias W. 2013. Cardiovascular Anatomy and Cardiac
Function in The Air-Breathing Swamp Eel (Monopterus albus). Molecular and Integrative Physiology. 164: 171-180.
Kroon FJ, Liley NR. 2000. The Role of Steroid Hormones in Protogynous Sex Change in The Blackeye Goby, Coryphopterus nicholsii. General and Comparative Endocrinology. 118: 273–283.
Liem KF. 1963. Sex Reversal as Natural Process in the Synbranchiform Fish (Monopterus albus). Copeia. American Society of Ichthyologists and Herpetologists.
Miura T, Miura CI. 2003. Molecular Control Mechanisms of Fish Spermatogenesis. Fish Physiology Biochemistry. 28: 181–186.
Navarro-Martin L, Mercedes B, Francecs P. 2008. Masculinization of the European Sea Bass (Dicentrarchus labrax) by Treatment with an Androgen or Aromatase Inhibitor Involves Different Gene Expression and has Distinct lasting Effects on Maturation. General and Comparative Endocrinology. 168: 3-11.
Nozu R, Kojima Y, Nakamura M. 2009. Short Term Treatment with Aromatase inhibitor Induces Sex Change in The Protogynous Wrasse, Halichoeres trimaculatus. General Comparative Endocrinology. 161: 360–364. Prihatman. 2000. Budidaya Ikan Belut (Synbranchus). Proyek Pengembangan
Ekonomi Masyarakat Pedesaan. BAPPENAS.
Schulz RW, Nobrega RH. 2011. Anatomy and Histology of Testis. Elsevier. Utrecht University. Netherland.
Shi Q. 2005. Melatonin is involved in sex change of the rice-field eel, Monopterus albus Zuiew. Fish Biology and Fisheries. 15: 23–36.
Singh AK. 2013. Introduction of Modern Endocrine Techniques for The Production of Monosex Population of Fishes. General Comparative Endocrinology. 181: 146-155.
Selim MK, Ai Shinomiya, Hiroyuki O, Satoshi H, Mitsuru S. 2009. Effect of High Temperature on Sex Differentiation and Germ Cell Population in Medaka, Oryzias latipes. Aquaculture Journal. 289: 340-349.
Seralini GE, Moslemi S. 2001. Aromatase Inhibitors: Past, Present and Future.
Molecular and Cellular Endocrinology. 178: 117-131.
Server DM, Halliday T, Waight V, Brown J, Davies HA, Moriarty E.C. 1999. Sperm Storage in Female of The Smoth New (Triturus vulgaris L.): Ultrastructure of The Spemathecal During The Breeding Season.
Tang F, Chan STH and Lofts B. 1974. Effect of Steroid hormones on the Process of Natural Sex Reversal in the Rice-Field eel, Monopterus albus
(Zuiew). General and Comparative Endocrinology. 24: 227–241. Tao Ya-Xiong, Hao-Ren L, Glen VDK, Richard EP. 1993. Hormonal Induction of
Precocious Sex Reversal in The Ricefield Eel, Monopterus albus.
Aquaculture. 118: 131-140.
Watts M, Ned WP, Henry RK. 2004. Maintenance of Atlantic Salmon (Salmo salar) at Elevated Temperature Inhibits Cytochrome P450 Aromatase Activity in Isolated Ovarian Follicles. General and Comparative Endocrinology. 135: 381-390.
Yeung WSB, Chan STH. 1987. The Plasma Sex Steroid Profiles in The Freshwater, Sex Reversing Teleostei fish, Monopterus albus Zuiew.
General and Comparative Endocrinology. 65: 233-242.
Zhang Y, Weimin Z, Huiyi Y, Wenliang Z, Chaoqun Hu, Lihong Z. 2008. Two Cytochrome P450 Aromatase Genes in The hermaphrodite Rice Field Eel Monopterus albus : mRNA Expression During Ovarian Development and Sex Change. Journal of Endocrinology. 199: 317–33.
Lampiran 1 Prosedur pengambilan sampel darah Belut Sawah
1. Ikan dibius dengan menggunakan stabilizer dengan dosis 1 ml/L air selama 10 menit.
2. Setelah pingsan, darah diambil dari arah caudal tepat dibawah anus sebanyak 0,7-1,0 ml dengan menggunakan siring ukuran 1 ml yang telah diberi antikoagulan (larutan citrate-phospate-dextrose, produk Laboratorium Kesehatan ikan), kemudian dimasukkan kedalam tube. 3. Darah yang terdapat didalam tube selanjutnya disetrifuge dengan
kecepatan 5000 rpm selama 5 menit sampai 10 menit.
4. Supernatan yang terbentuk diambil dan dimasukkan kedalam tube baru. Kemudian disimpan dalam freezer pada suhu -4oC hingga akan dilakukan analisis.
Lampiran 2 Prosedur analisis testosteron dan estradiol plasma menggunakan teknik ELISA dengan Vidas ELISA Kit (EIA 2693 untuk estradiol dan EIA 1559 untuk untuk testosteron)
1. Semua reagen harus dibiarkan pada suhu kamar (18-25 °C) sebelum digunakan. Selanjutnya, dipersiapkan terlebih dahulu larutan standar dengan kosentrasi 12,5;25;50;100;250;1000;2000 pg/ml dan larutan QC (quality control).
2. Larutan standar, QC dan sampel dimasukkan kedalam sumur plate
(microplate) masing-masing sebanyak 25 µl.
3. Selanjutnya ditambahkan 200 l enzim konjugat ke dalam setiap sumur, kemudian dikocok perlahan selama kurang lebih 10 detik. Kemudian diinkubasi pada suhu kamar selama 2 jam untuk estradiol dan 60 menit untuk testosteron.
4. Larutan pada pelat dibuang dan dicuci dengan larutan pencuci (washing solution) dengan volume 100 l pada masing-masing sumur. Pencucian dilakukan sebanyak 4 kali menggunakan alat Microplate Strip Washer Elx50TM. Setelah pencucian selesai, keringkan dengan cara dibanting secara perlahan pada kertas penyerap. Lalu ditambahkan 100 l (untuk estradiol) dan 200 µl (untuk testosteron) larutan substrat (TBM Substrate) pada masing-masing sumur pelat.
5. Inkubasi selama 20 menit pada suhu ruang. Setelah inkubasi dengan larutan substrat, reaksi enzimatis dihentikan dengan menambahkan 50 l (untuk estradiol) dan 100 µl (untuk testosteron) larutan penghenti (Stop Solution, H2SO4 0,5 M) ke dalam setiap sumur pelat.
6. Kemudian masukkan mikro plate kedalam elisa Elisa Spectrophotometer. 7. Setelah itu, absorbans dibaca pada panjang gelombang 450 nm
menggunakan ELISA reader (absorbance microplate reader Elx808TM) yang telah dilengkapi dengan program Gen 5 (BioTek® Instruments, Inc.). Pembacaan dilakukan tidak lebih dari 10 menit setelah penambahan larutan penghenti reaksi.
Lampiran 3 Prosedur histologi gonad mengacu pada metode Gunarso (1989) 1. Ikan dibedah dan diambil jaringan gonadnya, kemudian dicuci dengan
garam fisiologis 0,65% difiksasi dalam larutan BNF (campuran asam fikrat, formalin dan asam asetat) selama 24 jam.
2. Pindahkan kedalam larutan alkohol 70% beberapa kali selang 1 jam sampai kuning telur menghilang.
3. Setelah itu dehidrasi dilakukan dengan merendam organ sampel dalam larutan alkohol bertingkat (80%, 85%, 90% dan 95%) masing-masing selama dua jam, kemudian dipindahkan kedalam alkohol 100% sebanyak empat kali masing-masing selama satu jam.
4. Berikutnya clearing yaitu dengan merendam sampel organ dalam alkohol 100%+xylol dengan perbandingan 1:1 selama 45 menit.
5. Infitrasi yaitu dengan merendam organ sampel dalam xylol+parafin (1:1) selama 45 menit pada suhu 60oC. Kemudian direndam dalam parafin I, II dan III masing-masing selama 45 menit dalam suhu 63oC.
6. Setelah itu organ ditanam dalam blok parafin cair pada suhu 60oC sampai parafin mengeras selama 24 jam.
7. Kemudian spesimen dipotong setebal 6-7 µm, kemudian ditempel pada glas objek yang telah ditetesi ewid, renggangkan diatas alat pemanas dan keringkan selama 24 jam pada suhu 45oC.
8. Lalu dilakukan deparafinasi yaitu dengan merendam preparat secara berturut-turut xylol I, II, alkohol 100% I, alkohol 100% II, 95%, 90%, 85%, 80%, 70% dan 50% masing-masing selama 1 menit dan dicuci sampai warna putih.
9. Untuk pewarnaan, preparat direndam dalam larutan haemotoxylin selama dua menit, kemudian dicuci dengan air mengalir, setelah itu direndam dalam larutan eosin selama dua menit, kemudian dicuci kembali dengan air mengalir.
10.Selanjutnya dilakukan dehidarasi dengan cara merendam preparat dalam alkohol 70%, 80%, 85%, 90% I, 95% II, 100% I dan 100% II masing-masing selama satu menit.
11.Setelah itu preparat direndam dalam xylol I dan II masing-masing selama satu menit.
12.Kemudian preparat diberi zat perekat dan ditutup dengan cover glass,
dikeringkan selama 10 menit. Berikutnya preparat diberi label sehingga didapatkan preparat permanen histologi gonad yang dapat diamati dibawah mikroskop.
Lampiran 4 Kandungan oksigen terlarut pada perlakuan aromatase inhibitor dan suhu 32oC minggu ke 0-6
Perlakuan Oksigen Terlarut (DO) mg/L
M-1 M-2 M-3 M-4 M-5 M-6 Kontrol (A) 5,58 5,39 5,57 5,74 5,23 5,60 AI 0,001* 5,46 5,32 5,18 5,32 5,84 5,79 AI 0,01* 5,83 5,59 5,76 5,44 5,82 5,57 AI 0,1* 5,40 6,11 5,37 5,78 5,09 5,87 Suhu 32oC 5,81 5,53 5,95 5,26 5,78 5,92
Lampiran 5 pH air pada perlakuan aromatase inhibitor dan suhu 32oC minggu ke 0-6 Perlakuan pH (1-14) M-1 M-2 M-3 M-4 M-5 M-6 Kontrol 5,92 6,11 5,86 6,32 5,83 5,70 AI 0,001* 6,26 5,92 5,98 6,12 5,84 5,89 AI 0,01* 5,83 5,89 6,06 5,84 5,92 6,37 AI 0,1* 6,30 6,41 6,17 5,98 6,2 6,36 Suhu 32oC 5,81 5,93 5,95 6,26 6,09 6,42
Keterangan: * : mg/kg bobot ikan
Lampiran 6 Suhu air pada perlakuan aromatase inhibitor dan suhu 32oC minggu ke 0-6 Perlakuan Suhu (oC) M-1 M-2 M-3 M-4 M-5 M-6 Kontrol 28,0 28,0 27,1 28,0 27,8 28,0 AI 0,001* 27,9 28,0 27,6 28,0 28,0 28,0 AI 0,01* 28,0 28,0 28,0 28,0 27,7 28,0 AI 0,1* 28,0 28,0 27,0 27,6 27,9 27,8 Suhu 32oC 32,0 32,0 33,0 32,0 32,0 32,0
Keterangan: * : mg/kg bobot ikan
Lampiran 7 Indeks kematangan gonad belut sawah minggu ke-6
Ulangan ke- GSI (%)
Kontrol AI 0,001* 0,01* AI 0,1* Suhu 32oC 1 1,03 0,57 0,46 0,81 0,74 2 1,18 0,74 0,64 0,51 0,64 3 1,82 1,32 0,5 0,44 0,64 4 1,72 0,94 0,3 0,56 0,36 5 0,85 0,39 0,27 0,42 0,69 Jumlah 6,6 3,96 2,17 2,74 3,07 Rerata 1,32a 0,79b 0,43b 0,55b 0,61b Stdev 0,43 0,36 0,15 0,16 0,15
Keterangan: Huruf yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan pengaruh perlakuan yang berbeda nyata (p<0,05). * : mg/kg bobot ikan
Lampiran 8 Pertumbuhan bobot tubuh belut sawah pada minggu ke-0 sampai minggu ke-6
Mingg ke- Perlakuan
Kontrol AI 0,001* 0,01* AI 0,1* Suhu 32oC 1 0,18 0,23 0,24 0,25 0,1 2 0,4 0,3 0,62 0,33 0,11 3 0,1 0,09 0,24 0,76 0,21 4 0,58 0,7 0,83 0,23 0,02 5 0,45 0,15 0,57 0,75 0,12 6 0,49 0,46 0,79 1,52 0,12 Jumlah 2,2 1,93 3,29 3,84 0,68 Rerata 0,63a 0,55a 0,55a 0,64a 0,11a Stdev 0,19 0,64 0,26 0,49 0,06
Keterangan: Huruf yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan pengaruh perlakuan yang berbeda nyata (p<0,05). * : mg/kg bobot ikan
Lampiran 9 Pertumbuhan panjang tubuh belut sawah minggu ke-0 sampai minggu ke-6
Minggu ke- Perlakuan
Kontrol AI 0,001* 0,01* AI 0,1* Suhu 32oC 1 0,01 0,04 0 0,01 0 2 0,12 0,03 0,13 0,21 0,06 3 0,01 0 0,16 0,37 0,26 4 0,11 0,24 0,25 0 0 5 0,07 0,27 0,02 0,62 0 6 0,16 0 0,23 0,49 0 Jumlah 0,48 0,58 0,79 1,7 0,32 Rerata 0,14a 0,10a 0,13a 0,28a 0,05a Stdev 0,06 0,12 0,10 0,25 0,10
Keterangan: Huruf yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan pengaruh perlakuan yang berbeda nyata (p<0,05). * : mg/kg bobot ikan