BAB V HASIL PENELITIAN
5.4 Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Kloroform Daun Acalypha indica L.. indica L
5.4.1 Identifikasi Senyawa Alkaloid
Identifikasi senyawa dilakukan dengan eluen kloroform : etil asetat (1 : 1) dan penampak noda Dragendorf. Setelah plat KLT disemprot dengan penampak noda, tidak muncul noda berwarna jingga yang menunjukkan tidak adanya senyawa alkaloid dalam ekstrak kloroform.
Gambar 5.5 Plat KLT Setelah Dieluasi Dengan Eluen Kloroform : Etil Asetat (1 : 1) dan Disemprot dengan Penampak Noda Dragendorf.
5.4.2 Identifikasi Senyawa Terpenoid
Pada identifikasi senyawa terpenoid ini digunakan komposisi eluen n-heksana : etil asetat (4 : 1) dan disemprot dengan penampak noda anisaldehida asam sulfat. Pada plat KLT timbul noda warna ungu yang menunjukkan adanya kandungan terpenoid dalam ekstrak kloroform.
Gambar 5.6 Plat KLT Setelah Dieluasi dengan Eluen N-heksana : Etil Asetat (4 : 1) dan Disemprot dengan Penampak Noda Anisaldehida Asam Sulfat.
Rf = 0,80
Rf = 0,39
Rf = 0,16
5.4.3 Identifikasi Senyawa Tanin
Pada identifikasi senyawa tanin ini digunakan komposisi eluen kloroform: etil asetat : asam formiat (0,5 : 9 : 0,5)
dan disemprot dengan penampak noda FeCl3. Pada plat KLT
timbul noda warna hitam yang menunjukkan adanya kandungan tanin dalam ekstrak kloroform.
Gambar 5.7 Plat KLT Setelah Dieluasi dengan Eluen Kloroform : Etil Asetat : Asam Formiat (0,5 : 9 : 0,5) dan Disemprot dengan Penampak Noda FeCl3.
BAB VI PEMBAHASAN
Penelitian ini dilakukan dengan tujuan untuk mengetahui aktivitas antimalaria pada ekstrak n-heksana, ekstrak kloroform, dan ekstrak etanol 96% daun Acalypha indica L. terhadap P. falciparum secara in vitro. Dari ketiga ekstrak tersebut dapat diketahui aktivitas antimalaria dari masing – masing ekstrak berdasarkan hasil uji aktivitas antimalaria secara in vitro. Penelitian ini menggunakan serbuk simplisia daun Acalypha indica L. yang diperoleh dan dideterminasi dari UPT Materia Medica Batu, Jawa Timur. Pemilihan daun Acalypha indica L. didasari oleh penelitian sebelumnya yaitu uji aktivitas antimalaria secara in vivo yang menyatakan bahwa esktrak etil asetat Acalypha indica L. memiliki aktivitas antimalaria (Hayati et al., 2012).
Serbuk simplisia daun Acalypha indica L. diekstraksi dengan cara maserasi dengan pelarut n-heksana, kloroform, dan etanol 96%. Pemilihan pelarut didasarkan pada polaritas senyawa-senyawa yang
terkandung dalam Acalypha indica L.. Pada penelitian sebelumnya
senyawa yang diduga aktif sebagai antimalaria pada uji aktivitas antimalaria ekstrak etil asetat Acalypha indica L. secara in vivo, yaitu alkaloid, tanin dan steroid. Senyawa-senyawa tersebut terkandung dalam ekstrak etil asetat yang bersifat semipolar. Akan tetapi tidak semua senyawa yang diduga aktif terhadap P. berghei pada uji aktivitas antimalaria secara in vivo juga aktif terhadap P. falciparum.
Tahap selanjutnya, serbuk simplisia daun Acalypha indica L. sebanyak 50 gram direndam dalam pelarut n-heksana sebanyak 5 kali berat serbuk yaitu 250 mL selama 24 jam. Pada tahap ini dilakukan maserasi ulang sebanyak tiga kali dengan pelarut yang sama. Setelah itu
dilanjutkan dengan perendaman menggunakan pelarut kloroform dan etanol 96% dengan perlakuan yang sama seperti pada perendaman dengan pelarut n-heksana. Sebanyak dua kali ekstraksi dengan pelarut yang sama mampu menarik 99% senyawa secara efektif (Sarker et al., 2006) sehingga pada ekstraksi yang ketiga kalinya diharapkan dapat menarik lebih dari 99% senyawa dari serbuk simplisia. Selanjutnya pelarut
diuapkan dengan rotary evaporator dan dimasukkan dalam oven dengan
suhu 40 oC hingga didapatkan berat ekstrak yang stabil.
Pada uji aktivitas antimalaria secara in vitro, metode pembiakan parasit dilakukan dengan menggunakan metode Trager dan Jensen (1976) yaitu menggunakan candle jar untuk meminimalkan gas O2 sebab parasit tumbuh optimal pada sedikit gas O2 rendah dan 5% CO2 (Jensen, 2002). Ekstrak daun Acalypha indica L. yang akan diuji terlebih dahulu dilarutkan dengan DMSO (dimetil sulfoksida) dan dimasukkan ke dalam microwell kemudian ditambahkan media lengkap dan 500 μL suspensi parasit sehingga didapatkan konsentrasi bahan uji sebesar 100, 10, 1, 0,1,
dan 0,01 μg/mL. Konsentrasi DMSO dalam well pada konsentrasi bahan
uji tertinggi tidak lebih dari 1% (WHO, 2015). Microwell diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37 oC selama 48 jam sesuai dengan durasi satu siklus aseksual pada eritrosit. Setelah 48 jam, bagian media lengkap pada suspensi parasit dibuang dan dibuat hapusan tipis dari darah yang telah bersih dari media lengkap. Hapusan darah tipis difiksasi dengan metanol dan diwarnai dengan Giemsa 20% lalu didiamkan selama 20 menit. Hapusan darah tipis selanjutnya dihitung jumlah parasit yang terinfeksi dengan mikroskop dengan perbesaran 10 x 100 sebanyak 5000 eritrosit.
Berdasarkan hasil pengolahan data, seperti yang tercantum dalam tabel hasil persen penghambatan menunjukkan bahwa konsentrasi bahan uji berbanding lurus dengan persen penghambatannya terhadap
parasit. Semakin besar konsentrasi bahan uji maka semakin tinggi persen penghambatannya. Suspensi parasit yang diberi ekstrak n-heksana, ekstrak kloroform dan ekstrak etanol 96% terjadi penurunan persen penghambatan seiring dengan menurunnya konsentrasi bahan uji, akan tetapi pada konsentrasi bahan uji 0,01 μg/mL penghambatan sudah tidak terjadi lagi untuk ketiga ektrak tersebut. Hasil persentase penghambatan dianalisa dengan metode log-probit untuk mendapatkan nilai IC50. IC50
adalah konsentrasi bahan uji yang dapat menghambat pertumbuhan parasit sebanyak 50%. Semakin kecil nilai IC50 yang didapat maka semakin besar efektifitas penghambatan bahan uji terhadap pertumbuhan parasit. Berdasarkan (Chinchilla et al., 2012) aktivitas antimalaria suatu ekstrak dinyatakan sangat aktif bila IC50 < 5 μg/mL; aktif bila IC50 > 5-50 μg/mL; kurang aktif bila IC50 > 50-100 μg/mL; dan inaktif bila memiliki IC50 > 100 μg/mL.
Dari hasil analisis probit, didapatkan IC50 untuk ekstrak n-heksana sebesar 43787,79 μg/mL. Menurut Chinchilla et al., 2012, hasil tersebut termasuk kategori inaktif. IC50 untuk ekstrak kloroform sebesar 13,14 μg/mL. Menurut Chinchilla et al., 2012, hasil tersebut termasuk kategori aktif. Dan IC50 untuk ekstrak etanol 96% sebesar 950,41 μg/mL. Menurut Chinchilla et al., 2012, hasil tersebut termasuk kategori inaktif.
Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak kloroform daun Acalypha indica L.
memiliki aktivitas antimalaria.
Berdasarkan hasil profil kromatografi dari ekstrak n-heksana,
ektrak kloroform dan ekstrak etanol 96% daun Acalypha indica L. yang
sebelumnya dieluasi menggunakan eluen n-heksan : etil asetat (7 : 3) menunjukkan bahwa pada ekstrak n-heksan terdapat 12 peak, pada ekstrak kloroform terdapat 13 peak, dan pada ekstrak etanol 96% terdapat 10 peak. Dilihat dari hasil profil kromatogram, didapatkan Rf yang tidak
terdapat pada ekstrak n-Heksan dan Etanol 96% akan tetapi Rf tersebut hanya terdapat pada ekstrak kloroform. Rf tersebut yang diduga memiliki aktivitas antimalaria.
Dari ketiga ekstrak tersebut, ekstrak kloroform daun Acalypha indica L. memiliki aktivitas antimalaria, dengan dugaan senyawa yang terdapat pada ekstrak kloroform tersebut adalah senyawa golongan alkaloid, tanin dan steroid. Kemudian dilakukan uji pewarnaan untuk menunjukkan kebenaran dugaan senyawa yang terdapat pada ekstrak kloroform daun Acalypha indica L.. Untuk senyawa golongan alkaloid menggunakan penampak noda dragendorf, senyawa golongan steroid menggunakan penampak noda anisaldehida asam sulfat dan senyawa
golongan tanin menggunakan penampak noda FeCl3. Setelah dilkukan uji
pewarnaan, senyawa golongan alkaloid tidak terdeteksi, senyawa golongan steroid terdeteksi dan senyawa golongan tanin juga terdeteksi. Berdasarkan hasil tersebut maka dugaan senyawa yang memiliki aktivitas antimalaria pada ekstrak kloroform daun Acalypha indica L. yaitu steroid dan tanin.
Dari hasil penelitian sebelumnya yaitu uji aktivitas antimalaria ekstrak etil asetat Acalypha indica L. secara in vivo, menunjukkan bahwa persen penghambatan rata-rata berada diatas 80% yaitu 84% - 90% dengan dosis 0,01 mg/g bb, 0,1 mg/g bb, 1 mg/g bb. Dari data tersebut dapat disimpulkan bahwa ekstrak etil asetat Acalypha indica L. memiliki potensi yang sangat bagus dalam menghambat pertumbuhan parasit. Berdasarkan hasil dari kedua penelitian diatas menunjukkan bahwa
senyawa semipolar yang terkandung dalam Acalypha indica L. memiliki
aktivitas antimalaria. Pada dasarnya metode dan Plasmodium yang
digunakan pada uji aktivitas antimalaria secara in vivo dan in vitro berbeda, akan tetapi hasil yang didapat dari kedua penelitian tersebut
sama, yaitu menunjukkan adanya aktivitas antimalaria pada ekstrak etil asetat Acalypha indica L. dan ekstrak kloroform daun Acalypha indica L. Hal ini menunjukkan bahwa senyawa semipolar yang terkandung dalam Acalypha indica L. memiliki aktivitas antimalaria. Oleh karena itu diperlukan penelitian lebih lanjut untuk memisahkan senyawa semipolar yang sudah terbukti memiliki aktivitas antimalaria dari senyawa-senyawa lain yang terkandung dalam Acalypha indica L. dan penelitian lebih lanjut
mengenai Acalypha indica L. dalam rangka pengembangan obat
66 BAB VII