BAB 4. METODE PENELITIAN
4.9. Prosedur Penelitian
4.9.3. Tahap pelaporan
Pada tahap pelaporan penelitian, dilakukan kegiatan sebagai berikut : 1. Penulisan hasil analisis dan kesimpulan penelitian
2. Penyusunan laporan penelitian 3. Pencetakan hasil penelitian 4. Publikasi penelitian
4.10 Etika Penelitian
a. Menyertakan surat pengantar yang diajukan kepada pihak pemerintah setempat sebagai permohonan izin untuk melakukan penelitian.
b. Menyertakan surat ke Sekolah Dasar (SD) di Makassar untuk permohonan izini penelitian dan pengambilan sampel.
c. Melakukan perizinin kepada komisi komisi etik kedokteran.
18
18 4.11 Bagan Alur Penelitian
Pengambilan urin
Ektraksi DNA
Running PCR
Elektroforesis
(+) Gen TEM (-) Gen TEM
19
19 BAB V
HASIL DAN ANALISIS
Penelitian ini dilakukan di Kota Makassar dengan mengambil sampel dari 2 Sekolah Dasar yaitu SDN Kompleks dan SDN Cambayya. Banyaknya sampel yang digunakan yaitu 100 sampel yang kemudian sampel yang telah diambil dianalisis di Laboratorium HUM-RC berupa pemeriksaan Polymerase Chain Reaction (PCR) untuk mengidentifikasi adanya gen TEM pada bakteri Enterobacteriaceae. Hasil olah data disajikan dalam bentuk table dan diagram dilengkapi dengan narasi sebagai berikut.
5.1 Karakteristik Sampel
Dari populasi sampel diambil 100 partisipan secara acak dan memenuhi kriteria penelitian.
Adapun distribusi jenis kelamin sampel dapat dilihat pada diagram berikut.
Diagram 5.1 Distribusi Jenis Kelamin Sampel
Sampel ini terdiri dari 50 anak (50%) laki-laki dan 50 anak (50%) perempuan yang kemudian dari 100 sampel ini dilakukan ekstraksi gen dilanjutkan dengan Polymerase Chain Reaction (PCR).
Jenis Kelamin
Laki-laki Perempuan
20
20 5.2 Analisis Hasil Pemeriksaan PCR
Sebanyak 100 sampel yang telah dilakukan Polymerase Chain Reaction (PCR) selanjutnya dilakukan dengan elektroforesis untuk menilai hasil akhir. Adapun hasil PCR disajikan sebagai berikut.
Gambar 5.1 Hasil Elektroforesis Pemeriksaan PCR Sampel A (well atas)
Gambar 5.2 Hasil Elektroforesis Pemeriksaan PCR Sampel A (well tengah)
21
21
Gambar 5.3 Hasil Elektroforesis Pemeriksaan PCR Sampel A (well bawah)
Gambar 5.4 Hasil Elektroforesis Pemeriksaan PCR Sampel A dan B (well atas)
22
22
Gambar 5.5 Hasil Elektroforesis Pemeriksaan PCR Sampel B (well tengah)
Gambar 5.6 Hasil Elektroforesis Pemeriksaan PCR Sampel B (well bawah)
23
23
Gambar 5.7 Hasil Elektroforesis Pemeriksaan PCR Sampel B
Dari hasil elektroforesis 100 sumur yang berisi sampel ditemukan ikatan yang membentuk pita berwarna putih pada gel sesuai dengan control positif, yang artinya terdapat gen TEM pada 100 sampel urin siswa sekolah dasar di Kota Makassar. Data sampel yang terdeteksi gen TEM dapat dilihat dari tabel dan grafik berikut.
Hasil PCR Jumlah %
Gen TEM + 76 76
Gen TEM - 24 24
Total 100 100
Tabel 5.1 Distribusi Gen TEM pada sampel urin
24
24
Diagram 5.2 Distribusi Gen TEM pada sampel urin
Dari hasil pemeriksaan elektroforesis pada 100 sampel urin terdapat gen TEM, sedangkan untuk genotype ESBL lainnya yang juga terdeteksi selama penelitian dapat dilihat pada tabel dan diagram berikut.
Diagram 5.3 Distribusi Genotype ESBL pada sampel Urin
Secara keseluruhan, gen TEM merupakan gen ESBL terbanyak yang ditemukan dari sampel urin Enterobacteriaceae yaitu sebanyak 76 dari 100 sampel (76%) sedangkan untuk gen SHV dan CTX-M tidak terdapat pada sampel urin. Adapun sampel yang tidak terdeteksi ESBL
Hasil PCR
Gen TEM + Gen TEM
-Distribusi Genotype ESBL
Gen TEM Gen SHV Gen CTX-M Negatif
25
25
yaitu sebanyak 24 sampel dari 100 sampel (24%). Dengan demikian dapat disimpulkan bahwa terdapat gen TEM sebanyak 76 dari 100 sampel (76%) sedangkan tidak terdapat gen SHV dan CTX-M pada 100 sampel tersebut serta terdapat 24 dari 100 sampel yang tidak terdeteksi ESBL.
26
26 BAB VI PEMBAHASAN
Setelah proses pengambilan sampel urin dari siswa/i Sekolah Dasar di Kota Makassar, didapatkan 100 sampel urin yang memenuhi kriteria inklusi dan eksklusi yang kemudian akan diekstraksi dan dilakukan pemeriksaan dengan metode polymerase chain reaction (PCR) dengan tujuan mengidentifikasi adanya Gen TEM pada Enterobacteriaceae yang memproduksi Extended Spectrum Beta Lactamase (ESBL) yang didapatkan. Berikut merupakan penjelasan dari hasil penelitian yang akan dibahas dengan membandingkan dengan penelitian-penelitian lain yang telah ada sebelumnya :
6.1 Karakteristik Sampel
Penelitian ini dilakukan pada sampel urin yang diambil dari siswa/i SDN Kompleks Mangkura Makassar dan SDN Kompleks Cambayya Makassar kelas 3 sampai kelas 5 secara sukarela, dengan rentang usia partisipan antara 8-12 tahun yang terdiri dari 50 siswa (50%) laki-laki dan 50 siswa (50%) perempuan.
6.2 Distribusi Gen Temoneira (TEM) pada Bakteri Enterobacteriaceae dengan Pemeriksaan Metode Polymerase Chain Reaction (PCR)
Tujuan penelitian ini sendiri dilaksanakan akibat penggunaan antibiotika betalaktam di Indonesia yang masih sangat tinggi, sehingga kemungkinan resistensi terhadap antibiotika tersebut bakal meningkat dari tahun ke tahun. Salah satu faktor yang menyebabkan timbulnya resistensi tersebut adalah Extended Spectrum Beta-Lactamase (ESBL). Temoneira (TEM) merupakan salah
27
27
satu gen ESBL kelas A yang mempengaruhi bakteri sehingga resisten terhadap kebanyakan antibiotika betalaktam dan seringkali co-resisten terhadap antibiotika kelas-kelas lainnya.
Di Eropa sendiri penelitian seperti ini pernah dilakukan oleh T. Spanu et al pada tahun 2002 di Rumah Sakit Katolik del Sacro Cuore Roma, Italia. Di antara strain ESBL-positif, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, dan Escherichia coli menyumbang 73,6% isolat. Jadi
dari 500 sampel ditemukan hanya Gen TEM dan SHV yang secara keseluruhan gen TEM sebanyak 234 sampel (46,8%) dan gen SHV sebanyak 173 sampel (34,6%), secara keseluruhan jenis TEM-tipe ESBL lebih umum daripada enzim tipe SHV sedangkan strain ESBL yang tidak ditemukan gen sebanyak 93 sampel (18,6%). Secara in vitro, semua kecuali satu isolat penghasil ESBL tetap rentan terhadap imipenem .
Selain itu di Negara Asia sendiri tepatnya di Iran juga pernah dilakukan penelitian oleh Mojtaba Moosavian dan Behnaz Deiham pada tahun 2011 di Rumah Sakit Dezful Ganjavian kota Ahvaz yang menunjukkan bahwa dari 420 isolat Enterobacteriaceae, 128 (30,5%) adalah Isolat positif-ESBL, yang paling umum dari mereka milik Klebsiella (45,4%) dan E. coli (28,8%). Hasil elektroforesis produk PCR menunjukkan pola genom yang berhubungan dengan blaTEM (1097 bp), blaCTX-M (870 bp), gen blaSHV (660 bp). Hasil ini juga menunjukkan bahwa 57% dari isolat positif ESBL fenotipik adalah genotip ESBL positif. Klebsiella dan E. coli dengan frekuensi masing-masing 79,5 % dan 43,6% memiliki paling banyak frekuensi gen EBLS. Multiplex polymerase chain reaction (PCR) gen di antara bakteri positif ESBLs (73 isolat) menunjukkan adanya gen yang berhubungan dengan TEM dan SHV pada 65,8% dan 15% isolat, masing-masing. Juga gen ESBL dari keduanya TEM dan SHV terlihat pada 14 isolat (19,2%).
Di Indonesia sendiri akibat produksi extended-spectrum beta-lactamase (ESBL) oleh Enterobacteriaceae yang terus menjadi masalah penyakit infeksi khususnya di rumah sakit maka
28
28
dilakukan penelitian oleh Yuwono pada tahun 2011 di RSUP Moh. Hoesin Palembang. Bakteri produsen ESBLs menjadi penyebab utama infeksi saluran kemih, peritonitis dan abses. Identifikasi gen TEM pada Enterobacteriaceae produsen ESBL pada pasien yang dirawat di RSUP Moh.
Hoesin Palembang. Didapatkan 78 sampel Enterobacteriaceae berdasarkan uji Double Disk Approximation dan PCR. Berdasarkan hasil PCR ditemukan 34 sampel mengandung gen TEM.
Distribusi gen TEM adalah 13 (38,24%) pada Klebsiella pneumoniae, 16 (47,06%) pada Escherichia coli, 4 (11,76%) pada Enterobacter sp dan 1 (2,94%) pada Proteus sp. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa Klebsiella pneumoniae dominan pada Enterobacteriaceae produsen ESBL. Gen TEM dominan ditemukan pada E. Coli (Yuwono, 2011).
Terdapatnya gen TEM pada Enterobacteriaceae yang memproduksi ESBL menunjukkan bahwa sudah terjadi penyebaran bakteri yang memiliki enzim yang dapat melisiskan cincin beta laktam dari antibiotik golongan sefalosporin. Berdasarkan penelitian ini, ditemukan prevalensi gen TEM ESBL Enterobacteriaceae pada sampel urin siswa sekolah dasar di Kota Makassar dengan jumlah gen TEM yang paling banyak terdeteksi dibandingkan dengan gen ESBL lainnya yaitu gen CTX-M dan SHV. Hasil ini menunjukkan bahwa prevalensi ESBL secara genotype sudah cukup tinggi di Kota Makassar. Terdapatnya gen TEM pada Enterobacteriaceae yang memproduksi ESBL menunjukkan bahwa sudah terjadi penyebaran bakteri yang memiliki enzim yang dapat melisiskan cincin beta laktam dari antibiotik golongan sefalosporin di populasi anak Sekolah Dasar di Kota Makassar. Dari 100 sampel, hanya 24 sampel (24%) yang tidak memiliki gen ESBL CTX-M dan SHV. Akan tetapi, tidak menutup kemungkinan bahwa sampel yang negatif tersebut memiliki gen ESBL lain yang tidak diteliti pada penelitian ini, mengingat ESBL mempunyai beberapa kelas dan tiap kelas memiliki beberapa gen. Begitu pula sampel yang positif, dapat juga memiliki gen ESBL lain yang tidak diteliti pada penelitian ini. Jadi hasil analisis urin yang
29
29
mengandung bakteri Enterobacteriaceae menggunakan metode PCR yang dilakukan pada penelitian ini sendiri, ditemukan 76 dari 100 sampel (76%) yang memiliki gen TEM. Hasilnya, gen TEM merupakan gen yang paling banyak diidentifikasi jika dibandingkan dengan gen ESBL lainnya. Gen TEM yang ditemukan pada sampel urin Enterobacteriaceae adalah sebanyak 76 dari 100 sampel sedangkan gen SHV dan CTX-M sebanyak 0 dari 100 sampel
Jadi, peneliti telah menemukan gen TEM pada Enterobacteriaceae yang memproduksi ESBL pada sampel urin siswa Sekolah Dasar di Kota Makassar. Hal ini berarti dalam populasi Anak Sekolah Dasar sudah terdapat bakteri yang resisten terhadap antibiotik beta lactam yaitu sefalosporin III.
BAB VII
KESIMPULAN DAN SARAN 7.1 Kesimpulan
30
30
Setelah dilakukan penelitian dan pembahasan hasil penelitian mengenai "Deteksi Gen Temoneira (TEM) pada Enterobacteriaceae yang memproduksi Extended-Spectrum Beta Lactamase (ESBL) dengan Menggunakan Metode Polymerase Chain Reaction (PCR) dari Sampel Urin Siswa Sekolah Dasar Di Kota Makassar, Sulawesi Selatan maka dapat disimpulkan beberapa hal sebagai berikut:
a. Ditemukan gen TEM pada ESBL Enterobacteriaceae pada sampel urin siswa/i Sekolah Dasar di Kota Makassar.
b. Prevalensi ESBL Enterobacteriaceae secara genotype cukup tinggi di Kota Makassar.
7.2 Saran
a. Untuk Penelitian selanjutnya, dapat dilakukan penelitian lebih lanjut di tingkat populasi yang lebih luas bukan hanya pada anak SD untuk menggambarkan tingkat resistensi pada komunitas.
b. Untuk tenaga kesehatan, dianjurkan untuk lebih bijak dalam pemberian antibiotik terhadap pasien mengingat persentase bakteri penghasil ESBL yang sudah terbukti berkembang dalam masyarakat.
c. Untuk masyarakat, pencegahan infeksi bakteri dapat dilakukan dengan meningkatkan pola hidup bersih dan sehat dan menggunakan antibiotik sesuai petunjuk tenaga kesehatan.
31
31
DAFTAR PUSTAKA
1. Humaida R, (2015) Kesesuaian Penggunan Antibiotik Pada Balita Berdasarkan
Formularium Spesialistik Ilmu Kesehatan Anak IDAI di Puskesmas Way Urang Kalianda Kabupaten Lampung Selatan tahun 2013. Fakultas Kedokteran, Universitas Lampung.
2. Ginting, Jhon Effraim, 2015, Akurasi Duke Model Score Sebagai Prediktor Infeksi Extended-Spectrum Beta Lactamase (ESBL) Pada Pasien Rawat Inap
3. Pratama, M. Arief, 2014, Tingkat Pengetahuan Masyarakat terhadap Penggunaan Antibiotik di Kelurahan Suka Maju, Kecamatan Medan Johor, Kotamadya Medan
Pratiwi, S. T., 2008, Mikrobiologi Farmasi, 154 & 188, Jakarta, EMS.
Jawetz M, Melnick R, Aldelberg. 2008. Mikrobiologi Kedokteran. Jakarta : EGC;. P 199-200.
4. Karowsky J A. et. al. 2010. Multidrug resistant urinary tract isolates of Escherichia coli : prevalence and patient demographics in the United states in 2009. Antimicrob Agents Chemother 2009; 45(5) : 1402-06.
5. Malem, Rasta Natalia, 2015. Skrining Enterobactericeae Penghasil Extended Spectrum Beta-Lactamase dengan Metode Uji Double Disk Synergy Pada Sampel Urin Pasien Suspek Infeksi Saluran Kemih di RSUP. H. Adam Malik Medan
6. Bradford P. Extended spectrum ß lactamases in the 21st century: characterization,
epidemiology, and detection of this important resistance threat. Clinical Microbiology Revisi 2001; 14: 933-951.
7. Ankur Goyal, K.N. Prasad, Amit Prasad, Sapna Gupta, Ujjala Ghoshal & Archana Ayyagari.
2009. Extended spectrum-lactamases in Escherichia coli & Klebsiella pneumoniae &
associated risk factors. Indian J Med Res 129, pp 695-700.
8. Livermore DM. 1995. Beta-lactamases in laboratory and clinical resistance. Clin Microbiol Rev, 8, 557-584.
a. Branger C, Lesimple CA, Bruneu B, et al. l. 1998. Long-term investigation of the clonal dissemination of Klebsiella pneumonia isolates producing extended- -lactamases in a university hospital. J Med Microbiol 1998; 47: 210-09
32
32
9. Joshi dan Deshpande. 2010. Polymerase Chain Reaction : Methods, Principles and Application. International Journal of Biomedical Research, India.
10. Kaper JB, Nataro JP, Harry LT. 2004. Pathogenic Escherichia coli. Nature Reviews Microbiology. 2: 123-140.
11. Holt GJ, Krieg RN, Sneath HAP, Staley HAP,Williams TS. Enterobacteriaceae. In:
Bergey’smanual of determinative bacteriology.International Edition. 9th ed. Maryland:
Williams& Wilkins; 1994. p. 179-80.
12. Lindgren P K, Karlsson A, Hughes D. Mutation rate and evolution of fluoroquinolone resistancein Escherichia coli isolates from patients with urinary tract infections. Antimicrob Agents Chemother. 2003; 47: 3222-32.
Aztal Z, Sharif FA, Abdallah SA, Fahd MI. Extended spectrum beta lactamases in
Escherichia coli isolated from communityacquired urinary tract infection in the Gaza Strip, Palestina. Ann Saudi Med 2004;24:55-7.
13. Chaudary U, Aggarwal R. Extended Spectrum β-Lactamases (ESBL), an emerging threat to clinical therapeutics. Indian Journal of Medical Microbiology 2004;22(2):75-80.
14. Stobberingh E, Arends J, Hoogkamp- Korstanje JAA, Goessens WHF, Visser MR, Buiting AGM. Occurence of extendedspectrum β-Lactamases in Dutch Hospital Infection
1999;27:348-54.
Tsang DNC, Que TL, Ho M, Yuen KY. Comparison of screening methods for detection of extended spectrum β-Lactamases and their prevalens among Escherichia coli and Klebsiella species in Hongkong. APMIS 2000;108:237-40.
15. Kuntaman, Mertaniasih NM, Purwanta M. Dalam: Usman Hadi, Nasronudin, editors.
Bakteri penghasil ESBL dari spesimen klinikdi RSU dr Soetomo Surabaya. Simposium penyakit infeksi dan problema resistensi antimikroba. Surabaya: FK Unair 2005.p.1-9.
16. Hadi U, Duerink DO, Lestari ES, Nagelkerke NJ, Werter S, et al. 2008. A Survey of antibiotic use of individuals visiting public healthcare facilities in Indonesia. International journal of infectious diseases: IJID: official publication of the International Society for Infectious Diseases 12: 622–9.
17. Yuwono. 2011. Prevalensi Gen TEM pada Extended-Spectrum Beta-Lactamases Producing Enterobacteriaceae
33
33
18. Hasibuan, E. 2015.PerananTeknik Polymerase Chain Reaction (PCR)
TerhadapPerkembanganIlmuPengetahuan.PranataLaboratoriumPerguruanTinggiFakultasKe dokteranUniversitas Sumatera Utara 2015 .hal 11-13.
19. Winarto. Prevalensi Kuman ESBL (Extended Spectrum Beta Lactamase) dari Material Darah di RSUP Dr. Kariadi Tahun 2004-2005. Semarang: Media Medika Indonesia. Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro. 2009 ; 260 – 67.
34
34 LAMPIRAN 1. Biodata Peneliti
1. Nama Lengkap Muh. Hilmy Aditya 2. Jenis Kelamin Laki-Laki
3. Program Studi Pendidikan Dokter
4. NIM C11114513
5. Tempat/ Tanggal Lahir Ujung Pandang, 17 Desember 1996
6. E-mail hilmyadithya@yahoo.com
7. No. Telepon/ Hp 0895804057718
8.
Riwayat Pendidikan:
Jenjang Nama Institusi Jurusan Tahun masuk -
Tahun lulus
SD SD Pundarika 2002 – 2008
SMP SMP Islam Athirah
Kajaolalido
2008 – 2011
SMA SMA Negeri 1
Makassar
IPS 2011 – 2014
35
35 Perguruan Tinggi Universitas
Hasanuddin
Pendidikan Dokter 2014 - Sekarang
36
36 2. Etik Penelitian
37
37
3. Data distribusi Gen ESBL pada sampel feses siswa Sekolah Dasar di Kota Makassar
No
Kode Sampel
A
Hasil PCR Sampel Urine Hasil PCR Sampel Faeses
TEM SHV CTX-M TEM SHV CTX-M
1 32 Positif Negatif Negatif Positif Negatif Negatif
2 34 Negatif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
3 35 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
4 36 Positif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif
5 38 Positif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif
6 59 Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif
7 66 Positif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif
8 80 Positif Negatif Negatif Negatif Negatif Positif
9 82 Positif Negatif Negatif Positif Negatif Negatif
10 84 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
11 85 Negatif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
12 87 Positif Negatif Negatif Positif Negatif Negatif
13 99 Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif
14 100 Positif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif
15 105 Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif 16 106 Negatif Negatif Negatif Positif Negatif Negatif 17 107 Negatif Negatif Negatif Positif Negatif Negatif 18 114 Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif 19 116 Negatif Negatif Negatif Negatif Positif Negatif 20 126 Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif 21 128 Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif
22 150 Positif Negatif Negatif Positif Negatif Negatif
23 153 Negatif Negatif Negatif Positif Negatif Negatif
24 154 Positif Negatif Negatif Negatif Positif Negatif
25 157 Positif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif
26 31 Positif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif
27 39 Positif Negatif Negatif Positif Negatif Negatif
28 40 Positif Negatif Negatif Positif Negatif Negatif
29 41 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
30 42 Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif 31 48 Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif 32 49 Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif
33 51 Positif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif
34 53 Positif Negatif Negatif Positif Positif Positif
38
38
35 63 Negatif Negatif Negatif Positif Negatif Negatif 36 65 Negatif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
37 69 Positif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif
38 71 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
39 72 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
40 73 Positif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif
41 81 Positif Negatif Negatif Positif Negatif Negatif
42 90 Positif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif
43 93 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
44 94 Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif 45 95 Negatif Negatif Negatif Positif Positif Negatif 46 112 Negatif Negatif Negatif Positif Negatif Negatif 47 124 Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif 48 125 Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif
49 144 Positif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif
50 145 Negatif Negatif Negatif Positif Negatif Negatif
39
39 No
Kode Sampel
B
Hasil PCR Sampel Urine Hasil PCR Sampel Faeses
TEM SHV CTX-M TEM SHV CTX-M
1 13 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
2 14 Positif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif
3 19 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
4 33 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
5 42 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
6 59 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
7 61 Positif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif
8 63 Positif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif
9 64 Positif Negatif Negatif Positif Negatif Negatif
10 71 Positif Negatif Negatif Positif Negatif Negatif
11 72 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
12 81 Positif Negatif Negatif Positif Negatif Negatif
13 82 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
14 86 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
15 100 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
16 106 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
17 129 Positif Negatif Negatif Positif Positif Positif
18 130 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
19 131 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
20 138 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
21 139 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
22 140 Positif Negatif Negatif Positif Negatif Negatif
23 141 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
24 148 Positif Negatif Negatif Positif Negatif Negatif
25 151 Negatif Negatif Negatif Positif Negatif Negatif
26 11 Positif Negatif Negatif Positif Negatif Negatif
27 15 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
28 23 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
29 27 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
30 28 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
31 60 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
32 73 Positif Negatif Negatif Positif Negatif Negatif
33 75 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
34 78 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
35 85 Positif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif
36 99 Positif Negatif Negatif Positif Negatif Negatif
37 102 Positif Negatif Negatif Positif Positif Negatif
38 111 Positif Negatif Negatif Positif Negatif Negatif