Kandungan fenolik total per gram sampel pada fraksi etil asetat ekstrak metanol daun Lada sebesar 133,83 ± 5,4365 mg ekivalen asam galat. Aktivitas antioksidan fraksi etil asetat ekstrak metanol daun lada yang dinyatakan dalam persen inhibisi untuk metode FTC dan metode TBA berturut-turut sebesar (5,061 ± 0,598)%, (93,19 ± 2,245)%.
Saran untuk penelitian selanjutnya perlu dilakukan penambahan jumlah replikasi sampel untuk mengatasi masalah ketidakakuratan pembacaan absorbansi dengan metode FTC akibat kelemahan dalam pembentukan kompleks warna. Selain itu perlu dilakukan penelitian lain dengaan menggunakan metode DPPH untuk mengatahui senyawa yang terkandung dalam daun lada, yang berperan dalam penghambatan lipid peroksida.
14 Daftar Pustaka
Andersen, O.M., Markham, K.R., 2006, Flavonoids: Chemistry, Biochemistry, and
Application, Taylor & Francis Group, London, P.2.
Aris, S. R. S., Mustafa,S., Ahmat, N., Jaafar, F.Moh. & Ahmad, R, 2009, Phenolic Content and Antioxidant Activity of Fruit Ficus dettoidea var, Angustifolis sp., The
Malaysian Journal of Analytical Sciences, 13 (2), Pp. 146-150.
Artini, P. E. U. D., Astuti, K. W., Warditiani, N. K., 2013, Uji Fitokimia Ekstrak Etil Asetat Rimpang Bangle (Zingiber purpureum Roxb.) Jurnal Farmasi Udayana, Indonesia.
Blanski, A., Lopes,G.C., and De Mello, J. C. P., 2013, Application and Analysis of the Follin Ciocalteu Method for Determination of the Total Phenolic Content from
Limonium brasiliense L., Molecules,18, Pp. 6852-6865.
Cicco, N., and Lattanzio, V., 2011, The Influence of Initial Carbonate Concentration on the Folin-Ciocalteu Micro-Method for the Determination of Phenolic with Low Concentration in the Presence of Methanol: A Comparative Study of Real-Time Monitored Reactions, Am. J. Anal. Chem., Pp.840-845.
Cowan, M.M., 1999, Plant Products as Antimicrobial Agents, Clinical Microbiology
Review,Vol.12, No. 4, Pp.564-582.
Dodson, C. D., Dyer, L. A., Searcy, J., Wright, Z., and Letoumeau, D. K., 2000, Cenocladamide: A Diydropyridone Alkaloid from Piper Cenocladum,
Phytochemistry, Vo. 53, pp. 51-54.
Gandjar, I. G., Rohman, A., 2007, Kimia Farmasi Analisis, Pustaka Pelajar, Yogyakarta, Hal.220-265.
Huang, Y. W., Cai, Z. Y., 2010, Natural Phenolic Compounds From Medicina Herbs and Ditary Plants: Potenttial Use for Cancer Prevention, Nutrion and Cancer, Pp. 1-2.
Kamboj, A., Rana, A., Kaur, R., Jain, U., 2015, Application and Analysis of the Follin Ciocalteu Method for the Determination of the Total Phenolic Content from Leaves, Stems and Seeds of Cucumis sativus L., Journal of Pharmacy Research, Pp.323-329.
Moon, J.K., Shibamoto, T., 2009, Antioxidant Assays for Plant and Food Components, J.
Agric. Chem., Vol. 57, Pp.1655-1666.
Muhtadi, Hidayati, A.L., Suhendi, A., Sudjono, T.A., Haryanto., 2014, Pengujian Daya Antioksidan Dari Beberapa Ekstrak Kulit Buah Asli Indonesia dengan Metode FTC, Simposium Nasional RAPI XIII, Hal.1-9.
Nahak dan Sahu, 2011, Phytochemical Evaluation and Antioxidant Activity of Piper nigrum, Journal of Applide Pharmaceutical Science, pp. 153-157.
15
Prakash, A., 2001, Antioxidant Activity, Takes you into the Heart of a Giant Resource, Vol 19, No.2, Pp. 1-2.
Ronald, L., Piror, Wu, X., and Schaica, K., 2005, Standardized Methods for the Determination of Antioxidant Capacity and Phenolics in Food and Dietary Supplemnts, J. Agr. Food Chem., Pp. 4290-4302
Sochor, J., Zitaka, O., Skutkova, H., Pavlik, D., Babula, P., Krska, B., Homan, A., Adam, V., Provaznik, I., and Kizek, R., 2010, Content of phenolic Compounds and Antioxidant Capacity in Fruits of Apricot Genotypes, Molecule, pp.
6285-6305.
Thitilertdecha, N., Teerawutgulrag, A., and Rakariyatham, N., 2010, Identification of Major Phenolic Compound from Nephelium lappaceum L. and Their Antioxidant Activities, Molecules, 15, Pp. 1453-1465.
Winasari, H., 2011, Antioksidan alami & radikal bebas, Penerbit Kanisius, Yogyakarta, hal.71-76.
16
17 Lampiran 1. Surat Determinasi Tanaman
18
Lampiran 2. Klasifikasi Tanaman Lada (Piper nigrum L.)
Menurut United States Departement of Agriculture klasifikasi dari tanaman lada, yaitu:
Kerajaan : Plantae Sub kerajaan : Tracheobionta Super divisi : Spermatophyta Divisi : Magnoliophyta Kelas : Magnoliopsida Sub kelas : Magnoliidae Ordo : Piperales Suku : Piperaceae Genus : Piper L.
Spesies : Piper nigrum L.
Lampiran 3. Perhitungan Pentapan Kadar Air Daun Lada Kadar Air Simplisia =
Keterangan Berat Simplisia (g) Kadar Air (%) Rata-Rata
Awal Akhir Replikasi 1 5.019 4.659 7,173 7,418 Replikasi 2 5.020 4.643 7,509 Replikasi 3 5.018 4.638 7,573 Replikasi 1
Kadar Air Simplisia =
= 7,173% Replikasi 2
Kadar Air Simplisia =
19 Replikasi 3
Kadar Air Simplisia =
= 7,573 %
Lampiran 4. Perhitungan rendemen ekstrak dan fraksi a. Ekstrak metanol daun lada
Bobot (gram) Bobot simplisia yang digunakan 31,509 Bobot cawan kosong 80,3737 Bobot cawan + ekstrak 81,5782
Bobot ekstrak 1,2247
% rendemen ekstrak =
% rendemen ekstrak =
x 100 = 3,886%
b. Fraksi etil asetat daun lada
Bobot (gram) Bobot simplisia yang digunakan 31,509 Bobot cawan kosong 22,3606 Bobot cawan + fraksi etil asetat 22,5707 Bobot fraksi etil asetat 0,2101
% rendemen fraksi =
% rendemen fraksi =
Lampiran 5. Data penimbangan untuk penetapan kandungan fenolik total a. Penimbangan asam galat
1. Asam galat untuk operating time Replikasi 1 (gram) Replikasi 2 (gram) Replikasi 3 (gram) Bobot bekker 63,7284 61,4635 62,1535 Bobot bekker + zat 63,7385 61,4735 62,1636
Bobot zat 0,0101 0,0100 0,0101
b. Penimbangan fraksi etil asetat Replikasi 1 (gram) Replikasi 2 (gram) Replikasi 3 (gram)
20 Bobot bekker 61,7794 61,5234 61,6027 Bobot bekker + zat 61,7894 61,5334 61,6127 Bobot fraksi 0,01 0,01 0,01
Lampiran 6. Data perhitungan konsentrasi asam galat dan fraksi etil asetat untuk penetapan kandungan fenolik total
a. Contoh perhitungan konsentrasi asam galat
Bobot asam galat replikasi 1 = 0,0101g = 10,1 mL
Konsentrasi larutan stok asam galat =
=
1010 µg/mLPerhitungan seri konsentrasi replikasi 1 Seri 1 : V1 . C1 = V2 . C2 0,4 mL . 1010 µg/mL = 10 mL . C2 C2 = 40,4 µg/mL Seri 2 : V1 . C1 = V2 . C2 0,5 mL . 1010 µg/mL = 10 mL . C2 C2 = 50,5 µg/mL Seri 3 : V1 . C1 = V2 . C2 0,6 mL . 1010 µg/mL = 10mL . C2 C2 = 60,6 µg/m Seri 4 : V1 . C1 = V2 . C2 0,7 mL . 1010 µg/mL = 10mL . C2 C2 = 70,7 µg/mL
21 Seri 5 : V1 . C1 = V2 . C2 0,8 mL . 1010 µg/mL = 10 mL . C2 C2 = 80,8 µg/mL Replikasi 2 Replikasi 3 Seri 1 40 µg/mL 40,4 µg/mL Seri 2 50 µg/mL 50,5 µg/mL Seri 3 60 µg/mL 60,6 µg/mL Seri 4 70 µg/mL 70,7 µg/mL Seri 5 80 µg/mL 80,8 µg/mL
b. Contoh perhitungan konsentrasi fraksi etil asetat ekstrak metanol daun lada. Bobot fraksi etil asetat replikasi 1 = 0,0100 gram = 1000 µg/mL
Pengenceran fraksi etil asetat replikasi 1 V1 . C1 = V2 . C2
2 mL . 1000 µg/mL = 10mL . C2 C2 = 200 µg/mL
Replikasi 2 Replikasi 3
22
Lampiran 7. Hasil optimasi operating time untuk penetapan kandungan fenolik total
a. Replikasi 1
Pada replikasi 1, operating time yang didapat menit ke 30 b. Replikasi 2
Menit ke -
Absorbansi pada panjang gelombang 750 nm 40 µg/ml 60 µg/ml 80 µg/ml 5 0.344 0.408 0.581 10 0.368 0.490 0.610 15 0.377 0.532 0.627 20 0.384 0.544 0.636 25 0.386 0.549 0.640 30 0.386 0.548 0.641 35 0.387 0.548 0.640 40 0.386 0.549 0.640 45 0.386 0.549 0.640 50 0.386 0.550 0.639 55 0.385 0.537 0.638 60 0.385 0.546 0.638
Pada replikasi 2 operating time yang didapat menit ke 30
Menit ke- Absorbansi pada panjang gelombang 750 nm
40 µg/mL 60 µg/mL 80 µg/mL 5 0,341 0,401 0,574 10 0,366 0,482 0,607 15 0,376 0,528 0,626 20 0,382 0,545 0,635 25 0,385 0,549 0,640 30 0,386 0,551 0,640 35 0,386 0,550 0,640 40 0,386 0,551 0,639 45 0,386 0,549 0,639 50 0,386 0,552 0,639 55 0,385 0,533 0,638 60 0,385 0,533 0,638
23 c. Replikasi 3
Menit ke -
Absoorbansi pada panjang gelombang 750 nm 40 µg/mL 60 µg/mL 80 µg/mL 5 0.345 0.406 0.581 10 0.362 0.487 0.606 15 0.379 0.529 0.633 20 0.387 0.535 0.650 25 0.399 0.538 0.653 30 0.402 0.544 0.664 35 0.404 0.543 0.664 40 0.414 0.543 0.661 45 0.418 0.544 0.659 50 0.420 0.543 0.665 55 0.423 0.544 0.667 60 0.425 0.544 0.665
Pada replikasi 3 operating time yang didapat menit 30
Lampiran 8. Optimasi panjang gelombang maksimum untuk penetapan kandungan fenolik total
24 b. Konsentrasi 60 µg/m
25 c. Konsentrasi 80 µg/mL
26
Lampiran 9. Hasil pengukuran kurva baku untuk penetapan kandungan fenolik total
a. Replikasi 1
b. Replikasi 2
Seri Konsentrasi Absorbansi Persamaan kurva baku 1 40,0 µg/mL 0,390 A = 0,1264 B = 0,00618 r = 0,9894 y = 0,00618x + 0,1264 2 50,0 µg/mL 0,419 3 60,0 µg/mL 0,484 4 70,0 µg/mL 0,569 5 80,0 µg/mL 0,624
Seri Konsentrasi Absorbansi Persamaan kurva baku 1 40,4 µg/mL 0,349 A = 0,07 B = 0,00711 r = 0,9831 y = 0,00711x + 0,07 2 50,5 µg/mL 0,430 3 60,6 µg/mL 0,499 4 70,7 µg/mL 0,606 5 80,8 µg/mL 0,620
27 b. Replikasi 3
Lampiran 10. Perhitungan kandungan fenolik total fraksi etil asetat Konsentrasi Absorbansi Kandungan
Fenolik total Rata-rata % CV Replikasi 1 200 µg/mL 0,270 130,5 133,83 ± 5,4365 4,0622 % Replikasi 2 200 µg/mL 0,269 129,5 Replikasi 3 200 µg/mL 0,285 141,5
Contoh perhitungan kandungan fenolik total: a. Replikasi 1 y = 0,00662x + 0,0974 0, 270 = 0,00662x + 0,0974 x = 0, 270- 0,0974/0,00662 = 26,0725 µg/mL x = 0,0260725 mg/mL 0,0261mg/mL bobot fraksi = 0,0100 gram
b. Replikasi 2 y = 0,00662x + 0,0974 0,269 = 0,00662x + 0,0974 x = 0, 269- 0,0974/0,00662 = 25,9214 µg/mL = 0,0259214 mg/mL 0,0259 mg/mL Bobot fraksi = 0,0100 gram
c. Replikasi 3
y = 0,00662x + 0,0974
0,285 = 0,00662x + 0,0974x x = 0, 285- 0,0974/0,00662
Seri Konsentrasi Absorbansi Persamaan kurva baku 1 40,4 µg/mL 0,369 A = 0,0974 B = 0,00662 r = 0,9924 y = 0,00662x + 0,0974 2 50,5 µg/mL 0,424 3 60,6 µg/mL 0,492 4 70,7 µg/mL 0,587 5 80,8 µg/mL 0,622
28 = 28,3384 µg/mL
= 0,0283384 mg/mL 0,0283 mg/mL Bobot fraksi = 0,0100 gram
Rumus perhitungan kandungan fenolik total
Kandungan fenolik total = x
a. Replikasi 1
Kandungan fenolik total = 0,0261 x 50/0,0100 = 130,5 mg/gram
Jadi, kandungan fenolik total dalam sampel replikasi 1 sebesar 130,5 mg asam galat ekuivalen per gram fraksi etil asetat.
b. Replikasi 2
Kandungan fenolik total = 0,0259 x 50/0,0100 = 129,5 mg/gram
Jadi, kandungan fenolik total dalam sampel replikasi 1 sebesar 129,5 mg asam galat ekuivalen per gram fraksi etil asetat.
c. Replikasi 3
Kandungan fenolik total = 0,0283 x 50/0,0100 = 141,5 mg/gram
Jadi, kandungan fenolik total dalam sampel replikasi 1 sebesar 141,5mg asam galat ekuivalen per gram fraksi etil asetat.
Lamiran 11. Data Penimbangan untuk Uji Aktivitas Antioksidan Metode
