AKSAR CHAIR LAGES C3408
Lampiran 6 Kurva standard glukosa (Uji kandungan gula) Data :
Konsentrasi Glukosa (mg/mL) Absorbasi 490 nm 0,0 0,1 0,3 0,5 0,8 1,0 0,000 0,022 0,137 0,273 0,395 0,399 Grafik :
Perhitungan kandungan gula (glukosa) pada fraksi ke-10 ion-exchange: y = 0,4427x + 0,0051 0,151 = 0,4427x + 0,0051 x = 0,151−0,0051 0,4427 x = 0,3212 x 10 (dilusi sampel 10x) x = 3,212 mg/mL y = 0,4427x + 0,0051 R² = 0,9583 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0,45 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 A b so r b an si 490n m konsentrasi (mg/mL)
HELIKASE VIRUS HEPATITIS C
AKSAR CHAIR LAGES
DEPARTEMEN TEKNOLOGI HASIL PERAIRAN
FAKULTAS PERIKANAN DAN ILMU KELAUTAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
DAFTAR PUSTAKA
Al Baarri AN. 2003. Analisis perbedaan kolom pada determinasi karbohidrat susu fermentasi dengan metode HPLC. Journal of The Indonesian Tropical Animal Agriculture. 28(1): 27-32.
Amersham PB. 1999. Protein Purification Handbook. USA: Amersham Pharmacia Biotech Inc. 98 hlm.
Andersen RA. 2005. Algal Culturing Techniques. New York: Elsevier Academic Press. 588 hlm.
Anzola M, Burgos JJ. 2003. Hepatitis C virus (HCV): model structure and genome organisation. [terhubung berkala]. http://www.expertreview.org [1 Juni 2012].
Arad SM, Adda M, Cohen E. 1985. The potential of production of sulfated polysaccharides from Porphyridium. Plan and Soil 89: 117-127.
Arad SM, Richmond A. 2004. Industrial Production of Microalgal Cell-mass and Secondary Products-Species of High Potential Porphyridium sp. Dalam Richmond A, editor. Handbook of Microalgal Culture: Biotechnology and Applied Phycology. United Kingdom: Blackwell Publishing Company. Barsanti L, Gualtieri P. 2005. Algae: Anatomy, Biochemistry and Biotechnology.
New York: CRC Press. 320 hlm.
Baumgartner B, Chrispeels. 1976. Partial characterization of a protease inhibitor which inhibits the major endopeptidase present in the cotyledons of mung beans. Plant Physiology 58: 1-6.
BD Bioscience Clontech. 2003. BD TALONTM Metal Affinity Resins User Manual. Becton: Dickinson & Company. 47 hlm.
Becker EW. 1994. Microalgae: Biotechnology and Microbiology. New York: Cambridge University Press. 305 hlm.
Bennet WS, Steitz TA. 1978. Glucose-induced conformational change in yeast hexokinase. Proceedings of The National Academy of Sciences 75(10): 4848-4852.
Beress A, Wassermann O, Tahhan S, Bruhn T, Beress L, Kraiselburd EN, Gonzalez LV, de Motta GE, Chavez PI. 1993. A new procedure for isolation of anti-HIV compounds (polysaccharides and polyphenols) from the marine alga Fucus vesiculosus. Journal of Natural Products 56: 478-488.
Biringanine G, Ouedraogo M, Vray B, Samuelsen AB, Duez P. 2012. Partial chemical characterization of immunomodulatory polysaccharides from Plantago palmata. International Journal of Carbohydrate Chemistry: 1-7. Borowski P, Niebuhr A, Schmitz H, Hosmane RS, Bretner M, Siwecka MA,
Kulikowski T. 2002. NTPase/helicase of Flaviviridae: inhibitors and inhibition of the enzyme. Acta Biochimica Polonica 49: 597-614.
Borowski P, Heising MV, Miranda IB, Liao CL, Choe J, Baier A. 2008. Viral NS3 helicase activity is inhibited by peptides reproducing the Arg-rich concerved motif of the enzyme (motif VI). Biochemical Pharmacology 76: 28-38.
Chan KM, Delfert D, Junger KD. 1986. A direct colorimetric assay for Ca2+ stimulated ATPase activity. Analytical Biochemistry157: 375-380.
Clercq ED. 2004. Antivirals and antiviral strategies. Nature Review: Microbiology2: 704-720.
d’Ayala GG, Malinconico M, Laurienzo P. 2008. Marine derived polysaccharide for biomedical applications: chemical modification approaches. Molecules 13: 2069-2106.
[EASL] European Association for the Study of the Liver. 2011. EASL Clinical Practice Guidelines: Management of hepatitis C virus infection. Journal of Hepatology 55: 245-264.
Dubois M, Gilles KA, Hamilton JK, Rebers PA, Smith F. 1956. Colorimetric method of determination of sugars and related substances. Analytical Chemistry 28(3): 350-356.
Gandjar IG, Rohman A. 2007. Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta: Pustaka Pelajar. 486 hlm.
Ghosh T, Chattopadhyay K, Marschall M, Karmakar P, Mandal P, Ray B. 2009. Focus on antivirally active sulfated polysaccharides: From structure- activity analysis to clinical evaluation. Glycobiology 19(1): 2-15.
Giavasis I, Bilianderis CG. 2006. Microbial Polysaccharides. Dalam Bilianderis CG dan Izydorczyk, editor. Functional Food Carbohydrates. New York: CRC Press. 570 hlm.
Gouveia L. 2011. Microalgae as a Feedstock for Biofuels. London: Springer Heodelberg Dordrecht. 76 hlm.
Hagel L. 1998. Gel filtration chromatography. Dalam Coligan JE, Dunn BM, Ploegh HL, Speicher DW, dan Wingfiled PT, editor. Current Protocols In Protein Science. Wahington: John Wiley & Sons Inc. 610 hlm.
Hairany A. 2010. Pemurnian dan karakterisasi protein inhibitor RNA helikase virus hepatitis C dari Streptomyces chartreusis 5-095 [tesis]. Bogor: Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.
Harjadi W. 1976. Ilmu Kimia Analitik. Bogor: IPB Press. 290 hlm.
Huang S, Ning Z. 2010. Extraction of polysaccharide from Ganoderma lucidum and its immune enhancement activity. International Journal of Biological Macromolecules, in press.
Huleihel M, Ishanu V, Tal J, Arad SM. 2001. Antiviral effect of red microalgal polysaccharide on Herpes simplex and Varicella zoster viruses. Journal of Applied Phycology 13: 127-134.
Jawaid A, Khuwaja AK. 2008. Treatment and vaccination for hepatitis C: present and future. Journal Medical College Abbottabad 20: 129-133.
Kadare G, Haenni A. 1997. Virus encoded RNA helicases. Journalof Virology 71: 2583-2590.
Kementerian Kesehatan Republik Indonesia. 2010. Menkes meluncurkan program pendataan penyakit hepatitis C tahap II. [terhubung berkala] http://www.depkes.go.id/index.php/berita/press-release [1 Juni 2012]. Koolman J, Rohm K. 2005. Atlas Berwarna dan Teks Biokimia. Wanandi,
penerjemah; Jakarta: Terjemahan dari: Hipokrates. 435 hlm.
Kusumawati IS. 2011. Isolasi dan identifikasi pendahuluan bahan bioaktif sebagai inhibitor RNA helikase virus hepatitis C dari ekstrak metanol buah tanaman mangrove Avicennia marina [skripsi]. Jakarta: Fakultas Farmasi, Universitas Pancasila.
Laurienzo P. 2010. Marine polysaccharides in Pharmaceutical applications: an overview. Marine Drugs 8: 2435-2465.
LC Resources Inc. 2001. Getting started in HPLC. [terhubung berkala] http://www.lcresources.com/resources/getstart/1c01.htm [12 Juni 2012]. Leliaert F, Smith DR, Moreau H, Herron MD, Verbruggen H, Delwiche CF, Clerk
OD. 2012. Phylogeny and molecular evolution of the green algae. Critical Reviews in Plant Sciences 31: 1-46.
Mardiana U, Ramdani D. 2008. Analisis kadar akrilamida menggunakan HPLC (High Performance Liquid Chromatography) pada ubi (Ipomea batatas L.) cilembu sebelum dan setelah pemanggangan. Jurnal Kesehatan BTH 1(1): 21-31.
Mori N, Nakasone K, Tomimori K, Ishikawa C. 2012. Beneficial effects of fucoidan in patient with chronic hepatitis C virus infection. World Journal of Gastroenterology 18(18): 2225-2230.
Mukherjee S, Hanson AM, Shadrick WR, Ndjomou J, Sweeney NL, Hernandez JJ, Bartczak D, Li K, Frankowski KJ, Heck JA, Arnold LA, Schoenen FJ, Frick DN. 2012. Identification and analysis of hepatitis C virus NS3 helicase inhibitors using nucleic acid binding assays. Nucleic Acids Research : 1-15.
Mustopa AZ, Susilaningsih D, Hasim, Ridwan M, Rahman DY, Farida H. 2010. Purification of polysaccharide as spesific RNA helicase inhibitor from microalgae BTM 11. ITSF, unpublished.
[NREL] National Renewable Energy Laboratory. 2003. A Look Back at The U.S. Department of Energy’s Aquatic Species Program: Biodiesel from algae. Colorado: National Renewable Energy Laboratory. 328 hlm.
Nurhamidah. 2005. Penentuan kondisi optimum HPLC untuk pemisahan residu pestisida imidakloprid, profenofos dan deltametrin pada cabai (Capsicum annum). Jurnal Ilmu-ilmu Pertanian Indonesia 7(2): 87-93. Petty KJ. 1996. Metal-chelate affinity chromatography. Dalam Coligan JE, Dunn
BM, Ploegh HL, Speicher DW, dan Wingfiled PT, editor. Current Protocols In Protein Science. Wahington: John Wiley & Sons Inc. 610 hlm.
Poendjiadi A, Supriyanti T. 1994. Dasar-dasar Biokimia. Depok: UI Press. 476 hlm.
Purwadaria MBT. 1999. Penggunaan kromatografi tukar ion DEAE-Sepharose CL-6B dalam purifikasi komponen selulase Cellulomonas CS1-17. Jurnal Mikrobiologi Indonesia 4(1): 30-33.
Putri PH. 2011. Isolasi dan pemurnian bahan aktif dari mikroalga BTM 11 sebagai inhibitor RNA helikase virus hepatitis C [skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor.
Rinaudo M. 2006. Non-covalent interaction in polysaccharide systems. Macromoleculer Bioscience6: 590-610.
Rodjaroen S, Juntawong N, Mahakhant A, Miyamoto K. 2007. High biomass production and starch accumulation in native green algal strain and cyanobacterial strains of Thailand. Kasetsart Journal (Natural Sciences) 41: 570-575.
Sambrook J, Russell DW. 2001. Molecular Cloning: a laboratory manual. New York. Cold Spring Harbor Laboratory Press. 2344 hlm.
Sanchez-Moyano JE, Garcia-Asencio IM, Garcia-Gomez JC. 2007. Effect of temporalvariation of the seaweed Caulerpa prolifera cover on the associated crustacean community. Marine Ecology 28: 324-337.
Scopes RK. 1987. Protein Purification, Principles, and Practices. Ed ke-2. New York: Springer Verlag. 380 hlm.
Setianingsih D. 2011. Isolasi dan identifikasi awal senyawa aktif dari ekstrak rimpang temulawak (Curcuma zanthorrizha) sebagai inhibitor RNA helikase virus hepatitis C (HCV) [skripsi]. Jakarta: Fakultas Farmasi, Universitas Pancasila.
Sezonov G, Petit DJ, D’Ari R. 2007. Escherichia coli physiology in luria-bertani broth. Journal of Bacteriology 189(23): 8746-8749.
Shih SR, Tsai KN, Li YS, Chueh CC, Chan EC. 2003. Inhibition of enterovirus 71-induced apoptosis by allophycocyanin isolated from a blue-green alga Spirulina platensis. Journal of Medical Virology 70: 119-125.
SIGMA-ALDRICH. 2008. Detergents and solubilization reagents. Biofiles 3(3): 1-36.
Skoog DA. 2006. Principles of Instrumental Analysis 6th ed. Belmont: Thompson Brooks/Cole. 1107 hlm.
Soczewinski E, Wawryznowicz T. 2003. Gel filtration chromatography. Di dalam Jack Cazes, editor: Encyclopedia of Chromatography. New York: Marcel Dekker. 1679 hlm.
Solga S, Pooedad FF, Rai R, Norwitz L, Kalloo AN. 2007. Viral hepatitis C. The Johns Hopkins University. [terhubung berkala]. http://www.hopkins- gi.nts.jhu.edu [8 Juni 2012].
SpeicherDW. 1997. Electrophoresis. Dalam Coligan JE, Dunn BM, Ploegh HL, Speicher DW, Wingfield PT, editor. Current Protocol In Protein Science. USA: John Wiley & Sons Inc. 610 hlm.
Talyshinsky M, Souprun Y, Huleihel M. 2002. Anti-viral activity of red microalgal polysaccharide againts retroviruses. Cancer Cell International 2(8): 1-7.
Teas J, Hebert JR, Fitton JH, Zimba PV. 2004. Algae – a poor man’s HAART?. Medical Hypotheses 62(4): 507-510.
Tellinghuisen TL, Evans MJ, Hahn T, You S, Rice CM. 2007. Studying hepatitis C virus: making the best of a bad virus. Journal of Virology 81(17): 8853- 8867.
Tissue BM. 1996. Thin-Layer Chromatography (TLC). [terhubung berkala] http://elchem.kaist.ac.kr/vt/chem-ed/sep/tlc/tlc.htm [12 Juni 2012].
Utama A, Shimizu H, Morikawa S, Hasebe F, Morita K, Igarashi A, Hatsu M, Takamizawa K, Miyamura T. 2000. Identification and characterization of the RNA helicase activity of japanese enchepalitis virus NS3 protein. FEBS Letter 456:74-78.
Vanz ALS, Renard G, Palma MS, Chies JM, Dalmora SL, Basso LA, Santos DS. 2008. Human granulocyte colony stimulating factor (Hg-CSF): cloning, overexpression, purification and characterization. Microbial Cell Factories 7: 13-15.
Varki A, Cummings R, Esko J, Freeze H, Hart G, Marth J. 1999. Essentials of Glycobiology. New York: Cold Spring Harbour Laboratory Press. 671 hlm.
Wang Y, Zhang M, Ruan D, Shashkov AS, Kilcoyne M, Savage AV, Zhang L. 2004. Chemical component and molecular mass of six polysaccharides isolated from the sclerotium of Poria cocos. Carbohydrate Research 339: 327-334.
[WHO] World Health Organization. 2002. Guidelines for Drinking-water Quality: addendum microbiological agents in drinking water. Geneva: World Health Organization. 140 hlm.
Wilson K, Walker JM. 1994. Principles and Techniques of Practical Biochemistry. Ed 4. Cambridge: Cambridge University Pr. 808 hlm.
Worman HJ, Lin F. 2000. Molecular biology of liver disorders: the hepatitis C virus and molecular targets for drug development. World Journal of Gastroentestinal 6: 465-469.
Yamashita A, Salam KA, Furuta A, Matsuda Y, Fujita O, Tani H, Fujita Y, Fujimoto Y, Ikeda M, Kato N, Sakamoto N, Maekawa S, Enomoto N, Nakakoshi M, Tsubuki M, Sekiguchi Y, Tsuneda S, Akimitsu N, Noda N, Tanaka J, Moriishi K. 2012. Inhibition of hepatitis C virus replication and viral helicase by ethyl acetate extract of the marine feather star Alloeocomatella polycladia. Marine Drugs 10: 744-761.
Ye H, Wang K, Zhou C, Liu J, Zeng X. 2008. Purification, antitumor and antioxidant activities in vitro of polysaccharide from the brown seaweed Sargassum pallidum. Food Chemistry 111: 428-432.
Yuan YV, Walsh NA. 2006. Antioxidant and antiproliferative activities of extracts from a variety of edible seaweeds. Food and Chemical Toxicology 44: 1144-1150.
Zhang T, Wu Z, Du J, Hu Y, Liu L, Yang F, Jin Q. 2012. Anti-Japanese- Encephalitis-Viral effects of kaempferol and daidzin and their RNA- binding characteristics. PLOS One 7(1): 1-16.
Lampiran 1 Komposisi media IMK-SW
IMK – SW, dengan komposisi per liter :
- NaNO3 = 0,2 gram - Na2HPO4 = 0,0014 gram - K2HPO4 = 0,005 gram - NH4Cl = 0,00268 gram - Fe-EDTA = 0,0052 gram - Na-EDTA = 0,0372 gram - ZnSO4.7H2O = 0,0000023 gram - CoSO4.7H2O = 0,000014 gram - Na2MoO4.H2O = 0,00000073 gram - CuSO4.5H2O = 0,0000025 gram - MnCl2.4H2O = 0,000018 gram - Biotin = 0,0000015 gram - Thiamin HCl = 0,0002 gram - Vitamin B12 = 0,0000015 gram
Lampiran 2 Komposisi larutan yang digunakan dalam SDS-PAGE
Medium dan larutan-larutan Bahan-bahan
a Larutan separating 8% H2O 7,25 ml 1,5 M Tris-Cl pH 8,8 containing 0.4% SDS 3,75 ml 30% Akrilamid 4 ml 10% Amonium Persulfat 0,05 ml TEMED 0,015 ml b Larutan stacking 3,9% H2O 3,05 ml 0,5 M Tris-Cl pH 6,8 containing 0.4% SDS 1,25 ml 30% Akrilamid 0,65 ml 10% Amonium Persulfat 0,025 ml TEMED 0,005 ml
c Dapar sampel SDS 2X (Loading Dye) 4x Tris Cl/SDS pH 6,8 25 ml Gliserol 20 ml SDS 4 g β- mercaptoethanol (2-ME) 2 ml Bromphenol blue 1 mg H2O 53 ml
d Commasie Blue G-250 Staining Solution (500 ml)
45% H2O 225 ml
45% Metanol 225 ml
10% Asam asetat glacial 50 ml
0,05%Commasie brilliant
blue 250 mg e Commasie Blue G-250
Destaining Solution (1000 ml)
50% H2O 500 ml
10% Asam asetat glacial 100 ml
Lampiran 3 Kurva standard fosfat (Uji ATPase) Data : Konsentrasi K2HPO4 (mM) Absorbasi 620 nm dengan referensi 405 nm 0,0 0,1 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 0,000 0,102 0,239 0,417 0,622 0,834 1,022 Grafik :
Perhitungan konsentrasi enzim: y = 1,0207x + 0,0103 1,203666 = 1,0207x + 0,0103 x = 1,203666−0,0103
1,0207
x = 1,1692 mM (konsentrasi enzim tanpa inhibitor)
Konsentrasi enzim yang telah dihambat oleh inhibitor mikroalga BTM 11 Contoh perhitungan pada Fraksi ke-13
y = 1,0207x + 0,0103 0,787593 = 1,0207x + 0,0103 x = 0,787593−0,0103
1,0207
x = 0,7615 mM (besar konsentrasi enzim yang berhasil dihambat) 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 A b s 620/ 405 n m [K2HPO4] (mM) y = 1,0207x + 0,0103 R2 = 0,9989
Lampiran 4 Tabulasi data hasil fraksinasi kromatografi gel filtrasi
Rata-rata Selisih λ620-λ405 Abs Blanko Abs Enzim (Abs enzim-Abs Sampel)/ Abs enzim
0,442 0,147666667 blanko 2,002 1,351333333 1,203666333 enzim 17x 1,812333333 1,227666667 1,079999667 0,123666333 0,102741403 10,27414028 etanol : air (3:7) 1,811333333 1,237333333 1,089666333 0,113999667 0,094710382 9,471038201 -0,803101799 Fraksi 1 1,815 1,234333333 1,086666333 0,116999667 0,097202768 9,720276777 -0,553863223 Fraksi 2 1,836666667 1,249666667 1,101999667 0,101666333 0,084463907 8,446390721 -1,827749279 Fraksi 3 1,851666667 1,258333333 1,110666333 0,092999667 0,077263682 7,726368167 -2,547771833 Fraksi 4 1,777 1,218666667 1,070999667 0,132666333 0,11021856 11,02185601 0,747716008 Fraksi 5 1,874333333 1,276 1,128333 0,075333 0,062586299 6,258629886 -4,015510114 Fraksi 6 1,312 0,858666667 0,710999667 0,492666333 0,409304851 40,93048515 30,65634515 Fraksi 7 1,284333333 0,798 0,650333 0,553333 0,45970643 45,97064302 35,69650302 Fraksi 8 1,129 0,698666667 0,550999667 0,652666333 0,542232092 54,22320921 43,94906921 Fraksi 9 1,177 0,73 0,582333 0,621333 0,516200507 51,62005074 41,34591074 Fraksi 10 0,965 0,555 0,407333 0,796333 0,661589677 66,15896769 55,88482769 Fraksi 11 0,735333333 0,370333333 0,222666333 0,980999667 0,815009867 81,50098671 71,22684671 Fraksi 12 0,619333333 0,279666667 0,131999667 1,071666333 0,890335303 89,03353034 78,75939034 Fraksi 13 0,810666667 0,436 0,288333 0,915333 0,760454312 76,04543121 65,77129121 Fraksi 14 1,188 0,733333333 0,585666333 0,617999667 0,51343119 51,34311899 41,06897899 Fraksi 15 2,092 1,337 1,189333 0,014333 0,011907788 1,190778837 -9,083361163 Fraksi 16 2,045333333 1,319 1,171333 0,032333 0,026862103 2,686210294 -7,587929706 Fraksi 17 2,070666667 1,322 1,174333 0,029333 0,024369717 2,436971718 -7,837168282 Fraksi 18 2,089333333 1,347 1,199333 0,004333 0,003599836 0,359983583 -9,914156417 Fraksi 19 1,741666667 1,185 1,037333 0,166333 0,138188667 13,8188667 3,544726696 Fraksi 20 1,730666667 1,184666667 1,036999667 0,166666333 0,138465599 13,84655987 3,572419871 Fraksi 21 1,760333333 1,185666667 1,037999667 0,165666333 0,137634803 13,76348035 3,489340345 Fraksi 22 1,722 1,179666667 1,031999667 0,171666333 0,142619575 14,2619575 3,987817498 Fraksi 23 1,715333333 1,192 1,044333 0,159333 0,1323731 13,23731002 2,963170018 Fraksi 24 1,698333333 1,149 1,001333 0,202333 0,168097296 16,80972961 6,535589609 Fraksi 25 Persentase
Lampiran 5 Tabulasi data hasil fraksinasi kromatografi ion-exchange
Rata - Rata Selisih λ620-λ405 Abs Blanko Abs Enzim (Abs enzim-Abs Sampel)/ Abs enzim Nama sampel
0,7583 0,3893 blanko 2,0220 1,2657 0,8763 enzim 26x 1,2617 0,7633 0,7467 0,0657 0,0808 8,0837 NaCl 0,25 M 1,3127 0,7990 0,7823 0,0300 0,0369 3,6931 NaCl 0,5 M 1,2710 0,7640 0,7473 0,0650 0,0800 8,0017 NaCl 0,75 M 1,8357 1,2320 0,8427 0,0337 0,0384 3,8418 3,8418 fraksi 1 1,8793 1,2467 0,8573 0,0190 0,0217 2,1682 2,1682 fraksi 2 1,9003 1,2607 0,8713 0,0050 0,0057 0,5706 0,5706 fraksi 3 1,9360 1,2723 0,8830 -0,0067 -0,0076 -0,7607 -0,7607 fraksi 4 1,9653 1,2847 0,8953 -0,0190 -0,0217 -2,1681 -2,1681 fraksi 5 1,9673 1,2640 0,8747 0,0017 0,0019 0,1902 0,1902 fraksi 6 1,9490 1,2380 0,8487 0,0277 0,0316 3,1571 -4,9266 fraksi 7 2,0140 1,2483 0,8590 0,0173 0,0198 1,9780 -6,1058 fraksi 8 1,8893 1,2443 0,8550 0,0213 0,0243 2,4344 -5,6493 fraksi 9 0,9453 0,5413 0,1520 0,7243 0,8265 82,6550 74,5712 fraksi 10 0,9677 0,5557 0,1663 0,7100 0,8102 81,0194 72,9356 fraksi 11 0,9930 0,5777 0,1883 0,6880 0,7851 78,5089 70,4252 fraksi 12 1,0117 0,5943 0,2050 0,6713 0,7661 76,6071 72,9140 fraksi 13 1,0653 0,6377 0,2483 0,6280 0,7166 71,6622 67,9691 fraksi 14 1,1193 0,6837 0,2943 0,5820 0,6641 66,4131 62,7200 fraksi 15 1,0960 0,6657 0,2763 0,6000 0,6847 68,4671 64,7740 fraksi 16 1,0193 0,6053 0,2160 0,6603 0,7535 75,3518 71,6587 fraksi 17 1,0440 0,6233 0,2340 0,6423 0,7330 73,2978 69,6047 fraksi 18 1,1977 0,7583 0,3690 0,5073 0,5789 57,8927 49,8911 fraksi 19 1,9197 1,2220 0,8327 0,0437 0,0498 4,9829 -3,0188 fraksi 20 2,0147 1,1567 0,7673 0,1090 0,1244 12,4382 4,4365 fraksi 21 2,0180 1,0930 0,7037 0,1727 0,1970 19,7033 11,7017 fraksi 22 1,9543 1,0480 0,6587 0,2177 0,2484 24,8384 16,8367 fraksi 23 1,9060 1,1000 0,7107 0,1657 0,1890 18,9046 10,9029 fraksi 24 1,9390 1,0667 0,6773 0,1990 0,2271 22,7083 22,7083 fraksi 25 1,9383 1,0687 0,6793 0,1970 0,2248 22,4801 22,4801 fraksi 26 1,9447 1,1293 0,7400 0,1363 0,1556 15,5573 15,5573 fraksi 27 1,9183 1,1377 0,7483 0,1280 0,1461 14,6063 14,6063 fraksi 28 1,9400 1,1607 0,7713 0,1050 0,1198 11,9818 11,9818 fraksi 29 1,9580 1,1657 0,7763 0,1000 0,1141 11,4112 11,4112 fraksi 30 Persentase
Lampiran 6 Kurva standard glukosa (Uji kandungan gula) Data : Konsentrasi Glukosa (mg/mL) Absorbasi 490 nm 0,0 0,1 0,3 0,5 0,8 1,0 0,000 0,022 0,137 0,273 0,395 0,399 Grafik :
Perhitungan kandungan gula (glukosa) pada fraksi ke-10 ion-exchange: y = 0,4427x + 0,0051 0,151 = 0,4427x + 0,0051 x = 0,151−0,0051 0,4427 x = 0,3212 x 10 (dilusi sampel 10x) x = 3,212 mg/mL y = 0,4427x + 0,0051 R² = 0,9583 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0,45 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 A b so r b an si 490n m konsentrasi (mg/mL)
AKSAR CHAIR LAGES. C34080078. Optimasi Pemurnian Polisakarida dari Mikroalga BTM 11 sebagai Inhibitor RNA Helikase Virus Hepatitis C. Dibimbing oleh IRIANI SETYANINGSIH dan APON ZAENAL MUSTOPA.
Infeksi virus Hepatitis C (HCV) merupakan penyebab utama penyakit hati kronis di seluruh dunia. Pengobatan yang dilakukan terhadap penderita hepatitis C selama ini adalah melalui terapi dengan pemberian interferon yang dikombinasikan dengan ribavirin. Pengobatan ini masih belum optimal, memerlukan biaya yang mahal dan dapat memberikan efek samping.Usaha dalam menemukan obat HCV terus dilakukan dengan mencari unsur antiviral yang melawan virus dengan cara menghambat enzim yang berperan dalam proses replikasi virus HCV, yaitu RNA helikase. Inhibitor enzim RNA helikase dapat diperoleh dari hasil metabolit mikroalga, salah satunya adalah polisakarida. Mikroalga BTM 11 yang diekstraksi menggunakan metanol 80% memiliki aktivitas penghambatan terhadap RNA helikase HCV sebesar 80% (dilusi 5x). Namun, diperlukan teknik pemurnian polisakarida yang terbaik dalam menghasilkan aktivitas inhibisi yang maksimal. Oleh karena itu, perlu adanya optimasi dalam pemurnian polisakarida mikroalga BTM 11.
Penelitian ini bertujuan (1) mengetahui teknik pemurnian terbaik dari polisakarida mikroalga BTM 11 sebagai inhibitor RNA helikase virus hepatitis C, (2) mengetahui kandungan gula dari polisakarida inhibitor termurnikan, dan (3) mengetahui profil senyawa polisakarida inhibitor yang paling aktif. Tahap satu yaitu preparasi RNA helikase HCV yang meliputi (1) ekspresi RNA helikase dengan cara menumbuhkan bakteri E.coli BL21 (DE3) pLysS yang membawa gen NS3 RNA helikase HCV dalam plasmid pET 21b, (2) pemurnian RNA helikase yang telah terekspresi pada sel bakteri menggunakan kromatografi afinitas. Tahap dua meliputi (1) kultivasi mikroalga BTM 11 dalam media IMK-Sea Water pada suhu ruang dengan pencahayaan 4800 lux, (2) ekstraksi polisakarida dari biomassa mikroalga BTM 11. Penelitian tahap tiga meliputi (1) pemurnian ekstrak polisakarida menggunakan teknik kromatografi gel filtrasi dan kromatografi ion- exchange, (2) penentuan profil senyawa polisakarida inhibitor yang paling aktif menggunakan kromatografi lapis tipis dan kromatografi cair kinerja tinggi.
Hasil analisis enzim dengan SDS-PAGE menunjukkan pita tunggal yang tebal berukuran 54 kDa, sehingga dapat dikatakan RNA helikase telah terpurifikasi, dan dapat digunakan dalam pengujian aktivitas ATPase secara in vitro. Sebanyak 25 fraksi yang dikoleksi dari kromatografi gel filtrasi, menghasilkan fraksi aktif pada fraksi ke-13 dengan nilai penghambatan terhadap RNA helikase sebesar 78,76% dengan kandungan gula sebesar 2,97 mg/mL. Fraksinasi menggunakan kromatografi ion-exchange menghasilkan 30 fraksi dengan aktivitas tertinggi sebesar 74,6% terdapat pada fraksi ke-10, dan kandungan gula sebesar 3,21 mg/mL. Hasil KLT menunjukkan satu spot senyawa aktif pada fraksi ke-13 kromatografi gel filtrasi. Hasil KCKT menunjukkan 3 puncak terdeteksi pada fraksi polisakarida dengan retention time (RT) 4,072; 4,706 dan 5,530.