BAB II TINJAUAN PUSTAKA
3.4. Metode Analisis
Metode analisis vitamin yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode Ultra Performance Liquid Chromatography (UPLC) untuk vitamin larut lemak dan metode High Performance Liquid Chromatography (HPLC) untuk vitamin larut air pada tepung campuran pisang awak dengan tepung beras.
Pemilihan metode UPLC pada analisis vitamin larut lemak dan metode HPLC pada vitamin larut air yang dilakukan pada penelitian karena jenis metode ini lebih akurat, peka, tepat, dan cepat dibandingkan dengan penggunaan metode lain dalam menganalisis. UPLC adalah bagian dari HPLC, hanya saja UPLC adalah metode analisis yang terbaru dan lebih akurat dalam menganalisis sampel karena menggunakan kolom dengan ukuran partikel lebih kecil.
3.5. Definisi Operasional
1. Makanan Pendamping ASI (MP-ASI) adalah suatu yang diberikan selain air susu ibu setelah anak berumur 6 bulan.
2. MP-ASI tepung pisang awak adalah makanan bayi yang terbuat dari campuran pisang awak matang dengan tepung beras yang diolah menjadi tepung pisang awak.
3. Kandungan vitamin MP-ASI tepung pisang awak adalah banyaknya vitamin sesuai dengan pedoman MP-ASI bubuk dalam 100 gram tepung campuran pisang awak dengan tepung beras.
4. Sumbangan angka kecukupan gizi bayi dari tepung campuran pisang awak dengan tepung beras adalah besarnya persentase vitamin yang diperoleh dalam 100 gram bahan dasar MP-ASI.
3.6. Tahapan Penelitian
3.6.1. Proses Pembuatan Tepung Beras
Beras yang digunakan adalah beras putih, tidak kotor, dan tidak berkutu. Beras dibersihkan dengan cara diayak atau ditampi untuk memisahkan dari kotoran yang ada. Beras kemudian dicuci bersih dan direndam selama 2 jam sehingga dihasilkan beras yang lembab, selanjutnya beras yang lembab digiling agar mudah hal. Setelah kering tepung beras diayak dengan pengayakan tepung sehingga dihasilkan tepung beras yang halus (Jumirah, dkk, 2011).
3.6.2. Proses Pembuatan Tepung Campuran Pisang Awak dengan Tepung Beras
Menurut penelitian Jumirah, dkk (2011), proses pembuatan tepung campuran pisang awak dengan tepung beras adalah dengan cara mulai dari pemilihan pisang awak yang matang dengan kriteria warna kulit pisang berwarna kuning dan tidak terlalu masak agar tidak terlalu lembek. Pisang diambil daging buahnya (tanpa kulit dan biji) dan kemudian digiling menggunakan blender. Setelah halus pisang dicampurkan dengan tepung beras dengan perbandingan 2:1 sehingga terbentuk pasta yang homogen, pasta pisang
30
kemudian dipindahkan ke talam dan dimasukkan ke dalam oven. Pasta pisang dimasukkan dalam oven bersuhu 55o-60oC untuk dikeringkan (selama 24 jam). Pasta pisang yang sudah dikeringkan kemudian diblender dan diayak untuk menghasilkan tepung pisang awak.
Pisang awak matang: Tepung Beras:
Tepung pisang awak:
Gambar 3.1 Tahapan Proses Penelitian ditampi dan dicuci ambil daging buah
Pengeringan pasta (temperatur 55o-60oC)
Penggilingan tepung Pencampuran pisang awak
dengan tepung beras
Pengayakan tepung (ayakan 80 Mesh)
Analisis kandungan vitamin larut lemak dan larut air dalam tepung pisang awak dihaluskan
ditimbang
direndam selama 2-3 jam
3.6.3. Proses Analisis Vitamin Larut Lemak Tepung Pisang Awak
Analisis vitamin larut lemak menggunakan metode UPLC dimulai dengan tahapan penyiapan larutan sampel, yaitu sebagai berikut:
a. Untuk standar, ambil dan timbang standar vitamin sebanyak 0,005 gram dan encerkan dengan aquabidest sampai 100 ml, masukkan ke dalam labu ukur 10 ml.
b. Kemudian ambil 10 ml dari larutan tersebut dan masukkan ke dalam labu ukur 10 ml.
c. Ambil dan timbang sampel sebanyak 300 mg dan larutkan dengan 100 ml aquabidest (larutan 1). Lalu masukkan ke dalam labu ukur 100 ml.
d. Ambil sebanyak 10 ml larutan 1 dan encerkan sampai 100 ml dengan aquabidest.
e. Ambil sebanyak 100 ml dari larutan sebelumnya dan masukkan ke dalam labu ukur 10 ml.
f. Kemudian masukkan sampel dan standar ke dalam waterbath selama 5 menit agar larutan tercampur sempurna dan gelembung yang ada di dinding tabung hilang.
g. Lalu pindahkan sampel dan standar ke dalam tabung effendorf dengan menggunakan spuit 5 cc.
h. Masukkan sampel dan standar ke dalam alat HPLC dan tunggu hasilnya (Al Anshori, 2007).
32
3.6.4. Analisis Vitamin Larut Air Tepung Pisang Awak
Analisis vitamin larut air menggunakan metode HPLC sama dengan analisis vitamin larut lemak yaitu dimulai dengan tahapan penyiapan larutan sampel, antara lain sebagai berikut:
i. Untuk standar, ambil dan timbang standar vitamin sebanyak 0,005 gram dan encerkan dengan aquabidest sampai 100 ml, masukkan ke dalam labu ukur 10 ml.
j. Kemudian ambil 10 ml dari larutan tersebut dan masukkan ke dalam labu ukur 10 ml.
k. Ambil dan timbang sampel sebanyak 300 mg dan larutkan dengan 100 ml aquabidest (larutan 1). Lalu masukkan ke dalam labu ukur 100 ml.
l. Ambil sebanyak 10 ml larutan 1 dan encerkan sampai 100 ml dengan aquabidest.
m.Ambil sebanyak 100 ml dari larutan sebelumnya dan masukkan ke dalam labu ukur 10 ml.
n. Kemudian masukkan sampel dan standar ke dalam waterbath selama 5 menit agar larutan tercampur sempurna dan gelembung yang ada di dinding tabung hilang.
o. Lalu pindahkan sampel dan standar ke dalam tabung effendorf dengan menggunakan spuit 5 cc.
Adapun pedoman penggunaan HPLC adalah sebagai berikut: a. Preparasi sampel
-Sampel harus dalam bentuk larutan
-Untuk skala analisis sampel dalam uL, konsentrasi sampel yang diinjeksikan tidak boleh terlalu pekat karena dapat menyumbat kolom. Konsentrasi maksimal adalah sekitar 40 ppm.
b. Preparasi fase gerak
-Fase gerak (eluen) yang digunakan harus dalam kualitas p.a ataupun grade HPLC, untuk air, digunakan aquabidest.
-Sebelum digunakan, eluen harus disaring dengan milipore kemudian diwagaskan (didigest) dengan sonikator sekitar 30 menit untuk menghilangkan udara terlarut.
-Eluen harus dimasukkan ke dalam tabung eluen sebelum alat dinyalakan, untuk menghindari adanya gelembung pada selang penghubung.
-Tabung eluen yang sudah diisi harus diberi label sesuai dengan eluen yang digunakan
c. Penyalaan alat
-Sebelum alat dinyalakan, pastikan dalam slang penghubung antara tabung eluen dengan pompa tidak terdapat gelembung udara. Jika terdapat gelembung, buka penutup pompa kemudian buka katup slang di ujung pompa dan sedot secepanya gelembung tersebut dari slang dengan alat penyedot gelembung yang tersedia kemudian tutup katup dan tutup pompa kembali seperti semula.
34
-Hubungkan kabel alat ke sumber listrik.
-Nyalakan tombol paling bawah alat HPLC (tombol detektor). -Nyalakan tombol tengah HPLC (kolom).
-Nyalakan tombol paling atas dari HPLC (pompa).
-Nyalakan tombol power CPU kemudian tombol power pada monitor (Al Anshori, 2007).
3.6.5. Mengitung Sumbangan Vitamin terhadap Angka Kecukupan Gizi a. Sumbangan Vitamin �� =� � ���� � × � 100 b. AKG/ hari % �� =�� × 100 �� Keterangan: SV = Sumbangan Vitamin BS = Berat Sampel (50 gram) n = Jenis Vitamin
AKGa = AKG per hari
