Perlakuan yang diberikan pada penelitian ini adalah kontrol (pedet tanpa inokulasi bakteri pencerna serat yang berasal dari rumen kerbau) dan inokulasi (pedet dengan inokulasi bakteri pencerna serat yang berasal dari rumen kerbau).
Semua pedet mendapat pakan yang sama yaitu calf grower. Sebanyak 20 ml cairan media biakan bakteri dengan konsentrasi 4,56 x 109 CFU/ml, digunakan sebagai inokulan dan diberikan pada tiga ekor pedet. Empat ekor pedet dipelihara tanpa mendapatkan inokulan. Pemberian inokulan dilakukan setiap pagi hari dengan dicekokan langsung pada setiap pedet. Pemberian inokulan dihentikan setelah dua minggu.
Gambar 3. Pemberian Isolasi Bakteri Pencerna Serat pada Pedet dengan Cara Dicekok
Pembuatan Ransum dan Pemberian Pakan
Pembuatan ransum dilakukan secara manual dengan mencampurkan semua bahan pakan diatas lantai yang beralaskan terpal. Pencampuran masing-masing bahan pakan dilakukan secara bertahap yaitu dengan mencampurkannya satu persatu mulai dari yang bahan pakan yang jumlahnya paling kecil.
Selama periode menyusu atau empat minggu percobaan, setiap pedet percobaan mendapatkan susu sesuai dengan jumlah berat badannya yang diberikan pada pukul 8.00 WIB dan pukul 15.00 WIB. Disamping mendapatkan susu, selama periode menyusu kedua kelompok pedet percobaan mendapatkan calf stater. Setelah disapih pedet diberi calf grower yang sama selama percobaan. Pakan padat dan air minum diberikan ad libitum, sesuai dengan kemampuan pedet mengkonsumsi pakan. Sisa pakan dari setiap pedet ditimbang setiap hari lalu dikumpulkan di dalam kantong plastik.
Gambar 4.Pembuatan Ransum Calf Grower
Persiapan Isolat Bakteri
Isolat bakteri yang digunakan berjumlah tujuh isolat hasil isolasi mikroba rumen pencerna serat (Gayatri, 2010; Astuti, 2010) yang berasal dari rumen kerbau dan merupakan koleksi Laboratorium Ilmu Nutrisi Ternak Perah, Fakultas Peternakan IPB. Bakteri tersebut mampu hidup pada media sumber serat dan mampu mencerna serat dengan baik. Semua isolat bakteri ditumbuhkan di dalam satu media susu segar steril selama tiga hari. Bakteri tersebut dapat tumbuh dengan baik pada media yang berprotein tinggi walaupun tidak mengandung serat kasar.
Gambar 5.Isolat Bakteri yang Sudah Dibiakkan pada Susu Segar Steril
Koleksi Feses
Koleksi feses dilakukan selama satu minggu pada minggu ke delapan atau empat minggu setelah disapih dan inokulasi bakteri dihentikan. Feses yang sudah dikumpulkan setiap harinya dimasukkan ke dalam kantong plastik yang berbeda untuk masing-masing pedet. Feses harian ditimbang berat totalnya lalu diambil 10% dan dimasukkan ke dalam kantong kain sebagai sampel untuk dikeringkan dan dianalisa di laboratorium.
Gambar 6.Koleksi Total Feses untuk Pengukuran Kecernaan Nutrien
Pengambilan Sampel Cairan Rumen
Pengambilan sampel cairan rumen pedet dilakukan dua kali yaitu pada minggu ke dua setelah terakhir inokulasi bakteri dan pada akhir minggu ke empat yaitu pada hari setelah koleksi feses berakhir. Cairan rumen diambil menggunakan selang yang dimasukkan ke dalam mulut pedet lalu cairan rumen disedot dengan pompa vakum. Kadar NH3 dan VFA cairan rumen dianalisis.
Gambar 7.Pengambilan Cairan Rumen Menggunakan Selang yang Dimasukkan Melalui Mulut Pedet
Peubah yang Diamati
Peubah yang diamati dalam penelitian ini adalah: (1) konsumsi nutrien ransum, (2) Total Digestible Nutrient (TDN), (3) kecernaan bahan kering dan bahan organik, (4) konsentrasi NH3, dan (5) produksi VFA.
Konsumsi Calf Grower
Konsumsi harian calf grower dihitung dari selisih jumlah calf grower yang diberikan dengan sisa calf grower yang tidak dikonsumsi dalam 24 jam. Penghitungan dilakukan dalam bahan kering (BK).
Total Digestible Nutrient
Total digestible nutrient (TDN) merupakan nilai yang menunjukkan jumlah dari nutrien yang dapat dicerna ternak, yang merupakan jumlah dari semua nutrien organik yang dapat dicerna, seperti protein, lemak, serat kasar, dan BETN (bahan ekstrak tanpa nitrogen). Nilai TDN dihitung dengan menggunakan rumus:
TDN = Proteint + (2,25x Lemakt) + SKt + BETNt
Kecernaan Bahan Kering dan Bahan Organik
Pengukuran kecernaan bahan kering (KCBK) dan kecernaan bahan organik (KCBO) dilakukan dengan metode oven. Feses yang telah dikumpulkan dikeringkan di bawah sinar matahari selama beberapa hari sampai feses kering. Setelah itu feses dimasukkan ke dalam oven 60°C sampai feses kering. Setelah itu feses dihaluskan lalu diambil sekitar 3-5 gram kemudian dimasukkan ke dalam cawan porselen lalu feses dimasukkan ke dalam oven 105°C sampai kering. Setelah itu feses dimasukkan ke dalam tanur 600°C selama kurang lebih 6 jam. Kecernaan dihitung dengan menggunakan rumus: KCBK (%) = Konsumsi BK-BK Feses x 100% Konsumsi BK KCBO (%) =
Konsumsi BO-BO Feses
x 100% Konsumsi BO
Konsentrasi NH3
Pengukuran konsentrsi NH3 cairan rumen dilakukan dengan menggunakan
metode mikrodifusi conway. Cawan conway yang dipakai terlebih dahulu diolesi vaselin pada kedua bibirnya. Sebanyak 1 ml supernatan ditempatkan pada salah satu sisi sekat cawan dan di sisi yang lain ditempatkan 1 ml larutan Na2CO3 jenuh. Cawan
diletakkan miring ke arah sekat sehingga kedua larutan tidak tercampur. Pada bagian tengah cawan ditempatkan 1 ml asam borat berindikator merah metil dan brom kreosol hijau. Kemudian cawan ditutup rapat sehingga kedap udara. Larutan Na2CO3
dicampurkan dengan supernatan dengan cara menggoyangkan dan memiringkan cawan. Selanjutnya cawan dibiarkan selama 24 jam pada suhu kamar. Setelah tutup
cawan dibuka asam borat dititrasi dengan 0,005 N H2SO4 sampai warnanya kembali
menjadi merah muda. Perhitungan untuk konsentrasi NH3 menggunakan rumus:
NH3 (mM) = ml H2SO4 x N-H2SO4 x 1000
Produksi VFA
Pengukuran produksi VFA dilakukan dengan menggunakan teknik destilasi uap (steam destilation). Sebanyak 5 ml supernatan dimasukkan ke dalam tabung destilasi Markham lalu ditambahkan 1 ml H2SO4 15% dan tabung segera ditutup.
Proses destilasi dilakukan dengan cara menghubungkan tabung dengan labu yang berisi air mendidih. Destilat ditampung dalam erlenmeyer yang berisi 5 ml NaOH 00,5 N sampai volumenya mencapai 300 ml. Setelah itu ditambahkan indikator fenolptalin sebanyak 2-3 tetes dan kemudian dititrasi dengan HCl 0,5 N sampai warna titran berubah dari merah jambu menjadi bening. Perhitungan untuk konsentrasi VFA menggunakan rumus:
VFA total (mM) = (ml titran blanko – ml titran sampel) x N-HCl x 1000/5
Analisis Data
Perlakuan inokulasi dan kontrol diterapkan pada pedet dalam Rancangan Acak Lengkap (RAL). Pedet yang mendapatkan perlakuan kontrol berjumlah empat ekor dan pedet yang mendapatkan perlakuan inokulasi berjumlah tiga ekor. Setiap pedet merupakan ulangan dalam setiap perlakuan.
Rataan konsumsi nutrien, kecernaan nutrien, konsentrasi NH3 dan VFA
cairan rumen serta TDN dari pedet yang diinokulasi dibandingkan dengan dari pedet kontrol dengan Uji-t pada α=0,05 (Steel & Torrie, 1991) menggunakan rumus:
Keterangan: = rataan perlakuan ke-1 = rataan perlakuan ke-2