ASYMMETRIC DIMETHYLARGININ DAN NITRIC OXIDE
4. Prosedur Kerja
1. Siapkan semua reagen, sampel, dan standard.
2. Tambahkan 150 µl Assay Diluent RD1-105 ke dalam well.
3. Tambahkan 75 µl standard, kontrol, dan sampel ke dalam masing-masing well, campur dengan baik. Pastikan penambahan reagen tak terputus dan selesai dalam waktu 10 menit.
4. Tutup plate dengan plate sealer yang tersedia dan inkubasi pada suhu kamar selama 1 jam dengan shaker.
5. Buang isi dari tiap well dan cuci dengan menambahkan 400 µl Wash Buffer ke dalam masing-masing well. Ulangi proses tersebut sebanyak 3 kali (total pencucian sebanyak 4 kali). Setelah pencucian terakhir, buang isi dari well, buang sisa Wash Buffer dengan mengetuk-ngetukkan plate secara terbalik pada lap kertas yang bersih.
6. Segera tambahkan 200 µl Conjugate ke dalam masing-masing well. Tutup plate dengan plate sealer baru, inkubasi pada suhu kamar selama 3 jam dengan shaker.
7. Ulangi proses no. 5
8. Segera tambahkan 200 µl Substrate Solution ke dalam masing-masing well. Tutup plate dengan plate sealer baru, inkubasi pada suhu kamar selama 30 menit, lindungi dari cahaya.
9. Tambahkan 50 µl Stop Solution ke dalam masing-masing well.
10. Tentukan optical density dari tiap well dalam waktu 30 menit menggunakan microplate reader pada panjang gelombang 450 nm dan panjang gelombang koreksi pada 540 nm atau 570 nm.
Lampiran 4
Pemeriksaan NITRIC OXIDE (NO) (Cayman)
Konsentrasi NO adalah kadar nitric oxide dalam serum yang diukur dengan Colory metri/ Cayman satuannya µM.
Prosedur pemeriksaan Nitrate / Nitrite, Cat. No. 7 80001 1 . Metode : Colorimetric Assay
Alat : Micro reader panjang gelombang 450 nm Reagensia : Nitrate/Nitrite Cayman
Nitarte reductase 1. Prinsip : Nitrate( NO3- ) Nitrite ( NO2-)
di + Sulfanilamide(Griess Reagen I) & N-ethylenediamine (Gries Regaenn II) Azo compound product ( deep purple).
Ukur absorbent dari azo compound secara photomethrik pada panjang gelombang 450 nm. Konsentrasi Nitrite (NO2-) yg terukur sebanding dengan azo compound yg terbentuk.
2. Langkah Pemeriksaan: a. Pengambilan spesimen
5 cc darah vena tanpa antikogulan yang diambil secara aseptic, biarkan darah membeku. Kemudian disentrifuse 3000 RPM/10 menit. Pisahkan serum dimasukkan ke dalam 3 cup fezer masing – masing 500 ul, kemudian diberi label dan disimpan di frezer (-20 oC). Sampel serum dikirim ke LITBANG Laboratorium Riset Eksoterik Pusat Prodia Pusat di Jakarta disimpan di suhu – 70 o C.
b. Penanganan Reagen 1. Assay Buffer
Encerkan Assay Buffer vial sampai 100 ml dengan air Ultrapure. 2. Nitrate Reductase (vial #2)
Larutkan isi vial dengan 1.2 ml Assay Buffer. Tetap dalam ice selama digunakan. Simpan di -20°C jika tidak digunakan.
3. Enzyme Cofactors (vial #3)
Larutkan isi vial dengan 1.2 ml Assay Buffer. Tetap dalam ice selama digunakan. Simpan di -20°C jika tidak digunakan.
4. Nitrate Standard (vial #4)
Larutkan isi vial dengan 1.0 ml Assay Buffer. Simpan di 4°C jika tidak digunakan (jangan dibekukan).
5. Nitrite Standard (vial 5)
Larutkan isi vial dengan 1.0 ml Assay Buffer. Simpan di 4°C jika tidak digunakan (jangan dibekukan).
6. Griess reagent R1 and R2 (vial 6 dan 7)
Tidak perlu penambahan air atau Assay Buffer. Vial sudah siap untuk digunakan. Simpan di 4°C jika tidak digunakan (jangan dibekukan).
c. Prosedur Kerja
1. Tambahkan 200 µl air atau Assay Buffer ke dalam well.
2. Tambahkan 80 µl sampel/larutan sampel ke dalam well. Jumlah volume final disesuaikan sampai 80 µl dengan Assay Buffer solution.
3. Tambahkan 10 µl enzyme cofactor mixture (vial 3) ke dalam well. 4. Tambahkan 10 µl Nitrate reduktase mixture (vial 2) ke dalam well. 5. Tutup plate dengan plate cover, inkubasi pada suhu kamar selama 1
jam.
6. Tambahkan 50 µl Griess Reagent R1 (vial 6) ke dalam well. 7. Segera Tambahkan 50 µl Griess Reagent R2 (vial 7) ke dalam well. 8. Biarkan terjadi perubahan warna selama 10 menit pada suhu ruang.
Plate tidak perlu ditutup.
Lampiran 5. Uraian Jadwal Kegiatan
Jadwal Penelitian dilakukan pada bulan September 2012 sampai Oktober 2012
Uraian Jadwal kegiatan Rencana Penelitian NO. Kegiatan Bulan
7 8 9 10 11 12 1 2 3 4
1. Survey x
2 Sosialisasi penelitian x x
3 Persiapan alat-alat penelitian x x
4 Persiapan subyek penelitian x x
5 Pelaksanaan Penelitian x x
6 Pengolahan dan Analisis Data x x x
Lampiran 6. Rincian Biaya
Biaya yang akan dikeluarkan dalam penelitian ini adalah: a. Biaya Bahan dan Alat
1) Kit pemeriksaan NO, ET-1, ADMA Rp. 93.000.000,00@ Rp. 14.400.000,00
2) Pemeriksaan Na, K, Ca Rp 42.000.000,00
b. Biaya Operasional Rp. 6.300.000,00
1) Honor Pembantu peneliti 6 orang @ 50.000 selama 21 hari
c. Biaya ATK
1) 20 rim kertas A4 berat 80 gram Rp. 600.000,00
2) Alat-alat tulis Rp. 200.000,00
3) Foto kopi kuesioner Rp. 200.000,00
d. Biaya tidak terduga Rp. 2.750.000,00
Total biaya Rp. 145.050.000,00
Lampiran 7.
KUESIONER PENELITIAN
PERANAN ULTRAFILTRASI TERHADAP HIPERTENSI INTRADIALITIK DAN HUBUNGANNYA
DENGAN PERUBAHAN KADAR: ENDOTHELIN-1,
ASYMMETRIC DIMETHYLARGININ DAN NITRIC OXIDE
I. IDENTITAS 1. Nama : ... 2. Sex : ... 3. Umur : ... 4. Suku Bangsa : ... 5. Alamat : ... 6. Nomor telp. : ... 7. Pendidikan : ... 8. Pekerjaan : ... 9. Nama pendamping : ...
10. No. Telp Pendamping ... :
II. ANAMNESIS 1. Riwayat Penyakit: a. HD pertama kali : ………. (Tgl/Bln/Tahun) b. Lama HD : ………. (bulan) c. Jadwal HD : ……….
d. Riwayat Penyakit :
i. DM : ya/tidak
ii. Penyakit Jantung : ya/tidak iii. Batu saluran kemih : ya/tidak
iv. Hipertensi : ya/tidak
v. MRS dalam 6 bulan terakhir : ya/tidak 2. Riwayat sosial
a. Minum kopi : ya/tidak b. Merokok : ya/tidak c. Minum alkohol : ya/tidak
III. PEMERIKSAAN FISIK Pre HD
Diperiksa tanggal : ……… Oleh : ……… BB Kering : ………..Kg BB saat ini : ………. Kg Tinggi Badan : ………. cm Lingkar Pinggang : ……….. cm Tekanan Darah : ……….. mmHg Frekuensi Pernafasan : ……….. x/mnt Denyut nadi : ……….. x/menit Keadaan Umum : ( ) Baik ( ) Sedang ( ) Buruk Sianosis : ( ) ada ( ) Tidak ada
Anemia : ( ) ada ( ) Tidak ada
Telinga : ( ) ada kelainan ( ) Tidak ada kelainan Hidung : ( ) ada kelainan ( ) Tidak ada kelainan Gigi mulut : ( ) ada kelainan ( ) Tidak ada kelainan Tenggorokan : ( ) ada kelainan ( ) Tidak ada kelainan Leher : ( ) ada kelainan ( ) Tidak ada kelainan
JVP : ………..
JANTUNG
• Auskultasi :
a. S1 : ( ) ada kelainan ( ) Tidak ada kelainan b. S2 : ( ) ada kelainan ( ) Tidak ada kelainan c. Murmur : ( ) ada ( ) Tidak ada
• Thrill : ( ) ada ( ) Tidak ada
• Ictus cordis : intercostals ……….. kiri / kanan, garis ………….. PARU
• Suara nafas : ………/………..
• Ronchi : ………/………..
• Whexxing : ………/……….. ABDOMEN
• Hepar : ( ) Tidak teraba ( ) Teraba • Limpa : ( ) Tidak teraba ( ) Teraba • Asites : ( ) ada ( ) Tidak ada EKSTREMITAS
• Edema : ( ) ada ( ) Tidak ada • AV shunt : ( ) ada ( ) Tidak ada
IV. ELEKTROKARDIOGRAM ( ) Normal ( ) Q Waves, lokasi: ... ( ) ST Elevasi, lokasi: ... ( ) ST Depresi, lokasi: ... ( ) T Inversi, lokasi: ...
V. FOTO ROTGENT THORAK ( ) Normal ( ) sembab paru ( ) Kardiomegali ( ) Efusi Pleura VI. USG GINJAL ( ) contracted kidney ( ) Batu Ginjal ( ) Policystic kidney ( ) Hideonefrosis VII. PEMERIKSAAN LABORATORIUM No. Jenis Pemeriksaan Nilai Pre HD Post HD 1. Hemoglobin (mg%) 2. BUN (mg/dl) 3. SC (mg/dl) 4. Albumin (mg/dl) 5. Gula Darah (mg/dl) 6. Natrium 7. Calsium ion 8 Kalium (meq/L) 9. ET-1 (pq/ml) 10. ADMA (µmol/L) 11. NO (µM) VIII. DIAGNOSIS ……… ……… ………
IX. TERAPI
1. Asam Folat ( ) Ya ( ) Tidak 2. Calsium carbonat ( ) Ya ( ) Tidak 3. Lantanum ( ) Ya ( ) Tidak 4. Keto acid ( ) Ya ( ) Tidak
5. Captopril ( ) Ya , Dosis ……….. ( ) Tidak 6. Lisinopril ( ) Ya , Dosis ……….. ( ) Tidak 7. Ramipril ( ) Ya , Dosis ……….. ( ) Tidak 8. losartan ( ) Ya , Dosis ……….. ( ) Tidak 9. Irbesartan ( ) Ya , Dosis ……….. ( ) Tidak 10. Candesartan ( ) Ya , Dosis ……….. ( ) Tidak 11. Betabloker ( ) Ya , Dosis ……….. ( ) Tidak 12. Clonidin ( ) Ya , Dosis ……….. ( ) Tidak 13. Diuretik ( ) Ya , Dosis ……….. ( ) Tidak 14. CCB ( ) Ya , Dosis ……….. ( ) Tidak 15. Statin ( ) Ya , Dosis ……….. ( ) Tidak 16. Allupurinol ( ) Ya , Dosis ……….. ( ) Tidak 17. Eritropoetin a. Ya Jenis ……….. Dosis ……… b. Tidak 18. Besi Parenteral a. Ya Jenis ……….. Dosis ………. b. Tidak