BAB V KESIMPULAN DAN SARAN
B. Saran
1. Perlu dilakukan pengujian lebih lanjut terkait senyawa yang bertanggung jawab
terhadap aktivitas antiangiogenesis.
2. Perlu dilakukan pengujian lebih lanjut terkait mekanisme spesifik yang diduga
50
DAFTAR PUSTAKA
Almatsier, S., 2004, Prinsip Dasar Ilmu Gizi, Gramedia, Jakarta, hal. 94.
Anonim, 2000, Inventaris Tanaman Obat Indonesia (I), Jilid IV, Departemen Kesehatan & Kesejahteraan Sosial RI, Jakarta, hal. 173 - 174.
Auerbach, R., Lewis, R., Shinners, B., Kubai, L., Akhfar, N., 2003, Angiogenesis Assays : A Critical Overview, Clinical Chemistry, 49(1), 35 - 38.
Brem, S., 1999, Angiogenesis and Cancer Control: From Concept to Therapeutic Trial, Cancer Control, 6(5), 436-458.
Bosman, F.T., 1996, Aspek-aspek Fundamental Kanker, Edisi V, Panitia Kanker RSUP DR Sardjito, Yogyakarta, hal. 3 - 10.
Cimpean, E. M., Ribatti, D., Raica, M., 2008, The Chick Embryo Chorioallantoic Membrane as a Model to Study Tumor Metastasis, Springer Science, 11, 311 - 319.
Cooper, E.M., 1995, Oncogenes and Growth Factors, Oncogenes, 2nd, Massachussets, pp. 186 - 188.
Corwin, E.J., 2009, Buku Saku Patofisiologi, Edisi 3, EGC, Jakarta, hal. 81 - 82.
D’Arcy, P.F., and Howard, E. M., 1996, A New Anti-inflammatory Test, Utilizing The Chorio-allantoic Membrane of The Chick Embryo, Br J Pharmacol
Chemother, 29, 378-387.
Dalimartha, S., 2000, Atlas Tumbuhan Obat Indonesia, Volume 2 , Trubus Agriwidya, Jakarta, hal. 127.
Dalimartha, S., 1999, Ramuan Tradisional untuk Pengobatan Kanker, Penebar Swadaya, Jakarta, hal. 103.
Dannenberg A., Zakim D., 1999, Chemoprevention of Colorectal Cancer Through Inhibition of Cyclooxygenase-2. Semin Oncol, 26, 499 – 504.
Dolečková, I., Rárová, L., Grúz, J., Vondrusová, M., Strnada, M., and Kryštof, V., 2012, Antiproliferative and Antiangiogenic Effects Offlavone Eupatorin, An Active Constituent of Chloroform Extract of Orthosiphon stamineus
Leaves, Fitoterapia, 83, 1000 - 1007.
Dwiatmaka, Y., 2000, Kanker : Skrining Tanaman Berkhasiat Antikanker Dengan
Metode “BST” dalam Kanker, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta, hal. 102 - 104.
Evans, C.W., 1991, The Metastatic Cell, Edisi 1th, Champman and Hall, London, pp. 191 - 289.
Folkman, J., 1976, The Vascularization of Tumors, Scientific American, 6, 59-73. Folkman, J., 1996, Fighting Cancer By Attaching Its Blood Supply, Scientific
American, 9, 116 - 119.
Frisca., Sardjono, C. T., dan Sandra, F., 2009, Angiogenesis : Patofisiologi dan
Aplikasi Klinis, JKM, Jakarta, hal. 176 - 177.
Giavazzi, R., 2000, The Biological Basis for Antiangiogenic Therapy, European
Journal of Cancer, 36, 1917.
Govan, 1986, Pathology Illustrated, Churchill, Living Stone, pp. 185 - 190. Hanahan, D., and Weinberg, R.A., 2000, The Hallmark of CancerCell, Vol 100,
Hariana, A., 2008, Tumbuhan Obat dan Khasiatnya, Seri 2, Penebar Swadaya, Jakarta, hal. 65.
Hemati, S., Sadeghi, M., and Motovali, M., 2010, Higher Plasma MMP-9 Level in Breast Cancer Patients With MMP-9 Promoter, J. Biol. Res, 13, 113 –
118.
Herawati D., Nuraida, L., dan Sumarto, 2012, Cara Produksi Simplisia Yang Baik, Institut Pertanian Bogor, Bogor, hal. 11.
Hou, J., Tian, L., dan Wei, Y., 2004, Cancer Immunotherapy of Targeting Angiogenesis, Cellular & Molecular Immunology, 1(3), 161-166.
Jagannath, I., 2000, Herbs the Green Pharmacy of Malaysia, Vinpress, Malaysia, pp. 76-77.
Kerbel, R., and Folkman, J., 2002, Clinical Translation of Angiogenesis Inhibitor,
Nature Reviews Cancer, 2, 727-729.
King, R.J.B., 2000, Cancer Biology, 2nd edition, Pearson Education Ltd., London, pp. 214.
Kuswibawati, L., 2000, Apa Itu Kanker dalam Kanker, Yogyakarta, Penerbit Universitas Sanata Dharma, hal. 5.
Leng, T., Miller, J.M., Bilbao, K., Palanker, D., Huie, P., Blumenkranz, M., 2004, The Chick Chorioallantoic Membrane as a Model Tissue for Surgical Retinal Research and Simulation, The Journal of Retina and Vitreous
Disease, 24(3).
Lisdawati, 2007, Isolasi Dan Elusidasi Struktur Senyawa Lignan Dan Asam Lemak dari Ekstrak Daging Buah Phaleria Macrocarp, Buletin Penelitian
Kesehatan, 35 (3), 115-124.
Liu, Z., Tang, Z., Zhang S., Chou, Q., and Huang, Y., 2008, Angiogenesis Inhibition In Vascular Endothelial Cells By Terpenoid Compounds From
Bletilla striata Is Via Apoptosis Pathway, Journal of Molecular Cell
Biology, 41(5), 383-392.
Liu, Z., Wang, F., and Chen, X., 2008, Integrin αvβ3 Targeted Cancer Therapy,
Drug Dev Res, 69(6), 2-3.
Lopes, C. M., Rocha, A., Pirraco, A., Regasini, L, O., Silvs, D, S,. Bolzani, V, S., Azevedo, I., Carlos, I, Z., and Soares, R., 2009, Anti-angiogenic Effects Of PterogynidineAalkaloid Isolated From Alchornea glandulosa, BMC
Complementary and Alternative Medicine, 9(15), 4-11.
Lubis, N. L., 2009, Dukungan Sosial pada Pasien Kanker, Perlukah ?, USU Press, Medan, hal.2-3.
MacDonald, M. D., 2012, Angiogenesis Inhibitors A New Frontier in Cancer
Therapy, The Childhood Brain Tumor Foundation.
Putri, W.D.R., 2009, Kontrol Optimal Pada Model Tumor Anti Angiogenesis,
Skripsi, 7-8, Institut Teknologi Sepuluh Nopember Surabaya.
Ribatti, D., Leali, D., Gualandris, A., Bastaki, M., Vacca, A., Roncali, et al.,1999, In Vivo Angiogenic Activity of Urokinase : Role of Endogenous Fibroblast Growth Factor-2, Cell Science, 112, 4213-4221.
Ribatti, D., Vacca, A., and Presta, M., 2002, The Discovery of Angiogenic Factors: A Historical Review, General Pharmacology, 35, 229.
52
Ridwan, E., 2013, Etika Pemanfaatan Hewan Percobaan dalam Penelitian Kesehatan, J Indon Med Assoc., 63 (3), 114-115.
Sahib, H.B., Aisha, A.F., Yam, M.F., Asmawi, M.Z., Ismail, Z., Salhimi, S.M., et al., 2009, Anti-Angiogenic and Anti Oxidant Properties of Orthosiphon
stamineus Benth. Methanolic Leaves Extract, International Journal of
Pharmacology, 5(2), 162-167.
Santa, I.G.P., 1998, Studi Kemotaksonomi-Farmakognosi Benalu Antikanker
Scurrula atropurpurea (BI.) DANS. dan Dendrophthoe pentandra (L.)
MIQ., Warta Tumbuhan Obat Indonesia, 14-16.
Schneider, A.K., 1997, Encyclopedia of Human Biology, Edisi II, Academic Press, London, pp. 312 - 315.
Setiawan, E.J., 2012, Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak Herba Rumput Mutiara
(Hedyotis corymbosa (L.) Lamk.) Dengan Metode Hen’s Egg Test
Chorioallantoic Membrane, Skripsi, 28-29, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
Sudarsono, Pudjoarinto A., Gunawan D., Wahyuono S., Donatus I. A., Dradjat M., dkk., 1996, Tumbuhan Obat; Hasil Penelitian, Sifat-Sifat, dan
Penggunaan, Pusat Penelitian Obat Tradisional Universitas Gadjah
Mada, Jogjakarta, hal. 90.
Sudiono, J., 2008, Pemeriksaan Patologi untuk Diagnosis Neoplasma Mulut, EGC, Jakarta hal. 38.
Sumaryono, W., Proksch, P., Wray, V., Witte, L., and Hartmann, T., 1991, Qualitative and Quantitative Analysis of the Phenolic Constituents from
Orthosiphon aristatus, Plant Med, 57(2), 176 – 80.
Sunarto, 1999, Onkologi, panitia Kanker RSUP DR Sardjito, Yogyakarta.
Thurston, D.E., and Lobo, S.G.M.J., 1998, The Chemoteraphy Of Cancer :
Introduction to the Principles of Drug Desain and Action, 3rd Ed,
Harwood Academic Publisher, Singapore, pp. 334 - 338.
Tosetti, F., Ferrari, N., De Flora, S., and Albini, A., 2002, Angioprevention : Angiogenesis is a Common and Key Target for Cancer Chemopreventive
Agents, FASEB, 16, pp. 2-14
Wu, H., Huang, C., and Chang, D., 2008, Anti-Angiogenic Therapeutic Drugs for Treatment of Human Cancer, Journal of Cancer Molecules, 4(2), 37-45. Zhang, F., Subbaramaiah, K., Altorki, N., and Dannenberg, A., 1998, Dihydroxy
Bile Acids Activate The Transcription of Cyclooxygenase – 2, J Biol Chem, 273, 2424 – 2428.
Zhi, J.D., Wang, F.L., Wang, F.L., Jie, G., Hua, F.K., Yu, G.M., Shu, Q.Z., Yan, D., Shuai L., Xi, J.W., and Wen, Y.W., 2013, Anti-angiogenic Effect Of The Total FlavonoidsIin Scutellaria barbata D. Don., BMC
53
LAMPIRAN
54
56
Rendemen ekstrak metanol daun kumis kucing
= X 100 %
=
60
Lampiran 4. Data Perhitungan Kontrol bFGF
Kontrol bFGF termuati bFGF 10 ng + pelarut (DMSO-aquabidest steril) sebanyak
10 µL.
1. Larutan bFGF
Konsentrasi awal bFGF (C1) adalah 25 ng/µ L
Konsentrasi bFGF yang diinginkan (C2) adalah 1 ng/µ L
Dosis setiap telur adalah 10 ng
v = = = 10 µL
Setiap telur diinduksi dengan volume induksi bFGF sebesar 10 µL.
Telur yang digunakan untuk masing-masing perlakuan adalah 10 telur.
Total telur = 10 telur
Volume bFGF yang dibutuhkan = total telur x volume induksi bFGF
= 10 x 10 µl = 100 µL
V1 x C1 = V2 x C2
V1 x 25 ng/ µ L = 100 µL x 1 ng/ µ L
V1 =
V1 = 4 µL
Larutan bFGF (25 ng/ µL) diambil 4 µL kemudian ditambahkan dengan pelarut
bFGF yaitu PBS
2. Larutan Pelarut (DMSO-aquabidest steril)
Konsentrasiawal DMSO (C1) adalah 99,5%.
Konsentrasi yang diinginan (C2) adalah 0,2%.
dimasukkan dalam labu ukur 100 mL, kemudian di
62
Lampiran 5. Data Perhitungan Kontrol Pelarut Larutan Pelarut (DMSO – aquabidest steril)
Konsentrasiawal DMSO (C1) adalah 99,5%.
Konsentrasi yang diinginan (C2) adalah 0,2%.
dimasukkan dalam labu ukur 100 mL, kemudian di
Lampiran 6. Data Perhitungan Kelompok Konsentrasi Ekstrak Metanol Daun Kumis Kucing
1. Volume DMSO
Konsentrasi awal DMSO (C1) adalah 99,5%.
Konsentrasi yang diinginkan (C2) adalah 0,2%.
Untuk membantu melarutkan ekstrak, setiap konsentrasi ekstrak ditambahkan 0,2
mL DMSO.
2. Larutan Uji
Perlakuan ekstrak terbagi menjadi 3 peringkat konsentrasi yaitu 20 µg/mL, 40
µg/mL dan 80 µg/mL.
Konsentrasi 20 µg/mL
m = C x v
m = 20 µg/mL x 100 mL
m = 2000 µg = 0,002 g dilarutkan ke dalam 0,2 mL DMSO add aqubidest 100 mL
Konsentrasi 40 µg/mL
m = C x v
m = 40 µg/mL x 100 mL
m = 4000 µg = 0,004 g dilarutkan ke dalam 0,2 mL DMSO add aqubidest 100 mL
Konsentrasi 80 µg/mL
64
m = 80 µg/mL x 100 mL
m = 8000 µg = 0,008 g dilarutkan ke dalam 0,2 mL DMSO add aqubidest 100 mL
3. Larutan bFGF
Total telur yang digunakan = 3 x 10 telur = 30 telur
Volume bfGF yang dibutuhkan = total telur x volume induksi bFGF
= 30 x 10 µL = 300 µL
V1 x C1 = V2 x C2
V1 x 25 ng/µ L = 300 µL x 1 ng/ µ L
V1 = = 12 µL
V1 = Larutan bFGF (25 ng/µ L) diambil 12 µL kemudian ditambah dengan pelarut
bFGF yaitu PBS
66
Lampiran 8. Hasil Uji HET-CAM
Kontrol positif 1(bFGF + pelarut) Kontrol positif 2 (bFGF + pelarut) Kontrol positif 3 (bFGF + pelarut)
Kontrol normal 1 (paper disc) Kontrol normal 2 (paper
dis)
Kontrol normal 3 (paper disc)
Kontrol pelarut 1 (paper disc + pelarut)
Kontrol 2 (paper disc + pelarut)
Kontrol 3 (paper disc
+ pelarut)
Ekstrak daun kumis kucing 1 (20 µg/ml)
Ekstrak daun kumis kucing 2 (20 µg/ml)
Ekstrak daun kumis kucing 3 (20 µg/ml)
Ekstrak daun kumis kucing 1 (40 µg/ml)
Ekstrak daun kumis kucing 2 (40 µg/ml)
Ekstrak daun kumis kucing 3 (40 µg/ml)
Ekstrak daun kumis kucing 1 (80 µg/ml)
Ekstrak daun kumis kucing 2 (80 µg/ml)
Ekstrak daun kumis kucing 3 (80 µg/ml)
68
Lampiran 9. Persentase Penghambatan Angiogenesis
Tabel V. Jumlah Pembuluh Darah Baru Setiap Kelompok
Kelompok Jumlah Telur
Jumlah
Pembuluh Darah Rerata
Standar Deviasi
Kontrol normal (paper
disc blank) 3 15 15 13 14,33 1,15 Kontrol pelarut (DMSO – aquabidest steril) 3 13 11 15 13 2,00 Kontrol bFGF 3 24 23 23 23,33 0,58
Ekstrak daun kumis kucing 1( konsentrasi 20 µg/ml) 3 17 16 18 17 1,00
Ekstrak daun kumis kucing 2 ( konsentrasi 40 µg/ml) 3 12 12 11 11,67 0,57
Ekstrak daun kumis kucing 3 ( konsentrasi 80 µg/ml) 3 8 7 7 7,3 0,57
A. Persentase Pertumbuhan Pembuluh Darah Baru
Persentase Pertumbuhan Pembuluh Darah Baru = x 100%
Keterangan :
a = jumlah rerata pembuluh darah baru pada perlakuan ekstrak
b = jumlah pembuluh darah baru pada kontrol bFGF
Persentase penghambatan angiogenesis
= 100% - persentase pertumbuhan pembuluh darah baru relatif
1. Konsentrasi 1 (20 µg/mL)
Persentase Pertumbuhan Pembuluh Darah Baru = x 100% = 72,86 %
Persentase Penghambatan Angiogenesis = 100% - 72,86% = 27,14 %
2. Konsentrasi 2 (40 µg/mL)
Persentase Pertumbuhan Pembuluh Darah Baru = x 100% = 50,02 %
Persentase Penghambatan Angiogenesis = 100% - 50,02% = 49,98 %
3. Konsentrasi 3 (80 µg/mL)
Persentase Pertumbuhan Pembuluh Darah Baru = x 100% = 31,41 %
Persentase Penghambatan Angiogenesis = 100% - 31,41% = 68,59 %
Tabel VI. Persentase Penghambatan Angiogenesis
Kelompok
Pertumbuhan pembuluh darah relatif terhadap
bFGF (%) X±SD Penghambatan angiogenesis (%)X±SD Konsentrasi 1 (20 µg/ml) 72,86 % 27,14 % Konsentrasi 2 (40 µg/ml) 50,02 % 49,98 % Konsentrasi 3 (80 µg/ml) 31,41 % 68,59 %
70
Lampiran 10. Pengujian Statistik
Descriptive Statistics
N Mean Std. Deviation Minimum Maximum
Blank 3 14.3333 1.15470 13.00 15.00 Pelarut 3 13.0000 2.00000 11.00 15.00 bFGF 3 23.3333 .57735 23.00 24.00 Konsentrasi_1 3 17.0000 1.00000 16.00 18.00 Konsentrasi_2 3 11.6667 .57735 11.00 12.00 Konsentras_3 3 7.3333 .57735 7.00 8.00
One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test
Blank Pelarut bFGF Konsentras i_1 Konsentras i_2 Konsentras i_3 N 3 3 3 3 3 3 Normal Parametersa Mean 14.333 3 13.000 0 23.333 3 17.0000 11.6667 7.3333 Std. Deviation 1.1547 0 2.0000 0 .57735 1.00000 .57735 .57735 Most Extreme Differences Absolute .385 .175 .385 .175 .385 .385 Positive .282 .175 .385 .175 .282 .385 Negative -.385 -.175 -.282 -.175 -.385 -.282 Kolmogorov-Smirnov Z .667 .303 .667 .303 .667 .667
Asymp. Sig. (2-tailed) .766 1.000 .766 1.000 .766 .766
a. Test distribution is Normal.
Test of Homogeneity of Variances Jumlah_pembuluh_darah
Levene Statistic df1 df2 Sig.
ANOVA Jumlah_pembuluh_darah
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 437.778 5 87.556 71.636 .000
Within Groups 14.667 12 1.222
Total 452.444 17
Post Hoc Tests
Multiple Comparisons Jumlah_pembuluh_darah
Tukey HSD
(I) Perlakuan (J) Perlakuan
Mean
Difference (I-J) Std. Error Sig.
95% Confidence Interval
Lower Bound Upper Bound
blank pelarut 1.33333 .90267 .684 -1.6987 4.3653 bFGF -9.00000* .90267 .000 -12.0320 -5.9680 konsentrasi 1 -2.66667 .90267 .098 -5.6987 .3653 konsentrasi 2 2.66667 .90267 .098 -.3653 5.6987 konsentrasi 3 7.00000* .90267 .000 3.9680 10.0320 pelarut blank -1.33333 .90267 .684 -4.3653 1.6987 bFGF -10.33333* .90267 .000 -13.3653 -7.3013 konsentrasi 1 -4.00000* .90267 .008 -7.0320 -.9680 konsentrasi 2 1.33333 .90267 .684 -1.6987 4.3653 konsentrasi 3 5.66667* .90267 .000 2.6347 8.6987 bFGF blank 9.00000* .90267 .000 5.9680 12.0320 pelarut 10.33333* .90267 .000 7.3013 13.3653 konsentrasi 1 6.33333* .90267 .000 3.3013 9.3653 konsentrasi 2 11.66667* .90267 .000 8.6347 14.6987 konsentrasi 3 16.00000* .90267 .000 12.9680 19.0320 konsentrasi 1 blank 2.66667 .90267 .098 -.3653 5.6987 pelarut 4.00000* .90267 .008 .9680 7.0320 bFGF -6.33333* .90267 .000 -9.3653 -3.3013
72 konsentrasi 2 5.33333* .90267 .001 2.3013 8.3653 konsentrasi 3 9.66667* .90267 .000 6.6347 12.6987 konsentrasi 2 blank -2.66667 .90267 .098 -5.6987 .3653 pelarut -1.33333 .90267 .684 -4.3653 1.6987 bFGF -11.66667* .90267 .000 -14.6987 -8.6347 konsentrasi 1 -5.33333* .90267 .001 -8.3653 -2.3013 konsentrasi 3 4.33333* .90267 .004 1.3013 7.3653 konsentrasi 3 blank -7.00000* .90267 .000 -10.0320 -3.9680 pelarut -5.66667* .90267 .000 -8.6987 -2.6347 bFGF -16.00000* .90267 .000 -19.0320 -12.9680 konsentrasi 1 -9.66667* .90267 .000 -12.6987 -6.6347 konsentrasi 2 -4.33333* .90267 .004 -7.3653 -1.3013
73
BIOGRAFI PENULIS
Skripsi yang berjudul ““Aktivitas Antiangiogenesis Ekstrak Metanol Daun Kumis Kucing (Orthosiphon
stamineus L.) Terhadap Chorioallantoic Membrane
Yang Diinduksi bFGF” ini ditulis oleh Stien Dwiny. Penulis merupakan anak kedua dari dua bersaudara dari pasangan Drs. Berger Tupak dan Dra. Hawun Pahan, yang lahir di Pangkalan Bun, Kalimantan Tengah pada tanggal 12 Oktober 1992. Pendidikan formal yang ditempuh penulis dimulai di TK Cahaya Mulia (1997-1998), SDK Santa Maria (1998-2004), SMP Negeri 2 Arut Selatan (2004-2007) dan melanjutkan pendidikan menegah atas di SMA Negeri 2 Palangka Raya (2007-2010). Pada tahu 2010 penulis melanjutkan pendidikan ke jenjang Perguruan Tinggi di Universitas Sanata Dharma Yogyakarta, Fakultas Farmasi. Selama menempuh kuliah, penulis aktif dalam berbagai kepanitian dan organisasi. Penulis pernah menjadi anggota seksi Publikasi, Dekorasi dan Dokumentasi dalam kegiatan Pelepasan Wisuda (2011), anggota seksi Publikasi, Dekorasi dan Dokumentasi pada Komisi Pemilihan Umum Gubernur BEMF & Ketua DPMF Farmasi periode 2012-2013 (2012), anggota seksi Dekorasi dan Dokumentasi dalam kegiatan Pharmacy Days
(2012), menjadi anggota Unit Kegiatan Mahasiswa Agama Kristen “Apostolos”
(2011). Penulis juga pernah menjadi anggota tim dalam Kegiatan penyuluhan dengan tema Pencegahan Demam Berdarah (2011).
