BAB V KESIMPULAN DAN SARAN
B. Saran
B. Saran
1. Sampel alga coklat yang digunakan untuk pengujian aktivitas antioksidan harus benar-benar baru untuk menghindari rusaknya polifenol florotannin karena proses oksidasi selama penyimpanan.
2. Fraksi etil asetat sebaiknya dibagi-bagi terlebih dahulu di beberapa wadah sebelum pengujian aktivitas antioksidan untuk meminimalkan kerusakan florotannin yang disebabkan pengambilan sampel secara berulang.
3. Perlu dilakukan studi lebih lanjut tentang cara pengendalian stabilitas polifenol florotannin selama masa penyimpanan dan penanganan sampel.
DAFTAR PUSTAKA
Ahn, G. N., Kim, K. N., Cha, S. H., Song, C. B., Lee, J., Heo, M. S., Yeo, I. K., Lee, N. H., Jee, Y. H., Kim, J. S., Heu, M. S., and Jeon, Y. J., 2007, Antioxidant activities of phlorotannins purified from Ecklonia cava on free radical scavenging using ESR and H2O2-mediated DNA damage, Eur. Food. Res. Technol., In Press, 29.
Ames, B. N., 1983, Dietary Carcinogens and Anticarcinogens: Oxygen Radicals and Degenerative Disease, Sci., 221, (4617), 1256–1264.
Anonim, 1986, Sediaan Galenik, 1, 8-28, Depkes RI, Jakarta.
Anonim, 1995, Materia Medika Indonesia, Jilid VI, XIV, DepKes RI, Jakarta. Aruoma, O. I., 1996, Characterization of Drugs as Antioxidant Prophylactics, Free
Radical Biology and Medc., 20, (5), 675–705.
Breen, A. P. and Murphy, J. A.,1995, Reactions of Oxyl Radicals with DNA, Free Radic. Biol. Med.,18, 1033-1077.
Bruneton, J., 1999, Pharmacognosy. Phytochemistry Medicinal Plants, Edisi 2, diterjemahkan oleh Caroline K. Hatton, 385 – 386, 11.rue Lavoisier, Paris Burtin, P., 2003 , Nutrional Value of Seaweeds, EJEAFChe , France, 2, (4) ,
498-500.
Burton, G. W., Foster, D. O., Perly, B., Slater, T. F., Smith, I. C. P., and Ingold, K. U., 1985, Biological Antioxidants, Philosophical Society of Royal Transactions of London, Series B, Biol. Sci., 311, 565-576.
Cerruti, P. A.,1994, Oxy-radicals and Cancer, Lancet, 344, 862- 863.
Cheeseman, K. H., Beavis, A., and Esterbauer, H., 1988, Hydroxyl-radical-induced iron-catalysed Degradation of 2-deoxyribose, Biochem. J., 252, 649-653. Christian, G. D., 2004, Analytical Chemistry, Edisi VI, 460, John Wiley & Sons, Inc.,
United State of America.
Chutintrasri, B. and Noomhorm, A., 2003, Thermal Inactivation of Polyphenoloxidase in Pineapple Puree, Food. tech., 1-4.
Conte, D., 1996, Iron- Replaced Zinc Finger: The Effects on DNA Binding and Its Potential Use and Consequences, p.35, Thesis, Department of Biochemistry, University Of Toronto, Canada.
Dean, R. T., Fu, S., Stocker, R., and Davies, M. J., 1997, Biochemistry and Pathology of Radical-Mediated Protein Oxidation, Biochem. J., 324, 1-18.
Decker, E., 1998, Strategies for Manipulating the Prooxidative Antioxidative Balance of Foods to Maximize Oxidative Stability, Trends Food Sci. Technol., 9, 241-248.
Evans, W. C., 2002, Trease and Evans Pharmacology, Fifteenth Edition, 224, W. B. Saunders, China.
Farnsworth, N. R., Fong, H. S., and Tin, W. M., 1970, Phytochemical Screening, 63, Department of Pharmacognosy and Pharmacology, University of Illinois, Chicago.
Fessenden, R. J. dan Fessenden, J. S., 1994, Kimia Organik Jilid II, diterjemahkan oleh Pudjaatmaka, A.H., Edisi ketiga, 436-444, Penerbit Erlangga, Jakarta. Finkel, T. and Holbrook, N. J., 2000. Oxidants, Oxidative Stress and the Biology of
Aging. Nature, 408, (9), 239-247.
Frank, H., Thiel, D., and MacLoad, J., 1989, Mass Spectrometric Detection of Cross-linked Fatty Acids Formed during Radical Induced Lesion of Lipid Membranes, Biochem. J., 260, 873-878.
Glombitza, K. W. and Gerstberger, G., 1985, Phlorotannins with Dibenzodioxin Structural Elements from the Brown Alga Eisenia arborea. Phytochemistry,
24, 543-551 .
Glombitza, K. W. and Keusgen, M., 1995, Fuhalols and Deshydroxyfuhalols from the Brown Alga Sargassum spinuligerum, Phytochemistry, 38, 987-995.
Glombitza, K. W. and Pauli, K., 2003, Fucols and Phlorethols from the Brown Alga
Scytothamnus australis Hook. et Harv. (Chnoosporaceae), Bot. Mar., 46, 315-320.
Glombitza, K. W. and Schmidt, A., 1999a, Nonhalogenated and Halogenated Phlorotannins from the Brown Alga Carpophyllum angustifolium, J. Nat. Prod., 62, 1238-1240.
Glombitza, K. W. and Schmidt, A., 1999b, Trihydroxyphlorethols from the Brown Alga Carpophyllum angustifolium, Phytochemistry, 51, 1095-1100.
Gonzalez, A. T., Mazariegos, R. M., and Cantwell, M., 1992, Inactivation in situ of Polyphenol Oxidase in Ripe Avocado Fruit, Proc. of Second World Avocado Congress, 409-416.
Gulcin, I., Uguz, M. T., Oktay, M., Beydemir, S., and Kufrevioglu, O. I., 2004, Evaluation of the Antioxidant and Antimicrobial Activities of Clary Sage (Salvia sclarea L.), Turk. J. Agric. For., 28, 25-33.
Gupta, M., Mazumder, U. K., and Gomathi, P., 2007, In Vitro Antioxidant and Free Radical Scavenging Activities of Galega purpurea Root, Phcog. Mag., 3, (12), 219-223.
Gutteridge, J. M. C., Rowley, D. A., and Halliwell, B., 1981, Superoxide Dependent Formation of Hydroxyl Radical in the Presence of Iron Salts, Biochem. J.,
199, 263-265.
Gutteridge, J. M. C. and Halliwell, B., 1994, Antioxidants in Nutrition, Health, and Disease, 72, Oxford University Press, Oxford, UK.
Gutierrez, P. L., 2000, The Metabolism of Quinone-Containing Alkylating Agents: Free Radical Production and Measurement, Frontiers in Biosci., 5, 629-638. Halliwell, B. and Gutteridge, J. M. C., 1988, The Deoxyribose Assay: an Assay both
for 'Free' Hydroxyl Radical and for Site-Specific Hydroxyl Radical Production, Biochem., 253, 932-933.
Halliwell, B. and Chirico, S., 1993, Lipid Peroxidation: It’s Mechanism, Measurement, and Significance, Am. J. Clin. Nutr., 57, 715S-25S.
Halliwell, B., 1994, Free Radicals and Antioxidants: a Personal View, Nutr. Rev., 52, 253-265.
Halliwel, B. and Gutteridge, J. M. C., 1999, Free Radicals in Biology and Medicine, Third Edition, 22, 53, Oxford University Press, New York.
Ham, Y. M., Baik, J. S., Hyun, J. W., and Lee, N. H., 2007, Isolation of a New Phlorotannin, Fucodiphlorethol G, from a Brown Alga Ecklonia cava, Bull. Korean. Chem. Soc., 2007, 28, (9), 1597.
Harman, D., 1993, Free Radical Involvement in Aging, Pathophysiology and Therapeutic implications, Drugs and Aging, 3, (1), 60–80.
Hashimoto, T., Mashahiko, Y., and Hajime, N., 2003, Selective Brain Hypothermia Protects against Hypoxic-Ischemic Injury in Newborn Rats by Reducing Hydroxyl Radical Production, Kobe J. Med. Sci., 49, (4), 83-91.
Heo, S. J., Kim, J. P., Jung, W. K., Lee, N. H., Kang, H. S., Jun, E. M., Park, S. H., Kang, S. M., Lee, Y. J., Park, P. J., and Jeon, Y. J., 2006, Identification of Chemical Structure and Free Radical Scavenging Activity of Diphlorethohydroxycarmalol Isolated from a Brown Alga, Ishige okamurae,
J. Microbiol. Biotechnol., 1-5.
Huang, D., Ou, B., and Prior, R. L., 2005, The Chemistry Behind Antioxidant Capacity Assays, J. Agric. Food Chem., 53, 1841-1856.
Janeiro, P. and Brett, A. M. O., 2004, Cathecin Electrochemical Oxidation Mechanism, Anal. Chim. Acta,518, 109–115.
Kadi, A., 2007, Beberapa Catatan Kehadiran Marga Sargassum di Perairan Indonesia, http://www.oseanografi.lipi.go.id/volxxxno.42.pdf, diakses tanggal 20 Februari 2007.
Kang, K., Park, Y., Hwang, H. J., Kim, S. H., Lee, J. G., and Shin, H. C., 2003, Antioxidative Properties of Brown Algae Polyphenolics and Their Perspectives as Chemopreventive Agents Against Vascular Risk Factors,
Arch. Pharm. Res., 26, 286-293.
Kang, K. A., Lee, K. H., Chae, S., Zhang, R., Jung, M. S., Ham, Y. M., Baik, J. S., Lee, N. H., and Hyun, J. W., 2006, Cytoprotective effect of phloroglucinol on oxidative stress induced cell damage via catalase activation, J. Cell. Biochem.,
97, 609-620.
Kanner, J., Hazan, B., and Doll, L., 1988, Catalytic “Free” Iron Ions in Muscle Foods, J. Agric. Food Chem., 36, 412-415.
Kehrer, J. P., 2000, The Haber–Weiss Reaction and Mechanisms of Toxicity,
Toxicol., 149, 43–50.
Khopkar, S. M., 1990, Basic Concepts of Analytical Chemistry, diterjemahkan oleh Saptorahardjo, A., 85-86, Universitas Indonesia Press, Jakarta.
Kim, J. A., Lee, J. M., Shin, D. B., and Lee, N. H., 2004, The Antioxidant Activity and Tyrosinase Inhibitory Activity of Phlorotannins in Ecklonia cava, Food Sci. Biotechnol., 13, 476-480.
Koivikko, R., Loponen, J., Honkanen, T., and Jormalainen, V., 2005, Contents of Soluble, Cell-wall-Bound and Exuded Phlorotannins in the Brown Alga Fucus vesiculosus, With Implications On Their Ecological Functions, J. Chem. Ecol.,31, ( 1), 195-208.
Koivikko, R., 2008, Brown Algal Phlorotannin – Improving and Applying Chemical Method, 11-12, Turun Yliopisto, Turku.
Krishnaiah, D., Sarbatly, R., and Bono, A., 2007, Phytochemical Antioxidants for Health and Medicine – A Move towards Nature, Biotech. and Mol. Bio. Rev.,
1, (4), 97-104.
Krentz, A. N., 2004, Investigation on the Chemical Association of Important Elements in Seaweed Using SEC-ICP-MS, pp.15-50, Thesis, University of Cincinnati, Ohio.
Kuntari, C., 2007, Uji Aktivitas Penangkapan Radikal Hidroksil oleh Ekstrak Etanol Teh Hijau dan Teh Hitam dengan Metode Deoksiribosa, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
Li, S. M. and Glombitza, K. W., 1991, Phlorotannins from the Brown Alga
Landsburgia quercifolia (Hook. fil. et Harv.) Harv, Bot. Mar., 34, 455-457. List, P. H. and Schmidt, P. C., 2000, Phytopharmaceutical Technology, 107,109,
CRC Press, USA.
Liu, F. and Ng, T. B., 2000, Antioxidative and Free Radical Scavenging Activities of Selected Medicinal Herbs, Life Sci., 66, (8), 725–735.
Masella, R., Di Benedetto, R., Varì, R., Filesi, C., and Giovannini, C., 2005, Novel Mechanisms of Natural Antioxidant Compounds in Biological Systems: Involvement of Glutathione and Glutathione-Related Enzymes,
J.Nutr.Biochem., 16, 577-586.
McInnes, A. G., Ragan, M. A., Smith D. G., and Walter J. A., 1984, High-Molecular Weight Phloroglucinol based Tannins from Brown Algae: Structural Variants,
Miyawaki, M., 2006, Control of Polyphenol Oxidase and Pectin Methylesterase Activities by Ultra High Pressure, Dissertation, Washington State University, USA.
Murray, R. K., Granner, D. K., Mayes, P. A., dan Rodwell, V. W., 1997, Biokimia Harper, Edisi 24, diterjemahkan oleh dr. Andri Hartono, D. A. N., 146, Penerbit buku Kedokteran, EGC, Jakarta.
Nagayama, K., Iwamura, Y., Shibata, T., Hirayama, I., and Nakamura, T., 2002, Bacterial Activity of Phlorotannin from the Brown Algae Ecklonia Kurome, J. Antimicrob., Chemother, 50, 889-893.
Nakamura, T., Nagayama, K., Uchida, K., and Tanaka, R., 1996, Antioxidant Activity of Phlorotannins Isolated from the Brown Alga Eisenia bicyclis,
Fisheries Sci., 62, 923.
Park, P. J., Heo, S. J., Park, E. J., Kim, S. K., Byun, H. G., Jeon, B. T., and Jeon, Y. J., 2005, Reactive Oxygen Scavenging Effect of Enzymatic Extracts from
Sargassum thunbergii, J. Agric. Food Chem., 53, 6666-6672.
Patra, J. K., Rath, S. K., Jena, K., Rathod, V. K., and Thatoi, H., 2008, Evaluation of Antioxidant and Antimicrobial Activity of Seaweed (Sargassum sp) Extract: A Study on Inhibition of Glutathione-S-Transferase Activity, Turk. J. Biol., 32, 119-125.
Pescok, R. L.,Shields, L. D., Cairns, T., and Mc William, I. G., 1976, Modern Methods of Chemical Analysis, 147, John Wiley & Sons, Inc., Canada.
Pokorny, J., 1991, Natural antioxidants for food use, Trends Food Sci. Technol., 2, 223–227.
Purwantoko, A., 2006, Validasi Metode Deoksiribosa sebagai Uji Penangkapan Radikal Hidroksil secara In Vitro, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
Ragan, M. A. and Craigie, J. S., 1973, Phenolic Compounds in Brown and Red algae. In: Handbook of Phycological Methods – Physiological and Biochemical methods, Edited by J.A. Hellebust & J.S. Craigie., 157-179.
Ragan, M. A. and Glombitza, K. W., 1986, Phlorotannins, Brown Algal Polyphenols. In: Hellebustand, J.A., Craigie, J.S. (Eds.), Handbook of Phycological Methods, 2, 129-241, Cambridge University Press, Cambridge.
Rice-Evans, C. A., Miller N. J., and Panganga, G., 1997, Antioxidant Properties of Phenolic Compounds, Trends in Plant Sci., 2, 152-159.
Sailler, B. and Glombitza, K. W., 1999, Phlorethols and Fucophlorethols from the Brown Alga Cystophora retroflexa, Phytochemistry, 50, 869-881.
Sakihama ,Y., Michael F. C., Stephen C. G., and Hideo, Y., 2002, Plant Phenolic Antioxidant and Prooxidant Activities: Phenolics-Induced Oxidative Damage Mediated by Metals in Plants, Toxicol., 177, 67–80.
Schinella, G. R., Tournier, H. A., Prieto, J. M., de Buschiazzo, P. M., and Rios, J. L., 2002, Antioxidant Activity of Anti-Inflammatory Plant Extracts, Life Sci., 70,
(9), 1023–1033.
Schoenwaelder, M. E. A. and Clayton, M. N., 1998, Secretion of Phenolic Substances into the Zygote Wall and Cell Plate in Embryos of Hormosira and Acrocarpia
(fucales, phaeophyceae), J. Phycol., 34, 969–980.
Schoenwaelder, M. E. A and Clayton, M. N., 2000, Physode Formation in Embryos of Phyllospora comosa and Hormosira banksii (Phacophyceae), J. Phycol.,
39, 1-9.
Setyawati, L., 2006, Uji Aktivitas Penangkapan Radikal Hidroksil oleh Fraksi Etil Asetat dan Fraksi Air Ekstrak Teh Hitam dengan Metode Deoksiribosa, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
Shcherbakova, I., Mitra, S., Beer R. H., and Brenowitz, M., 2006, Fast Fenton Footprinting: a Laboratory-Based Method for the Time-Resolved Analysis of DNA, RNA and Proteins. Nucleic Acids Res., 34, (6), USA.
Shibata, T., Nagayama, K., Tanaka, R., Yamaguchi, K., and Nakamura, T., 2003, Inhibitory Effects of Brown Algal Phlorotannins on Secretory Phospholipase A2s, Lipoxygenases and Cycloxygenases, J. Appl. Phycol.,15, 61-66.
Shin, H. C., Hwang, H. J., Kang, K. J., and Lee, B. H., 2006, An oxidative and antiinflammatory agent for potential treatment of osteoarthritis from Ecklonia cava, Arch. Pharm. Res., 29, (2), 165-171.
Singleton, V.L. and Rossi, J.A., 1965, Colorimetry of Total Phenolics with Phosphomolybdic-Phosphotungstic Acid Reagent, Am. J. Enol. Vitic, 16, 147. Skoog, D. A., 1985, Principles of Instrumental Analysis, Third Edition, 182-183,
Skoog, D. A., Donald, M. W., and F. J. Holler., 1994, Analytical Chemistry: An Introduction, Sixth Edition, 416, Sounder College Publishing, USA.
Stephanie, M., 2007, Penetapan Kadar Florotanin dalam Fraksi Etil Asetat Alga Coklat Sargassum hystrix v. buxifolium (Chauvin) J. Agardh Secara Spektrofotometri Metode Folin Ciocalteau, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
Taylor, W. R., 1972, Marine Algae of Eastern Tropical and Subtropical Coasts of The Americas, 279, University of Michigan Press, USA.
Tejada, M. M. R., Duran, J. D. G., Ortega, A. O., Jimenez, M. E., Carpio, R. P., and Chibowski, E., 2002, Investigation of Alumina/(+)-Catechin System Properties Part I: A Study of The System by FTIR-UV–Vis Spectroscopy,
Biointerface, 24, 297-308.
Velavan, S., Nagulendran, K., Mahesh, R., and Begum, V. H., 2006, In Vitro Antioxidant Activity of Asparagus racemosus Root, Phcog. Mag., 26-31. Von Sonntage, C., 1987, The Chemical Basis of Radiation Biology, 24, 56, Taylor &
Francis, New York, USA.
Waterman, P. G. and Mole, S., 1994, Analysis of Phenolic Plant Metabolites, 42-45, Blackwell Scientific, Oxford.
Whitaker, J. R., 1996, Enzymes. In: Food Chemistry, 431-530, Fennema OR, Marcel Dekker, Inc., New York.
Yen, G. C., Chen H. Y. and Peng, H. H., 1997, Antioxidant and Pro-Oxidant Effects of Various Tea Extracts, J. Agric. Food Chem., 45, 30-34.
Zusterzeel, P. L. M., 2001, Biotransformation Enzymes and Oxidative Stress in Preeclampsia, p. 35, Thesis, University Nijmegen, Nederland.
LAMPIRAN I
DATA PENETAPAN KADAR AIR DENGAN MOISTURE BALANCE 1. Replikasi I
Berat serbuk mula-mula = 5,001 g (100%)
Persen berat serbuk setelah pemanasan = 90,67 %
Kadar air = 100% - 90,67 %
= 9,33 %
2. Replikasi II
Berat serbuk mula-mula = 5,001 g (100%)
Persen berat serbuk setelah pemanasan = 90,69 %
Kadar Air = 100% - 90,69 %
= 9,31 %
3. Replikasi III
Berat serbuk mula-mula = 5,001 g (100%)
Kadar Air = 100% - 90,26 %
= 9,74 %
Kadar air rata-rata = % = 9,46 %
SD = 0,2427
LAMPIRAN II
DATA PERHITUNGAN KONSENTRASI REAGEN DAN FRAKSI ETIL ASETAT
1. Pembuatan reagen Fenton • Larutan FeCl3 1 mM
BM: 270,33
Bobot yang ditimbang: 0,0146 g Perhitungan kadar:
M= x
= x = 5,4 x 10-3 M
Larutan FeCl3 dengan konsentrasi 1 mM dibuat dengan mengambil larutan tersebut sebanyak 2 ml dan diencerkan hingga volume 10 ml, sehingga konsentrasi larutan FeCl3 adalah :
V 1 x C 1 = V 2 x C 2 2 ml x 5,4 mM = 10 ml x C2 C2 = 1,08 mM
• Larutan EDTA 1 mM BM Na EDTA : 372,24
Bobot yang ditimbang : 0,0182 g Perhitungan kadar:
M= x
= x
= 4,8893 x 10-3 M
Larutan EDTA dengan konsentrasi 1 mM dibuat dengan mengambil larutan tersebut sebanyak 2 ml dan diencerkan hingga volume 10 ml, sehingga konsentrasi larutan EDTA adalah :
V 1 x C 1 = V 2 x C 2 2 ml x 4,8893 mM = 10 ml x C2 C2 = 0,9779 mM • Larutan H2O2 20 mM BM : 34,02
Larutan H2O2yang tersedia adalah larutan H2O230% 30% = 30 g
100 ml
Konsentrasi dalam Molar adalah: M = x
= x
= 8,8183 M
Volume yang diambil dari larutan H2O230% untuk mendapatkan larutan H2O2 dengan konsentrasi 80 mM sebanyak 10 ml adalah :
V1x C1= V2x C2
V1x 8,8183 x 103 mM = 10 ml x 80 mM V1= 0,091 ml
Larutan H2O230% yang diambil : 0,091 ml Perhitungan Kadar : V1x C1 = V2x C2 0,091 ml x 8818,3 mM = 10 ml x C2 C2 = 80,2465 mM Larutan H 2O
2 dengan konsentrasi 20 mM dibuat dengan mengambil larutan tersebut sebanyak 2,5 ml dan diencerkan hingga volume 10 ml, sehingga konsentrasi larutan H2O2 adalah :
V1x C1= V2x C2 2,5 ml x 80,2465 mM = 10 ml x C2 C2= 20,062 mM • Larutan vitamin C 1 mM
BM : 176,13
Bobot vitamin C yang ditimbang : 0,0179 g Perhitungan Kadar :
M= x
= x
= 0,0102 M
Larutan vitamin C dengan konsentrasi 1 mM dibuat dengan mengambil larutan tersebut sebanyak 1 ml dan diencerkan hingga volume 10 ml, sehingga konsentrasi larutan vitamin C adalah :
V1x C1= V2x C2 1 ml x 10,2 mM = 10 ml x C2 C2 = 1,02 mM 2. Deoksiribosa 2,5 mM
BM : 134,13
Bobot deoksiribosa yang ditimbang : 0,0198 g Perhitungan Kadar :
M = x
= x
Larutan deoksiribosa dengan konsentrasi 2,5 mM dibuat dengan mengambil larutan tersebut sebanyak 4 ml dan diencerkan hingga volume 25 ml, sehingga konsentrasi larutan deoksiribosa adalah :
V1x C1= V2x C2 4 ml x 14,8 mM = 25 ml x C2 C2 = 2,37 mM 3. Buffer Fosfat 7,4 Na2HPO4 20 x 10-3 M BM : 141,96
Bobot NaH2PO4 yang ditimbang : 1,4001 g Perhitungan Kadar : M = x = x = 19,73 x 10-3 M KH2PO4 20 x 10-3M BM : 136,09
Bobot KH2PO4 yang ditimbang : 0,6799 g Perhitungan Kadar :
=
= 0,020M
4. Asam Trikloroasetat 5% (TCA) Bobot TCA yang ditimbang : 1,25 g Perhitungan Kadar:
x 100% = x 100%
= 5 %
5. Asam Tiobarbiturat 1% (TBA)
Bobot TBA yang ditimbang : 0,2495 g Perhitungan Kadar:
x 100% = x 100%
= 0,998 % 6. Fraksi etil asetat
Bobot fraksi etil asetat yang ditimbang : 0,025 g = 25 mg Fraksi dilarutkan ke dalam 25 ml aquadest, maka:
C =
Larutan fraksi etil asetat tersebut diambil 0,1 ml; 0,2ml; 0,3 ml; 0,4 ml; 0,5 ml; 0,6 ml; 0,7 ml; 0,8 ml; 0,9 ml; dan 1 ml. Contoh perhitungan konsentrasi akhir fraksi dalam 6 ml adalah : V 1 x C 1 = V 2 x C 2 0,1 ml x 1 mg/ml = 6 ml x C2 C2 = 0,0167 mg/ml
Dengan cara yang sama, maka konsentrasi fraksi etil asetat untuk menangkap radikal hidroksil adalah :
Volume 0,1 ml diperoleh konsentrasi fraksi etil asetat sebesar 0,0167 mg/ml Volume 0,2 ml diperoleh konsentrasi fraksi etil asetat sebesar 0,0333 mg/ml Volume 0,3 ml diperoleh konsentrasi fraksi etil asetat sebesar 0,05 mg/ml Volume 0,4 ml diperoleh konsentrasi fraksi etil asetat sebesar 0,067 mg/ml Volume 0,5 ml diperoleh konsentrasi fraksi etil asetat sebesar 0,083 mg/ml Volume 0,6 ml diperoleh konsentrasi fraksi etil asetat sebesar 0,1 mg/ml Volume 0,7 ml diperoleh konsentrasi fraksi etil asetat sebesar 0,1167 mg/ml Volume 0,8 ml diperoleh konsentrasi fraksi etil asetat sebesar 0,133 mg/ml Volume 0,9 ml diperoleh konsentrasi fraksi etil asetat sebesar 0,15 mg/ml Volume 1,0 ml diperoleh konsentrasi fraksi etil asetat sebesar 0,167 mg/ml
LAMPIRAN III
PERHITUNGAN KONSENTRASI DEOKSIRIBOSA PADA PENETAPAN PANJANG GELOMBANG MAKSIMUM
Penetapan panjang gelombang maksimum dilakukan pada 3 konsentrasi larutan deoksiribosa, dengan perhitungan sebagai berikut.
Konsentrasi awal deoksiribosa 2,37 mM
Larutan deoksiribosa tersebut diambil 0,2ml; 0,3 ml dan 0,4 ml. Contoh perhitungan konsentrasi akhir deoksiribosa dalam 6 ml adalah :
V 1 x C 1 = V 2 x C 2 0,2 ml x 2,37 mM = 6 ml x C2 C2 = 0,079 mM
Dengan cara yang sama, maka konsentrasi fraksi etil asetat untuk menangkap radikal hidroksil adalah :
Volume 0,2 ml diperoleh konsentrasi deoksiribosa sebesar 0,079 mM Volume 0,3 ml diperoleh konsentrasi deoksiribosa sebesar 0,1185 mM Volume 0,4 ml diperoleh konsentrasi deoksiribosa sebesar 0,158 mM
LAMPIRAN IV
UJI PENANGKAPAN RADIKAL HIDROKSIL Replikasi I
Fraksi etil asetat yang ditimbang = 0,0251 g
Konsentrasi fraksi etil asetat = 0,001 g/ ml
= 1 mg/ml
Tabel 1. Absorbansi kromogen MDA-TBA pada penambahan fraksi etil asetat replikasi 1 Konsentrasi fraksi
etil asetat (mg/ml)
Volume yang diambil (ml)
Konsentrasi uji dalam 6 ml (mg/ml) Absorbansi 1 0 0 0,540 1 0,1 0,0167 0,564 1 0,2 0,0333 0,613 1 0,3 0,05 0,685 1 0,4 0,0677 0,703 1 0,5 0,0833 0,677 1 0,6 0,1 0,680 1 0,7 0,1167 0,717 1 0,8 0,1333 0,649 1 0,9 0,15 0,671 1 1 0,1677 0,680
Kontrol positif tanin
Berat tanin yang ditimbang = 0,025 g
Konsentrasi tanin = 0,001 g/ ml
Tabel 2. Absorbansi kromogen MDA-TBA pada penambahan tanin replikasi 1 Konsentrasi tanin (mg/ml) Volume yang diambil (ml) Konsentrasi uji dalam 6 ml (mg/ml) Absorbansi % Scavenging 1 0 0 0,540 -1 0,2 0,0333 0,397 26,481 1 0,4 0,0677 0,263 51,296 1 0,6 0,1 0,198 63,333 1 0,8 0,1333 0,149 72,407 A = 15,619 B = 451,838 r = 0,974 Y = 451,838 x + 15,619
ES50 (% scavenging 50), diperoleh dengan memasukkan nilai 50% sebagai sumbu y ke dalam persamaan regresi linier. Hasil yang didapatkan ialah ES50 = 0,076 mg/ml
Replikasi II
Fraksi etil asetat yang ditimbang= 0,025 g
Konsentrasi fraksi etil asetat= 0,001 g/ ml
Tabel 3. Absorbansi kromogen MDA-TBA pada penambahan fraksi etil asetat replikasi 2 Konsentrasi fraksi
etil asetat (mg/ml)
Volume yang diambil (ml)
Konsentrasi uji dalam 6 ml (mg/ml) Absorbansi 1 0 0 0,519 1 0,1 0,0167 0,542 1 0,2 0,0333 0,601 1 0,3 0,05 0,675 1 0,4 0,0677 0,690 1 0,5 0,0833 0,657 1 0,6 0,1 0,698 1 0,7 0,1167 0,653 1 0,8 0,1333 0,640 1 0,9 0,15 0,667 1 1 0,1677 0,694
Kontrol positif tanin
Berat tanin yang ditimbang = 0,0251 g
Konsentrasi tanin = 0,001 g/ ml
= 1 mg/ml
Tabel 4. Absorbansi kromogen MDA-TBA pada penambahan tanin replikasi 2 Konsentrasi tanin (mg/ml) Volume yang diambil (ml) Konsentrasi uji dalam 6 ml (mg/ml) Absorbansi % Scavenging 1 0 0 0,519 -1 0,2 0,0333 0,378 27,167 1 0,4 0,0677 0,251 51,638 1 0,6 0,1 0,169 67,437 1 0,8 0,1333 0,128 75,337 A = 15,0112 B = 483,201 r = 0,976 Y = 483,201 x + 15,0112
ES50 (% scavenging 50), diperoleh dengan memasukkan nilai 50% sebagai sumbu y ke dalam persamaan regresi linier. Hasil yang didapatkan ialah ES50 = 0,072 mg/ml
Replikasi III
Fraksi etil asetat yang ditimbang= 0,025 g
Konsentrasi fraksi etil asetat = 0,001 g/ ml
= 1 mg/ml
Tabel 5. Absorbansi kromogen MDA-TBA pada penambahan fraksi etil asetat replikasi 3 Konsentrasi fraksi etil asetat (mg/ml) Volume yang diambil (ml) Konsentrasi uji dalam 6 ml (mg/ml) Absorbansi 1 0 0 0,519 1 0,1 0,0167 0,530 1 0,2 0,0333 0,578 1 0,3 0,05 0,655 1 0,4 0,0677 0,671 1 0,5 0,0833 0,598 1 0,6 0,1 0,676 1 0,7 0,1167 0,661 1 0,8 0,1333 0,597 1 0,9 0,15 0,601 1 1 0,1677 0,623
Kontrol positif tanin
Berat tanin yang ditimbang = 0,0251 g
Konsentrasi tanin = 0,001 g/ ml
Tabel 6. Absorbansi kromogen MDA-TBA pada penambahan tanin replikasi 3 Konsentrasi tanin (mg/ml) Volume yang diambil (ml) Konsentrasi uji dalam 6 ml (mg/ml) Absorbansi % Scavenging 1 0 0 0,519 -1 0,2 0,0333 0,373 28,131 1 0,4 0,0677 0,246 51,638 1 0,6 0,1 0,164 68,401 1 0,8 0,1333 0,130 74,952 A = 16,181 B = 473,825 r = 0,973 Y = 473,825x + 16,181
ES50 (% scavenging 50), diperoleh dengan memasukkan nilai 50% sebagai sumbu y ke dalam persamaan regresi linier. Hasil yang didapatkan ialah ES50 = 0,071 mg/ml
Replikasi IV
Fraksi etil asetat yang ditimbang= 0,025 g
Konsentrasi fraksi etil asetat = 0,001 g/ ml
Tabel 7. Absorbansi kromogen MDA-TBA pada penambahan fraksi etil asetat replikasi 4 Konsentrasi fraksi
etil asetat (mg/ml)
Volume yang diambil (ml)
Konsentrasi uji dalam 6 ml (mg/ml) Absorbansi 1 0 0 0,531 1 0,1 0,0167 0,584 1 0,2 0,0333 0,569 1 0,3 0,05 0,689 1 0,4 0,0677 0,675 1 0,5 0,0833 0,685 1 0,6 0,1 0,647 1 0,7 0,1167 0,624 1 0,8 0,1333 0,570 1 0,9 0,15 0,590 1 1 0,1677 0,617
Kontrol positif tanin
Berat tanin yang ditimbang = 0,0251 g
Konsentrasi tanin = 0,001 g/ ml
= 1 mg/ml
Tabel 8. Absorbansi kromogen MDA-TBA pada penambahan tanin replikasi 4 Konsentrasi tanin (mg/ml) Volume yang diambil (ml) Konsentrasi uji dalam 6 ml (mg/ml) Absorbansi % Scavenging 1 0 0 0,531 -1 0,2 0,0333 0,381 28,249 1 0,4 0,0677 0,253 52,354 1 0,6 0,1 0,179 66,290 1 0,8 0,1333 0,136 74,388 A = 10,658 B = 571,741 r = 0,991 Y = 571,741 + 10,658
ES50 (% scavenging 50), diperoleh dengan memasukkan nilai 50% sebagai sumbu y ke dalam persamaan regresi linier. Hasil yang didapatkan ialah ES50 = 0,069 mg/ml
Larutan fraksi sampel diencerkan 10 kali dan diukur absorbansinya
Tabel 9. Absorbansi kromogen MDA-TBA pada penambahan fraksi etil asetat replikasi 4 (pengenceran 10x) Konsentrasi fraksi etil asetat (mg/ml) Volume yang diambil (ml) Konsentrasi uji dalam 6 ml (mg/ml) Absorbansi 0,1 0 0 0,531 0,1 0,1 0,0017 0,596 0,1 0,2 0,0033 0,605 0,1 0,3 0,005 0,578 0,1 0,4 0,0067 0,581 0,1 0,5 0,0083 0,591 0,1 0,6 0,01 0,602 0,1 0,7 0,0117 0,553 0,1 0,8 0,0133 0,547 0,1 0,9 0,015 0,548 0,1 1 0,01677 0,578
Larutan fraksi sampel diencerkan 100 kali dan diukur absorbansinya
Tabel 10. Absorbansi kromogen MDA-TBA pada penambahan fraksi etil asetat replikasi 4 (pengenceran 100x) Konsentrasi fraksi etil asetat (mg/ml) Volume yang diambil (ml) Konsentrasi uji dalam 6 ml (mg/ml) Absorbansi 1 0 0 0,531 1 0,1 1,667 x 10-4 0,585 1 0,2 3,333x 10-4 0,583 1 0,3 5 x 10-4 0,579 1 0,4 6,667 x 10-4 0,606 1 0,5 8,333 x 10-4 0,607 1 0,6 1 x 10-3 0,586 1 0,7 1,1667 x 10-3 0,557 1 0,8 1,3333 x 10-3 0,551 1 0,9 1,5 x 10-3 0,579 1 1 1,6667 x 10-3 0,576
Replikasi V
Fraksi etil asetat yang ditimbang= 0,025 g
Konsentrasi fraksi etil asetat= 0,001 g/ ml
= 1 mg/ml
Tabel 11. Absorbansi kromogen MDA-TBA pada penambahan fraksi etil asetat replikasi 5 Konsentrasi fraksi asetat (mg/ml) Volume yang diambil (ml) Konsentrasi uji dalam 6 ml (mg/ml) Absorbansi 1 0 0 0,568 1 0,1 0,0167 0,587 1 0,2 0,0333 0,607 1 0,3 0,05 0,618 1 0,4 0,0677 0,651 1 0,5 0,0833 0,610 1 0,6 0,1 0,662 1 0,7 0,1167 0,635 1 0,8 0,1333 0,631 1 0,9 0,15 0,641 1 1 0,1677 0,631
Kontrol positif tanin
Berat tanin yang ditimbang = 0,0251 g
Konsentrasi tanin = 0,001 g/ ml
Tabel 12. Absorbansi kromogen MDA-TBA pada penambahan tanin replikasi 5 Konsentrasi tanin (mg/ml) Volume yang diambil (ml) Konsentrasi uji dalam 6 ml (mg/ml) Absorbansi % Scavenging 1 0 0 0,568 -1 0,2 0,0333 0,409 27,993 1 0,4 0,0677 0,277 51,232 1 0,6 0,1 0,199 64,965 1 0,8 0,1333 0,158 72,183 Konsentrasi vs Absorbansi A = 17,229 B = 441,093 r = 0,973 Y = 441,093x + 17,229
ES50 (% scavenging 50), diperoleh dengan memasukkan nilai 50% sebagai sumbu y ke dalam persamaan regresi linier. Hasil yang didapatkan ialah ES50 = 0,074 mg/ml.
Tabel 13. Persen scavenging senyawa standar tanin % scavenging
Konsentrasi senyawa
tanin (mg/ml) Rep I Rep II Rep III RepIV Rep V
0,0333 26,481 27,167 28,131 28,249 27,993 0,0677 51,296 51,638 51,638 52,354 51,232 0,1 63,333 67,437 68,401 66,290 64,965 0,1333 72,407 75,337 74,952 74,388 72,183 Persamaan regresi Y = 451,838x + 15,619 Y = 483,201x + 15,0112 Y = 473,825x + 16,181 Y = 571,741x + 10,658 Y = 441,093x + 17,229 Nilai r 0,974 0,976 0,973 0,991 0,973 ES50 (mg/ml) 0,076 0,072 0,071 0,069 0,074 Rata-rata ES50 (mg/ml) 0,0724 SD 2,7019 x 10-3 CV (%) 3,732
Keterangan : Rep = Replikasi
Nilai r yang didapat > nilai r tabel ; nilai r selang kepercayaan 95% adalah 0,950 (Muth, 1999).
Tabel 14. Absorbansi kromogen MDA-TBA pada Penambahan Fraksi Etil Asetat Replikasi Konsentrasi uji dalam 6 ml (mg/ml) I II III IV V Rata-rata (x) SD CV 0 0,540 0,519 0,519 0,531 0,568 0,5354 0,0203 3,79 0,0167 0,564 0,542 0,530 0,584 0,587 0,5614 0,0252 4,49 0,0333 0,613 0,601 0,578 0,569 0,607 0,5936 0,0191 3,22 0,05 0,685 0,675 0,655 0,689 0,618 0,6644 0,0291 4,38 0,0677 0,703 0,690 0,671 0,675 0,651 0,678 0,0197 2,91 0,0833 0,677 0,657 0,598 0,685 0,610 0,6454 0,0394 6,10 0,1 0,680 0,698 0,676 0,647 0,662 0,6726 0,0192 2,85 0,1167 0,717 0,653 0,661 0,624 0,635 0,658 0,0361 5,49 0,1333 0,649 0,640 0,597 0,570 0,631 0,6174 0,033 5,35 0,15 0,671 0,667 0,601 0,590 0,641 0,634 0,0372 5,87 0,1677 0,680 0,694 0,623 0,617 0,631 0,649 0,0354 5,45
Analisis Korelasi ( Konsentrasi vs Absorbansi rata-rata)
A = 0,6104
B = 0,2932
r = 0,4003
Y = 0,2932x + 0,6104
Ho = Tidak ada korelasi antara 2 variabel
Ho ditolak apabila jika nilai r hitung melebihi nilai rn-2 (α). Nilai r tabel untuk taraf kepercayaan 95% dan derajat bebas 8 adalah 0,632 (Muth, 1999). Dari hasil r hitung, dapat disimpulkan bahwa variabel konsentrasi dengan variabel absorbansi tidak memiliki hubungan korelasi.
Ho juga ditolak jika apabila t hitung > t n-2(1- α/2). Nilai t hitung, diperoleh dengan:
t =
= 1,2355
Nilai t8 (0,975) = 2,306
Nilai t hitung < t tabel, maka Ho diterima. Tidak ada korelasi antara konsentrasi fraksi etil asetat dengan absorbansi kromogen MDA-TBA.
Uji t (Membandingkan signifikansi absorbansi antara kontrol negatif dengan larutan uji)
Hipotesis : Ho : µk = µu
Hi : µk ≠ µu
Dengan α = 0,05, Ho ditolak jika t > t8 (0,025)
Ho ditolak jika t > 2,306
Perhitungan : S2p =
Tabel 15. Uji statistik perbandingan aktivitas fraksi etil asetat dan kontrol negatif Nilai Konsentrasi fraksi etil asetat (mg/ml) S2p T Signifikan/Tidak signifikan 0,0167 0,5236 x 10-3 1,797 Tidak signifikan 0,0333 0,3885 x 10-3 4,669 Signifikan 0,05 0,6295 x 10-3 8,129 Signifikan 0,0677 0,4001 x 10-3 11,272 Signifikan 0,0833 0,9822 x 10-3 5,550 Signifikan 0,1 0,3904 x 10-3 10,979 Signifikan 0,1167 0,8577 x 10-3 6,619 Signifikan 0,1333 0,7506 x 10-3 4,740 Signifikan 0,15 0,8980 x 10-3 5,2025 Signifikan 0,1677 0,8326 x 10-3 6,225 Signifikan
LAMPIRAN V
FRAKSINASI EKSTRAK METANOL ALGA COKLAT Fraksi methanol-air (atas) dan kloroform (bawah) Fraksi etil asetat
LAMPIRAN VI FRAKSI ETIL ASETAT
LAMPIRAN VII
HASIL UJI KUALITATIF FLOROTANNIN
1. Uji Pendahuluan Fraksi Etil Asetat 3. Uji polifenol Sebelum Sesudah
pemanasan pemanasan + KOH Tanin Sampel
2. Uji tannin 4. Uji dengan reagen Folin Ciocalteau Sampel Tanin Sampel Tanin
BIOGRAFI PENULIS
Penulis skripsi yang berjudul “Uji Aktivitas Penangkapan Radikal Hidroksil oleh Fraksi Etil Asetat Ekstrak Metanolik Alga Coklat Sargassum hystrix v. Buxifolium (Chauvin) J. Agardh dengan Metode Deoksiribosa” memiliki nama lengkap Lina. Penulis lahir di Pontianak, Kalimantan Barat pada tanggal 10 Agustus 1989 dari pasangan Bapak Chua Kak Seng dan Ibu Lim Khim Leng. Pendidikan formal yang ditempuh oleh penulis meliputi: SD Negri 19 Pontianak pada tahun 1993-1999, SLTP Negri 1 Pontianak pada tahun 1999-2002, SMA Santo Paulus Pontianak pada tahun 2002-2005 dan melanjutkan kuliah di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2005 hingga tahun 2008. Selama kuliah, penulis aktif dalam