4 KESIMPULAN DAN SARAN
4.2 Saran
Perlu dilakukan pengkajian teknologi kultivasi menggunakan substrat padat yang dapat mempertahankan atau meningkatkan potensi bioinsektisida dengan mengatur kondisi proses yang meliputi suhu, RH, aerasi, dan agitasi pada produksi skala besar.
DAFTAR PUSTAKA
Abd-aziz S. 2002. Sago Starch and Its Utilisation. J Biosci Bioeng. 94(6): 526– 529.
Asben A, Irawadi TT, Syamsu K, Haska N. 2012. Kajian Potensi dan Pemanfaatan Limbah Ampas Sagu setelah Pretreatment. J Lumbung.
Politani Payakumbuh. 11(1): 1-11.
Asano S, Hori H. 1995. Enhancing Effects of Supernatants from Various Cultures of Bacillus thuringiensis on Larvacidal Activity of Delta-endotoksin Againts the Common Cutworm, Spodoptera litura. J Entomol Zool. 30: 369 – 374.
Banwart GJ. 1989. Basic Food Microbiology, 2nd edition. New York (ID): Chapman and Hall.
Bernhard K,R Utz. 1993. Production of Bacillus thuringiensis Insecticides for Experimental and Commercial Uses. Di dalam: Bacillus thuringiensis An Environmental Biopesticide : Theory and Practice. Chichester (US): J Wiley.
Blondine CP, Wianto R, Sukarno. 1999. Pengendalian Jentik Nyamuk Vektor Demam Berdarah, Malaria dan Filariasis Menggunakan Strain Lokal
Bacillus thuringiensis H-14. Bul Penelitian Kesehatan. 27: 178 – 184. Bravo A. 1997. Phylogenetic Relationship of Bacillus thuringiensis δ-endotoksin
Family Protein and Their Functional Domains. J Bacteriol. 179 (9) : 2793 – 2801.
Bulla LA, Kramer KJ, Davidson LI. 1977. Characterization of The Entomocidal Parasporal Crystal of Bacillus thuringiensis. J Bacteriol. 130 (1) : 375 – 383.
Burgerjon A, Martouret D. 1971. Determination and Significance of The Host Spectrum of Bacillus thuringiensis. Di dalam: H. D. Burges and N. W. Hussey (Penyunting). Microbial Control of Insect and Mites. London (GB): Academic Pr.
Capalbo DMS, Valicente Fh, Moraes IO, Pelizer LH. 2001. Solid State Fermentation of Bacillus thuringiensis tolworthi to control Fal Armyworm in Maize. J Biotechnol. 4: 112-125.
Chicott CN, Pillai JS. 1995. The use Coconut Wastes for the Production of
Bacillus thuringiensis var israelensis. J Mircen. 1: 327 – 332.
Crespo ALB, Ana RS, Herbert AAS. Eliseu JGP, Juan F, Blair DS. 2011. Cross- resistance and Mechanism of Resistance to Cry1Ab Toxin from
Bacillus thuringiensis in a Field-derived Galur of European Corn Borer, Ostrinia nubilalis. J Inverteb Pathol. 107: 185 – 192.
Dashtban M, Schraft H, Qin W. 2009. Fungal Bioconversion of Lignocellulosic Residues for Opportunities and Perspectives. Int J Biol Sci. 5(6): 578 – 595.
Debby MS, Tjahjadi C, Herudiyanto M, Sukarti T. 2005. Mekanisme Produksi Minyak Sel Tunggal dengan Sistem Kultivasi Padat pada Media Onggok-Ampas Tahu dengan Menggunakan Kapang Aspergillus terreus. J Teknol Indust Pangan. 16 (1) : 25-28.
Dent DR. 1993. The Use of Bacillus thuringiensis as Insecticide. Di dalam: Jones DG (Ed.). Exploition of Microorganisms. New York (US): Chapman and Hall.
Dono D, Syafri I, Idar, Djoko P, Ikha M. 2010. Status dan Mekanisme Resistensi Biokimia Crocidolomia pavonana (F.) (Lepidoptera: Crambidae) terhadap Insektisida Organofosfat serta Kepekaan terhadap insektisida Botani Ekstrak Biji Barringtonia asiatica. J Entomol. 7(1): 9 – 27. Dulmage HT, Correa JA, Morales GG. 1990. Potential of Improved Formulation
of Bacillus thuringiensis through Standardization and Cultivation Development. Di dalam Bacterial Control of Mosquitoes and Blackfleis: Biochemistry, Genetics and Application of Bacillus thuringiensis and Bacillus sphaericus. New Jersey (USA): Rutgers University Press. hlm 110 – 133.
Dulmage HT, Rhodes RA. 1971. Production of Pathogens in Artificial Media, pp.507-540. Di dalam: Burges HD (ed). Microbial Control of Pest and Plant Diseases 1970 – 1980. New York (US): Academic Pr.
Dulmage HT. 1981. Insecticidal Activity of Isolates of Bacillus thuringiensis and Their Potential for Pest Control. Di dalam: Burges HD (editor).
Microbial Control Pest and Plant Disease 1970 – 1980. New York (US): Academic Pr.
Dunkle RL, Shasha BS. 1989. Response of Starch-encapsulated Bacillus thuringiensis Containing Ultra Violet Screens to Sunlight. Environ Entomol. 18: 1035 – 1041.
Effendi MS. 2009. Teknologi Pengolahan dan Pengawetan Bahan Pangan. Bandung (ID): Alfabeta.
Ellar DJ, Knowles BH, Haider MZ, Drobniewski FA.1986. Investigation of The Specificity, Cytotoxic Mechanisms and Relatedness of Bacillus thuringiensis Insecticidal delta-endotoxin from Different Pathotypes. Zentralblatt fur Bakteriologie, Mikrobiologie, and Hygiene. Stutttgart (PT): Gastav Fisher Verlag.
Farrera RR, Perez-Guevara F, de la Torre M. 1998. Carbon:Nitrogen Ratio Interacts with Initial Concentration of Total Solids on Insecticid Crystal Protein and Spore Production in Bacillus thuringiensis HD-73. Appl. Microbiol Biotechnol. 49: 758 – 765.
Ferdiaz S. 1992. Mikrobiologi Pengolahan Pangan Lanjut. Bogor (ID): Pusat Antar Universitas Pangan dan Gizi, IPB.
Gill SS, Knowles EA, Pietrantonio PV. 1992. The Mode of Action of Bacillus thuringiensis Endotoxins. J Entomol. 37 : 615 – 636.
Hofte H, Whiteley HR. 1989. Insecticidal Crystal Protein of Bacillus thuringiensis. Microbial Rev Entomol. 12 : 287 – 322.
Idris, Moh S, Mohamad AF, Ismail D. 1998. Utilization of oil palm by-products as livestock feed. Di dalam: Proc. National Seminar on Livestock and
Crop Integration in Oil Palm: “Towards Sustainability”. A. Darus, M.T. Dolmat dan S. Ismail (eds). 12-14 May 1998, Johor-Malaysia. Ignoffo CM. 1992. Environmental Factors Affecting Persistence of
Entomopathogens. J Entomol. 75: 516 – 525.
Iriani ES, Sunarti TC, Richana N, Mangunwidjaja D, Hadiyoso A. 2012. Utilization of Corn Hominy as a New Source Material for Thermoplastic Starch Production. J Procedia Chem. 4: 245 – 253. James DW. 1993. Urea: A Low Cost Nitrogen for Fertilizer With Special
Management Requirements. New York (US): US Univ.
Kang BC, Lee SY, Chang HN. 1993. Production of Bacillus thuringiensis Spores in Total Cell Retention Culture and Two-Stage Continuous Culture Using an Internal Ceramic Filter System. J Biotechnol Bioeng. 42: 1107
– 1112.
Kurniadi T. 2010. Kopolimerisasi Grafting Monomer Asam Akrilat pada Onggok Singkong dan Karakterisasinya [Tesis]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Lacey LA, Siegel JP. 2000. Safety and Ecotoxicology of Entomopathogenic Bacteria. Di dalam: Entomophathogenic Bacteria: From Laboratoty to field Application. Dordrecht: Kluwer Academic.
Lahoni E. 2003. Pengetahuan Bahan Makanan Ternak. Bogor (ID): IPB Pr. McCleary BV. 2001. Analysis of Feed Enzimes. Di dalam: Bedford MR dan
Partridge GG, Editor. Enzymes in Farm Animal Nutrition. New York (US): Cabi Publishing.
McGuire MR, Shasha BS. 1990. Sprayable Self-encapsulating Starch Formulations for Bacillus thuringiensis. J Econ Entomol. 83: 1813 – 1817.
Meryandini A, Wahyu W, Besty M, Sunarti TC, Nisa R, Hasrul S. 2009. Isolasi Bakteri Selulolitik dan Karakterisasi Enzimnya. Makara Sains. 13(1) : 33 – 38.
Morris ON, Kanagaratman P, Converse. 1996. Suitability of 30 Agricultural Products and By-Products as Nutrient Sources for Laboratory Productions of Bacillus thuringiensis subsp. aizawai (HD133). J Pathol. 70 : 113 – 120.
Mummigatti SG, Raghunathan. 1990. Influence of Media Composition on the Production of Delta-Endotoxin by Bacillus thuringiensis. J Invertebr. 55:147 – 151.
Nafari IB. 2012. Kajian Mikroenkapsulasi Bioinsektisida dari Bacillus thuringiensis [Tesis]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Naiola E. 2008. Isolasi dan Seleksi Mikroba Amilolitik dari Makanan Fermentasi/Ragi Tapai Gambut di Kalimantan Selatan. Berkala Penel Hayati. 13: 109 - 114
Nelly A. 2012. Penentuan Rasio C/N dan Pengembangan Produksi Bioinsektisida oleh Bacillus thuringiensis Menggunakan Media Kultivasi Limbah Industri Tahu [Tesis]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Othman N. 1982. Biology of Croccidolomia binotalis Zeller (Lepidoptera : Pyralidae) and Its Parasites From Cipanas Area (West Java). Research Report. SEAMEO Center for Tropical Biology, Bogor.
Passos ML, Claudio PR. 2010. Innovation in Food Engineerinf: New techniques and Products. US: CRC Pr.
Prijono D, Hasan E. 1992. Life Cycle and Demography of Croccidolomia binotalis Zeller (Lepidoptera : Pyralidae) on Broccoli in Laboratory. J Trop Agric. 4 : 18 – 24.
Pusztai M, Fast P, Gringorten L, Kaplan H, Lessard T, Carey P. 1991. The Mechanism of Sunlight-mediated Inactivation of Bacillus thuringiensis
Crystals. J Biochem. 273: 43 – 47.
Putrina M, Fardedi. 2007. Pemanfaatan Air Kelapa dan Air Rendaman Kedelai Sebagai Media Perbanyakan Bakteri Bacillus thuringiensis Barliner. J Ilmu Pert Indones. 9(1) : 64 – 70.
Quinlan RJ, SG. Lisansky. 1985. Microbial Insecticides. J Biotechnol. 3: 233 – 254.
Rahayuningsih M, Syamsu K, Dawis A dan Purnawati R. 2007. Penggandaan Skala Produksi Bioinsektisida Bacillus thuringiensis var.israelensis
untuk Membasmi Jentik Nyamuk Aedes aegypti. J Ilmu Pert Indones. 12 (2): 123 – 130.
Rahyuningsih M. 2003. Toksisitas dan Pembedaan Aktivitas Dipterosidal Bioinsektisida Bacillus thuringiensis var. israelensis Tipe Liar dan Mutan pada berbagai Formulasi Media dan Kondisi Kultivasi [Disertasi]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Raimbault M. 1998. General and Microbiological Aspects of Solid Substrate Fermentation. J Biotechnol vol 1.
Rehm HJ, G Reed. 1999. Biotechnology vol. 1. Microbial Fundamentals. Weinheim (DE): Verlag Chemic.
Santos MHS, Zarzo JT, Santamarta AA, Peristoran MJ. 1993. Citric Acid Lowers Heat Resistance of Clostridium perfringens PA 3679 in HTST White Asparagus Puree. Food Sci Technol. 28: 603 – 610.
Schnepf EN, Crickmore, van Rie J, Lereclus D, Baum J, Feitelson J, Zeigler DR, Dean DH. 1998. Bacillus thuringiensis and its Pesticidal Crystal Proteins.
Microbial Mol Boil Rev. 62 (3) : 775 – 806.
Scherrer P, Luthy P, Trumpi B. 1972. Production of Delta-endotoxin by Bacillus thuringiensis as a Function of Glucose Concentrations. Appl. Microbiol. Biotechnol. 2 5(4): 644 – 646.
Shieh TR. 1994. Identification and Classification of Bacillus thuringiensis. Jakarta (ID): Komisi Pestisida Departemen Pertanian.
Shojaaddini M, Saeid M, Mahvash K, Ali AT. 2010. Development of A Cost Effective Medium for Production of Bacillus thuringiensis
Bioinsecticide Using Food Barley. J Plant Protection Res. 50 (1): 9 – 14.
Siegel JP. 2000. Bacteria In Field manual of techniques invertebrate pathology. L. A. Lacey dan H. K. Kaya (eds). Netherlands (NL): Kluwer Academic Pr. hlm 209 – 230.
Sikdar DP, Majumdar MK. 1993. Optimization of Process for Production of Delta Endotoxin by Bacillus thuringiensis in Five Litres Fermentor. Biochem Archieves. 9: 119 – 123.
Sivaramakrishnan S, Gangadharan D, Nampoothiri KM, Soccol CR, Pandey A. 2006.Alpha-amylases from Microbial Sources: an Overview on Recent Developments. Food Technol Biotechnol. 44 (2): 173 – 184.
Soesanto. 1992. Initial Study of Production of Bacillus thuringiensis var.
israelensis using Locally Obtained Substrates. Berkala Ilmu Kedokteran. 24: 3-7.
Stanbury PF, Whitaker A. 1984. Principles of Fermentation Technology. Oxford (US): Pergamon Pr.
Sukmadi B, Haryanto B, Ratna SH. 1996. Pengaruh Konsentrasi Dekstrosa pada Produksi Bahan Aktif Bioinsektisida Bacillus thuringiensis subsp.
aizawai. Majalah BPPT No. LXXII : 17 – 23.
Syaefullah S. 1990. Studi Karakteristik Glukomanan dan Sumber “Indigenous”
Iles-Iles (A. Onchophyllus) dengan Variasi Proses Pengeringan dan Basis Perendaman [Tesis]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Swadener C. 1994. Bacillus thuringiensis. J Pesticides Reform. 14 (3) : 13 – 20. Tabashnik BE. 1992. Evaluation of Sinergism Among Bacillus thuringiensis
toxins. Appl Environ Microbiol. 58: 3343 – 3346.
Thiery I, Frachon E. 1997. Identification, Isolation, Culture and Preservation of Entomopathogenic Bacteria. Di dalam: Biological Techniques Manual of Techniques in Insect Pathology. L. A. Lacey (ed.). New York (USA): Academic Pr.
Tirado-Montiel M, Tyagi RD, Valero JR. 2001. Wastewater Treatment Sludge as a Raw Material for The Production of Bacillus thuringiensis Based Biopesticides. Water Research, New York, v. 35, p. 3807 – 3816. Vandekar M, Dulmage HT. 1982. Guidelines for Production of Bacillus
thuringiensis H-14. Special Programe for Research and Training in Tropical Diseases. Geneva, Switzerland.
Wang DIC, Cooney Cl, Demain AL, Dunnill P, Humprey AE, Lilly MD. 1978.
Fermentation and Enzyme Technology. New York (USA): J Wiley. Winarno FG. 1997. Kimia Pangan dan Gizi. Jakarta (ID): Gramedia Pustaka. Yamamoto T, Lizuka T, Aronson, JN. 1983. Mosquitocidal Protein of Bacillus
thuringiensis var. israelensis : Identification and Partial Isolation of the Protein. Curr Microbiol. 9: 279-284.
Zainuddin D, Murtisari K. 1995. Penggunaan Limbah Agroindustri Buah Kopi (Kulit Buah Kopi) dalam Ransum Ayam Pedaging (Broiler). Prosiding Pertemuan Ilmiah Komunikasi dan Penyaluran Hasil Penelitian. Semarang. Sub Balai Penelitian Ternak Klepu, Puslitbang Peternakan, Badan Litbang Pertanian. Hlm 71-78.
Zahidah D, Shivitri M. 2013. Isolasi, Karakterisasi dan Potensi Bakteri Aerob Sebagai Pendegradasi Limbah Organik. J Sains dan Seni Pomits. 2 (1): 2337 – 3520.
Lampiran 1. Prosedur Karakterisasi Substrat
a. Kadar Air (SNI 01-2891-1992)
Cawan kosong yang bersih dikeringkan dalam oven bersuhu 100- 105oC sekitar 30 menit. Kemudian cawan didinginkan dalam desikator, lalu ditimbang. Contoh sebanyak 1 – 2 g (a) dimasukkan ke dalam cawan, kemudian dimasukkan ke dalam oven bersuhu 100 – 105oC selama 6 jam. Cawan yang berisi contoh yang sudah dikeringkan diangkat dan didinginkan dalam desikator, setelah itu ditimbang kembali dan dikurangi bobot cawan (b). Pekerjaan diulangi hingga diperoleh bobot tetap
Kadar air (%) = − x 100%
b. Kadar Abu (SNI 01-2891-1992)
Sebanyak 2 – 3 g contoh dimasukkan ke dalam sebuah porselen (atau platina) yang telah diketahui bobotnya, untuk contoh cairan uapkan di atas penangas air sampai kering. Sampel diarangkan di atas nyala pembakar, lalu diabukan dalam tanur listrik pada suhu maksimum 550oC sampai pengabuan sempurna (sekali-kali pintu tanur dibuka sedikit, agar oksigen bisa masuk). Selanjutnya sampel dikeluarkan dari dalam tanur dan didinginkan dalam desikator, lalu ditimbang hingga diperoleh bobot tetap.
Kadar Abu (%) = 1− 2 x 100% Keterangan:
w1 = bobot cawan + sampel setelah pengabuan w2 = bobot cawan sebelum pengabuan
W = bobot contoh sebelum pengabuan
c. Kadar Protein (SNI 01-2891-1992)
Sebanyak 0.2 g bahan dimasukkan ke dalam labu Kjeldahl kemudian ditambahkan 1 g selenium mixture dan 3 ml H2SO4 pekat.
Campuran tersebut didekstruksi sampai larutan menjadi berwarna jernih kehijauan. Setelah dingin, larutan tersebut dipindahkan ke dalam labu ukur 50 ml kemudian diencerkan sampai tanda tera. Sebanyak 5 -10 ml contoh dimasukkan dalam labu destilasi kemudian ditambahkan 5 – 10 ml NaOH 30%. Destilat ditampung dalam 15 ml larutan H3BO3 4% yang sudah
diberi indikator metil merah dan brom cresol green, kemudian dilakukan destilasi sampai larutan menjadi berwarna hijau dan jumlahnya 4 – 5 x volume larutan borat. Larutan tersebut dititrasi dengan HCl standar sampai warnanya berubah menjadi merah muda.
Total nitrogen (%) = − � 14 x 100% Kadar Protein (%) = Nitrogen (%) x fk
Keterangan: fp = faktor pengenceran = 10 fk = faktor konversi
d. Kadar Lemak (SNI 01-2891-1992)
Labu lemak yang dibersihkan, dikeringkan dalam oven dan didinginkan di dalam desikator kemudian ditimbang. Sebanyak 2 – 5 g sampel kering yang dibungkus dengan kertas saring dimasukkan ke dalam soxhlet. Pelarut heksan dituangkan ke dalam soxhlet yang telah digabungkan dengan labu lemak. Peralatan tersebut disambungkan dengan kondensor di bagian atas soxhlet kemudian direfluks selama 5-6 jam.
Pelarut yang terdapat di dalam labu lemak didestilasi dan pelarutnya ditampung. Sampel dikeringkan pada suhu ruang selama 5 menit kemudian dilakukan pengeringan dengan oven pada suhu 100- 105oC.
Kadar lemak (%) = �
� x 100%
e. Kadar Serat Kasar (AOAC, 1995)
Sebanyak 2 g sampel hasil sisa kadar lemak dimasukkan ke dalam erlenmeyer 500 ml dan ditambah 100 ml larutan asam sulfat 0,325 N. Campuran sampel kemudian dididihkan dengan alat pendingin tegak selama kurang lebih 30 menit, kemudian ditambahkan lagi 50 ml larutan kemudian disaring dengan kertas saring Whatman no. 41 yang telah dikeringkan dan diketahui bobotnya. Pembilasan hasil saring dilakukan berturut-turut dengan larutan asam sulfat 0,325 N, air panas, dan etanol. Kertas saring dikeringkan dalam oven selama 1-2 jam, kemudian didinginkan dalam desikator dan ditimbang bobotnya. Pengeringan diulangi setiap setengah jam, kemudian ditimbang sampai diperoleh bobot konstan. Kadar serat kasar dihitung dengan persamaan berikut:
Kadar Serat Kasar (%) = −
x 100%
f. Densitas Kamba (Khalil, 1999)
Densitas kamba diukur dengan cara memasukkan tepung ke dalam gelas ukur sampai volume tertentu tanpa dipadatkan, kemudian berat tepung ditimbang. Densitas kamba dihitung dengan cara membagi
berat tepung dengan volume ruang yang ditempati. Densitas kamba dinyatakan dalam satuan g/ml.
Densitas Kamba = � � ( )
� ( )
g. Aw
Pengukuran aktivitas air (Aw ) dilakukan dengan menggunakan
alat Aw meter. Alat dikalibrasi dengan NaCl jenuh yang memiliki nilai Aw
0,7547;0,7529 dan 0,7509 yang berturut-turut pada suhu 20,25 dan 29oC dengan cara memasukkan NaCl jenuh tersebut dalam wadah Aw
meter. Nilai Aw dapat dibaca setelah ada tulisan “completed” di
layar. Bila Aw yang terbaca tidak tepat 0,750 maka bagian switch
diputar sampai mencapai tepat 0,750.Pengukuran Aw sampel dilakukan
dengan cara yang sama dengan kalibrasi alat yaitu sampel dimasukkan dalam wadah Aw meter. Nilai Awdan suhu pengukuran akan terbaca setelah ada tulisan “completed” di layar.
h. Water Holding Capacity (Yoanasari, 2003)
Sejumlah 1 g sampel dilarutkan dalam 10 ml akuades, kemudian diaduk dengan menggunakan magnetic stirer selama 10 menit. Sampel didiamkan selama 30 menit dan disentrifuse selama 30 menit dengan kecepatan 3500 rpm. Supernatan kemudian diambil dan ditimbang.
Daya Serap Air (%) = − x 100%
Keterangan: a = Berat air (g)
b = Berat supernatan (g) c = Berat sampel (g)
Lampiran 2. Metode Analisis Pra dan Pasca Kultivasi
a. Jumlah Spora Hidup (Viable Spore Count/VSC) (Mummigati dan Raghunathan 1990)
Sebanyak 1 g kultur diencerkan ke dalam 9 ml larutan garam fisiologis kemudian dipanaskan pada suhu 70oC selama 15 menit. Setiap pengenceran diambil 1 ml dan ditumbuhkan pada medium agar cawan. Selanjutnya diinkubasi pada suhu 30oC selama 24 jam. Jumlah spora yang terbentuk diketahui dengan penghitungan jumlah koloni yang tumbuh pada cawan. Prosedur penentuan jumlah spora hidup disajikan pada Gambar 5.1.
Gambar 5.1. Prosedur Analisis Jumlah Spora Hidup
b. Pengamatan jumlah sel dengan metode TPC
Sebanyak 1 g kultur dilakukan pengenceran dengan 9 ml larutan garam fisiologis. Cairan yang sudah diencerkan selanjutnya diambil 1 ml dan dilakukan sederetan pengenceran dengan 9 ml larutan garam fisiologis. Setiap pengenceran diambil 1 ml dan ditumbuhkan pada medium agar dalam cawan petri dan diinkubasi pada suhu 30oC selama 24 jam. Jumlah koloni yang tumbuh kemudian dihitung. Prosedur penentuan jumlah sel hidup disajikan pada Gambar 5.2.
1 g kultur
Pengenceran ke dalam 9 ml larutan garam fisiologis
Pemanasan pada suhu 70 0C selama 15 menit
Pembuatan sederetan pengenceran
1 ml dari setiap pengenceran ditumbuhkan pada medium agar cawan
Inkubasi pada suhu 30 0C selama 24 jam
Gambar 5.2. Prosedur Analisis Pengamatan Jumlah sel dengan Metode TPC
c. Uji aktivitas bioinsektisida (Bioasai) (dilakukan pasca kultivasi) (Yamamoto et al. 1983)
- Uji aktivitas bioinsektisida pada isolat Bacillus thuringiensis subsp.
aizawai dan Bacillus thuringiensis subsp. berliner
Sebanyak 1 g hasil fermentasi dari tiap-tiap perlakuan, diencerkan dengan 9 ml air suling yang diberi pro-stiker ( 0.25 ml/L). Dari hasil pengenceran pertama selanjutnya dilakukan sederetan pengenceran. Daun kubis yang telah dipotong-potong dengan ukuran 4 x 4 cm kemudian direndam dalam suspensi spora kristal selama beberapa menit. Daun kubis yang telah di rendam dikering anginkan lalu dimasukan ke dalam cawan petri yang telah dialasi tissu. Selanjutnya dimasukkan 10 larva ulat ke dalam masing-masing cawan dan diamati perkembangannya selama 4 hari dan diberi supply makanan kubis yang telah diberi perlakuan. Pada hari terakhir jumlah larva yang mati dihitung. Penentuan aktivitas bioinsektisida disajikan pada Gambar 5.3.
1 g kultur
Pengenceran ke dalam 9 ml larutan garam fisiologis
Pembuatan sederetan pengenceran
1 ml dari setiap pengenceran ditumbuhkan pada medium agar cawan
Inkubasi pada suhu 30 0C selama 24 jam
Gambar 5.3. Prosedur Uji Aktivitas Bioinsektisida
- Uji aktivitas bioinsektisida pada isolat Bacillus thuringiensis subsp.
israelensis
Evaluasi toksisitas (uji bioasai) terhadap cairan kultivasi dilakukan terhadap larva Aedes aegypti. Sampel cairan kultivasi sebanyak 1 ml dilakukan serangkaian pengenceran. Sebanyak 10 ekor larva nyamuk Aedes aegypti ditempatkan di dalam cup yang berisi cairan kultivasi hasil pengenceran. Jumlah larva nyamuk yang mati dihitung setelah 24 jam.
1 g hasil fermenttasi dari tiap-tiap perlakuan
Pengenceran ke dalam 9 ml air suling yang diberi Pro-Stiker ( 0.25 ml/L)
Pembuatan sederetan pengenceran
Pemotongan daun kubis Perendaman di dalam suspense
spora Kristal selama 1 menit
Dikering anginkan
cawan petri
Inkubasi 4 (empat) hari
Perhitungan jumlah larva mati sampai hari ke empat 10 larva ulat kubis
Lampiran 3. Contoh Perhitungan Komposisi Media Fermentasi pada Substrat Sumber Karbon
Onggok % karbohidrat onggok = 77.929 % BM C6H12O6 = 180 %C onggok = 72 180 77.929 % = 31.172 % = 0.3117 % N onggok = 0.3345 % = 0.003345 BM CO (NH2)2 = 60 C urea = 12 60 100 % = 20% = 0.2 N urea = 28 60 100 % = 46.67% = 0.4667 Basis onggok 25 g C = 7 N
C Onggok + C Urea = 7(N Onggok + N Urea) (25 x 0.3117) + 20% Urea= 7(25 x 0.0033 + 46.667% Urea)
7.7925 + 0.2 Urea = 7 (0.0825 + 0.4667 Urea) 7.7925 – 0.5775 = 3.2669 Urea – 0.2 Urea
7.215 = 3,0669 Urea
Lampiran 4. Contoh Perhitungan Komposisi Media Fermentasi pada Substrat Sumber Nitrogen
Kombinasi Onggok dan Bungkil Inti Sawit % karbohidrat onggok = 77.929 % BM C6H12O6 = 180 % C onggok = 72 180 77.929 % = 31.172 % = 0.3117 % N onggok = 0.3345 % = 0.003345
% karbohidrat bungkil sawit = 25.082 % BM C6H12O6 = 180 % C bungkil sawit = 72 180 25.082 % = 10.033 % = 0.1003 % N bungkil sawit = 3.5970 % = 0.0359 Basis onggok 7 g C = 7 N
C onggok + C bungkil = 7(N onggok + N bungkil) (7 x 0.3117) + 0.1003 BS = 7(7 x 0.0033 + 0.0359 BS)
2.1819 + 0.1003 BS = 7 (0.0231 + 0.0359 BS) 2.1819 – 0.1617= 0.2513 BS - 0.1003 BS
2.0202 = 0.151 BS
Lampiran 5. Contoh Perhitungan Air yang Ditambahkan Supaya Kondisi Fermentasi mencapai aw 0.92
Pengujian dengan aw-meter supaya aw 0.92 yaitu pada KA onggok = 45 %
Basis onggok 25 g
KA onggok = 14.73 %, sehingga
Jumlah padatan onggok = 100 % - 14.73 % = 85.27 % = 0.8527 x 25 = 21.32 g KA 45 % = (100/55) x 21.32 = 38.76 g
Lampiran 6. Dokumentasi Penelitian Pengujian indeks potensial (amilolitik) Pengujian indeks potensial (selulolitik) Kultur inokulum
Inkubasi Pengujian bioasai pada ulat
Perendaman daun
Daun yang dimakan ulat Ulat yang mati setelah memakan bioinsektisida
Pengujian bioasai pada nyamuk
RIWAYAT HIDUP
Penulis lahir di Banyumas pada tanggal 8 Desember 1988, anak pertama dari tiga bersaudara dari pasangan Bapak Eko Haryanto dan Ibu Suciyati. Pendidikan Sekolah Dasar selesai tahun 2000 di SDN V Purwanegara, dan melanjutkan ke tingkat Sekolah Menengah Pertama di SMPN I Purwokerto hingga lulus tahun 2000. Selepas SMP, penulis menyelesaikan sekolah di SMAN I Purwokerto pada tahun 2006 dan melanjutkan kuliah di Institut Pertanian Bogor mengambil jurusan Teknologi Industri Pertanian, Fakultas Teknologi Pertanian dan lulus tahun 2010. Pada tahun 2011 Penulis melanjutkan pendidikan program magister di Program Studi Teknologi Industri Pertanian, Fateta, IPB dengan sponsor pembiayaan dan bantuan penelitian yang berasal dari program IMHERE.
Selama mengikuti program magister, penulis berkesempatan untuk
menyajikan karya ilmiah berjudul “ Utilization of Kimpul” pada The 3RD
International Agriculture Students Symposium yang diselenggarakan di Universiti Putra Malaysia. Pada tahun 2012 penulis juga berkesempatan untuk menyajikan
karya ilmiah berjudul “Utilization of Agroindustrial Wastes for Bioinsecticide Production” pada program Summercourse yang diselenggarakan oleh Institut
Pertanian Bogor (Indonesia) dan Ibaraki University (Jepang). Artikel lain berjudul
“Produksi Bioinsektisida oleh Bacillus thuringiensis subsp. berliner Menggunakan Hasil Samping Agroindustri untuk Kultivasi Media Padat” akan dipublikasikan pada Jurnal Entomologi.
Bogor, Maret 2014 Penulis