Bab 4 Kesimpulan dan Saran
4.2 Saran
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai variasi dari jenis tanaman anggrek lainnya yang terserang penyakit, identifikasi isolat serta pemanfaatan isolat untuk tujuan pengendalian hayati.
DAFTAR PUSTAKA
Alam, Md. M., Mizutani, T., Isono, M., Nikaidou, N. and Atanabe, T. 1996. Three Chitinase Genes (chiA, chiB, and chiC) Comprise The Chitinase System of Bacillus circulans WL-12. J. Ferment Bioeng. 82(1): 28-36.
Alexopoulos, C. J and C. W. Mimms. 1979. Introductory Mycology. Third edition. New York: John Wiley and Sons, Inc. 296.
Alfonso,C., Neuro, O.M., Santamaria, F. and Reves, F. 1995. Purification of Heat Stable Chitin Deacetylase From Aspergillus nidulans and Its Role in Cell Wall Degradation. J. Curr. Microbiol. 30(1): 49-54.
Barnes, Ervin H. 1997. Atlas and Manual of Plant Pathology. Appleton-Century-Crofts. New York. 126-130.
Barnett, H.L. and B.B. Hunter. 1972. Illustrated Genera of Imperfect Fungi. Co. Minneapolis.
Boucher, I, Dupuy, A., Vidal, P., Neugebauer, W.A. and Brzezinski, R. 1992. Purification and Characterization of Chitosanase From Streptomyces N-174. J. Appl. Microbiol
and Biotechnol. 38(2): 188-193.
Bouriotis, V., Kafetzopoulos, D. and Vournakis, J. 1993. Process for Isolating and Preparing Purified Chitin Deacetylase. Inst. Mol. Biol. Biotechnol. US Patent No. 5219749.
Crawford D. L. and Mahadevan, B. 1997. Properties of The Chitinase of the Antifungal Biocontrol Agent Streptomyces lydicus WYEC-108. Enzyme Microb. Technol. 20(7): 489-493.
Donzelli B, Lorito M, Scala F, and Harman G. 2001. Cloning, Sequence and Structure of a Gene Encoding an Antifungal Glucan 1,3-β-Glucosidase from Trichoderma atroviride (T. harzianum).
De la Cruz J, Pintor-Toro JA, Benitzer T, and L1obel A. 1995. Purification and Characterization of An Endo-β-1,6-Glucanase from Trichoderma harzianum that is Related to Its Mycoparasitism. Journal of Biotecnology. 177: 64-71.
El-Katatny MH. Somitsch W, Robra K-H, El-Katatny MS, and Gübitz GM. 2000. Harzianum for Control of the Phytopathogenic Fungus Sclerotium rolfsii. Food Technol Biotechnol. 38: 173–180.
Fravel DR, Connick Jr, WJ, and Lewis JA. 1998. Formulation of Microorganisms to Control Plant Diseases. In Formulation of Microbial Biopesticide. Ed. Burges HD. Kluwer Academic Press. Dordrecht. 187-202.
Gao, X. D., Katsumoto, T., and Ondera, K. 1995. Purification and Characterization of Chitin Deacetylase from Absidia coerulea. J. Biochem. 117(2): 257-263.
Gohel V, Singh A, Vimal M, Ashwini D, and Chatpar HS. 2003. Bioprospecting and Antifungal Potential of Chitinolytic Microorganism. African J Biotechnol. 5: 54-72.
Hasanuddin. 2003. Peningkatan Peranan Mikroorganisme Dalam Sistem Pengendalian Penyakit Tumbuhan Secara Terpadu. Jurusan Hama dan Penyakit Tumbuhan. Fakultas Pertanian. Universitas Sumatera Utara. Digitilized by USU digital library.
Hocking and J. L. Pitt. 1997. Fungi and Food Spoilage. Blackie Academic & Professional: Australia.
Di akses tanggal 16 April 2010.
http://www.duniahobi.com/forum/viewtopic.php?f=81&t=840. Diakses tanggal 27 April 2010.
Irawati, N. 2008. Potensi Bakteri Kitinolitik Lokal Dalam Pengendalian Fungi Patogen Tumbuhan. Skripsi. USU. Medan.
Jin W, Horner H, Palmer R, and Shoemaker R. 1999. Analysis and Mapping of Gene Families Encoding β-1,3-Glucanase of Soybean. Genetic. 153: 445-452.
Kafetzoupoulos, D., Martinou, A., Tsigos, I., Christodoulidou,A., Kavelaki, P. and Bouriotis, V. 1994. Chitin Deacetylation by Enzymic Means. J. Prog. Biotechn o
l. 9(1): 291-294.
Malloch, D. 1997. Moulds Isolation, Cultivation, Identification, Mycology. Toronto: Departement of Botany, University of Toronto.
Martinou, A., Kafetzoupoulos, D. and Bouriotis, V. 1995. Chitin Deacetylation by Enzymatic Means: Monitoring of Deacetylation Process. J. Carbohydr. Res. 273(2): 235-242.
Martorejo, T., C. Sumardiyono dan E. H. Astuti. 2001. Kajian Pengendalian Hayati Kapang Hijau pada Buah Jeruk Dengan Trichoderma sp. Prosding Seminar PFI. IPB. Bogor. 354-356.
McQuilken, M., h. G. Powell, S. P. Budge and J. M. Wipps. 1997. Effect of Storage on the Survival and Biocontrol Activity of Pythium oligandrum in Pelleted Sugar Beet Seed. Biocon. Sci and Tech. 8: 237-241.
Morikawa, Y., Nogawa, M., Takahashi, H., Kashigawa, A., Oshima, K and Okada, H. 1998. Purification and characterization of exo-β- D-glucosaminidase from Sellulotic Fungus Trichoderma reesei PC-37. J. Appl. Environ. Microbiol. 64(3): 890-895.
Munawaroh, E. 2001. Eksplorasi dan Inventarisasi Tumbuhan Dalam Rangka Konservasi Keanekargaman Jenis Tumbuhan. Sehari hasil-hasil penelitian bidang ilmu hayat. Bogor. Balai Pengembangan Kebun Raya-LIPI.
Muharni. 2009. Isolasi dan Identifikasi Bakteri Penghasil Kitinase dari Sumber Air Panas Danau Ranau Sumatera Selatan. Jurusan Biologi FMIPA, Universitas Sriwijaya, Sumatera Selatan, Indonesia. Jurnal Penelitian Sains. Edisi Khusus Desember. 09: 12-15.
Ohishi, K., Yamagishi, M., Okta, T., Suzuki, M. and Izumida, H. 1996. Purification and Properties of Two Chitinases from Vibrio alginolyticus H-8. J. Ferment. Bioeng. 82(6): 598-600.
Oku, H. 1994. Plant Pathogenesis and Disease Control. London: Lewis Pub.
Patil, R. S., V. Ghormade and M. V., Deshpande. 1999. Chitinolytic Enzymes AnEx ploration. J. Enzyme and Microbial Technol. 26: 473-483.
Patil, R. S., V. Ghormade and M. V., Deshpande. 2000. Chitinolytic Enzymes: An Exploration. Enz. Microb. Tech. Rev. 26: 473-483.
Pelletier, A. and Sygusch, J. 1990. Purification and Characterization of Three Chitosan ase Activities from Bacillus megaterium PI. J. Appl. Environ. Microbiol. 6(4): 844-848.
Reves, F., Alfonso, C., Neuro, O.M. and Santamaria, F. 1995. Purification of Heat-Stable Chitin Deacetylase from Aspergillus nidulans and Its Role in Cell Wall Degradation. Current Microbiol. 30(1) : 49-54.
Saleh, M., Abdilah, R., Suherman, M., Basmal, J. dan Indriati, N. 1994. Pengaruh Suhu, Waktu, dan Konsentrasi Pelarut pada Ekstraksi Kitosan dari Limbah Pengolahan Udang Beku terhadap beberapa Parameter Mutu Kitosan. Jurnal Pen. Pasca
Semangun, H. 1996. Ilmu Penyakit Tanaman. Yogyakarta. Gadjah Mada University Press. hlm 96.
Sherief, A. A., El-Sawah, M. M., and El-Naby, M. A. Abd. 1991. Some Properties of Chitinase Produced by a Potent Aspergillus carneus Strain. J. Appl. Microbiol.
Biotech. 35(2): 228-230.
Suryanto, D., Fakhrullah., Napitupulu, D., Munir, E. 2009e. Assay of Three Chitinolytic Bacterial Isolates of Taman Nasional Gunung Leuser Tangkahan to Inhibit Plant Pathogenic Fungi. Microbiol Indones Press.
Tsao, P. H. 1983. Factors Affecting Isolation & Quantitation of Phytophthora from soil. In D. C. Erwin, S. B. Garcia dan P. H. Tsao. Phytophthora its Biology, Taxonomy and Ecology. The American Phytopatological Society. St. Paul. 219-236.
Wang, San-Lang and Chang, Wen-Tsu, 1997. Purification and Characterization of Two Bifunctional Chitinases Lysozymes Extracellularly Produced by Pseudomonas
aeruginosa K-187 in a Shrimp and Crab Shell Powder Medium. J. Appl. Environ. Microbiol. 63(2): 380-386.
Lampiran 1: Komposisi Medium Medium MGMC padat • K2HPO4 0,7 g • KH2PO4 0,3 g • MgSO4.7H2O 0,5 g • FeSO4.7H2O 0,01 g • ZnSO4 0,001 g • MnCl2 0,001 g • Koloidal kitin 12,5% (b/v) 72,7 ml • Agar 20 g • pH 6,8 Cara Pembuatan
Semua bahan dicampur dan ditambahkan akuades sampai volumenya menjadi satu liter. Diatur pH sampai 6.8 dengan penambahan NaOH 0,1 N atau HCl 0,1 N. Setelah dicapai pH yang diinginkan, medium disterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121oC dan tekanan 2 bar selama 15 menit.
Lampiran 2 : Alur Kerja Karakterisasi Sifat Morfologi Dan Biokimia Isolat Isolat Bakteri kitinolitik
Karakteristik
Morfologi Pewarnaan Gram Uji Biokimia Sederhana
Bentuk koloni Uji Katalase
Warna koloni Uji Sitrat
Elevasi Koloni UJi Hidrogen Sulfida
Bentuk Sel Uji Motilitas
Lampiran 3. Isolasi dan Identifikasi Mikroskopis Jamur Patogen Tanaman Anggrek
Akar, batang, daun dan bunga tanaman anggrek yang sakit
Disimpan di dalam kantong plastik yang disemprot alkohol 70 % dan dibawa ke Laboratorium Mikrobiologi USU
Dipotong 3 cm Diinkubasi selama 2-5 hari
Ditumbuhkan ke dalam cawan petri steril berisi media PDA (potato dextrose agar) padat.
Diinkubasi selama 2-5 hari Isolat Fungi
Diamati di bawah mikroskop dengan metode block square
Diidentifikasi dengan panduan buku identifikasi fungi Hocking and J. L Pitt (1997)
Lampiran 4. Alur Kerja AsaiAntagonime in vitro
Biakan (Fusarium sp 1., Fusarium sp 2., Fusarium sp 3., Fusarium sp 4., Fusarium sp 5)
Diinokulasikan pada media MGMC (Suryanto, 2001) pada jarak 3,5 cm dari cakram tempat inokulum bakteri.
Diinkubasi selama 10 hari Biakan Fungi
Dibuat cakram dengan diameter 0,5 cm dibagian pinggir media
Dibuat 2 titik pengulangan
Setelah 24 jam kemudian, sebanyak 30 µ l (≈ 108 sel/ml) sel bakteri diinokulasikan ke dalam sumur berdiameter 2 mm pada bagian tengah jamur yang telah diinkubasi.
Diinkubasi pada suhu 30oC dan dilakukan pengamatan selama 10 hari
Diamati zona hambat terhadap miselia fungi patogen tanaman anggrek yang terbentuk mulai dari hari ke-2 sampai ke-10
Hasil Pengamatan
Pengamatan Struktur Hifa Jamur Patogen Tanaman Anggrek Setelah Uji Patogenitas.
Isolat Fungi
Diambil bagian hifa patogen yang abnormal Diamati struktur hifa di bawah mikroskop Dibandingkan dengan struktur hifa normal Hasil
Lampiran 5. Pembuatan Koloidal Kitin dengan Cara hidrolisis Parsial (Rodriquez-Kabana et al, 1983).
20 gr serbuk kitin
Dihaluskan
Dilarutkan dalam 180 ml 10 N HCl sambil diaduk dengan pengaduk magnetik selama 1,5- 2 jam.
Suspensi Kitin
Dituang ke dalam erlenmeyer yang berisi 2 liter air
Dibiarkan semalam kemudian bagian yang bening dipisahkan dari endapannya.
Endapan Bagian Bening
Dicuci sampai pH suspensi kitin antara 5,5 – 6
Diambil 10 ml kemudian dikeringkan pada suhu 80o C Dihitung berat keringnya