BAB V KESIMPULAN DAN SARAN
B. Saran
1. Perlu dilakukan penelitian dalam satu periode agar dapat menjamin performa
alat sehingga pemisahan alopurinol dan turunannya dapat terpisah dengan
DAFTAR PUSTAKA
Ahuja, S. and Dong, M. W., 2005, Handbook of Pharmaceutical Analysis by HPLC, Elsevier Inc., London, pp. 21, 22-35, 203.
Ahuja, S. and Rasmussen, H., 2007, HPLC Method Developments for Pharmaceutical, Elsevier Academic Press, Italy, pp. 14,15,472.
Anonim, 2014, Toxicology of Allopurinol, http://www.gsk.com, diakses tanggal 10 Maret 2014
Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, 2004, Klasifikasi Obat Herbal, Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, Jakarta.
Badan Pengawas Obat dan Makanan, 2005, Peraturan Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia Nomor HK.00.05.41.1384 tentang Kriteria dan Tata Laksana Pendaftaran Obat Tradisional, Obat Herbal Terstandar dan Fitofarmaka, Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, Jakarta.
Chan, C.C., Lam, H., 2004, Analytical Method Validation and Instrument Perfomance Verification, John Willey & Sons, Inc., New York, pp. 13-14, 125.
Chemaxon, 2013, Chemicalize.org Beta, Properties Viewer, http://www.chemicalize.org/structure/allopurinol, diakses tanggal 20 Desember 2013
Clarks, E.G.,2005, Isolation and Identification of Drug, The Phamaceutical Press, London, pp. 179-181.
Cook, et al., 2000, Pearson’s Product Moment Correlation Coefficient, http://media3.bmth.ac.uk/spss/focus_pages/focus_10a.htm, diakses tanggal 16 Agustus 2014
Denney, R. C., 1993, A Dictionary of Chromatography, 2nd edition, John Wiley & Sons, New York, pp. 93-95, 165.
Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1979, Farmakope Indonesia, edisi 3, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta.
Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1995, Farmakope Indonesia, edisi 4, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta.
Dipiro, J.T., et al., 2005, Pharmacotherapy Handbook, Sixth edition, The Mc. Grow Hill Company, USA.
Gandjar, I.G. dan Rohman, A., 2007, Kimia Analisis Farmasi, Pustaka Pelajar, Yogyakarta.
Gandjar, I.G. dan Rohman, A., 2010, Kimia Farmasi Analisis, Pustaka Pelajar, Yogyakarta, pp. 220-246, 335-340, 378-390.
Haborne, A.J., 1998, Phytochemical Methods A Guide to Modern Techniques of Plant Analysis, Thomson Science, Weinheim, Germany, pp. 15.
Harvey,D., 2000, Modern Analytical Chemistry, McGraw-Hill Companies, UnitedStates of America, pp. 370,371, 579-586,584.
Horwitz, W., Latimer, G.W., (Eds), 2007, Official Method of Analysis, AOAC International, USA, pp. 254-250.
Ibnu, Drs., M. Sodiq, dkk, 2004, Kimia Analitik 1, JICA, Malang, pp. 99-100. Iskandar, J., 2006, Rematik dan Asam Urat, Bhuana Ilmu Komputer, Jakarta, pp.
34-38.
Johnson, E.L., 1978, Basic Liquid Chromatography, diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata, Penerbit ITB, Bandung, pp. 22-24, 99.
Katzung, B.G., 2004,Farmakologi Dasar dan Klinik, EGC, Jakarta.
Kealey, D., 2005, Analytical Chemistry, BIOS Scientific Publisher Limited, United Kingdom, pp. 191.
Machata, S.G., 2005, Comparison of Octanol/Water Partition Coefficients Calculated by ClogP®, ACDlogP and KowWin® to Experimentally Determined Values, International Journal of Pharmaceutics, 294, pp. 185-192.
Miller, J.M. dan Crowther, J.B., 2010, Analytical Chemistry In a GMPEnvironment – A Practical Guide, John Wiley & Sons, Inc., New York,United States Of America, pp. 196-197,205,389.
Mulja, M. dan Suharman, 1995, Analisis Instrumental, Universitas Airlangga, Surabaya, pp. 26.
Mursyidi, A., 2008, Volumetri dan Gravimetri, Gadjah Mada University Press, Yogyakarta, pp. 88-89, 109-110.
Noegrohati, S., 1994, Pengantar Kromatografi, UGM, Yogyakarta.
Noegrohati, S., 2013, An Introduction on the Effectivity and Safety, UGM, Yogyakarta
Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia, 2012, Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia No. 007 Tahun 2012 tentang Registrasi Obat Tradisional, Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta.
Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia, 2013, Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia nomor 179 / Men.Kes. / Per / VII / 76 tentang produksi dan distribusi obat tradisional.
Rohman, A., 2009, Kromatografi untuk Analisis Obat, edisi pertama, Penerbit Graha Ilmu, Yogyakarta, pp. 217-230.
Sastrohamidjojo, 2002, Dasar-Dasar Spektroskopi, edisi 2, Penerbit Liberty,Yogyakarta, pp. 22-23.
Snyder, L.R., Kirkland, J.J., Glajch, J.L., 1997, Practical HPLC MethodDevelopment, 2nd edition, John Willey & Sons, Inc., New York, pp 25-26.
Snyder, L.R., Kirkland, J.J., Dolan, J.W., 2010, Introduction of Modern LiquidChromatography, 3rd edition, John Wiley & Sons, Inc., New York, pp.Xl. 25, 28, 33, 40-42, 51-52, 71, 109,151-152,316,327,331.
Soenarso, A.S., 2014, Optimasi Isolasi Alopurinol Dalam Sediaan Tablet dan Jamu, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
The United States Pharmacopeia, 2007, The United States Pharmacopeia 30th : The National Formulary 25th, United States Pharmacopeial Convention, Inc., Washington, D.C.
Waters, 2008, OASIS Sample Preparation, Waters Corporation, USA, pp. 7. Willard, H. H., Merrit, jr., Dean, J.A., dan Settle, F.A., 1988, Instrumental
Methods of Analysis, 7th edition, Wadsworth Publishing Company, California, pp. 519, 522-530, 580, 614-615.
LAMPIRAN 3.Perhitungan pembakuan NaOH 0,1 N 1. Penimbangan kalium biftalat
Penimbangan Kalium biftalat (g)
Berat kertas 0,4574 Berat kertas + zat 0,8375 Berat kertas + sisa 0,4377 Berat zat 0,3998
2. Perhitungan pembakuan Natrium Hidroksida 0,1 N Diketahui : Bobot kalium biftalat = 0,3998 g = 399,8 mg
BM kalium biftalat = 204,2 Volume NaOH = 21,35 mL Reaksi : KHC5H4O4 + NaOH KNaC5H4O4 + H2O Perhitungan : N NaOH = = , , , = 0,0917 N
LAMPIRAN 4.Spektrogram penetapan panjang gelombang maksimum alopurinol untuk Spektrofotometri UV
a. Kosentrasi 4 μg/mL
b. Konsentrasi 8 μg/mL
LAMPIRAN 5.Data penimbangan kurva baku sampel tablet obat 1. Tabel keseragaman bobot tablet obat
No. Bobot tablet (mg) No. Bobot tablet (mg)
1. 307,9 11. 307,1 2. 310,1 12. 303,9 3. 311,4 13. 305,9 4. 306,4 14. 310,0 5. 307,5 15. 302,0 6. 305,6 16. 302,0 7. 306,0 17. 302,7 8. 309,2 18. 304,1 9. 305,6 19. 303.2 10. 304,4 20. 304,8 Σ = 6119,8 SD = 2,7388 ̅ = 305,99 CV = 0,8951%
2. Penimbangan baku alopurinol untuk pembuatan kurva baku
Penimbangan Replikasi I (g) Replikasi II (g) Replikasi III(g)
Berat kertas 0,2560 0,2455 0,2545 Berat kertas + zat 0,3064 0.2961 0,3050 Berat kertas + sisa 0,2564 0,2461 0,2550 Berat zat 0,0500 0,0500 0,0500
3. Data persamaan kurva baku dalam sampel tablet obat
Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3
Konsentrasi(µg/mL) Abs Konsentrasi
(µg/mL) Abs Konsentrasi (µg/mL) Abs 4 0,256 4 0,253 4 0,253 6 0,356 6 0,355 6 0,367 8 0,453 8 0,460 8 0,475 10 0,563 10 0,570 10 0,587 12 0,659 12 0,686 12 0,683 14 0,755 14 0,776 14 0,798 y = 0,050 x + 0,055 y = 0,053 x + 0,039 y = 0,054 x +0,040 r = 0,999 r = 0,999 r = 0,999
NB : Ketiga kurva baku diatas dimasukkan ke dalam program powerfit dan diperoleh persamaan y = 0.045 + 0.052 x dengan linearitas 0,998.
4. Contoh perhitungan kadar Replikasi 1
Tingkat kemurnian alopurinol = 100,51 (berdasarkan CoA pada lampiran 1) Jumlah allopurinol = 50 mg x 100,51% = 5025,5 mg C stok = 5025,5 mg/50 mL = 1,0051 mg/ml = 1005,1 μg/mL C1V1 = C2V2 C baku intermediet 1 →1005,1 x 1 mL = C2 x 10 mL C2= 100,51 μg/mL C baku intermediet 2 →100,51 x 10 mL = C2 x 50 mL C2= 20,102 μg/mL Seri 1→ 20,102 μg/mL x 2 mL = C2 x 10 mL C2 = 4,0204μg/mL≈ 4 μg/mL
NB : perhitungan seri baku lainnya dilakukan dengan cara yang sama dengan menyesuaikan volume larutan baku intermediet 2 yang diambil.
LAMPIRAN 6.Perhitungan Limit of Detection sampel tablet obat Persamaan regresi linier yang diperoleh, y = 0,052x - 0,045
Polynomial Degree is: 1 , based on 18 data points (#1 to #18) POLYNOMIAL is: F(x) = 0.04479 + 0.05246 x
higher degree is no significant improvement: F(1,15,95.0%) = 4.542 > F_obs = 0.197
Coefficients, Standard Deviations and 95.0% Confidence Limits are: Coefficient Std.Dev. Min.Limit Max.Limit
a0 4.47873E-002 7.62142E-003 2.86298E-002 6.09448E-002 a1 5.24619E-002 7.91724E-004 5.07834E-002 5.41404E-002 Variance Y, S^2 = 1.316337302E-004
Covariance matrix of Coefficients: 5.80860E-005 -5.64145E-006 -5.64145E-006 6.26827E-007 Correlation Coefficient: 0.99818
x value at y = 0: -0.854 Std.Dev.: 0.157 Range: -1.2E+000 < x0 < -5.2E-001
Perhitungan :
LOD = ,
= , , .
,
LAMPIRAN 7.Spektogram scaning panjang gelombang maksimum alopurinol a. Alopurinol 5 μg/mL
b. Alopurinol 7,5 μg/mL
d. Alopurinol 12,5 μg/mL
LAMPIRAN 8.Perhitungan polaritas Diketahui data berikut :
Pelarut / Solvent Polarity Index
Metanol 5,1
Air 10,2
Perhitungan polarity index pelarut dalam penentuan panjang gelombang : 1. Pelarut NaOH 0,1 N dalam 100% air
Indeks polaritas = 10,2 = 10,2
2. Pelarut amonium hidroksida 5% dalam metanol = 5:95
Indeks polaritas = 10,2 + 5,1 = 0,51 + 4,84 = 5,35 ≈5,4
Perhitungan polarity indexfase gerak:
3. Fase gerak metanol : akuabides + ammonium hidroksida 5% = 10:90
Indeks polaritas = 5,1 + 10,2 = 0,51 + 9,18 = 9,69
4. Fase gerak metanol : akuabides + ammonium hidroksida 5% = 20:80
Indeks polaritas = 5,1 + 10,2 = 1,02 + 8,16 = 9,18
5. Fase gerak metanol : akuabides + ammonium hidroksida 5% = 30:70
LAMPIRAN 9. Kromatogram hasil optimasi fase gerak metanol :amonium hidroksida 0,1% dalam akuabides (10:90)
1. Flow rate 0,5 mL/menit
Kromatogram alopurinol konsentrasi 20 g/mL
Contoh perhitungan nilai Resolusi (flow rate 0,5 mL/menit) Diketahui : tR0 = 4,402 menit tR1 = 4,884 menit
w ½ h0 = 0 menit w ½ h1 = 0,221 menit keterangan : 0,65 cm = 0,5 menit ; 1 cm = 1,3 menit
Rs =
( ) = , ,
2. Flow rate 0,8 mL/menit
3. Flow rate 1 mL/menit
LAMPIRAN 10. Kromatogram hasil optimasi fase gerak metanol :amonium hidroksida 0,1% dalam akuabides (20:80)
1. Flow rate 0,5 mL/menit
2. Flow rate 0,8 mL/menit
3. Flow rate 1 mL/menit
LAMPIRAN 11. Kromatogram hasil optimasi fase gerak metanol :amonium hidroksida 0,1% dalam akuabides (30:70)
1. Flow rate 0,5 mL/menit
2. Flow rate 0,8 mL/menit
3. Flow rate 1 mL/menit
LAMPIRAN 12.Kromatogram alopurinol untuk pembuatan kurva baku, uji kesesuaian sistem dan penentuan LOD periode I
Replikasi 1
a. Seri 1 (101 ng)
b. Seri 2 (201 ng)
c. Seri 3 (302 ng)
e. Seri 5 (503 ng)
Replikasi II a. Seri 1 (101 ng)
c. Seri 3 (302 ng)
e. Seri 5 (503 ng)
Replikasi III a. Seri 1 (101 ng)
c. Seri 3 (302 ng)
e. Seri 5 (503)
LAMPIRAN 13.Penimbangan dan contoh perhitungan kadar baku periode I a. Penimbangan
Penimbangan Replikasi I (g) Replikasi II (g) Replikasi III (g)
Berat kertas 0,2133 0,2141 0,2125 Berat kertas + zat 0,2383 0,2391 0,2375 Berat kertas + sisa 0,2133 0,2141 0,2125 Berat zat 0,0250 0,0250 0,0250 b. Data AUC Replikasi Massa alopurinol (ng)
AUC Persamaan Persamaan
kumulatif 1 101 247249 F(x) = -471920.3 + 6859.7 x r= 0.999 F(x) = -477792.8 + 6876.6 x r = 0.999 201 818744 302 1654925 402 2309629 503 2986392 603 3639311 2 101 245974 F(x) = -480792.2 + 6886.3 x r = 0.999 201 813919 302 1651463 402 2307736 503 2986772 603 3653295 3 101 245746 F(x) = -480665.7 + 6883.9 x r = 0.999 201 815105 302 1650687 402 2306361 503 2981560 603 3655325
c. Contoh perhitungan kadar Replikasi I
Tingkat kemurnian alopurinol = 100,51 (berdasarkan CoA pada lampiran 1) Jumlah alopurinol = 25 mg x 100,51% = 25,1275 mg
C stok = 25,1275 mg/25 mL = 1005,1 mg/1000 mL = 1005,1g/mL
C1V1 = C2V2
C baku intermediet →1005,1 x 5 mL = C2 x 10 mL C2 = 502,55g/mL
Seri 1→ 502,55g/mL x 0,1 mL = C2 x 10 mL x volume inject
C2 = 5,0255g/mL x 20 L = 5,0255 ng/L x 20 L = 100,51 ng
= 101 ng
NB : perhitungan seri baku lainnya dilakukan dengan cara yang sama dengan menyesuaikan volume larutan baku intermediet yang diambil.
LAMPIRAN 14.Perhitungan Limit of Detection periode I
Konsentrasi
(g/mL) Replikasi Massa (ng) AUC
5 1 101 247249 2 245974 3 245746 10 1 201 818744 2 813919 3 815105 15 1 302 1654925 2 1651463 3 1650687 20 1 402 2309629 2 2307736 3 2306361 25 1 503 2986392 2 2986772 3 2981560 30 1 603 3639311 2 3653295 3 3655325 Regresi A -477792,8 Y = -477792,8 + 6876,6 x Bx 6876,6 R 0.999
Nilai Sa diperoleh dari program Powerfit (Utrecht University Faculteit Scheikunde) Sa = 2,66.104 Perhitungan LOD : = 3,3 = 3,3 2,60.10 6876,6 = 12,5 ng
LAMPIRAN 15.Kromatogram alopurinol untuk pembuatan kurva baku, uji kesesuaian sistem dan penentuan LOD periode II
Replikasi I a. Seri 1 (1 ng)
c. Seri 3 (3 ng)
Replikasi II a. Seri 1 (1 ng)
c. Seri 3 (3 ng)
Replikasi III a. Seri 1 (1 ng)
c. Seri 3 (3 ng)
LAMPIRAN 16. PerhitunganLimit of Detection periode II
Konsentrasi
(g/mL) Replikasi Massa (ng) AUC
0.1 1 1 18307 2 16573 3 16871 0.2 1 2 22397 2 21598 3 21857 0.3 1 3 27433 2 26991 3 27438 0.4 1 4 34450 2 34521 3 34305 Regresi A 11013 Y = 11013 + 5686.2 x Bx 5686.2 R 0.993
Nilai Sa diperoleh dari program Powerfit (Utrecht University Faculteit Scheikunde) Sa = 5,86.102 Perhitungan LOD : = 3,3 = 3,3 5,86.10 5686,2 = 0,3 ng
LAMPIRAN 17. Perhitungan Uji T untuk slope kurva baku alopurinol periode I dan periode II
t hitung =
untuk mencari nilai s digunakan rumus : s2=( ) ( )
( ) = ( ) . ( ) ( ) = 20668.15 s = 143.76 t hitung = . . . = 22,38 t tabel= 2,048
karena nilai t hitung (22,38) lebih besar daripada t tabel (2,048) pada tingkat kepercayaan 95% dengan harga degree of freedom 28, maka nilai slope antara kurva baku Idan II berbeda signifikan.
BIOGRAFI PENULIS
Penulis bernama lengkap Meta Kartika Sari dan akrab dipanggil Meta merupakan anak tunggal dari pasangan Ong Tian Tjoan dan Yellis Gunawan.Penulis dilahirkan di Tangerang pada tanggal 28 Mei 1992. Pendidikan formal yang pernah ditempuh penulis yaitu di TK Kristen Kanaan Tangerang (1998), SD Kristen Kanaan Tangerang (2004), SMP Strada Santa Maria 1 Tangerang (2007), SMA Santo Thomas Aquino Tangerang (2010) dan pada tahun 2010 melanjutkan pendidikan di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta sampai tahun 2014. Selama menjadi mahasiswa penulis aktif dalam berbagai kegiatan antara lain Kampanye Informasi Obat (KIO) sebagai volunteer (2010), KMBK Dharma Virya sebagai sie pendidikan (2011), Komisi Pemilihan Umum KMBK Dharma Virya dan HUT KMBK sebagai koordinator acara (2012), Organisasi Dewan Perwakilan Mahasiswa Fakultas Farmasi sebagai anggota divisi publikasi dan informasi (2012), Seminar Motivasi Andrie Wongso “Who Are You, Give or Be Given”
sebagai bendahara (2012), Komisi Pemilihan Umum Gubernur Badan Eksekutif Mahasiswa dan Ketua Dewan Perwakilan Mahasiswa Fakultas Farmasi sebagai sie acara (2013), asisten dosen praktikum Analisis Farmasi (2014), dan Validasi Metode (2014).