Saran - KESIMPULAN DAN SARAN - Pengaruh ekstrak etanolik daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

B. Saran

a. Perlu dilakukan uji sitotoksik menggunakan sel normal untuk mengetahui selektifitas ekstrak etanol daun sirih merah.

b. Perlu dilakukan fraksinasi terhadap ekstrak etanol daun sirih merah yang selanjutnya diteliti aktivitas sitotoksik, mekanisme induksi apoptosis, dan penekanan ekspresi COX-2 pada sel WiDr.

DAFTAR PUSTAKA

Abdolmohammadi, M.H., Fouladdel, S., Shafiee, A., Amin, G., Ghaffari, S.M.,and Azizi, E., 2008, Anticancer Effect and Cell Cycle Analysis on Human Breast Cancer T47D Cells Treated with Extracts of Astrodaucus persicus (Boiss.) Drude in Comparison to Doxorubicin, DARU, 16(2), 112-118.

Agnes, Lois, Aning, and Nani, 2013, Ekstraksi Kulit Petai Sebagai Sumber Antioksidan Alami dengan Metode Domestic Microwave Maceration, Jurnal Teknik Kimia Indonesia, 11(5), 237-242.

Agoes, A., 2010, Tanaman Obat Indonesia, Buku 1, Salemba Medika, Jakarta, pp.85-87.

Alfarabi, M., Bintang, M., Suryani, and Safithri, M., 2010, The Comparative Ability of Antioxidant Activity of Piper crocatumin Inhibiting Fatty Acid Oxidation and Free Radical Scavenging, Hayati J. Biosci, 17(4), 201-204. American Cancer Society, 2014, Colorectal Cancer Facts & Figures,

www.cancer.org/research/cancerfactsstatistics/colorectal-cancer-facts- figures, diakses tanggal 25 Januari 2015.

Aspinall, R.J., and Taylor-Robinson, S.D., Mosby's Color Atlas and Text of Gastroenterology and Liver Disease, Elseveir, Canada, p. 50.

Astuti, P., Wahyono, and Nababan, O.A., 2014, Antimicrobial and Cytotoxic Activities of Endophytic Fungi Isolated from Piper crocatum Ruiz & Pav, Asian Pac J Trop Biomed, 4(2), 592-596.

Awik, P.D.N., Sukardiman, and Tri, W.N., 2011, Uji Sitotoksisitas dan Efek Ekstrak Spons Laut Aatos suberitoides Terhadap Sel Kanker Payudara (T47D) Secara In Vitro, Department of Biology, Sepuluh Nopember Institute of Technology, Surabaya, pp. 2-11.

Azhar, T.N., 2008, Dasar-Dasar Biologi Molekuler, Widya Padjadjaran, Bandung, pp. 114.

Bachran, C., Bachran, S., Sutherland, M., Bachran, D., and Fuchs, H., 2008, Saponins in Tumor Therapy, Mini Rev Med Chem, 8(6), 575–584.

Chrestella, J., 2009, Neoplasma, Departemen Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran, Universitas Sumatra Utara, Medan, pp. 3-4.

Corwin, E.J., 2008, Handbook of Pathophysiology, 3rd Ed., diterjemahkan oleh Subekti, N.B., hal. 43, 81-82, 85, EGC, Jakarta.

Da’I, Meiyanto, M., Supardjan, E., and Agustina, D., 2004, Efek Antiproliferatif Pentagamavunon-0 terhadap Sel Myeloma, Sains Kesehatan, 17(1), 5. Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 2007, Pedoman Pengendalian

Kanker, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta.

Deore, S.L., Khadabadi, S.S., Baviskar, B.A., Khangenbam, R.A., Koli, U.S., Daga, N.P., et al., 2009, Invitro Antioxidant Activity and Phenolic Conten of Croton caudatum, International Journal of Chemical Technology Research, 1(2), 174-176.

Devi, P.U., 2005, Basics of Carcinogenesis, Health Administrator, 16(1), 16-24. Doyle, A., and Griffiths, J.B., 2000, Cell and Tissue Culture for Medical

Research, John Willey & Sons LTD, England, pp. 215-217.

El-Sayyad, H., Ismail, M.F., Shalaby, F.M., Abou-El-Magd, R.F., Gaur, R.L., Fernando, A., et al., 2009, Histopathological Effects of Cisplatin, Doxorubicin and 5-flurouracil (5-FU) on The Liver of Male Albino Rats, Int. J. Biol. Sci., 5(5), 446-473.

Ernawati, F., 2010, Uji Sitotoksik Isolat Aktif dari Ekstrak Kloroform Rumput Mutiara (Hedyotis corymbosa (L.) Lamk.) Terhadap Sel Hela dan SiHa, Skripsi, 17-18, Universitas Surakarta.

Fauziah, F.F., Juswono, U.P., and Herwiningsih, S., 2013, Pengaruh Pemberian Buah Manggis, Buah Sirsak dan Kunyit terhadap Kandungan Radikal Bebas pada Daging Sapi yang diradiasi dengan Sinar Gamma, Laporan Penelitian, Universitas Brawijaya, Malang.

Ferlay, J., Shin, H. R., Bray, F., Forman, D., Mathers, C., and Parkin, D.M., 2010, Estimates of Worldwide Burden of Cancer in 2008: Globocan 2008, Int J Cancer, 127(12), 2893-2917

Fitriyani, A., Winarti, L., Muslichah, S., and Nuri, 2011, Uji Antiinflamasi Ekstrak Metanol Daun Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) Pada Tikus Putih, Majalah Obat Tradisional, 16(1), 35.

Foesslien, E., 2001, Molecular Pathology of Cyclooxygenase-2 in Cancer-induce Angiogenesis, Ann Clin Lab Sci, 32(4), 325-340.

Freshney, R.I., 2005, Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique, Forth Edition, John Wiley & Sons, Inc Publications, New York, pp. 40.

Gaylord Chemical’s, Dimetyl Sulfoxide (DMSO) Health and Safety Information, www.researchgate.net/publictopics.PublicPostFileLoader.html?id=547d95 e4d2fd6436518b468c&key=e0af7d46-c953-4a40-bd0f-a3f9213e8328, diakses tanggal 15 Maret 2015.

Ghosh, N., Chaki, R., Mandal, V., and Mandal, S.C., 2010, COX-2 as a Target for Cancer Chemotherapy, Pharmacological Reports, 62, 236.

Goldie, S.J., Gaffikin, L., Jeremy D., Amparo G.T., Levin, C.I., and Thomas, C., 2005, Cost-Effectiveness of Cervical Cancer Screening in Five Developing Countries, N Engl J Med., 353(21), 58-68.

Gonzales-Angulo, A.M., Fuloria, J., and Prakash, O., 2002, Cyclooxygenase-2 Inhibitors and Colon Cancer, The Ochsner Journal, 4, 176.

Hanahan, D., and Weinberg, R.A., 2000, The Hallmarks of Cancer, Cell, 100, 59- 60.

Hartati, M.S., Mubarika, S., Bolhuis R.L.H., Nooter, K., Oostrum, R.G., Boersma, A.W.M., et al., 2003, Sitotoksisitas Rimpang Temu Mangga (Curcuma mangga Val. &V. Zijp.) dan Kunir Putih (Curcuma zedoaria I.) Terhadap Beberapa Sel Kanker Manusia (in Vitro) dengan Metoda SRB, Berkala llmu Kedokteran, 35(4), 198.

Hartwich, A., Konturek, S.J., Pierzchalski, P., Zuchowicz, M., Konturek, P.C., Bielanski, W., et al., 2001, Molecular Basis of Colorectal Cancer-Role of Gastrin and Cyclooxygenase-2, Med Sci Monit, 7(6), 1172.

IHC World, Introduction to Immunocytochemistry, www.ihcworld.com/protocols /general_ICC/introduction.htm, diakses tanggal 4 Maret 2015.

Immanuel, H., 2015, Uji Aktivitas Antikanker Ekstrak Etil Asetat Daun Keladi Tikus (Typhonium flagelliforme) Terhadap Sel Kanker Kolon WiDr Melalui Penekanan Ekspresi Protein COX-2, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.

Jatmika, Y.N., 2013, Tanaman-Tanaman Hias Ajaib untuk Kecantikan dan Kesehatan, Buku Biru, Yogyakarta, pp. 100-101.

Katrin, E., Komarudin, D., Susanto, and Winarno, H., 2013, Pengaruh Iradiasi Gamma Terhadap Sitotoksisitas Daun Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) pada Sel Leukemia L1210, A Scientific Journal for The Applications of Isotopes and Radiation, 9(2), 113-127.

Khanbabaee, K., and Ree, T.V., 2001, Tannins Classification and Definition, Nat Prod Rep, 18, 641.

Khomsan, A., 2009, Rahasia Sehat dengan Makanan Berkhasiat, Buku Kompas, Jakarta, pp. 16-17

Kim, S.J., Cheung, S., Hellerstein, M.K., 2004, Isolation of Nuclei from Label- retaining Cells and Measurement of Their Turnover Rates in Rat Colon, Am J Physiol Cell Physiol, 286(6), 1464-1473.

Korsmeyer, S.J., Wei, M.C., Saito, M., Weiler, S., Oh, K.J., and Schlesinger, P.H., 2000, Pro-apoptotic Cascade Activates BID, which Oligomerizes BAK or BAX into Pores That Result in The Release of Cytochrome C, Cell Death Differ, 7, 1166–1173.

Kumar, V., Abbas, A.K., and Fausto, N., 2005, Robbins and Cotran Pathologic Basic of Disease, 7th Ed., diterjemahkan oleh Pendit, B.U., hal 3-4, 10-12, 18, 58, 287, 294, 298, 304-328, 885-887, EGC, Jakarta.

Lendra, K.N., 2014, Aktivitas Antiogenesis Ekstrak Etanolik Daun Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav.) pada Chorioallantoic Membrane yang Diinduksi oleh bFGF, Skripsi, 57, Universitas Sanata Dharma Yogyakarta Levrero, M., Laurenzi, V.D., Constanzo, A., Sabatini, S., Gong, J., Wang, J.Y.J.,

et al., 2000, The p53/p63/p73 Family of Transcription Factors: Overlapping and Distinct Functions, Journal of Cell Science, 113, 1661. Lin, J., Zhang, S.M., Wu, K., Willett, W.C., Fuchs, C.S., and Giovannucci, E.,

2006, Flavonoid Intake and Colorectal Cancer Risk in Men and Women, Am J Epidemiol, 164, 644–651.

Liu, H.C., Chen, G.G., Vlantis, A.C., Leung, B.C.S., Tong, M.C.E., and van Hasselt, C.A., 2006, 5-Fluorouracil Mediates Apoptosis and G1/S Arrest in Laryngeal Squamous Cell Carcinoma via a p53-Independent Pathway, The Cancer Journal, 12(6), 482-483.

Maretniatin, C.D., 2008, Uji Potensi Ekstrak Etanolik Daun Sirih Merah Terhadap Candida albicans Secara In Vitro, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta, p. 56.

Markowitz, S.D., 2007, Aspirin and Colon Cancer-Targetting Prevention, N. Engl. J. Med., 356(21), 2195.

Maryati and Sutrisna, E.M., 2011, Fraksi Petroleum Eter Tanaman Ceplukan (Physalis angulata L.) Menghambat Proliferasi dan Memacu Apoptosis pada Sel HeLa, Biota, 16(1), 82,84.

Ma’mun, Suhirman, S., Manoi, F., Sembiring, S., Tritianingsih, Sukmasari, M., et.al., 2006, Teknik Pembuatan Simplisia dan Ekstrak Purwoceng, Laporan Pelaksanaan Penelitian Tanaman Obat dan Aromatik, 315-316, 318, 321.

McPhee, S.J., and Ganong, W.F., 2006, Pathophysiology of Disease: An Introduction to Clinical Medicine, 5th Ed., diterjemahkan oleh Pendit, B.U., hal. 107-108, EGC, Jakarta.

Meyerhardt, J.A., and Mayer, R.J., 2005, Systemic Therapy for Colorectal Cancer, N Engl J Med., 352(5), 476-487.

Muller-Decker, K., Neufang, G., Berger, L., Neumann, M., Marks, F., Furstenberger, G., 2002, Transgenic Cyclooxygenase-2 Overexpression Sensitizes Mouse Skin for Carcinogenesis, Proc Natl Acad Sci., 99(19), 12483-12488.

Naghshvar, F., Torabizadeh, Z., Emadian, O., Enami, K., and Ghahremani, M., 2009, Correlation of Cyclooxygenase-2 Expression and Inflammatory Cells Infiltration in Colorectal Cancer, Pak. J. Biol. Sci., 12(1), 98-100. Nijveldt, R.J., van Nood, E., van Hoorn, D.E.C., Boelens, P.G., van Norren, K.,

and van Leeuwen, P.A.M., 2001, Flavonoids: A Review of Probable Mechanisms of Action and Potential Applications, Am J Clin Nutr, 74, 418–425.

Nertika, K., 2008, Uji Sitotoksisitas Ekstrak Etanolik Daun Sirih Merah Terhadap Kultur Sel Kanker Payudara, Skripsi, 16-17, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.

Nurrochmad, A., 2004, Review: Pandangan Baru Kurkumin dan Aktivitasnya Sebagai Antikanker, Biofarmasi, 2(2), 75-80.

Oktaviani, Dina, Subakir, and Firdaus, W., 2012, Uji Banding Efektivitas Ekstrak Daun Sirih Merah (Piper crocatum) 100% Terhadap Pertumbuhan Pityrosporum ovale pada Penderita Berketombe, Media Medika Muda, 1(1), 2.

Palozza, P., Serini, S., Maggiano, N., Giuseppe, T., Navarra, P., and Ranelletti,

F.O., 2005, β-Carotene Downregulates the Steady-State and Heregulin-a- Induced COX-2 Pathways in Colon Cancer Cells, J.Nutr., 135, 129. Rahmawati, Sukardiman, and Muti, 2013, Aktivitas Antikanker Ekstrak N-

Heksana dan Ekstrak Metanol Herba Pacar Air (Impatiens balsamina Linn) terhadap Sel Kanker Payudara T47D, Media Farmasi, 10(2), 47-55.

Ranger, G.S., Salhab, M., and Mokbel, K., 2008, The Role of Cyclooxygenase-2 in Breast Cancer, Breast Cancer Res Treat, 109, 189-198.

Reha, D., Kabelac, M., Ryjacek, F., Sponer, J., Sponer, J.E., Elstner, et al., 2003, Nature of Stacking Interactions Between Intercalators (Ethidium,

Daunomycin, Ellipticine, and 4′,6-diaminide-2-phenylindole) and DNA Base Pairs, J. Am. Chem. Soc, 124, 3366-3376.

Ren, Qiao, Wang, Zhu, and Zhang, 2003, Flavonoids: Promising Anticancer Agents, Med Research Rev, 23(4), 519-534.

Ribble, D., Goldstein, N.B., and Shellman, Y.G., 2005, A Simple Technique for Quantifying Apoptosis in 96-well Plates, BMC Biotechnology, 5(12), 1-2. Ricci, M.S., and Zong, W.X., 2006, Chemotherapeutic Approaches for Targeting

Cell Death Pathways, The Oncologist, 11, 354.

Safithri, M., and Fahma, F., 2008, Potency of Piper crocatum Decoction as an Antyhiperglycemia in Rat Strain Sparague dawley, Hayati J. Biosci, 15(1), 45-48.

Sarmoko, 2012, Peningkatan Sensitivitas Doksorubisin oleh Hesperitin Terhadap Sel MCF-7 Melalui Penghambatan Ekspresi P-Glikoprotein, Tesis, 1, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.

Sayin, V.I., Ibrahim, M.X., Larsson, E., Nilsson, J.A., Lindahl, P., Bergo, M.O., 2014, Antioxidants Accelerate Lung Cancer Progression in Mice, Sci Transl Med, 6, 1-8.

Sinicrope, F., and Gills, S., 2004, Role of Cyclooxygenase-2 in Colorectal Cancer, Cancer and Metastatis Reviews, 23, 65-75.

Shao, J., Lee, S.B., Gou, H., Evers, M., and Sheng, H., 2003, Prostaglandin E2 Stimulates the Growth of Colon Cancer Cells via Induction of Amphiregulin, Cancer Res, 63, 5218-5223.

Shin, J.Y., An, H.J., Lee, Y.H., Kim, S.K., Lee, K.P., and Lee, K.S., 2003, Overexpression of Cyclooxygenase-2 is Associated with Breast Carcinoma and Its Poor Prognostic Factors, J Mod Pathol, 16 (12), 1199- 1204.

Sudewo, B., 2010, Basmi Penyakit dengan Sirih Merah, Agro Media Pustaka, Jakarta, p. 1.

Sudiana, I.K., 2008, Patobiologi Molekuler Kanker, Salemba Medika, Jakarta, pp. 1-3, 46.

Suhermanto, 2013, Profil Flavonoid, Tanin, dan Alkaloid dari Ekstrak Daun Sirih Merah (Piper crocatum), Skripsi, 16, Institut Pertanian Bogor, Bogor.

Talaprata, S., and Thompson, C.B., 2001, Growth Factor Signaling in Cell Survival Implications for Cancer Treatment, J Pharmacol Exp Ther, 298, 873-878.

Triana, E., Yulinery, T., and Nurhidayat, N., 2014, Analisis Citrinin, Lovastatin, dan Pigmen Pada Angkak Hasil Fermentasi Beras Ir 42 dengan Monascus purpureus Hasil Mutagenesis Etidium Bromida, Prosiding SNaPP 2014 Sains, Teknologi, dan Kesehatan, 459-466.

The Human Protein Atlas, Immunocyctochemistry, http://www.proteinatlas.org/ learn/method/immunocytochemistry, diakses tanggal 4 Maret 2015. The International Agency for Research on Cancer, 2013, Latest World Cancer

Statistics Global Cancer Burden Rises to 14,1 Million New Cases in 2012, World Health Organization, France, p.1

Tong, Qing, Shu, He, Zhao, Li, et al., 2011, A Steroidal Saponin, Inhibits Colon Cancer Cell Growth in Vitro and Tumor Growth in Vivo via Induction of Apoptosis and Antiangiogenesis, Karger Medical and Scientific Publisher, 27, 3-4.

Violante, D.G., Zerrouk, N., Richard, I., Provot, G., Chaumeil, J.C., and Arnaud, P., 2002, Evaluation of the Cytotoxicity Effect of Dimethyl Sulfoxide (DMSO) on Caco2/TC7 Colon Tumor Cell Cultures, Biol Pharm Bull, 25(12), 1600-1603.

Wattanapitayakul, S.K., Chularojmontri, L., Herunsalee, A., Charuchokolwongse, S., Niumsakul, S., and Bauer, J.A., 2005, Screening of Antioxidants from Medicinal Plants for Cardioprotective Effect Against Doxorubicin Toxicity, Basic & Clinical Pharmocology & Toxicology, 96, 80-87.

Werdhany, I., Marton, A., and Setyorini, W., 2008, Sirih Merah, Balai Pengkajian Teknologi Pertanian Yogyakarta, Yogyakarta, p. 3.

Wicaksono, B.D., Handoko, Y.A., Arung, E.T., Kusuma, I.W., Yulia, D., Pancaputra, A.N., et al., 2009, Antiproliferative Effect of the Methanol Extract of Piper crocatum Ruiz & Pav Leaves on Human Breast (T47D) Cells In-vitro, Trop. J. Pharm. Res., 8(4), 345-352.

Wolpert, L., 2009, How We Live and Why Die: The Secret Lives of Cells, diterjemahkan oleh Leo, P., hal. 48, Mizan Pustaka, Bandung.

Zhang, H., and Sun, X-P., 2002, Overexpression of Cyclooxygenase-2 Correlates with Advanced Stages of Colorectal Cancer, The American Journal Of Gastroenterology, 97 (4), 1038.

Zheng, Z., Huang, W., Yang, Y., Li, Z., Cai, J., and Su, H., 2000, Detection of Antitumor and Antimicrobial Activities in Marine Organism Associated Actinomycetes Isolated from the Taiwan Strait, China, Microbiol Lett, 188, 87–91.

Lampiran 1.

Pengolahan data uji sitotoksik MTT assay

1. Data Konsentrasi Ekstrak Etanol Daun Sirih Merah dengan Absorbansi

No. Konsentrasi (µg/mL) log Konsentrasi Absorbansi

1 2 3 Rata - Rata 1 4000 3,602059991 0,137 0,137 0,138 0,137 2 2000 3.01029996 0,056 0,052 0,046 0,051 3 1000 3 0,379 0,434 0,376 0,396 4 500 2.698970004 0,611 0,613 0,608 0,611 6 100 2 0,718 0,749 0,732 0,733 7 10 1 0,781 0,832 0,908 0,840 8 1 0 0,860 0,843 0,832 0,845

2. Data Viabilitas Sel WiDr Dengan Tiga Kali Replikasi

No. Konsentrasi Ekstrak Etanol Daun Sirih Merah (µg/mL) Viabilitas Sel

v1 v2 v3 rata - rata SD 1 4000 3,323 3,323 3,442 3,363 0,069 2 2000 -6,347 -6,825 -7,541 -6,904 0,601 3 1000 32,212 38,778 31,854 34,282 3,898 4 500 59,908 60,147 59,550 59,869 0,300 6 100 72,682 76,383 74,353 74,473 1,853 7 10 80,203 86,291 95,364 87,286 7,629 8 1 89,634 87,604 86,291 87,843 1,684

3. Data Konsentrasi Ekstrak Etanol Daun Sirih Merah dengan Viabiitas Sel

No. _{Konsentrasi Ekstrak Etanol Daun Sirih Merah (µg/mL)} _{Viabilitas Sel}

1 ₄₀₀₀ _3,363 _96,637 2 ₂₀₀₀ _-6,904 _106,904 3 ₁₀₀₀ _34,282 _65,718 4 ₅₀₀ _59,869 _40,131 5 ₁₀₀ _74,473 _25,527 6 ₁₀ _87,286 _12,714 7 ₁ _87,843 _12,157

4. Data Absorbansi Kontrol Media dan Kontrol Sel

Absorbansi

Kontrol Media Kontrol Sel

0,938 0,09 0,996 0,095 0,988 0,094 0,917 0,167 0,959 0,101 0,883 0,108 0,947 0,109

Lampiran 3.

Dokumentasi uji sitotoksik MTT assay

Perlakuan Sebelum diberi MTT Sesudah diberi MTT

Ekstrak etanol daun sirih merah konsentrasi 1 µg/mL

Ekstrak etanol daun sirih merah konsentrasi 250

µg/mL

Ekstrak etanol daun sirih merah konsentrasi 2000

µg/mL

Ekstrak etanol daun sirih merah konsentrasi 4000

74 Lampiran 4.

Distribusi sel WiDr pada uji apoptosis dengan metode double staining

1. Perlakuan dengan Ekstrak Etanol Daun Sirih Merah

Sel Pengamat 1 Pengamat 2 Pengamat 3

Bagian Apoptosis Nekrosis Hidup Apoptosis Nekrosis Hidup Apoptosis Nekrosis Hidup

1 (Total Sel : 54) 44 (81,48%) 0 (0%) 10 (18,52%) 39 (72,22%) 0 (0%) 15 (27,78%) 42 (77,78%) 0 (0%) 12 (22,22%) 2 (Total Sel : 37) 36 (97,30%) 0 (0%) 1 (2,70%) 35 (94,59%) 0 (0%) 2 (5,41%) 37 (100%) 0 (0%) 0 (0%) 3 (Total Sel : 85) 82 (99,47%) 0 (0%) 3 (3,53%) 80 (94,12%) 0 (0%) 5 (5,88%) 75 (88,24%) 0 (0%) 10 (11,76%) Rata-rata tiap pengamat (%) 92,75 0 8,25 86,98 0 13,02 88,67 0 11,33

Apoptosis Nekrosis Hidup

Rata-Rata Pengamat 1 (%) 92,75 0 8,25

Rata-Rata Pengamat 2 (%) 86,98 0 13,02

Rata-Rata Pengamat 3 (%) 88,67 0 11,33

2. Kontrol Sel

Bagian Apoptosis Nekrosis Hidup

Pengamat 1 (%) 0 0,36 99,53

Pengamat 2 (%) 0 0 100

Pengamat 3 (%) 0 0,73 99,27

Rata-Rata Keseluruhan (%) ±SD 0 0,37±0,38 99,60±0,37

3. Doksorubisin

Sel Pengamat 1 Pengamat 2 Pengamat 3

Bagian Apoptosis Nekrosis Hidup Apoptosis Nekrosis Hidup Apoptosis Nekrosis Hidup

1 93,75% 0 6,25% 93,75% 0 6,25% 81,25% 12,25% 6,25%

2 100% 0 0 85,71% 14,28% 0 100% 0 0

3 90% 0 10% 90% 0 10% 90% 0 10%

Rata-rata tiap

pengamat (%) 94,58 0 5,41 93,75 4,76 5,42 90,41 4,17 5,41

Apoptosis Nekrosis Hidup

Rata-Rata Pengamat 1 (%) 94,58 0 5,42

Rata-Rata Pengamat 2 (%) 93,75 4,76 5,42

Rata-Rata Pengamat 3 (%) 90,42 4,17 5,42

76 Lampiran 5.

Hasil analisis statistik pada uji apoptosis dengan metode double staining

1. Uji normalitas dengan Shapiro-Wilk Test

a. Ekstrak etanol daun sirih merah Prosedur uji :

(1) Menentukan hipotesis H0 : data berdistribusi normal H1 : data tidak berdistribusi normal

(2) Data hasil penelitian diurutkan dari yang terkecil hingga yang terbesar besar. (3) Taraf kepercayaan, α = 0,05

(4) Menghitung statistik uji

 Nilai D

Rumus : D = ∑ ) Keterangan :

: angka ke i pada data : rata-rata data

Pengamat Rata-rata tiap pengamat Urutan rata-rata tiap

pengamat ( ) ) 1 92,75 86,98 -2,49 6,20 2 86,98 88,67 -0,80 0,64 3 88,67 92,75 3,28 10,76 89,47 D 17,6  Nilai T Rumus : T3 = [∑ )] Keterangan :

: koefisien test Shapiro Wilk : angka ke pada data

) [∑

)]

1 0,7071 86,98 92,75 5,77 4,08 16,65 0,95

(5) Menghitung singnifikansi uji

Signifikansi uji nilai T3 dibandingkan dengan nilai tabel Shapiro Wilk, untuk melihat posisi nilai probabilitasnya (p). Jika nilai p lebih dari 5%, maka H0 diterima ; H1 ditolak. Jika nilai p kurang dari 5%, maka H0 ditolak ; H1 diterima.

) )

Nilai T3 = 0,95 terletak diantara 0,789 (α = 0,1) dan 0,959 (α = 0,5). Nilai p tersebut lebih dari 5%, bearti H0 diterima, H1 ditolak, dan data berdistribusi normal.

b. Doksorubisin Prosedur uji :

(1) Menentukan hipotesis H0 : data berdistribusi normal H1 : data tidak berdistribusi normal

(2) Data hasil penelitian diurutkan dari yang terkecil hingga yang terbesar. (3) Taraf kepercayaan, α = 0,05

(4) Menghitung statistik uji

 Nilai D

Rumus : D = ∑ ) Keterangan :

: angka ke i pada data : rata-rata data

Pengamat Rata-rata tiap pengamat Urutan rata-rata tiap

pengamat ( ) ) 1 94,58 90,42 -2,5 6,25 2 93,75 93,75 0,83 0,69 3 90,42 94,58 1,66 2,76 92,92 D 9,7  Nilai T

Rumus : T3 = [∑ )] Keterangan :

: koefisien test Shapiro Wilk

: angka ke pada data : angka ke i pada data

) [∑

)]

1 0,7071 90,42 94,58 4,16 2,94 8,64 0,89

(5) Menghitung singnifikansi uji

Signifikansi uji nilai T3 dibandingkan dengan nilai tabel Shapiro Wilk, untuk melihat posisi nilai probabilitasnya (p). Jika nilai p lebih dari 5%, maka H0diterima ; H1 ditolak. Jika nilai p kurang dari 5%, maka H0 ditolak ; H1 diterima.

) )

Nilai T3= 0,89 terletak diantara 0,789 (α = 0,1)dan 0,959 (α = 0,5). Nilai p tersebut lebih dari 5%, bearti H0 diterima, H1 ditolak, dan data berdistribusi normal.

2. Uji kesamaan variansi

Prosedur uji :

a. Menentukan hipotesis

H0 : kedua data memiliki kesamaan variansi H1 : kedua data tidak memiliki kesamaan variansi b. Taraf kepercayaan, α = 0,05

c. Data hasil penelitian diurutkan dari yang terkecil hingga yang terbesar.

Ekstrak etanol daun sirih merah Doksorubisin

86,98 90,42

88,67 93,75

92,75 94,58

d. Menghitung nilai variansi tiap kelompok data menggunakan program Microsof Excel 2007 (F-Test Sample of Variances)

Ekstrak etanol daun sirih merah Doksorubisin

Rata-rata 89,47 92,92

Variansi 8,8 4,85

Observasi 3 3

Ekstrak etanol daun sirih merah Doksorubisin

F-hitung 1,82

Nilai signifikansi 0,36

F-tabel 19

e. Kesimpulan

Nilai F-hitung dibandingkan dengan nilai F-tabel. Jika nilai F-hitung < F-tabel, maka H0 diterima, H1 di tolak. Jika nilai F-hitung > F-tabel, maka H0 ditolak; H1 di terima. Pada penelitian ini, nilai F-hitung (=1,82) < F-tabel (=19), maka H0 diterima, H1 ditolak, dan kedua data memiliki kesamaan variansi.

3. Uji t-berpasangan

Prosedur uji :

a. Menentukan hipotesis

H0 : kedua data berbeda signifikan H1 : kedua data tidak berbeda signifikan b. Taraf kepercayaan, α = 0,05

c. Data hasil penelitian diurutkan dari yang terkecil hingga yang terbesar besar. Ekstrak etanol daun sirih

merah Doksorubisin

86,98 90,42

88,67 93,75

92,75 94,58

d. Menghitung nilai t tiap kelompok data menggunakan program Microsof Excel 2007 (t-Test : Paired Two Sample for Means)

Ekstrak etanol daun sirih merah Doksorubisin

Rata-rata 89,47 92,92

Variansi 8,8 4,85

Observasi 3 3

Korelasi Pearson 0,84

Selisih rata-rata pada hipotesis 0

df 2

t-hitung - 3,68

Nilai signifikansi (uji 1 pihak) 0,03

t-tabel (uji 1 pihak) 2,92

t-tabel (uji 2 pihak) 4,30

e. Uji signifikansi

Uji signifikansi dengan membandingkan besarnya nilai t-hitung dengan nilai t-tabel. Jika nilai t-hitung < t-tabel, maka H0 diterima, H1 di tolak. Jika nilai t-hitung > t-tabel, maka H0 ditolak; H1 di terima.Pada penelitian ini, nilai t-hitung (= -3,68)> t-tabel (= 4,30), maka H0 diterima, H1 ditolak, dan kedua data berbeda signifikan.

Lampiran 6.

Dokumentasi uji double staining

Keterangan Gambar

Double staining Kontrol Sel

Double staining Ekstrak Etanol Daun Sirih Merah (1)

Double staining Ekstrak Etanol Daun Sirih Merah (2)

Double staining Ekstrak Etanol Daun Sirih Merah (3)

82 Lampiran 7.

Hasil perhitungan uji ekspresi COX-2 dengan metode imunositokimia

1. Perlakuan dengan Ekstrak Etanol Daun Sirih Merah

Pengamat Preparat 1 (total sel = 170) Preparat 2 (total sel = 200) Preparat 3 (total sel = 165)

1 75(44,12%) 78(39%) 58(35,15%)

2 60(35,29%) 62(31%) 66(40%)

3 65(38,24%) 75(37,50%) 55(33,33%)

Rata-rata tiap preparat (%) 39,22 35,83 36,16

Rata-rata keseluruhan(%)±SD 37,07 ± 1,87

2. Kontrol sel

Pengamat Preparat 1 (total sel = 225) Preparat 2 (total sel = 240) Preparat 3 (total sel = 145)

1 155(68,89%) 135 (55,25%) 88(60,69%)

2 160(71,11%) 145(60,42%) 97(66,90%)

3 135(60%) 125(52,08%) 82(56,55%)

Rata-rata tiap preparat (%) 66,67 56,25 61,38

Rata-rata keseluruhan(%)±SD 61,43 ± 5,21

3. Doksorubisin

Pengamat Preparat 1 Preparat 2 Preparat 3

1 49(38,58%) 45(35,43%) 34(26,77%)

2 45(44,11%) 34 (33,33%) 40(39,21%)

3 43(28,28%) 51(33,55%) 45(29,60%)

Rata-rata tiap pengamat (%) 36,99 34,10 31,86

83 Lampiran 8.

Hasil analisis statistik pada uji imunositokimia

1. Uji normalitas dengan Shapiro-Wilk Test

a. Ekstrak etanol daun sirih merah Prosedur uji :

(1) Menentukan hipotesis H0 : data berdistribusi normal H1 : data tidak berdistribusi normal

(2) Data hasil penelitian diurutkan dari yang terkecil hingga yang terbesar. (3) Taraf kepercayaan, α = 0,05

(4) Menghitung statistik uji

Nilai D

Rumus : D = ∑ ) Keterangan :

: angka ke i pada data : rata-rata data

Pengamat Rata-rata tiap pengamat Urutan rata-rata tiap

pengamat ( ) ) 1 39,22 35,83 -1,24 1,54 2 35,83 36,16 -0,91 0,83 3 36,16 39,22 2,15 4,62 37,07 D 6,99 Nilai T Rumus : T3 = [∑ )] Keterangan :

: koefisien test Shapiro Wilk

) [∑

)]

1 0,7071 35,83 39,22 3,39 2,40 5,76 0,82

(5) Menghitung singnifikansi uji

Signifikansi uji nilai T3 dibandingkan dengan nilai tabel Shapiro Wilk, untuk melihat posisi nilai probabilitasnya (p). Jika nilai p lebih dari 5%, maka H0diterima ; H1 ditolak. Jika nilai p kurang dari 5%, maka H0ditolak ; H1 diterima.

) )

Nilai T3= 0,82 terletak diantara 0,789 (α = 0,1) dan 0,959 (α = 0,5). Nilai p tersebut lebih dari 5%, bearti H0 diterima, H1 ditolak, dan data berdistribusi normal.

b. Kontrol sel Prosedur uji :

(1) Menentukan hipotesis H0 : data berdistribusi normal H1 : data tidak berdistribusi normal

(2) Data hasil penelitian diurutkan dari yang terkecil hingga yang terbesar. (3) Taraf kepercayaan, α = 0,05

(4) Menghitung statistik uji

Nilai D

Rumus : D = ∑ ) Keterangan :

: angka ke i pada data : rata-rata data

Pengamat Rata-rata tiap pengamat Urutan rata-rata tiap

pengamat ( ) )

1 66,67 56,25 -5,18 26,83

2 56,25 61,38 -0,05 0,0025

3 61,38 66,67 5,24 27,46

85 Nilai T

Rumus : T3 = [∑ )] Keterangan :

: koefisien test Shapiro Wilk : angka ke pada data

: angka ke i pada data

) [∑

)]

1 0,7071 56,25 66,67 10,42 7,38 54,46 1,003

(5) Menghitung singnifikansi uji

) )

Nilai T3 = 1,00 terletak pada α = 0,999. Nilai p tersebut lebih dari 5%, bearti H0 diterima, H1 ditolak, dan data berdistribusi normal. c. Doksorubisin

Prosedur uji :

(1) Menentukan hipotesis H0 : data berdistribusi normal H1 : data tidak berdistribusi normal

(2) Data hasil penelitian diurutkan dari yang terkecil hingga yang terbesar. (3) Taraf kepercayaan, α = 0,05

(4) Menghitung statistik uji

Nilai D

Rumus : D = ∑ ) Keterangan :

: angka ke i pada data : rata-rata data

Pengamat Rata-rata tiap pengamat Urutan rata-rata tiap

pengamat ( ) )

86 2 34,10 34,10 -0,22 0,05 3 31,86 36,99 2,67 7,13 34,32 D 13,23 Nilai T Rumus : T3 = [∑ )] Keterangan :

: koefisien test Shapiro Wilk : angka ke pada data

: angka ke i pada data

) [∑

)]

1 0,7071 31,86 36,99 5,13 3,63 13,18 0,996

(5) Menghitung singnifikansi uji

) )

Nilai T3= 0,996 terletak diantara 0,959 (α = 0,5). dan 0,998 (α = 0,9). Nilai p tersebut lebih dari 5%, bearti H0 diterima, H1 ditolak, dan data berdistribusi normal.

2. Uji kesamaan variansi

a. Kontrol sel dengan ekstrak etanol daun sirih merah Prosedur uji :

(1) Menentukan hipotesis

H0 : kedua data memiliki kesamaan variansi H1 : kedua data tidak memiliki kesamaan variansi (2) Taraf kepercayaan, α = 0,05

(3) Data hasil penelitian diurutkan dari yang terkecil hingga yang terbesar.

Kontrol sel Ekstrak etanol daun sirih merah

61,38 36,16

66,67 39,22

(4) Menghitung nilai variansi tiap kelompok data menggunakan program Microsoft Excel (F-Test Sample of Variances)

Kontrol sel Ekstrak etanol daun sirih merah

Rata-rata 61,43 37,07 Variansi 27,15 3,49 Observasi 3 3 df 2 2 F-hitung 7,77 Nilai signifikansi 0,11 F-tabel 19 (5) Kesimpulan

Nilai F-hitung dibandingkan dengan nilai F-tabel. Jika nilai F-hitung < F-tabel, maka H0 diterima, H1 di tolak. Jika nilai F-hitung > F-tabel, maka H0 ditolak; H1 di terima.Pada penelitian ini, nilai F-hitung (=7,77) < F-tabel (=19), maka H0 diterima, H1 ditolak, dan kedua data memiliki kesamaan variansi.

b. Kontrol sel dengan doksorubisin Prosedur uji :

(1) Menentukan hipotesis

H0 : kedua data memiliki kesamaan variansi H1 : kedua data tidak memiliki kesamaan variansi (2) Taraf kepercayaan, α = 0,05

(3) Data hasil penelitian diurutkan dari yang terkecil hingga yang terbesar besar.

Kontrol sel Doksorubisin

56,25 31,86

61,38 34,10

66,67 36,99

(4) Menghitung nilai variansi tiap kelompok data menggunakan program Microsoft Excel (F-Test Sample Of Variances)

Kontrol sel Doksorubisin

Rata-rata 61,43 34,32

Variansi 27,15 6,61

Observasi 3 3

F-hitung 4,10

Nilai signifikansi 0,20

F-tabel 19

(5) Kesimpulan

Nilai F-hitung dibandingkan dengan nilai F-tabel. Jika nilai F-hitung < F-tabel, maka H0 diterima, H1 di tolak. Jika nilai F-hitung > F-tabel, maka H0 ditolak; H1 di terima. Pada penelitian ini, nilai F-hitung (=4,10) < F-tabel (=19), maka H0 diterima, H1 ditolak, dan kedua data memiliki kesamaan variansi.

c. Ekstrak etanol daun sirih merah dengan doksorubisin Prosedur uji :

(1) Menentukan hipotesis

H0 : kedua data memiliki kesamaan variansi H1 : kedua data tidak memiliki kesamaan variansi (2) Taraf kepercayaan, α = 0,05

(3) Data hasil penelitian diurutkan dari yang terkecil hingga yang terbesar.

Ekstrak etanol daun sirih merah Doksorubisin

35,83 31,86

36,16 34,10

39,22 36,99

(4) Menghitung nilai variansi tiap kelompok data menggunakan program Microsoft Excel (F-Test Sample Of Variances)

Doksorubisin Ekstrak etanol daun sirih merah

Rata-rata 34,32 37,07 Variansi 6,61 3,49 Observasi 3 3 df 2 2 F-hitung 1,89 Nilai signifikansi 0,35 F-tabel 19 (5) Kesimpulan

Nilai F-hitung dibandingkan dengan nilai F-tabel. Jika nilai F-hitung < F-tabel, maka H0 diterima, H1 di tolak. Jika nilai F-hitung > F-tabel, maka H0 ditolak; H1 di terima.Pada penelitian ini, nilai F-hitung (=1,89) < F-tabel (=19), maka H0 diterima, H1 ditolak, dan kedua data memiliki kesamaan variansi.

3. Uji t-berpasangan

a. Kontrol sel dengan ekstrak etanol daun sirih merah Prosedur uji :

(1) Menentukan hipotesis

H0 : kedua data memiliki kesamaan variansi

Dalam dokumen Pengaruh ekstrak etanolik daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz and Pav) terhadap sel kanker kolon WiDr. (Halaman 80-113)