BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN
5.2 Saran
1. Perlu dilakukan pencarian dan optimasi metode pencucian liposom yang lebih efektif dan efisien.
2. Dilakukan optimasi terhadap persentase asam oleat yang ditambahkan ke dalam formula, juga komposisi bahan-bahan penyusun liposom untuk menghasilkan liposom yang stabil terhadap pH netral dan basa, dan sensitif terhadap pH asam.
3. Perlu dilakukan orientasi dan optimasi terhadap waktu pelepasan obat yang optimum pada uji sensitivitas pH.
American Pharmaceutical Association. (1994). Handbook of Pharmaceutical Excipients (Second ed.). London: Pharmaceutical Press.
Anonim. Cholesterol. Diunduh 30 Desember 2010, dari Chemicalland21:
http://www.chemicalland21.com/lifescience/phar/CHOLESTEROL.htm Balamuralidhara, V., Pramodkumar, T. M., Srujana, N., Venkatesh, M., Gupta,
N. V., Krishna, K. L., et al. (2011). pH Sensitive Drug Delivery Systems:
A review. American Journal of Drug Discovery and Development , 1 (1), 24-48.
Barenholz, Y., & Crommelin, D. J. (1994). Liposomes as Pharmaceutical Dosage Forms. Dalam J. Swarbrick, & J. C. Boylan, Encyclopedia of Pharmaceutical Technology (Third ed., Vol. 9). New York: Marcel
Dekker Inc.
Biju, S. S., Talegaonkar, S., Mishra, P. R., & Khar, R. K. (2006). Vesicular Systems : An Overview. Indian Journal of Pharmaceutical Sciences , 144.
Christie, W. W. (2010). Phosphatidylcholine and Related Lipids. Diunduh 4 Januari 2011 dari http://lipidlibrary.aocs.org/lipids/pc.index.htm.
Connor, J., Yatvin, M. B., & Huang, L. (1984). pH-Sensitive Liposomes: Acid-Induced Liposome Fusion. Proceeding National Academy Science USA , 81, 1715-1718.
Departemen Kesehatan Republik Indonesia. (1979). Farmakope Indonesia Edisi III. Jakarta: Departemen Kesehatan.
Encyclopedia Britannica. (2007). Liposome In Encyclopædia Britannica. Diunduh
07 Januari 2011, dari:
http://www.britannica.com/EBchecked/topic/342910/liposome
Huang, L., & Zhou, X. (1988). Cytoplasmic Delivery of Proteins and DNA by pH-Sensitive Liposomes. Protein Traffic in Parasites and Mammalian CellsWorkshop. Nairobi: The International Laboratory for Research on Animal Diseases.
Inui, Y., Matsuda, H., Ueda, Y., Yamamouchi, K., & Hirama, M. (1991). Paten No. 90119235.1. Osaka.
Kaparissides, C., & et.al. (2006). Recent Advance in Novel Drug Delivery Systems. Journal of Nanotechnology Online .
Martin, F. J. (1990). Pharmaceuticals Manufacturing of Liposomes. Dalam P.
Tyle, Specialized Drug Delivery Systems Manufacturing and Production Technology. New York: Marcel Dekker, Inc.
Mayer, L. D., L., L. C., Bally, M. B., Miltilines, G. N., Ginsberg, R. S., & Cullis, P. R. (1990). Characterization of Liposomal Systems Containing
Doxorubicin Entrapped in Response to pH Gradients. Biochemica et Biophysica Acta (1025), 143-151.
Ranade, V. V., & Hollinger, M. A. (2003). Drug Delivery System Second Edition.
Florida, USA: CRC Press LLC.
Rane, S., & Prabhakar, B. (2009). Influence of Liposome Composition on Paclitaxel Entrapment and pH Sensitivity of Liposome. International Journal of PharmTech Research , 1 (3), 914-917.
Ropert, C. (1999). Liposomes as a Gene Delivery System. Brazilian Journal of Medical and Biological Research , 32 (2), 163-169.
Schroeder, A., Kost, J., & Barenholz, Y. (2009). Ultrasound, liposomes, and drug delivery: principles for using ultrasound to control the release of drugs from liposomes. Chemistry and Physics of Lipids , 1-16.
Shen, Y., Huadong, T., Radosz, M., Kirk., E. V.,Murdoch, W. J. (2008). pH-Responsive Nanoparticles for Cancer Drug Delivery. Dalam Kewal K. Jain (Ed.), Methods in Molecular Biology: Drug Delivery Systems (Vol. 437).
New York: Humana Press.
Shivhare, U. D., Ambulkar, D., Mathur, V. B., Bhusari, K. P., & Godbole, M.
(2009). Formulation and Evaluation of Pentoxifylline Liposome Formulation. Digest Journal of Nanomaterials and Biostructures , 4 (4), 857-862.
Sweetman, S. C. (2009). Martindale (36 ed.). London: Pharmacutical Press.
Stano, P., & Luisi, P. L. (2008). Self-Reproduction of Micelles, Reverse Micelles, and Vesicles: Compartments Disclose a Geeneral Transformation Pattern.
Dalam L. A. Liu (Ed.), Advanced in Planar Lipid Bilayers and Liposomes (Vol. 7, hal. 236-238). Michigan, USA: Elsevier Inc.
Williams, R. O., & Vaughn, J. M. (2007). Nanoparticle Enginerering. Dalam J.
Swarbick, Encyclopedia of Pharmaceutical Technology. New York:
Informa Health Care USA, Inc.
Wu, J., Zhao, X., & Lee, R. J. (2007). Lipid-Based Nanoparticulate Drug Delivery Systems. Dalam e. Deepak Thassu, Nanoparticulate Drug Delivery Systems (Vol. 166, hal. 89-92). New York: Informa Health Care USA, Inc.
Gambar 4.8. Kurva serapan spiramisin dalam larutan dapar fosfat pH 7,4.
Gambar 4.9. Kurva kalibrasi spiramisin dalam larutan dapar fosfat pH 7,4
Gambar 4.10. Kurva serapan spiramisin dalam larutan dapar klorida pH 2
Gambar 4.11. Kurva kalibrasi spiramisin dalam larutan dapar klorida pH 2
Gambar 4.12. Kurva serapan spiramisin dalam larutan dapar fosfat pH 5,5
Gambar 4.13. Kurva kalibrasi spiramisin dalam larutan dapar fosfat pH 5,5
Gambar 4.14. Kurva serapan spiramisisn dalam larutan dapar fosfat pH 8
Gambar 4.15. Kurva kalibrasi spiramisin dalam larutan dapar fosfat pH 8
Gambar 4.16. Morfologi liposom formula 2 hasil pengukuran dengan SEM digital zoom 2000x
Gambar 4.17. Morfologi liposom formula 2 hasil pengukuran dengan SEM digital zoom 4000x
Gambar 4.18. Morfologi liposom formula 1 hasil pengukuran dengan mikroskop konfokal (perbesaran 60x7)
Gambar 4.19. Morfologi liposom formula3 hasil pengukuran dengan mikroskop konfokal (perbesaran 60x7)
(a) (b) (c)
Gambar 4.20. Hasil pembuatan suspensi liposom formula 1 (a), formula 2 (b), formula 3 (c)
Gambar 4.21. Grafik hasil pengukuran distribusi ukuran partikel liposom formula 1 sebelum diultrasonikasi
Mean: 17, 96 µm Median: 16, 99 µm Modus: 34,58 µm
Gambar 4.22. Grafik hasil pengukuran distribusi ukuran partikel liposom formula 1 setelah diultrasonikasi
Mean: 16,89 µm Median: 12, 16 µm Modus: 31,50 µm
Gambar 4.23. Grafik hasil pengukuran distribusi ukuran partikel liposom formula 2 sebelum diultrasonikasi
Mean: 25,65 µm Median: 28, 50 µm Modus: 34,58 µm
Gambar 4.24. Grafik hasil pengukuran distribusi ukuran partikel liposom formula 2 setelah diultrasonikasi
Mean: 6,99 µm Median: 3,75 µm Modus: 2,31 µm
Gambar 4.25. Grafik hasil pengukuran distribusi ukuran partikel liposom formula 3 sebelum diultrasonikasi
Mean: 17,27 µm Median: 18,76 µm Modus: 31,50 µm
Gambar 4.26. Grafik hasil pengukuran distribusii ukuran partikel liposom formula 3 setelah diultrasonikasi
Mean: 15,76 µm Median: 11,81 µm Modus: 4,87 µm
Gambar 4.27. Grafik persentase spiramisin terdialisis dengan menggunakan medium pH 7,4 selama 24 jam
Gambar 4.28. Grafik persentase pelepasan spiramisin dari liposom formula 1 selama 8 jam
Gambar 4.29. Grafik persentase pelepasan spiramisin dari liposom formula 2 selama 8 jam
Gambar 4.30. Grafik persentase pelepasan spiramisin dari liposom formula 3 selama 8 jam
Konsentrasi (µg/ml) Serapan (A)
Tabel 4.2. Kosentrasi dan serapan kurva kalibrasi spiramisin dalam larutan dapar pH 2
Konsentrasi (µg/ml) Serapan (A)
8,088 0,256
Tabel 4.3. Kosentrasi dan serapan kurva kalibrasi spiramisin dalam larutan dapar pH 5,5
Konsentrasi (µg/ml) Serapan (A)
8,088 0,256
Tabel 4.4. Kosentrasi dan serapan kurva kalibrasi spiramisin dalam larutan dapar pH 8
Konsentrasi (µg/ml) A
8,072 0,235
Tabel 4.5. Data hasil dialisis formula 1
Tabel 4.6. Data hasil dialisis formula 2
0,25 0,072 0,215 1,338
0,5 0,079 0,239 1,485
0,75 0,093 0,267 1,658
1 0,088 0,293 1,821
18 0,306 1,654 10,277
19 0,298 1,743 10,827
20 0,303 1,833 11,387
21 0,294 1,920 11,930
22 0,279 2,003 12,445
23 0,253 2,079 12,913
24 0,235 2,149 13,347
Tabel 4.7. Data hasil dialisis formula 3
0,25 0,064 0,744 2,318
0,5 0,057 0,761 2,371
0,75 0,099 0,790 2,463
1 0,135 0,831 2,589
14 0,721 3,306 10,304
15 0,680 3,507 10,934
16 0,665 3,705 11,549
17 0,691 3,910 12,189
18 0,641 4,101 12,782
19 0,626 4,287 13,362
20 0,552 4,451 13,873
21 0,542 4,612 14,375
22 0,544 4,773 14,879
23 0,540 4,934 15,379
24 0,543 5,095 15,882
67
Tabel 4.8. Data hasil evaluasi sensitivitas pH liposom formula 1
pH 2 pH 5,5 pH 8
68
Tabel 4.9. Data hasil uji sensitivitas pH liposom formula 2.
pH 2 pH 5,5 pH 8
69
Tabel 4.10. Data hasil uji sensitivitas liposom formula 3
pH 2 pH 5,5 pH 8
Tabel 4.11. Hasil pengukuran istribusi ukuran partikel liposom formula 1 dengan Particle Size Analyzer
Sebelum Ultrasonikasi Setelah Ultrasonikasi Channel Diameter
3,519 0,046 0,4700 3,03000 3,870
3,863 0,600 4,5700 3,21000 3,100
4,240 1,840 10,6000 3,32000 2,420
4,655 3,270 14,3000 3,35000 1,850
5,110 4,800 15,8000 3,31000 1,380
5,610 6,090 15,2000 3,20000 1,010
6,158 6,910 13,0000 3,03000 0,720
6,760 7,070 10,1000 2,80000 0,500
7,421 6,490 6,9900 2,51000 0,340
8,147 5,200 4,2300 2,19000 0,220
8,943 3,460 2,1300 1,86000 0,140
9,818 1,600 0,7400 1,54000 0,090
10,780 0,340 0,1200 1,23000 0,055
11,830 0,016 0,0043 0,97000 0,032
12,990 0,045 0,0091 0,84000 0,021
14,260 0,610 0,7400 0,88000 0,017
15,650 1,840 0,2100 1,12000 0,016
17,180 2,990 0,2600 1,53000 0,017
18,860 3,850 0,2500 2,11000 0,017
20,710 4,370 0,2200 2,92000 0,018
22,730 4,700 0,1800 4,05000 0,019
24,950 5,220 0,1500 5,55000 0,020
27,390 6,330 0,1400 7,30000 0,020
30,070 7,660 0,1200 8,95000 0,018
33,010 8,710 0,1100 7,99000 0,012
36,240 5,320 0,0490 4,73000 0,006
39,780 0,620 0,0044 1,21000 0,001
43,670 0 0 0,13000 0,000
101,100 0 0 0 0
Tabel 4.12.Hasil pengukuran distribusi ukuran partikel liposom formula dengan Particle Size Analyzer
Sebelum Ultrasonikasi Setelah Ultrasonikasi Channel Diameter
0,545 0 0 0,0013 0,056000
0,598 0 0 0,0170 0,560000
0,656 0 0 0,0890 2,280000
0,721 0 0 0,2400 4,710000
0,791 0 0 0,4800 6,960000
0,868 0 0 0,7600 8,350000
0,953 0 0 1,1100 9,200000
1,047 0 0 1,5200 9,560000
1,149 0,0082 0,5300 1,9800 9,440000
1,261 0,0680 3,3300 2,4700 8,880000
1,384 0,2100 7,7100 2,9500 8,010000
1,520 0,4000 11,3000 3,3900 6,970000
1,668 0,6400 13,5000 3,7900 5,880000
1,832 0,8900 14,1000 4,1000 4,810000
2,011 1,1100 13,3000 4,3000 3,820000
2,207 1,2300 11,2000 4,3900 2,950000
2,423 1,2300 8,4700 4,3600 2,210000
2,660 1,0800 5,6200 4,2100 1,610000
2,920 0,8200 3,2000 3,9700 1,150000
3,205 0,5200 1,5500 3,6600 0,800000
3,519 0,3500 0,7700 3,3200 0,550000
3,863 0,3600 0,6200 2,9700 0,370000
4,240 0,6100 0,7900 2,6600 0,250000
4,655 1,0200 0,9900 2,4000 0,170000
5,110 1,3400 0,9800 2,1900 0,120000
5,610 1,3400 0,7400 2,0400 0,083000
6,158 0,9300 0,3900 1,9400 0,060000
6,760 0,3500 0,1100 1,8800 0,044000
7,421 0,0880 0,0210 1,8600 0,033000
8,147 0,1600 0,0300 1,8500 0,025000
8,943 0,5200 0,0710 1,9000 0,019000
9,818 0,7700 0,0800 2,0000 0,015000
10,780 0,6100 0,0470 2,1600 0,012000
11,830 0,3600 0,0210 2,3700 0,010000
12,990 0,6000 0,0270 2,5800 0,008500
14,260 1,7300 0,0580 2,8000 0,007000
15,650 2,7300 0,0700 3,0400 0,005700
17,180 2,4300 0,0470 3,3200 0,004700
18,860 2,5700 0,0370 3,6100 0,003900
20,710 4,3900 0,0480 3,0300 0,002500
22,730 6,6300 0,0550 1,7800 0,001100
24,950 8,0000 0,0500 0,4600 0,000210
27,390 9,3700 0,0450 0,0520 0,000018
30,070 12,2000 0,0440 0 0
33,010 14,6000 0,0400 0 0
36,240 12,5000 0,0260 0 0
39,780 5,2200 0,0081 0 0
101,100 0 0 0 0
Tabel 4.13 Hasil pengukuran distribusi ukuran partikel liposom formula 3 dengan Particle Size Analyzer
Sebelum Ultrasonikasi Setelah Ultrasonikasi Channel Diameter
(µm) % Diff. Volume % Diff. Jumlah % Diff. Volume % Diff. Jumlah
0,375 0,17 6,800000 0 0
0,412 0,30 9,110000 0 0
0,452 0,44 10,100000 0 0
0,496 0,63 11,000000 0 0
0,545 0,80 10,500000 0,39 4,69000
0,598 0,95 9,380000 1,60 14,40000
0,656 1,09 8,130000 3,32 22,70000
0,721 1,23 6,930000 4,73 24,40000
0,791 1,35 5,790000 4,97 19,40000
0,868 1,47 4,740000 3,70 10,90000
0,953 1,57 3,830000 1,37 3,05000
1,047 1,66 3,060000 0 0
1,149 1,74 2,430000 0 0
1,261 1,81 1,910000 0 0
1,384 1,88 1,500000 0 0
1,520 1,93 1,160000 0 0
1,668 1,97 0,900000 0 0
1,832 2,00 0,690000 0 0
2,011 2,03 0,530000 0 0
2,207 2,04 0,400000 0 0
2,423 2,03 0,300000 0 0
2,660 2,00 0,220000 0 0
2,920 1,96 0,170000 0 0
3,205 1,90 0,120000 0 0
3,519 1,83 0,089000 0 0
3,863 1,73 0,064000 0 0
4,240 1,62 0,045000 6,92 0,18000
4,655 1,49 0,031000 9,45 0,18000
5,110 1,37 0,022000 2,60 0,03800
5,610 1,24 0,015000 0 0
6,158 1,09 0,009900 0 0
6,760 0,96 0,006600 0 0
7,421 0,84 0,004400 0 0
8,147 0,77 0,003000 0 0
8,943 0,73 0,002200 0 0
9,818 0,72 0,001600 0 0
10,780 0,72 0,001200 0 0
11,830 0,77 0,000990 2,68 0,0031
12,990 0,94 0,000910 3,14 0,0028
14,260 1,23 0,000900 0 0
15,650 1,61 0,000890 1,80 0,00091
17,180 1,93 0,000800 3,55 0,00140
18,860 2,19 0,000690 3,62 0,00100
20,710 2,59 0,000620 4,32 0,00094
22,730 3,37 0,000610 5,10 0,00084
24,950 4,77 0,000650 5,97 0,00074
27,390 6,76 0,000700 8,10 0,00076
30,070 8,92 0,000690 8,59 0,00061
33,010 5,09 0,000230 8,61 0,00046
36,240 1,33 0,000045 5,46 0,00022
39,780 0,14 0,000004 0 0
43,670 0 0 0 0
92,090 0 0 0 0
Phospolipid Kolesterol Spiramisin Asam Oleat
Dilarutkan dalam 40 ml kloroform, dimasukkan
dalam labu bulat
Larutan dievaporasi dengan rotary evaporator
selama 1 jam dengan kecepatan 150 rpm pada suhu 62 0C, dan divakum
sampai pelarut organik menguap dan terbentuk lapisan tipis di sekeliling
tabung. Labu dialiri gas N2 dan ditutup selama 24
Dibiarkan sampai dingin dan divortex selama 15 menit, dibiarkan lagi selama 24 jam dengan kondisi
mulut labu tertutup
Ultrasonikasi selama 2 jam
Liposom
Lampiran 2. Contoh perhitungan efisiensi penjerapan spiramisin oleh liposom F 1 jam ke – 1
Hasil pengukuran serapan 0,541 A dimasukkan ke dalam rumus:
Persamaan kurva kalibrasi y = 0,0337x - 0,0006 Maka didapat:
Pada jam ke 24 didapat berat akumulatif: 5,029 mg
Kosentrasi spiramisin di dalam vial dialisis (6 ml sampel):
Kosentrasi total di dalam 40 ml suspensi liposom, dengan penimbangan 322 mg:
Maka didapat efisiensi penjerapan:
Efisiensi juga dapat diperoleh dari hasil pengurangan dengan persentase akumulatif spiramisin yang terdialisis selama 24 jam
Persentase terdialisis:
Lampiran. 3 Contoh perhitungan persen pelepasan obat pada uji sensitivitas pH.
F 1 pH 2 jam pertama (15 menit)
Hasil pengukuran serapan 0,141 A dimasukkan ke dalam rumus:
Persamaan kurva kalibrasi y = 0,0296x + 0,0100 Maka didapat:
Pada jam ke 8 didapat berat akumulatif: 1,021 mg
Kosentrasi spiramisin di dalam vial dialisis (1 ml sampel):
Kosentrasi total di dalam 40 ml suspensi liposom:
Maka didapat persentase pelepasan obat:
Lampiran 4. Gambar alat-alat yang digunakan
Gambar 1. Rotary evaporator
Gambar 2. Alat ultrasonikasi
Gambar 3. Alat-alat untuk dialisis dan uji sensitivitas pH
Gambar 4. Scanning Electron Microscope (SEM)
Gambar 5. Particle Size Analizer (PSA)
Gambar 6. Spektrofotometri floresensi
Gambar 7. Spektrofotometri UV-Vis
Lampiran 5. Sertifikat analisis fosfatidilkolin
Lampiran 6. Sertifikat analisis kolesterol
Lampiran 7. Sertifikat analisis asam oleat
Lampiran 8. Sertifikat analisis spiramisin