BAB V KESIMPULAN DAN SARAN
B. Saran
Penelitian ini perlu diaplikasikan dalam bentuk penetapan kadar guaifenesin (pada tingkat konsentrasi sedang) dalam sediaan sirup merek “X” dengan menggunakan metode KCKT fase terbalik yang telah tervalidasi.
63
DAFTAR PUSTAKA
Ahuja, S. dan Dong, M.W., 2005, Handbook of Pharmaceutical Analysis by HPLC, Vol. 6, Elsevier Inc., USA, hal. 49, 58-62, 210-211
Cairns, D., 2008, Intisari Kimia Farmasi, Edisi 2, EGC, Jakarta, hal. 10-12, 17 Dicpinigaitis, P.V., 2006, Chronic Cough Due to Asthma ACCP Evidence-Based
Clinical Practice Guidelines, No. 129, American College of Chest Physicians, Maryland City, hal. 755-759
Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995, Farmakope Indonesia, Edisi IV, Departemen Kesehatan RI, Jakarta, hal. 421, 751-752, 1009, 1061
Gonzalez, A.G. dan Herrador, M.A., 2007, A Practical Guide to Analytical Method Validation, Including Measurement Uncertainty and Accuracy Profiles, Vol. 26, No. 3, Trends in Analytical Chemistry, Department of Analytical Chemistry, Spain, hal. 227-238
Harmita, 2004, Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara Perhitungannya, Majalah Ilmu Kefarmasian, Vol. I, No. 3, Departemen Farmasi FMIP, Universitas Indonesia, Jakarta, hal. 117-134
Harvey, D., 2000, Modern Analytical Chemistry, McGraw-Hill Companies, Inc., USA, hal. 372-376, 385, 578
ICH, 2005, Validation of Analytical Procedures: Text and Methodology, Topic Q2(R1), ICH Harmonised Tripartite Guideline, hal. 8-10
Jyothi, N., VenuGopal, K., dan Rao, JVLN, S., 2012, Development and Validation of an HPLC method for the Simultaneous Estimation of the Salbutamol Sulphate and Ipratropium in Inhalation Dosage Forms, International Journal of Pharma Sciences, Vol. 2, No. 4, Aize Publisher, India, hal. 79-83
Kazakevich, Y. dan Lobrutto, R., 2007, HPLC for Pharmaceutical Scientist, John Wiley & Sons, Inc., Hoboken, New Jersey, hal. 9-13, 23, 94-101, 461-462, 465
Korany, M.A., Fahmy, O.T., Mahgoub, H., dan Maher, H.M., 2010, High Performance Liquid Chromatographic Determination of Some Guaiphenesin – Containing Cough – Cold Preparations, No. 2, Department of Pharmaceutical Analytical Chemistry, Egypt, hal. 121-130
Kromidas, S., 2005, More Practical Problem Solving in HPLC, Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim, Germany, hal. 34
Levita, J. dan Mustarichie, R., 2012, Pemodelan Molekul dalam Kimia Medisinal, Graha Ilmu, Yogyakarta, hal. 22-25
Martis, E. A. dan Gangrade, D. M., 2011, Reverse Phase Isocratic HPLC Method for Simultaneous Estimation of Salbutamol Sulphate and Beclomethasone Dipropionate in Rotacaps Formulation Dosage Forms, International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Science, Vol. 3, Issue 1, India, hal. 64-67
Moffat, A.C., David, M.O., dan Brian, W., (Eds.), 2005, Clarke’s Analysis of
Drugs and Poisons, 3rd edition, The Pharmaceutical Press, London, monograph on Guaifenesin, Salbutamol
Moffat, A.C., David, M.O., dan Brian, W., (Eds.), 2011, Clarke’s Analysis of
Drugs and Poisons, Pharmaceutical press, London, hal. 1468-1469, 2038-2039
Mulja, M. dan Suharman, 1995, Analisis Instrumental, Universitas Airlangga, Surabaya, hal. 6-11, 26, 31-34
Mulyawan, A., 2014, Optimasi Komposisi dan Kecepatan Alir Fase Gerak Sistem Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Fase Terbalik pada Pemisahan Salbutamol Sulfat dan Guaifenesin dalam Sediaan Obat Sirup “Merek X”, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta
Oemiati, R., Sihombing, M., dan Qomariah, 2010, Faktor-Faktor yang
Berhubungan dengan Penyakit Asma di
Indonesia, Media Litbang Kesehatan, Vol. XX, No. 1, Puslitbang BMF, Jakarta, hal. 41-49
Rohman, A., 2007, Kimia Farmasi Analisis, cetakan I, Pustaka Pelajar, Yogyakarta, hal. 220-225, 228-243, 339
Rohman, A., 2009, Kromatografi untuk Analisis Obat, Graha Ilmu, Yogyakarta, hal. 111-116, 217, 223-226, 232, 380
Sastrohamidjojo, H., 2001, Spektroskopi, cetakan II, Liberty, Yogyakarta, hal. 9-15, 22-26, 39
Snyder, L.R., Kirkland, J.J, dan Glajh, J.L., 1997, Practical HPLC Method Development, 2nd edition, John Wiley & Sons, Inc., New York, hal. 296-300
Snyder, L.R., Kirkland, J.J., dan Dolan, J.W., 2010, Introduction to Modern Liquid Chromatography, 3rd edition, John Wiley & Sons, Inc., New York, hal. 20-23, 309-312
Sukandar, E.Y., Andrajati, R., Sigit, J.I., Adnyana, I.K., Setiadi, A.P., dan Kusnandar, 2009, ISO Farmakoterapi, PT. ISFI Penerbitan, Jakarta, hal. 446-448
UBM Medica, 2011, MIMS Indonesia Petunjuk Konsultasi, Edisi 11 2011/2012, PT Bhuana Ilmu Populer, Jakarta, hal. A24, A34, A40, 85
United States Pharmacopeial Convention, 2007, United States Pharmacopeia, Edisi 30 (monograph on CD-ROM), United States Pharmacopoeial Convention, Inc.
Walode, S.G., Deshpande, S.D., dan Deshpande, A.V., 2013, Stability Indicating RP-HPLC Method for Simultaneous Estimation of Salbutamol Sulphate and Guaifenesin, Vol. 4, No. 2, Department of Pharmaceutical Chemistry, Der Pharmacia Sinica, India, hal. 61-67
Watson, D.G., 2000, Pharmaceutical Analysis, A Textbook for Pharmacy Students and Pharmaceutical Chemists, Churchill Livingstone, Edinburgh, London, hal. 76-80
Lampiran 3. Data penimbangan baku
1. Baku guaifenesin untuk pembuatan kurva baku
Penimbangan Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3
Berat wadah (g) 8,58440 8,58434 8,58421
Berat wadah+zat (g) 8,60689 8,60684 8,60671
Berat zat (g) 0,02249 0,02250 0,02250
2. Baku guaifenesin untuk sampel adisi
Penimbangan
Berat wadah (g) 8,58440 Berat wadah+zat (g) 8,60689 Berat zat (g) 0,02249
3. Baku guaifenesin untuk uji kestabilan larutan baku guaifenesin Penimbangan
Berat wadah (g) 8,58434 Berat wadah+zat (g) 8,60684 Berat zat (g) 0,02250
4. Baku salbutamol sulfat untuk uji kestabilan larutan baku salbutamol sulfat Penimbangan
Berat wadah (g) 8,58386 Berat wadah+zat (g) 8,59386 Berat zat (g) 0,01000
Lampiran 4. Skema pembuatan larutan baku guaifenesin dan contoh perhitungan kadar larutan baku yang digunakan
1. Skema pembuatan larutan baku guaifenesin
Timbang seksama lebih kurang 22,5 mg guaifenesin ↓
Larutkan dengan metanol dalam labu takar 25,0 mL hingga tanda, sehingga didapatkan konsentrasi 900 μg/mL (sebagai larutan stok)
↓
Ambil atau pipet larutan stok sejumlah 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; dan 0,8 mL ↓
Encerkan dengan metanol dalam labu takar 10,0 mL hingga tanda, sehingga didapatkan konsentrasi seri larutan baku 36,0; 45,0; 54,0; 63,0; dan 72,0 μg/mL
2. Contoh perhitungan kadar larutan baku guaifenesin yang digunakan
Perhitungan seri baku guaifenesin (hasil dari penentuan kurva baku Replikasi 3) Berat baku guaifenesin hasil penimbangan = 0,02250 gram = 22,5 mg
Konsentrasi baku guaifenesin dalam larutan stok = 22,5 mg/25,0 mL = 0,9 mg/mL = 900 μg/mL
Kemurnian baku pembanding guaifenesin 99,88%, maka konsentrasi baku guaifenesin dalam larutan stok sebenarnya = 900 μg/mL x 99,88% = 898,92 μg/mL
Konsentrasi seri larutan baku guaifenesin =
V1 x C1 = V2 x C2 0,4 mL x 898,92 μg/mL = 10,0 mL x C2 C2 = 35,957 μg/mL Seri baku V1 (mL) C2 (μg/mL) 1 0,4 35,957 2 0,5 44,946 3 0,6 53,935 4 0,7 62,924 5 0,8 71,914
Lampiran 5. Kromatogram baku guaifenesin untuk kurva baku 1. Replikasi I
Gambar 20. Kromatogram baku guaifenesin 36 μg/mL replikasi I Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 21. Kromatogram baku guaifenesin 45 μg/mL replikasi I Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 22. Kromatogram baku guaifenesin 54 μg/mL replikasi I Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 23. Kromatogram baku guaifenesin 63 μg/mL replikasi I Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 24. Kromatogram baku guaifenesin 72 μg/mL replikasi I Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
2. Replikasi II
Gambar 25. Kromatogram baku guaifenesin 36 μg/mL replikasi II Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 26. Kromatogram baku guaifenesin 45 μg/mL replikasi II Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 27. Kromatogram baku guaifenesin 54 μg/mL replikasi II Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 28. Kromatogram baku guaifenesin 63 μg/mL replikasi II Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 29. Kromatogram baku guaifenesin 72 μg/mL replikasi II Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
3. Replikasi III
Gambar 30. Kromatogram baku guaifenesin 36 μg/mL replikasi III Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 31. Kromatogram baku guaifenesin 45 μg/mL replikasi III Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 32. Kromatogram baku guaifenesin 54 μg/mL replikasi III Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 33. Kromatogram baku guaifenesin 63 μg/mL replikasi III Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 34. Kromatogram baku guaifenesin 72 μg/mL replikasi III Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Lampiran 6. Data penentuan kurva baku guaifenesin
Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3
C (μg/mL) (mAU) AUC C (μg/mL) (mAU) AUC C (μg/mL) AUC
(mAU) 35,941 416750 35,957 430299 35,957 434389 44,926 542221 44,946 563166 44,946 565020 53,911 690626 53,935 674301 53,935 676218 62,896 779459 62,924 790499 62,924 791864 71,882 903167 71,914 913892 71,914 917741 A = - 59598,246 A = - 42280,037 A = - 39082,532 B = 13467,384 B = 13288,380 B = 13277,580 r = 0,9975 r = 0,9996 r = 0,9997 Keterangan:
C = konsentrasi seri baku guaifenesin (μg/mL)
AUC = Area Under Curve (mAU)
Lampiran 7. Persamaan dan gambar kurva baku guaifenesin
1. Persamaan kurva baku guaifenesin yang digunakan berasal dari replikasi 3 dengan persamaan sebagai berikut:
y = 13277,580x – 39082,532 2. Gambar kurva baku guaifenesin
y = 13277,580x - 39082,532 r = 0.9997 0 100000 200000 300000 400000 500000 600000 700000 800000 900000 1000000 0 20 40 60 80 AUC (m AU) Konsentrasi guaifenesin (μg/mL)
Lampiran 8. Kromatogram sampel 1. Sampel rendah
Gambar 35. Kromatogram sampel 40 μg/mL replikasi I Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 36. Kromatogram sampel 40 μg/mL replikasi II Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 37. Kromatogram sampel 40 μg/mL replikasi III Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
2. Sampel sedang
Gambar 38. Kromatogram sampel 50 μg/mL replikasi I Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 39. Kromatogram sampel 50 μg/mL replikasi II Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 40. Kromatogram sampel 50 μg/mL replikasi III Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
3. Sampel tinggi
Gambar 41. Kromatogram sampel 60 μg/mL replikasi I Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 42. Kromatogram sampel 60 μg/mL replikasi II Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 43. Kromatogram sampel 60 μg/mL replikasi III Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Lampiran 9. Kromatogram sampel adisi 1. Sampel rendah adisi
Gambar 44. Kromatogram sampel rendah adisi replikasi I Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 45. Kromatogram sampel rendah adisi replikasi II Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 46. Kromatogram sampel rendah adisi replikasi III Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
2. Sampel sedang adisi
Gambar 47. Kromatogram sampel sedang adisi replikasi I Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 48. Kromatogram sampel sedang adisi replikasi II Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 49. Kromatogram sampel sedang adisi replikasi III Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
3. Sampel tinggi adisi
Gambar 50. Kromatogram sampel tinggi adisi replikasi I Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 51. Kromatogram sampel tinggi adisi replikasi II Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 52. Kromatogram sampel tinggi adisi replikasi III Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Lampiran 10. Perolehan nilai AUC sampel dan sampel adisi, contoh perhitungan konsentrasi terukur, perhitungan % Recovery, dan KV baku guaifenesin adisi
1. Nilai AUC sampel dan sampel adisi
Replikasi Tingkat konsentrasi AUC (mAU)
Sampel Sampel adisi 1 Sampel rendah 489817 538335 2 484516 537117 3 475948 557849 1 Sampel sedang 611026 683119 2 606857 679353 3 611906 683544 1 Sampel tinggi 738696 821605 2 738337 785825 3 724654 774172
2. Contoh perhitungan konsentrasi terukur baku guaifenesin
Diketahui AUC sampel guaifenesin sebesar 611026 dan AUC sampel adisi sebesar 683119, maka:
Konsentrasi guaifenesin dalam sampel:
y = 13277,580x – 39082,532 611026 = 13277,580x – 39082,532
x = 48,963 μg/mL Konsentrasi guaifenesin dalam sampel adisi:
y = 13277,580x – 39082,532 683119 = 13277,580x – 39082,532
x = 54,393 μg/mL
Konsentrasi baku guaifenesin adisi = konsentrasi guaifenesin dalam sampel adisi – konsentrasi guaifenesin dalam sampel
Konsentrasi baku guaifenesin adisi = (54,393 – 48,963) μg/mL Konsentrasi baku guaifenesin adisi = 5,430 μg/mL
3. Contoh perhitungan % Recovery baku guaifenesin adisi
Diketahui konsentrasi terukur baku guaifenesin adisi sebesar 5,430 μg/mL dan konsentrasi sebenarnya sebesar 5,391 μg/mL, maka:
% Recovery = konsentrasi baku dan sampel terukur – konsentrasi sampel terukur
konsentrasi baku teoritis x 100%
% Recovery = 5,430 μg/mL
5,391 μg/mL x 100%
% Recovery = 100,72%
4. Contoh perhitungan KV baku guaifenesin adisi
Diketahui konsentrasi terukur rata-rata (x̅) baku guaifenesin adisi sebesar 5,429 μg/mL dengan standar deviasi (SD) sebesar 0,032, maka:
KV = standar deviasi (SD) rata-rata (X̅) x 100% KV = 0,032 x 100% KV = 0,59% Replikasi Tingkat konsentrasi Konsentrasi guaifenesin % Recovery Sampel (μg/mL) KV (%) Sampel adisi (μg/mL) KV (%) Baku adisi (μg/mL) KV (%) 1 Sampel rendah 39,834 1,34 43,488 1,99 3,654 29,86 67,78 2 39,435 43,396 3,961 73,47 3 38,789 44,958 6,169 114,43 1 Sampel sedang 48,963 0,42 54,393 0,32 5,430 0,59 100,72 2 48,649 54,109 5,460 101,28 3 49,029 54,425 5,396 100,09 1 Sampel tinggi 58,578 1,04 64,823 2,97 6,245 33,17 115,84 2 58,551 62,128 3,577 66,35 3 57,521 61,250 3,729 69,17
Lampiran 11. Kromatogram baku guaifenesin untuk uji kestabilan larutan baku guaifenesin
6 Maret 2014
Gambar 53. Kromatogram baku guaifenesin 36 μg/mL 6 Maret 2014 Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 54. Kromatogram baku guaifenesin 54 μg/mL 6 Maret 2014 Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 55. Kromatogram baku guaifenesin 72 μg/mL 6 Maret 2014 Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
7 Maret 2014
Gambar 56. Kromatogram baku guaifenesin 36 μg/mL 7 Maret 2014 Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 57. Kromatogram baku guaifenesin 54 μg/mL 7 Maret 2014 Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 58. Kromatogram baku guaifenesin 72 μg/mL 7 Maret 2014 Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
8 Maret 2014
Gambar 59. Kromatogram baku guaifenesin 36 μg/mL 8 Maret 2014 Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 60. Kromatogram baku guaifenesin 54 μg/mL 8 Maret 2014 Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 61. Kromatogram baku guaifenesin 72 μg/mL 8 Maret 2014 Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Lampiran 12. Perolehan nilai AUC baku guaifenesin, contoh perhitungan konsentrasi terukur dan perhitungan % perubahan untuk uji kestabilan larutan baku guaifenesin
1. Nilai AUC baku guaifenesin
C teoritis (μg/mL)
AUC (mAU) pada tanggal 6 Maret 7 Maret 8 Maret 35,957 430299 428289 432367 53,935 674301 674835 674079 71,914 913892 914290 913048
2. Contoh perhitungan konsentrasi terukur baku guaifenesin
Diketahui AUC baku guaifenesin konsentrasi 35,957 μg/mL tanggal 6 Maret sebesar 430299, 7 Maret sebesar 428289, dan 8 Maret sebesar 432367, maka: Konsentrasi terukur baku guaifenesin tanggal 6 Maret:
y = 13277,580x – 39082,532 430299 = 13277,580x – 39082,532
Konsentrasi terukur baku guaifenesin tanggal 7 Maret:
y = 13277,580x – 39082,532 428289 = 13277,580x – 39082,532
x = 35,200 μg/mL Konsentrasi terukur baku guaifenesin tanggal 8 Maret:
y = 13277,580x – 39082,532 432367 = 13277,580x – 39082,532
x = 35,507 μg/mL
3. Contoh perhitungan % perubahan untuk uji kestabilan larutan baku guaifenesin
% perubahan = konsentrasi terukur – konsentrasi terukur
konsentrasi terukur awal x 100%
Tanggal 7 Maret, % perubahan = konsentrasi terukur – konsentrasi terukur
konsentrasi terukur awal x 100%
% perubahan = 35,200– 35,351
35,351 x 100%
% perubahan = 0,43%
Tanggal 8 Maret, % perubahan = konsentrasi terukur – konsentrasi terukur
konsentrasi terukur awal x 100%
% perubahan = 35,507– 35,351 35,351 x 100% % perubahan = 0,44% Kadar teoritis (μg/mL)
Kadar terukur (μg/mL) pada tanggal persen perubahan (%) 6 Maret 7 Maret 8 Maret 6 - 7
Maret 6 - 8 Maret 35,957 35,351 35,200 35,507 0,43 0,44 53,935 53,728 53,769 53,712 0,08 0,03 71,914 71,773 71,803 71,710 0,04 0,09
Lampiran 13. Skema pembuatan larutan baku salbutamol sulfat dan contoh perhitungan kadar larutan baku yang digunakan untuk uji kestabilan larutan baku salbutamol sulfat
1. Skema pembuatan larutan baku salbutamol sulfat
Timbang seksama lebih kurang 10,0 mg salbutamol sulfat ↓
Larutkan dengan metanol dalam labu takar 50,0 mL hingga tanda, sehingga didapatkan konsentrasi 200 μg/mL (sebagai larutan stok)
↓
Ambil atau pipet 0,5 mL larutan stok, masukkan ke dalam labu takar 5,0 mL dan encerkan dengan metanol hingga tanda, sehingga didapatkan konsentrasi
20 μg/mL (sebagai larutan intermediate) ↓
Ambil atau pipet larutan intermediate sejumlah 0,4; 0,6; dan 0,8 mL ↓
Encerkan dengan metanol dalam labu takar 10,0 mL hingga tanda, sehingga didapatkan konsentrasi seri larutan baku 0,8; 1,2; dan 1,6 μg/mL
2. Perhitungan kadar larutan baku salbutamol sulfat yang digunakan untuk uji stabilitas larutan baku salbutamol sulfat
Berat baku salbutamol sulfat hasil penimbangan = 0,01000 gram = 10,0 mg
Konsentrasi baku salbutamol sulfat dalam larutan stok = 10,0 mg/50,0 mL = 0,2 mg/mL = 200 μg/mL
Konsentrasi baku salbutamol sulfat dalam larutan intermediate = V1 x C1 = V2 x C2
0,5 mL x 200 μg/mL = 5,0 mL x C2 C2 = 20 μg/mL
Kemurnian baku pembanding salbutamol sulfat 98,83%, maka konsentrasi baku salbutamol sulfat dalam larutan intermediate sebenarnya = 20 μg/mL x 98,83% = 19,766 μg/mL
Konsentrasi seri larutan baku salbutamol sulfat = V1 x C1 = V2 x C2 0,4 mL x 19,766 μg/mL = 10,0 mL x C2 C2 = 0,791 μg/mL Seri baku V1 (mL) C2 (μg/mL) 1 0,4 0,791 3 0,6 1,186 5 0,8 1,581
Lampiran 14. Kromatogram baku salbutamol sulfat untuk uji kestabilan larutan baku salbutamol sulfat
5 Maret 2014
Gambar 62. Kromatogram baku salbutamol sulfat 0,8 μg/mL 5 Maret 2014 Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 63. Kromatogram baku salbutamol sulfat 1,2 μg/mL 5 Maret 2014 Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 64. Kromatogram baku salbutamol sulfat 1,6 μg/mL 5 Maret 2014 Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
6 Maret 2014
Gambar 65. Kromatogram baku salbutamol sulfat 0,8 μg/mL 6 Maret 2014 Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 66. Kromatogram baku salbutamol sulfat 1,2 μg/mL 6 Maret 2014 Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 67. Kromatogram baku salbutamol sulfat 1,6 μg/mL 6 Maret 2014 Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
7 Maret 2014
Gambar 68. Kromatogram baku salbutamol sulfat 0,8 μg/mL 7 Maret 2014 Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 69. Kromatogram baku salbutamol sulfat 1,2 μg/mL 7 Maret 2014 Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 70. Kromatogram baku salbutamol sulfat 1,6 μg/mL 7 Maret 2014 Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
16 Januari 2014 (Konsentrasi 10 μg/mL)
Gambar 71. Kromatogram baku salbutamol sulfat 10 μg/mL 16 Januari 2014 Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
8 Maret 2014 (Konsentrasi 10 μg/mL)
Gambar 72. Kromatogram baku salbutamol sulfat 10 μg/mL 8 Maret 2014 Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Lampiran 15. Perolehan nilai AUC baku salbutamol sulfat, contoh perhitungan % perubahan untuk uji kestabilan larutan baku salbutamol sulfat
1. Nilai AUC baku salbutamol sulfat
C teoritis μg/mL)
AUC (mAU) pada tanggal 5 Maret 6 Maret 7 Maret
0,791 12429 13008 11721
1,186 14296 14288 12919
1,581 16943 18411 18209
C teoritis (μg/mL)
AUC (mAU) pada tanggal 16 Januari 8 Maret
9,883 72363 91019
2. Contoh perhitungan % perubahan untuk uji kestabilan larutan baku salbutamol sulfat. Pada penelitian tidak didapatkan kurva baku (tidak dapat menghitung kadar), maka digunakan respon AUC untuk menghitung % perubahannya.
% perubahan = respon – respon
respon awal x 100%
Tanggal 6 Maret, % perubahan = respon – respon
respon awal x 100%
% perubahan = 13008– 12429
12429 x 100%
% perubahan = 4,66%
Tanggal 7 Maret, % perubahan = respon – respon
respon awal x 100% % perubahan = 11721– 12429 12429 x 100% % perubahan = 5,70% Kadar teoritis (μg/mL)
persen perubahan (%) Kadar teoritis (μg/mL) persen perubahan (%) (16 Jan - 8 Mar) 5 - 6 Maret 5 - 7 Maret 0,791 4,66 5,70 9,883 25,78 1,186 0,06 9,63 1,581 8,66 7,47
Lampiran 16. Kromatogram untuk menunjukkan resolusi pemisahan salbutamol sulfat dan guaifenesin dalam larutan baku campuran
Replikasi I (Rs = 10,462)
Gambar 73. Kromatogram baku campuran salbutamol sulfat 1,2 μg/mL dan guaifenesin 80
μg/mL replikasi I
Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Replikasi II (Rs = 10,451)
Gambar 74. Kromatogram baku campuran salbutamol sulfat 1,2 μg/mL dan guaifenesin 80
μg/mL replikasi II
Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Replikasi III (Rs = 10,429)
Gambar 75. Kromatogram baku campuran salbutamol sulfat 1,2 μg/mL dan guaifenesin 80
μg/mL replikasi III
Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Lampiran 17. Kromatogram untuk menunjukkan resolusi pemisahan salbutamol sulfat dan guaifenesin dalam sampel
Gambar 76. Kromatogram sampel 50 μg/mL untuk menunjukkan resolusi replikasi I Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 77. Kromatogram sampel 50 μg/mL untuk menunjukkan resolusi replikasi II Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
Gambar 78. Kromatogram sampel 50 μg/mL untuk menunjukkan resolusi replikasi III Fase diam : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5 µm
Fase gerak : metanol : 0,01M bufer fosfat pH 3 (40:60) Kecepatan alir : 1,0 mL/min
Volume injeksi : 20 µL Detektor : UV-275 nm
BIOGRAFI PENULIS
Penulis skripsi berjudul “Validasi Metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Fase Terbalik untuk Penetapan Kadar Salbutamol Sulfat dan Guaifenesin dalam Sediaan Sirup Merek “X”” memiliki nama lengkap Agustinus Hendy Larsen. Penulis lahir di Tegal pada 3 Agustus 1992 sebagai anak kedua dari tiga bersaudara pasangan Dra.