Berdasarkan hasil penelitian yang diperoleh, maka pada penelitian selanjutnya disarankan untuk :
1. Menelusuri kurva pertumbuhan dari Actinomycetes ANL-4.
2. Mengidentifikasi karakteristik morfologi dari isolat Actinomycetes ANL-4 menggunakan SEM (Scanning Electron Microscope).
3. Menganalisis kemurnian glukosamin hasil fermentasi setiap selang waktu 1 jam dalam 1 hari waktu inkubasi kitin dengan Actinomycetes ANL-4 menggunakan HPLC-ELSD dengan rentang waktu 0-9 menit.
4. Menganalisis karakteristik kerja enzim kitinase dari Actinomycetes ANL-4 dalam mendegradasi kitin selama proses fermentasi menggunakan
DAFTAR PUSTAKA
Aam, B.B., Ellinor B.H., Anne L.N., Morten S., Kjell M.V., and Vincent G.H.E. 2010. Production of Chitooligosaccharides and Their Potential
Applications in Medicine. Review Marine Drugs. 8: 1482-1517.
Alexander, M. 1997. Introduction to Soil Microbiology 2nd Edition. John Wiley and Sons. New York.
Anggraini, W. 2010. Uji Aktivitas Enzim Kitinase dari Isolat Actinomycetes Selama Proses Solid State Fermentation Kitin Dengan Metode Somogyi-Nelson. Skripsi. Universitas Lampung. Bandar Lampung.
Angka, S.L. dan M.T. Suhartono. 2000. Bioteknologi Hasil Laut. PKSPL-IPB. Bogor.
Anonim. 2013. N-Acetylglucosamine. http://en.wikipedia.org/wiki/N-Acetylglucosamine. Diakses pada tanggal 30 Januari 2014.
Azmi, J. 2006. Penentuan Kondisi Optimum Fermentasi Aspergillus oryzae Untuk Isolasi Enzim Amilase Pada Medium Pati Biji Nangka (Arthocarphus heterophilus Lmk). Jurnal Biogenesis. 2(2): 55-58.
Bahariah. 2005. Pengaruh Konsentrasi NaOH dan Suhu pada Proses Deproteinasi Untuk Produksi Kitin dari Limbah Kulit Udang Putih (Penaeus
merguensis). Skripsi. Universitas Hasanuddin. Makassar.
Ball, S. 2012. Analysis of Foods Using HPLC with Evaporative Light Scattering Detection. Agilent Technologies. United Kingdom.
Beaney, P., J Lizardi-Mendoza, and M Healy. 2005. Comparison of Chitins Produced by Chemical and Bioprocessing Methods. J. Chem. Technol. Biotechnol. (80): 145-150.
Cabrera J.C. and Cutsem, P.V. 2005. Preparation of Chitooligosaccarides with Degree of Polymerization Higher Than 6 by Acid or Enzymatic
Degradation of Chitosan. Biochemical Engineering Journal. 25: 165-172. Campbell, N.A., J.B. Reece and L.G. Mitchell. 2002. Biologi. Terjemahan dari
Biology, oleh Lestari, R., E.I.M Adil & N. Anita. Erlangga. Jakarta.
Chahal, P.S., D.S. Chahal, and G.B.B. Lee. 1996. Production of Cellulase in Solid State Fermentation with Trichoderma reesi MCG80 on Wheat Straw. Applied Biochemistry and Biotechnology. 57-58: 433-441.
Clark, K. 2007. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (HPLC). http:/www.chem-is-try.org/. Diakses pada tanggal 10 Juni 2014.
Dachriyanus, 2004. Analisis Struktur Senyawa Organik Secara Spektroskopi. Andalas University Press. Padang.
Day, R.A. dan Underwood, A.L. 2002. Analisis Kimia Kuantitatif Edisi Keenam. Erlangga. Jakarta.
Donderski,W. dan M. Tzrebiatowska. 2000. Influence of Physical and Chemical Factors on The Activity of Chitinases Produced by Planktonic Bacteria Isolated from Jezorak Lake. Polish Journal of Environmental Studies. 9(2); 77-82.
Dutta, K. P., Shipra Tripathi, Mehrotra, K. G., Joydeep Dutta. 2009. Perspectives for Chitosan Based Antimicrobial Films in Food Applications. Food Chemistry. 114: 1173-1182.
Einbu, A. 2007. Characterisation of Chitin and a Study of Its Acid-Catalyzed Hydrolysis, Thesis for The Degree of Philosophiae Doctor. Norwegian University of Science and Technology. Dept. of Biotechnology. Noorwegian.
Fessenden, R.J. dan Fessenden, J.S. 1990. Kimia Organik Jilid 2. Erlangga. Jakarta.
Foucher, J.P., G.K. Westbrook, A. Boetius, S. Ceramicola, S. Dupre, J. Mascle, J. Mienert, O. Pfannkuche, C.Pierre, and D. Praeg. 2009. Structure and Drivers of Cold Seep Ecosystems. Oceanography. 22 : 92-109.
Gadgoli, C. 2006. Spectophotometric Method for Determination of Glucosamine in Tables. Saraswathi Vidya Bhavan’s College of Pharmachy. Sonarpada. Dombivli (East). 5: 83-84.
Gohel, V., A. Singh, M. Vimal, P. Ashwini, and H. S. Chatpar. 2006.
Bioprospecting and Antifungal Potential of Chitinolytic Mocroorganisms. African Journal of Biotechnology. 5(2): 54-72.
Gohel, V., P. Vyas and H.S. Chhatpar. 2004. Activity Staining Method of Chitinase on Chitin Agar Plate Through Polyacrylamide Gel Electrophoresis. African Journal of Biotechnology. 4: 87-90. Holker, U.,M. Hofer, and J.Lenz. 2004. Biotechnological Advantages of
Laboratory-Scale Solid State Fermentation with Fungi. Applied Microbiology and Biotechnology. 64: 175-186.
Hunger, M. and Weitkamp, J. 2001. In situ IR, NMR, EPR, and UV/Vis Spectroscopy: Tools For New Insight Into The Mechanisms of
Heterogeneous Catalysis. Angew. Chemistry International. 40: 2954-2971. Iman, R. 2008. Sistem Operasi Fermentasi. Departemen Biologi FMIPA IPB.
Bogor.
Jacyno, M. and Dean C.T. 2004. New High Sensitivity HPLC Assay For
Glucosamine Using ELSD. http:/www.dongmyung.co.kr/. Diakses pada tanggal 23 Juni 2014.
Junoto, F. 1995. Enzim Pangan. Gramedia Pustaka Utama. Jakarta.
Kralovec, J.A. and Barrow C.J. 2008. Marine Neutricals and Function Foods. CRC Press London. New York.
Kuk, J. H., Jung W. J., Jo G. H., Kim Y. C., Kim K. Y., Park R. D. 2005.
Production of N-acetyl-β-Dglucosamine from chitin by Aeromonas sp. GJ-18 Crude Enzyme. Application Microbial Biotechnology. 68: 384-389. Kumar, R.M.N.V. 2000. A Riview of Chitin and Chitosan Applications. React.
Functional Polymer. 46: 1-27.
Kumirska, J., Czerwicka, M., Kaczynski, Z., Bychowska, A., Brzozowski, K., Thoming, J., Stepnowski, P. 2010. Application of Spectroscopic Methods for Structural Analysis of Chitin and Chitosan. Marine Drugs. 8: 1567-1636.
Kupiec, T. 2004. Quality-Control Analytical Methods: High-Performance Liquid Chromatography. International Journal of Pharmaceutical Compounding. 8(3): 223-227.
Lehninger, A.L. 2005. Dasar-dasar Biokimia. Terjemahan dari: Principles of Biochemistry, oleh Thenawidjadja, M. Erlangga. Jakarta.
Lindsay, S. 1992. High Performance Liquid Chromatography. Wiley. New York. Liu, D., Wei, Y., Yao, P., Jiang, L. 2006. Determination of Degree of Acetylation of Chitosan by UV Spectrofotometry Using Dual Standards. Carbohydrate Res. 341: 782-785.
Mahmoud, N.S., Ghaly, A.E., and Arab, F. 2007. Uncoventional Approach For Demineralization of Deproteinized Crustacean Shells for Chitin
Production. American Journal of Biochemistry and Biotechnology. 3(1): 1-9.
Mangamuri, U.K., Muvva, V., Poda, S., and Kamma, S. 2012. Isolation,
Identification and Molecular Characterization of Rare Actinomycetes from Mangrove Ecosystem of Nizampatnam. Malaysian Journal of
Mycrobiology. 8(2): 83-91.
Margavey, N.A., J. M. Keller, V. Bernan, M. Dworkin, and D. H. Sherman. 2004. Isolation and Characterization of Novel Marine-Derived Actinomycetes Taxa Rich In Bioactive Metabolites. Applied and Environmental
Mitchel, D., N. Krieger, and M. Berovic. 2006. Solid-State Fermentation Bioreactors. Springer-Verlag Berlin. Heidelberg.
Mugiyanto, P. 2012. Uji Efektivitas Fermentasi Kitin Secara Bertahap Dengan Isolat Actinomycetes ANL-4 dan Mucor Miehei Untuk Pembuatan Glukosamin. Skripsi. Universitas Lampung. Bandar Lampung.
Murray, R.K., Granner, D.K., Mayes, P.A., dan Rodwell, V.W. 2003. Biokimia Harper. Edisi 25. Buku Kedokteran EGC. Jakarta.
Nurofik, 2008. Reaksi Oksidasi Katalitik Gugus OH Sekunder pada 2-Butanol Menggunakan Katalis TiO2-Al2O3. Skripsi. UI. Depok.
Pandey, A., C. Ricardo, and C. Larroche. 2008. Current Development in Solid State Fermentation: I-Bioprocesses and Products. Process Biochemistry. 35: 1153-1169.
Pangestu, A. 2011. Spektrofotometer UV-Vis dan Refraktometer. http://pangestu-ayupangestu.blogspot.com/2011/12/spektrofotometer-uv-vis-dan.html. Diakses pada tanggal 08 Juni 2014.
Pariera, B.M. 2004. Limbah Cangkang Udang Menjadi Kitosan.
http://www.Chem-is-try.org . Diakses pada tanggal 29 Agustus 2013. Pasaribu N. 2004. Berbagai Ragam Pemanfaatan polimer.
http://library.usu.ac.id/download/ft/tki.mia-nurhaida .pdf. Diakses pada 12 Oktober 2013.
Patil, R. S.,V. Ghormade, and M. V. Deshpande. 2000. Chitinolytic Enzymes : An Exploration. Enzyme and Microbial Technology. 26: 473-483
Paulino, A.T., Simionato, J.I., Garcia, J.C., Nozaki, J. 2006. Characterization of Chitosan and Chitin Produced from Silkworm Chrysalides. Carbohydrate Polymer. 64: 98-103.
Pavia D.L.,Lampman G.M., Kriz G.S.,dan Vyvyan J.R. 2009. Introduction to Spectroscopy; Fourth Edition. Belmont. USA.
Peter, M.G. 2005. Chitin and Chitosan from Animal Sources. Di dalam:
Steinbuchel A dan SK Rhee, editor. Polysacharides and Polyamides in the Food Industry. Volume ke-1. Wiley-VCH. Wernheim.
Pillai, C.K.S., Paul W., Sharma, C.P. 2009. Chitin and Chitosan Polymers:
Chemistry, Solubility and Fiber Formation. Program Polymer Science. 34: 641-678.
Rahman, A. 1992. Teknologi fermentasi. Arcan. Jakarta.
Rao, N. 1994. Mikroorganisme Tanah dan Pertumbuhan Tanaman. UI press. Jakarta.
Remya, M. and Vijayakumar, R. 2008. Isolation and Characteization of Marine Antaginistic Actinomycetes from West Coast of India. Medicine and Biology. Vol. 15. 1: 13-19.
Richy, F., Bruyere, O., Ethgen, O., Cucherate, M., and Reginster, J.Y. 2003. Structural and Symptomatic Efficacy of Glucosamine and Chondroitin in Knee Osteoarthritis. Archieve International Medicine. 163: 1514-1522. Rohmat, A. 2007. Optimasi Fermentasi Asam Kojat oleh Galur Mutan Auksotrof
Aspergilus Flavus. Skripsi. UI. Depok.
Rohman, 2007. Kimia Farmasi Analisis. Pustaka pelajar. Yogyakarta.
Samsiah, R. 2009. Karakterisasi Biokomposit Apatit-Kitosan dengan XRD (X-ray Difraction), FTIR (Fourier Transform Infra Red), SEM (Scanning Electron Microscopy), dan Uji Mekanik. Skripsi. ITB. Bogor.
Samsuri, M., Muhammad G., Rany M., Muhammad B., Heri H., dan Ali W. 2003. Kitin dan Kitosan. UGM. Yogyakarta.
Sari, I. M. 2010. Pembuatan Glukosamin Dari Kitosan Dengan Bantuan Enzim Lisozim. Skripsi. Universitas Lampung. Bandar Lampung.
Sashiwa, H., Fujishima S., Yamano N., Kawasaki N., NakayamaA., Muraki E., Hiraga K., Oda K., and Aiba S. 2003. Production of
N-acetyl-D-glucosamine from α-Chitin by Crude Enzymes from Aeromonas hydrophyla H-2330. Carbohydrate Research. 337: 761-763. Shahib, M.N. 2005. Biologi Molekuler Medik I. UNPAD Press. Bandung.
Shakhbazau, A.V. and Kartel, N.A. 2008. Chitinases in Bioengineering Research. Russian Journal of Genetics. 44: 881-889.
Somchai, K. and Duenpen A. 2007. Chitin Oligomers Production From Fungal Mycelium Cultivating on Cassava Starch Medium. KMITL Science Technology Journal.
Stevens, W. 2005. Chitin and Chitosan : Production and Application. Journal of Bioscience Bioenergy. 89: 515-521.
Sugita, P., Wukisari T., Sjahriza A., dan Wahyono D. 2009. Kitosan: Sumber Biomaterial Masa Depan. IPB Press. Bogor.
Suryanto, D. dan Yurnaliza. 2005. Eksplorasi Bakteri Kitinolitik : Keragaman Genetik Gen Penyandi Kitinase Pada Berbagai Jenis Bakteri dan Pemanfaatannya. USU. Medan.
Susanto, A. 2012. Proses Fermentasi (Batch, Fed, Batch and Continues Process). http://anthosusantho.wordpress.com/bahan-ajar-kuliah/. Diakses pada 20 Oktober 2013.
Sutedjo, M. dan Ghandi K. 1991. Mikrobiologi Tanah. Ineka Cipta. Jakarta Syahmani dan A. Solahuddin. 2009. Interaksi Cd (II) dengan Kitin dan Kitosan
Isolat Limbah Kulit Udang.
http://ptp2007.wordpress.com/2007/11/29/pemanfaatan-kitosan. Diakses pada 28 Januari 2014.
Synowiecki, J. and Al-Khateeb, N. 2003. Production, Properties, and Some New Applications of Chitin and Its Derivates. Critical Reviews in Food Science and Nutrition. ProQuest Medical Library. 43(2): 145-171.
Tang, Z.X., Shi, L., and Qian, J. 2007. Neutral Lipase From Aqueous Solution on Chitosan Nano Particles. Journal Biochemical Engineering. 34: 217-223. Thakur, D., Yadav, A., Gogoi, B.K., and Bora, T.C. 2007. Isolation and Screening
of Streptomyces in Soil of Protected Forest Areas from The States of Assam and Tripura, India, for Antimicrobial Metabolites. Journal of Medical Mycology. 15: 242-249.
Tomokazu, K., Saito, S., Sato, S., Kanai,K.,Fujii,F., Nikaidou, N., and Watanabe, W. 2004. American Society for Microbiology. 70(2): 1135-1144.
Ton, N.M.N., Nguyen M.D., pham T.T.H., and Le V.V.M. 2010. Influence of Initial pH and Sulfur Dioxide Content in Must on Wine Fermentation by immobilized Yeast in Bacterial Cellulose. International Food Research Journal. 6(3): 743-749.
Williams G.W. 2004. Osteoarthristis and treatment: What You Need To Know. In The American Council of Science and Health.
http://www.acsh.org/publications/pubid.i90/pub_detail.asp. Diakses pada 18 September 2013.
Winarti, R. 1992. Pengaruh Konsentrasi NaOH dan Waktu Deasetilasi Kitin Terhadap Pembentukan Kitosan. Skripsi. Universitas Gajah Mada. Yogyakarta.
Xie H., Zhengyu J., Jinhui H., Cuirong Z. 2011. Preparation of Low Molecular Weight Chitosan by Complex Enzymes Hydrolysis. International Journal of Chemistry. 2: 180-186.
Yuliandari, R. 2013. Pengaruh Penambahan Konsentrasi Inokulum dan Media Terhadap Efektivitas Fermentasi Kitin Dengan Actinomycetes ANL-4 Untuk Pembuatan Glukosamin. Skripsi. Universitas Lampung. Bandar Lampung.
Yurnaliza, 2002. Senyawa kitin dan kajian aktivitas enzim microbial pendegradasinya.
http://library.usu.ac.id/download/fmipa/BiologiYurnaliza.pdf. Diakses pada 18 Juni 2013.
Lampiran 1.
*) Dianalisis dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis dan HPLC-ELSD
Gambar 22. Skema Penelitian Kulit Udang
-Dideproteinasi -Didemineralisasi Kitin
-Dikarakterisasi dengan FTIR -Dicuci dengan NaOH 0,5% 1 g Kitin cuci
Actinomycetes ANL-4 -Diinokulasi
pada media mineral garam
Inokulum 10 ml Media fermentasi kitin 10 ml
Fermentasi Batch 20 ml
-Masing-masing dipanaskan dalam waterbath pada suhu 70oC selama 45 menit -Dishaker (200 rpm; 1 jam) -Disentrifus (10.000 rpm; 20 menit; suhu 4oC) Hari ke-5 Hari ke-10 Hari ke-15 Hari ke-20 Hari ke-25 Hari ke-30 Hari ke-35 Hari ke-40 Hari ke-45 -Dibuat 9 replikat
Filtrat hasil sentrifus
-Dibekukan dalam freezer selama 24 jam
-Diliofilisasi dengan freeze dryer
Lampiran 2.
(a) (b)
Gambar 23.(a)Filtrat deproteinasi sebelum dan (b)filtrat sesudah diuji dengan CuSO4
Lampiran 3.
(a) (b)
Gambar 24.(a)Filtrat sebelum dan (b)filtrat sesudah diuji dengan (NH4)2C2O4
Lampiran 4.
Lampiran 5.
Gambar 26. Hasil mikroskopik isolat Actinomycetes ANL-4 2014
Gambar 27. Hasil mikroskopik isolat Actinomycetes ANL-4 2010
Lampiran 6.
Hari ke 5 Hari ke 10 Hari ke 15
Hari ke 20 Hari ke 25 Hari ke 30
Hari ke 35 Hari ke 40 Hari ke 45 Gambar 29. Rendemen glukosamin hasil fermentasi kitin dengan Actinomycetes
Lampiran 7.
Tabel 2. Persentase rendemen glukosamin dalam substrat kitin awal
No Hari ke- Bobot rendemen Glc Bobot kitin awal Persentase rendemen Glc (gram) (gram) (% b/b) 1 5 0,63 1 63 2 10 0,693 1 69,3 3 15 0,717 1 71,7 4 20 0,673 1 67,3 5 25 0,581 1 58,1 6 30 0,611 1 61,1 7 35 0,626 1 62,6 8 40 0,673 1 67,3 9 45 0,678 1 67,8
Kadar rendemen glukosamin (% b/b) dapat dihitung menggunakan rumus sebagai berikut :
% (b
/
b) rendemen Glc = Bobot rendemen Glc hasil fermentasiBobotsubstrat kitin awal x 100 %
Contoh Perhitungan Kadar Rendemen Glukosamin Pada Hari ke 5 Inkubasi:
% (b
/
b) rendemen Glc = 0,63 gram1 gram x 100 %
Lampiran 8.
Tabel 3. Hasil pengukuran absorbansi larutan standar fenil tiourea (PTH)
No Konsentrasi Absorbansi (mg/L) 1 2 3 Rata-rata 1 3 0,2159 0,2159 0,2163 0,216 2 6 0,4001 0,4004 0,4001 0,4002 3 9 0,6345 0,6348 0,6353 0,6349 4 12 0,8435 0,8433 0,8438 0,8435 5 15 1,0407 1,0406 1,0406 1,0407 Lampiran 9.
Tabel 4. Hasil pengukuran absorbansi rendemen hasil fermentasi
No Hari ke- Absorbansi Rata-rata
1 2 3 1 5 0,8192 0,8185 0,8182 0,8186 2 10 0,8086 0,8133 0,8083 0,8101 3 15 0,798 0,7993 0,7988 0,7987 4 20 0,7998 0,7993 0,799 0,7995 5 25 0,8057 0,8063 0,8049 0,8057 6 30 0,8169 0,8179 0,818 0,8176 7 35 0,8089 0,8097 0,8094 0,8093 8 40 0,8181 0,8185 0,8178 0,8181 9 45 0,7683 0,768 0,7688 0,7684
Lampiran 10.
Tabel 5. Konsentrasi sebenarnya glukosamin dalam rendemen hasil fermentasi
No Hari ke- Konsentrasi Glc terukur (mg/L) Pengenceran (kali) Konsentrasi Glc sebenarnya (mg/L) 1 5 11,7458 833 9.784,25 2 10 11,6240 833 9.682,77 3 15 11,4605 833 9.546,64 4 20 11,4720 833 9.556,19 5 25 11,5609 833 9.630,23 6 30 11,7315 833 9.772,34 7 35 11,6125 833 9.673,21 8 40 11,7387 833 9.778,34 9 45 11,0262 833 9.184,82
Konsentrasi glukosamin terukur dapat dihitung dengan mengkalibrasikannya ke persamaan regresi linear y = 0,0697x – 0,0007. Dimana y adalah absorbansi sampel rata-rata dan x adalah konsentrasi glukosamin terukur. Contoh perhitungannya adalah sebagai berikut :
Contoh perhitungan Konsentrasi Glc terukur pada hari ke 5 inkubasi : y = 0,0697x – 0,0007 0,8186 = 0,0697x – 0,0007 0,8186 + 0,0007 = 0,0697x 0,8193 = 0,0697x x = 0,8193 0,0697 x = 11,7458 mg/L
Konsentrasi Glc sebenarnya dapat dihitung menggunakan rumus sebagai berikut : [Glc] = [Glcterukur] x FP
Dimana : FP adalah faktor pengenceran, yaitu 833,33 Misal, konsentrasi glukosamin pada hari ke-5
[Glc] = 11,7458 x 833 = 9.784,25 mg/L
Lampiran 11.
Tabel 6. Kadar Glc dalam rendemen hasil fermentasi
No Hari ke- Bobot rendemen Glc Bobot Glc sebenarnya Kadar Glc dalam rendemen (gram) (gram) (% b/b) 1 5 0,63 0,617 97,88 2 10 0,693 0,671 96,87 3 15 0,717 0,685 95,5 4 20 0,673 0,643 95,6 5 25 0,581 0,56 96,34 6 30 0,611 0,6 97,76 7 35 0,626 0,606 96,77 8 40 0,673 0,658 97,82 9 45 0,678 0,623 91,88
Contoh Perhitungan Jumlah Bobot Glukosamin dalam Rendemen Sampel Glukosamin Hasil Fermentasi
Bobot Glc = [Glcsebenarnya) x Volume larutan stok sampel
Misal, jumlah bobot glukosamin pada hari ke-5 :
Bobot Glc dalam sampel= 9.784,25 mg/L x 0,01 L = 97,8425 mg
= 0,0978425 g
Bobot glukosamin sebenarnya dalamleh dapat rendemen hasil fermentasi yang diperoleh dapat dihitung berdasarkan rumus dibawah ini :
Bobot Glc dalam rendemen = Bobot Glc dalam sampel x Bobot rendemen
Bobot sampel
Contoh Perhitungan Bobot Glukosamin dalam Rendemen Hasil Fermentasi pada hari ke 5 inkubasi :
Bobot Glc dalam rendemen = 0,0978 gram x 0,63 gram
0,1 gram
= 0,617 gram
Kadar glukosamin (% b/b) dapat dihitung menggunakan rumus sebagai berikut :
% b/b Glc dalam rendemen = Bobot Glc sebenarnya
Bobot rendemen x 100 %
Contoh Perhitungan Kadar Glukosamin dalam Rendemen Hasil Fermentasi pada hari ke 5 inkubasi :
% b/b Glc dalam rendemen = 0,617 gram
0,63 gram x 100 %