Berdasarkan hasil penelitian, makin tinggi konsentrasi limbah cair tahu yang digunakan sebagai media, maka makin kecil nilai LC50 dan makin tinggi potensi produknya, sehingga yang perlu disarankan adalah diadakan penelitian lebih lanjut menggunakan media limbah cair tahu dengan konsentrasi yang lebih tinggi.
39
DAFTAR PUSTAKA
Afriatni, A. 2003. Pengaruh Rasio Karbon dan Nitrogen (C/N) Terhadap Daya Toksisitas Bioinsektisida dari Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki. Skripsi. Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Anonym. 2009. Sisi-Sisi Yang Dapat Dikembangkan Pada Industri Tahu. http://okenet-kimia-blogspot.com. Diakses tanggal 15 Maret 2010.
AOAC, 1984. Official Methods of Analysis of The Association of Official Agriculture Chemist, Washington, D. C.
Aronson, A., I., W. Beckman dan P. Dunn. 1986. Bacillus thuringiensis dan Related Insect Pathogen. Microbial. Rev. 50 (1) : 1 – 24.
Bahagiawati. 2002. Penggunaan Bacillus thuringiensis sebagai Bioinsektisida. Balai Penelitian Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik Pertanian, Bogor.
Bailey, J. E. dan D. F. Ollis. 1991. Dasar – Dasar Biokimia. Terjemahan. PAU IPB, Bogor.
Becker dan J. Margalit. 1993. Production of Bacillus thuringiensis Insecticides for Experimental and Commercial Uses. Di dalam P. F. Enwistle, J. s. Cory, M. J. Bailey dan S. Higgs (editor). Bacillus thuringiensis, An Environmental Biopesticide : Theory and Practice. John Wiley and Sons, Chichester : 147 – 168.
Behle, R. W., P. Tamez-Guerra, B. S. Shasha, dan M. R. McGuire. 1999. Makalah Formulations Forum 99. Formulating Bioinsecticides to Improve Recidual Activity. University Peoriia, Illiois.
Bernhard, K. dan R. Utz. 1993. Production of Bacillus thuringiensis Insecticides for Experimental and Commercial Uses, Hlm. 255 – 265. Di dalam P. F. Entwilse, J. S. Cory, M. J. Bailey, dan S. Higgs (Penyunting). Bacillus thuringiensis An Environmental Biopesticide : Theory and Practice. John Wiley and Sons, Chichester.
Benoit, L. G., G. R. Wilson dan C. L. Baugh. 1990. Cultivation During Growth and Sporulation of Bacillus thuringiensis HD-1. Left. Appl. Microbial. 10 : 15 – 26.
Bravo, A. 1997. Phylogenetic Relationship of Bacillus thuringiensis δ-endotoksin Family Protein and Their Functional Domains. Bacterial. 179 (9) : 2793 – 2801.
Bulla, L. A., K. J. Kramer, dan L. I. Davidson. 1977. Characterization of The Entomocidal Parasporal Crystal of Bacillus thuringiensis. J. Bacteriol. 130 (1) : 375 – 383.
40 Burgerjon, A. dan D. Martouret. 1971. Determination and Significance of The Host Spectrum of Bacillus thuringiensis. Pp. 305 – 322. Di dalam H. D. Burges and N. W. Hussey (Penyunting). Microbial Control of Insect and Mites. Academic Perss. London.
Cookson, J. T. 1995. Bioremediation Engineering : Design and Application. McGraw-Hill, Inc. Toronto.
Couh, T. L. and D. A. Ross. 1980. Production and Utilization of Bacillus thuringiensis. Biotechnol and Bioengi. 22 ; 1297 – 1304.
Debby, M. S., C. Tjahjadi, M. Herudiyanto, dan T. Sukarti. 2005. Mekanisme Produksi Minyak Sel Tunggal dengan Sistem Kultivasi Padat pada Media Onggok-Ampas Tahu dengan Menggunakan Kapang Aspergillus terreus. Artikel Jurnal Teknologi dan Industri Pangan. Vol. XVI.
De Barjack, H. dan E. Frachon. 1990. Classification of Strain Bacillus thuringiensis. Entomophage 36 : 233 – 240.
Djojosumarto, P. 2008. Pestisida dan Aplikasinya. PT Agromedia Pustaka, Jakarta. Dubois, M. K., AGilles, J. K. Hamilton, D. A. Rebers, dan F. Smith. 1956.
Colorimetric Methods for Determination of Sugar and Related Substances. Analitical Chemist 28:350-356
Dulmage, H. T. 1981. Insecticidal Activity of Isolates of Bacillus thuringiensis and Their Potential for Pest Control. Di dalam H. D. Burges (editor). Microbial Control Pest and Plant Disease 1970 – 1980. Academic Press, New York. Dulmage, H. T. and Rhodes, R. A. 1971. Production of Pathogens in Artificial
Media, pp.507-540 In : Burges, H.D. (ed). Microbial Control of Pest and Plant Diseases 1970 – 1980. Acad Press, New York.
Dulmage, H. T., J. A. Correa and G. G. Morales. 1990. Potential of Improved Formulation of Bacillus thuringiensis through Standardization and Cultivation Development. Di dalam Bacterial Control of Mosquitoes and Blackfleis : Biochemistry, Genetics and Application of Bacillus thuringiensis and Bacillus sphaericus. Eds : H. D. Barjac and D. J. Sutherland. Rutgers University Press. New Brunswick, New Jersey, USA. 110 – 133.
Ellar, D. J., Knowles, B. H. Haider, M. Z., dan F. A. Drobniewski.1986. Investigation of The Specificity, Cytotoxic Mechanisms and Relatedness of Bacillus thuringiensis Insecticidal delta-endotoxin from Different Pathotypes. Zentralblatt fur Bakteriologie, Mikrobiologie, und Hygiene; Suppl. 5, bacterial Protein Toxins 41 – 48. Gastav Fisher Verlag, Stutttgart. Faust, R. M. and L. A. Bulla, Jr. 1982. Bacteria and Their Toxins as Insecticides, Hlm. 75 – 109. Di dalam E. kurstak (Penyunting). Microbial and Viral Pesticides. Marcel Dekker Inc, New York.
41 Feitelson, J. S., Payne, and L. Kim. 1992. Bacillus thuringiensis : Insects and Beyond. Biotechnology. 10 : 271 – 275. Di dalam Bahagiawati (2002). Penggunaan Bacillus thuringiensis sebagai Bioinsektisida. Bulletin Agrobio 5 (1) : 21 – 28.
Gill, S. S., E. A. Knowles, and P. V. Pietrantonio. 1992. The Mode of Action of Bacillus thuringiensis Endotoxins. Annu. Rev. Entomol. 37 : 615 – 636. Goldberd, I., B. Sneh., E. Battat and D. Klein. 1980. Optimization of A Medium for
A High Yield Production of Spore-Crystal Preparation of Bacillus thuringiensis Effective Against The Egyptian Cotton Leaf Worm Spodoptera littoralis Boisd. The Cultivation Unit, The Hebrew University. Harjadi, S. 1989. Dasar-Dasar Hortikultura. Jurusan Budidaya Pertanian. Fakultas
Pertanian, Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Hartati, N. 2010. Pengaruh Aerasi Terhadap Produksi Biopestisida Oleh Pseudomonas putida Menggunakan Substrat limbah cair tahu. Skripsi. Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Hofte, H. dan H. R. Whiteley. 1989. Insecticidal Crystal Protein of Bacillus thuringiensis. Microbial. Rev. Entomol. 12 : 287 – 322.
Ignoffo, C. M. dan R. F. Anderson. 1979. Bioinsecticides, pp. 1 – 27. In H. J. Peppler and D. Perlman, eds. Microbial Technology. Acad. Press, New York.
Ridawati. 1993. Produksi Pigmen oleh Monascus purpureus BC 88202 pada Media Campuran Limbah Cair Tapioka, Ampas Tapioka dan Ampas Tahu. Skripsi. FATETA, IPB. Bogor.
Kalshoven, L. G. E. 1981. The Pest of Crops in Indonesia. (terjemahan). PT. Ichtiar Baru Van-Hoeve, Jakarta.
Kosaric, H., A. Wieczorek, G. P. Cosentino, R. J. Magee, and J. E. Prenosil. 1983. Ethanol Cultivation. Di dalam H. Dellweg. Biotechnology Volume 3. Verlag Chemie, Weinheim.
Lereclus, D., A. Delecluse, and M. M. Lecadet. 1993. Diversity of Bacillus thuringiensis Toxins and Genes, Hlm. 37 – 60. Di dalam P. F. Ent Wisle, J. S. Cory, M. J. Bailey, and S. Higgs (Penyunting). Bacillus thuringiensis An Environmental Biopesticide : Theory and Practice. John Wiley and Sons, Chichester.
Liu, W. H. and P. K. Bajpai. 1995. A Modified Growth Medium for Bacillus thuringiensis Biotechnol Prog. 11: 589 – 591.
Mangunwidjaja, D. dan Suryani A. 1994. Teknologi Bioproses. Penebar Swadaya, Jakarta.
42 Margalit, J. dan D. Dean. 1985. The Story of Bacillus thuringiensis subs israelensis.
Am. Mosg. Contr. Assoc. 1, 1 – 7.
Milne, R. AZ. Ge. De. Rivers dan D. H. Dean. 1990. Specificity of Insecticidal Crystal Proteins : Implication for Industrial Standardization. Di dalam Analytical Chemistry of Bacillus thuringiensis. Editor : Hickle, L. A. dan W. L. Petch. American Chemical Society. Washington DC.
Morris, O. N., P. Kanagaratman, and Converse. 1996. Suitability of 30 Agricultural Products and By-Products as Nutrient Sources for Laboratory Productions of Bacillus thuringiensis subsp. aizawai (HD133). Journal of Pathology 70 : 113 – 120.
Muller-Cohn, J., J. Chaufaux, C. Buisson, N. Gilois, V. Sanchis, and D. Lereclus. 1996. Spodoptera littoralis (Lepidoptera : Noctuidae) Restitance To Cry 1C and Cross-Resistance To Other Bacillus thuringiensis Crystal Protein. J. Econ. Entomol. 89(4) : 791 – 797.
Mummigatti, S. G. and Raghunathan. 1990. Influence of Media Composition on the Production of Delta-Endotoxin by Bacillus thuringiensis. J. Invertebr. Pathol. 55 : 147 – 151.
Nugrahani, W. 2005. Pemanfaatan Wheat Pollard dan Wheat Bran sebagai Substrat pada Produksi Bioinsektisida Bacillus thuringiensis subsp. kursstaki. Skripsi. Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor, Bogor. Nuraida, L., A. H. Sihombing, dan Srikandi, F. 1996. Produksi Karotenoid Pada
Limbah Climbah cair tahu, Air Kelapa, dan Onggok oleh Kapang Neurospora sp. Artikel Bulletin Teknologi dan Industri Pangan. Vol. VII. Nurdjannah, N. dan Sri Usmiati. 2009. Isolasi dan Karakterisasi Protein Ampas
Tahu. http://www.pascapanen.litbang.deptan.go.id. Diakses tanggal 19 Februari 2010.
Othman, N. 1982. Biology of Croccidolomia binotalis Zeller (Lepidoptera : Pyralidae) and Its Parasites From Cipanas Area (West Java). Research Report. SEAMEO Center for Tropical Biology, Bogor.
Pearson, D., and O. P. Ward. 1988. Effect of Culture Conditions on Growth and Sporulation of Bacillus thuringiensis subsp. Israelensis and Development of Media for Production of The Protein Crystal Endotoxin. Biotechnol. Lett. 10 (7) : 4511 – 456.
Permadi, A. H. dan Sastrosiswojo S. 1993. Kubis. Edisi Pertama. Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian. Balai Penelitian Hortikultura, Lembang. Prabowo, A.D., Samain dan Rangkuti, M. 1985. Pemanfaatan Ampas Tahu Sebagai
Makanan Tambahan dalam Usaha Penggemukan Daging Potong. Buletin Limbah Pangan : 172 – 174.
43 Prapanca. 2001. Kol Alias Kubis. Cetakan XVI. Jakarta. Penebar Swadaya.
Prijono, D. dan E. Hasan. 1992. Life Cycle and Demography of Croccidolomia binotalis Zeller (Lepidoptera : Pyralidae) on Broccoli in Laboratory. Indon. J. Trop. Agric. 4 : 18 – 24.
Quinlan, R. J. and S. G. Lisansky. 1985. Microbial Insecticides, pp. 233 – 254. Di dalam H. Dellweg (editor). Biotechnology vol. 3. Verlag Chemis, Weinheim.
Rahyuningsih, M. 2003. Toksisitas dan Pembedaan Aktivitas Dipterosidal Bioinsektisida Bacillus thuringiensis var. israelensis Tipe Liar dan Mutan pada berbagai Formulasi Media dan Kondisi Kultivasi. Disertasi. Program Pascasarjana Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Ranchman, A. 1989. Pengantar Teknologi Kultivasi. Pusat Antar Universitas, IPB. Bogor.
Rehm, H. J. dan G. Reed. 1981. Biotechnology vol. 1. Microbial Fundamentals. Verlag Chemic., Weinheim.
Rumiyantie, R. R. 1999. Kultivasi Bacillus thuringiensis subsp. aizawai Skala Pilot Dengan Urea Sebagai Sumber Nitrogen Tambahan. Skripsi. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor, Bogor. Schnepf, E., N. Crickmore, J. van Rie, D. Lereclus, J. Baum, J. Feitelson, D. R.
Zeigler, and D. H. Dean. 1998. Bacillus thuringiensis and its Pesticidal Crystal Proteins. Microbial. Mol. Boil. Rev. 62 (3) : 775 – 806.
Shieh, T. R. 1994. Identification and Classification of Bacillus thuringiensis. Komisi Pestisida Departemen Pertanian, Jakarta.
Sastrosiswojo, S. dan W. Setiawati. 1993. Hama-Hama Tanaman Kubis dan Cara Pengendalian. Hal 39 – 59. Dalam A. H. Permadi dan S. Sastrosiswojo (ads.), Kubis. Ballitan dan Program Nasional Pengendalian Hama Terpadu, Jakarta.
Sikdar, D. P., M. K. Majumdar dan S. K. Majumdar. 1993. Optimization of Process for Production of Delta-Endotoxin by Bacillus thuringiensis subsp. Israelensis in a 5 litre Fermentor. Biochemical Archieves. 9 : 119 – 123. Sneath, P. H. A. 1986. Endospore-forming gram-positive Rods and Cocci, Hlm. 1104
– 1139. Di dalam P. H. A. Sneath, N. S. Mair, M. E. Sharpe, and J. G. Holt (Penyunting). Bergey’s Manual of Systematic Bacteriologi. Volume 2 Baltimore, USA.
Soeroto, H. A. dan Cahyaniati. 1994. Pengelolaan Organisme Pengganggu Tumbuhan Secara Terpadu pada Tanaman Kubis. Jakarta : Direktorat Jendral Tanaman Pangan.
44 Stanbury, P. F. dan A. Whitaker. 1984. Principles of Cultivation Technology.
Pergamon Press, London.
Suastuti, MGAMDA. 1998. Pemenfaatan hasil samping industry pertanian molase dan limbah cair tahu sebagai sumber karbon dan nitrogen untuk produksi biosurfactan oleh Bacillus sp galur komersial dan local. Tesis. Program Pascasarjana. Institute Pertanian Bogor, Bogor.
Swadener, C. 1994. Bacillus thuringiensis. Journal of Pesticides Reform vol. 14. No.3 : 13 – 20. Northwest Coalition for Alternative to Pesticides. Canada. Trizelia. 2001. Makalah Falsafah Sains (PPs 702). Program Pascasarjana/SC. Institup
Pertanian Bogor, Bogor.
Uhan, T. S. 1993. Kehilangan Hasil Panen Karena Ulat Krop Kubis (Croccidolomia binotalis Zell) dan Cara Pengendaliannya. J Hort 3 : 22-26.
Vandekar, M. And H. T. Dulmage. 1982. Guidelines for Production of Bacillus thuringiensis H-14. Special Programe for Research and Training in Tropical Diseases. Geneva, Switzerland.
Wang, D. I. C., C. L. Conney, A. L. Demain, P. Dunhil, A. E. Humprey dan M. D. Lily. 1979. Cultivation and Enzyme Technology. John Wiley and Sons Inc, New York.
Wicaksono, Y. 2002. Pemanfaatan Onggok Tapioka dan Urea sebagai Media Sumber Karbon dan Nitrogen dalam Produksi Bioinsektisida oleh Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki. Skripsi. Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Yamamoto, T., T. Lizuka and J. N. Aronson. 1983. Mosquitocidal Protein of Bacillus thuringiensis var. israelensis : Identification and Partial Isolation of The Protein. Current Microbiology, Vol. 9, pp. 279 – 284.
45
LAMPIRAN
46
Lampiran 1. Metode Analisis Pada Penelitian
Analisis Proksimat Bahan Baku
a. Penetapan Kadar Air dengan Metode Oven (AOAC, 1984)
Cawan alumenium kosong dipanaskan dengan oven 105 0C selama 15 menit, kemudian didinginkan dengan desikator selama 30 menit dan ditimbang. Prosedur pengeringan cawan ini diulang sampai didapatkan bobot tetap. Sampel sebanyak 4 – 5 gram ditimbang dalam cawan tersebut, kemudian dipanaskan dalam oven pada suhu 105 0C selama 3 -5 jam. Setelah cawan dikeluarkan dari oven dan didinginkan, diulang sampai didapatkan bobot tetap bahan. Presentase kadar air dapat dihitung dengan menggunakan rumus sebagai berikut :
Keterangan :
A : Bobot cawan berisi sampel sebelum dioven (g) B : Bobot cawan berisi sampel setelah dioven (g) C : Bobot sampel basa (g)
b. Penetapan Kadar Abu dengan Metode Oven (AOAC, 1984)
Sampel sebanyak 4 – 5 gram ditimbang dalam cawan yang bobotnya konstan. Dibakar sampai tak berasap di atas Bunsen dengan api kecil, kemudian dimasukkaan ke dalam tanur pada suhu 600 0C sampai menjadi abu. Cawan didinginkan di dalam desikator selama 15 menit kemudian ditimbang. Pengabuan diulangi, dengan cara dimasukkan ke dalam tanur pada suhu 600 0C selama 1 jam sampai didapat bobot yang tetap. Presentase kadar abu dapat dihitung dengan menggunakan rumus sebagai berikut :
Keterangan :
A : Bobot cawan berisi abu sampel (g) B : Bobot cawan (g)
47
c. Penetapan Kadar Protein (Nitrogen) dengan Metode Kjedhal
Sampel sebayak 0,2 gram, ditambahkan dengan 1 gram CuSO4, 1,2 gram Na2SO4, dan 2,5 larutan H2SO4 pekat dan didestruksi dalam labu Kjedhal selama 1 jam. Setelah dingin ditambahkan larutan NaOH 50 % sebanyak 15 ml dan didestilasi. Destilat ditampung dalam Erlenmeyer yang berisi larutan HCl 0,02 N. destilat dititrasi dengan larutan HaOH 0,02 N yang sebelumnya telah ditambahkan indicator mensel. Penentuan kadar nitrogen berdasarkan volume larutan NaOH 0,02 N yang digunakan untuk titrasi.
Blangko disiapkan seperti prosedur penentuan kadar nitrogen dengan metode Kjedhal. Penentuan kadar nitrogen dihitung berdasarkan rumus sebagai berikur :
Keterangan :
FP : Faktor Pengencer FK : Faktor Konversi (6,25)
d. Penetapan Kadar Lemak dengan Metode Ekstraksi Langsung dengan Alat Soxhlet (SNI 01-2891-1992)
Sebanyak 1 – 2 gram contoh, dimasukkan ke dalam selongsong kertas saring yang dialasi dengan kapas. Kemudian selongkong kertas saring berisi contoh disumbat dengan kapas lalu dikeringkan di dalam oven pada suhu tidak lebih dari 80 0C selama lebih kurang 1 jam. Kemudian selongsong kertas yang telah di oven dimasukkan ke dalam alat soxhlet yang telah dihubungkan dengan labu lemak berisi batu didih yang telah dikeringkan dan telah diketahui bobotnya. Kemudian diekstraksi dengan heksana atau pelarut lemak lainnya selama lebih kurang 6 jam. Kemulian heksana disuling dan ekstrak lemak dikeringkan di dalam oven pada suhu 105 0C sampai bobotnya tetap. Didinginkan dan ditimbang. Penentuan kadar lemak dihitung berdasarkan rumus sebagai berikur :
48 Keterangan :
W : bobot contoh (g)
W1 : Bobot labu lemak kosong (g) W2 : Bobot labu lemak dan lemak (g)
e. Penetapan Kadar Serat Kasar (AOAC, 1984)
Sebanyak 2 gram contoh dimasukin ke dalam Erlenmeyer 500 ml dan ditambahkan 100 ml H2SO4 0,325 N. kemudian dihidroolisis di dalam autoklaf selama 15 menit pada suhu 105 0C. Didinginkan lalu ditambahkan NaOH 1,25 N sebanyak 50 ml. hidrolisis kembali ke dalam autoklaf selama 15 menit. Kemudian contoh disaring dengan kertas saring yang telah dikeringkan dan diketahui bobot tetapnya. Contoh dicuci berturut-turut dengan air panas menggunakan 25 ml H2SO4 0,325 N, kemudian dicuci dengan air panas terakhir menggunakan alkohol 25 ml. kertas saring dikeringkan di dalam oven pada suhu 105 0C sampai bobotnya tetap. Penentuan kadar serat dihitung berdasarkan rumus sebagai berikur :
f. Penetapan Kadar Karbohidrat (by different)
Penentuan karbohidrat (by different) dihitung berdasarkan rumus sebagai berikut :
49
Lampiran 1. Lanjutan Metode Analisis Pada Penelitian
Analisis Pra dan PascaKultivasi a. Pengukuran pH
Pengukuran pH cairan dilakukan dengan menggunakan pH-meter yang telah dikalibrasi dengan menggunakan buffer standar (4, 7, dan 10). Sampel cairan kultur diambil pada waktu yang telah ditentukan dan langsung diukur dengan pH-meter tanpa dilakukan pengenceran terlebih dahulu.
b. Jumlah Spora Hidup (Viable Spore Count/VSC)
Prosedur penentuan jumlah spora hidup adalah sebagai berikut :
1 ml cairan fermentasi
Pengenceran ke dalam 9 ml larutan garam fisiologis
Pemanasan pada suhu 70 0C selama 15 menit
Pembuatan sederetan pengenceran
1 ml dari setiap pengenceran ditumbuhkan pada medium agar cawan
Inkubasi pada suhu 30 0C selama 24 jam
50
c. Pengamatan jumlah sel dengan metode TPC
Prosedur penentuan jumlah sel hidup adalah sebagai berikut :
d. Penetapan Total Gula dengan Metode Fenol H2SO4 (Dubois et. al., 1956)
Sebelum dilakukan pengujian sampel perlu diketahui kurva standar fenol yang digunakan. Pembentukan kurfa standar fenol adalah sebagai berikut :
Sebanyak 2 ml larutan glukosa standar yang mengandung 0, 15, 30, 45, 60, dan 75 µg glukosa masing-masing dimasukkan ke dalam tabung reaksi, ditambahkan 1 ml larutan fenol dan dikocok. Kemudian 5 ml H2SO4 pekat ditambahkan dengan cepat. Biarkan selama 10 menit, kocok dan tempatkan dalam penangas air selama 15 menit. Absorbansinya diukur pada 490 nm.
y = 0.014x + 0.001 R² = 0.999 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0 10 20 30 40 50 60 Ab sor b an si ( 49 0 n m ) Konsentrasi (ppm)
KURVA STANDAR GLUKOSA
Linear (Absorbansi) 1 ml cairan fermentasi
Pengenceran ke dalam 9 ml larutan garam fisiologis
Pembuatan sederetan pengenceran
1 ml dari setiap pengenceran ditumbuhkan pada medium agar cawan
Inkubasi pada suhu 30 0C selama 24 jam
51 Pengujian sampel sama dengan pembuatan kurva standar fenol, hanya 2 ml larutan glukosa diganti dengan 2 ml sampel.
e. Uji aktivitas bioinsektisida (Bioassay) (dilakukan pasca kultivasi)
Penentuan aktivitas bioinsektisida dikerjakan mengikuti prosedur sebagai berikut :
1 ml cairan hasil fermenttasi dari tiap-tiap perlakuan
Pengenceran ke dalam 1 L air suling yang diberi Pro-Stiker ( 1ml/L)
Pembuatan sederetan pengenceran
Pemotongan daun kubis Perendaman di dalam suspense
spora Kristal selama 1 menit
Dikering anginkan
cawan petri
Inkubasi 4 (empat) hari
Perhitungan jumlah larva mati sampai hari ke empat 10 larva ulat kubis
52
Lampiran 2. Perhitungan Susunan Medium Kultivasi
Berikut perhitungan total penambahan urea pada beberapa perbedaan perbandingan substrat ampas tahu dan limbah cair tahu dengan berbasiskan pada rasio C/N adalah 7/1.
1. Media A (ampas tahu 20 % dan limbah cair tahu 80 %) C = 7 N
C Ampas T + C Air T + C Urea = 7(N Ampas T + N Air T + N Urea)
5,639% (10 g) + 0.273% (40 g) + 20% Urea = 7(0,42% (10 g) + 0.022% (40 g) + 46,667% Urea) 0,5693 + 0,1092 + 0,2 Urea = 7(0,042 + 0,0088 + 0,4667 Urea)
0,6731 + 0,2 Urea = 0,3556 + 3,2669 Urea 0,6731 – 0,3556 = 3,2669 Urea – 0,2 Urea
0, 3175 g = 3,0669 Urea
Urea = 0,1035 gram untuk 50 gram media
2. Media B (ampas tahu 30 % dan limbah cair tahu 70 %) C = 7 N
C Ampas T + C Air T + C Urea = 7(N Ampas T + N Air T + N Urea)
5,639% (15 g) + 0.273% (35 g) + 20% Urea = 7(0,42% (15 g) + 0.022% (35 g) + 46,667% Urea) 0,8459 + 0,0956 + 0,2 Urea = 7(0,063 + 0,0077 + 0,4667 Urea)
0,9415 + 0,2 Urea = 0,4949 + 3,2669 Urea 0,9415 – 0,4949 = 3,2669 Urea – 0,2 Urea
0, 4466 g = 3,0669 Urea
Urea = 0,1456 gram untuk 50 gram media
3. Media C (ampas tahu 40 % dan limbah cair tahu 60 %) C = 7 N
C Ampas T + C Air T + C Urea = 7(N Ampas T + N Air T + N Urea)
5,639% (20 g) + 0.273% (30 g) + 20% Urea = 7(0,42% (20 g) + 0.022% (30 g) + 46,667% Urea) 1,1278 + 0,0810 + 0,2 Urea = 7(0,084 + 0,0066 + 0,4667 Urea)
1,2088 + 0,2 Urea = 0,6342 + 3,2669 Urea 1,2088 – 0,6342 = 3,2669 Urea – 0,2 Urea
0, 5746 g = 3,0669 Urea
53 Berikut perhitungan total C dan total N pada substrat ampas tahu, limbah cair tahu, dan urea pada berbagai formulasi medium.
1. Media A (ampas tahu 20 % dan limbah cair tahu 80 %) Total C = C Ampas Tahu + C Limbah cair tahu + C Urea
= 5,639% (10 g) + 0.273% (40 g) + 20% (0,1035 g) = 0,5693 + 0,1092 + 0,0207
= 0,6938 gram untuk 50 gram media
Total N = N Ampas Tahu + N Limbah cair tahu + N Urea = 0,42% (10 g) + 0.022% (40 g) + 46,667% (0,1035 g) = 0,042 + 0,0088 + 0,0483
= 0,0991 gram untuk 50 gram media
2. Media B (ampas tahu 30 % dan limbah cair tahu 70 %) Total C = C Ampas Tahu + C Limbah cair tahu + C Urea
= 5,639% (15 g) + 0.273% (35 g) + 20% (0,1456 g) = 0,8459 + 0,0956 + 0,0291
= 0,9706 gram untuk 50 gram media
Total N = N Ampas Tahu + N Limbah cair tahu + N Urea = 0,42% (15 g) + 0.022% (40 g) + 46,667% (0,1035 g) = 0,063 + 0,0077 + 0,0680
= 0,1387 gram untuk 50 gram media
3. Media C (ampas tahu 40 % dan limbah cair tahu 60 %) Total C = C Ampas Tahu + C Limbah cair tahu + C Urea
= 5,639% (20 g) + 0.273% (30 g) + 20% (0,1874 g) = 1,1278 + 0,081 + 0,0375
= 1,2463 gram untuk 50 gram media
Total N = N Ampas Tahu + N Limbah cair tahu + N Urea = 0,42% (20 g) + 0.022% (30 g) + 46,667% (0,1035 g) = 0,084 + 0,0066 + 0,0875
54
Lampiran 3. Rekapitulasi Data pH Rata-Rata Media Kultivasi Pada Jam Ke-0, Jam Ke-30, dan Jam Ke-48 (dua kali ulangan)
MEDIA WAKTU (JAM) Rata-Rata pH
A1 0 7.32 30 7.75 48 8.17 A2 0 7.31 30 7.65 48 8.15 A3 0 7.31 30 7.80 48 8.21 B1 0 7.32 30 7.76 48 8.16 B2 0 7.30 30 7.80 48 8.13 B3 0 7.34 30 7.82 48 8.14 C1 0 7.27 30 7.63 48 7.94 C2 0 7.30 30 7.77 48 8.09 C3 0 7.29 30 7.65 48 8.06
55
Lampiran 4. Rekapitulasi Data Log Jumlah Sel Hidup (TPC) Rata-Rata Media Kultivasi Pada Jam Ke-0, Jam Ke-30, dan Jam Ke-48 (dua kali ulangan)
Kultivasi Log Jumlah Sel
Hidup (TPC/ml)
Sandi Media Waktu
A1 0 5.74 30 7.60 48 6.99 A2 0 5.81 30 7.94 48 7.53 A3 0 6.22 30 7.82 48 6.98 B1 0 5.76 30 7.55 48 7.20 B2 0 6.03 30 8.25 48 8.33 B3 0 6.29 30 7.93 48 8.66 C1 0 5.70 30 8.16 48 7.83 C2 0 6.15 30 7.79 48 7.66 C3 0 6.34 30 7.48 48 7.75
56
Lampiran 5. Rekapitulasi Data Total Gula Rata-Rata Media Kultivasi Pada Jam Ke-0, Jam Ke-30, dan Jam Ke-48 (dua kali ulangan)
Kultivasi Total Gula
(g/L)
Sandi Media Waktu
A1 0 4.43 30 3.00 48 2.71 A2 0 4.39 30 2.93 48 2.56 A3 0 4.46 30 2.95 48 2.63 B1 0 4.64 30 3.28 48 2.81 B2 0 4.72 30 3.70 48 2.99 B3 0 4.73 30 3.71 48 2.74 C1 0 4.48 30 3.37 48 2.93 C2 0 4.47 30 3.86 48 3.02 C3 0 4.44 30 3.71 48 2.90
57
Lampiran 6. Rekapitulasi Data Log Jumlah Spora Hidup (VSC) Rata-Rata Media Kultivasi Pada Jam Ke-0, Jam Ke-30, dan Jam Ke-48 (dua kali ulangan)
Kultivasi Log Jumlah Spora
Hidup (VSC/ml)
Sandi Media Waktu
A1 0 0.00 30 6.58 48 6.09 A2 0 0.00 30 6.12 48 7.53 A3 0 0.00 30 6.90 48 6.75 B1 0 0.00 30 6.51 48 6.59 B2 0 0.00 30 7.22 48 7.47 B3 0 0.00 30 6.87 48 6.97 C1 0 0.00 30 6.33 48 7.15 C2 0 0.00 30 7.21 48 6.39 C3 0 0.00 30 6.46 48 6.65
58
Lampiran 7. Contoh Penentuan LC50 Menggunakan Program Probit Quant
A1-30
conc obs.corr. expected O-E cont.chi-sq 2958.3000 99.82 99.48 .34 .0022321 295.8300 98.78 96.35 2.42 .0167093 29.5830 90.00 84.75 5.25 .0213317 2.9583 40.00 60.19 20.19 .1701328 .2958 40.00 30.53 9.47 .0422657 tot. chi-sq = 2.5267 chi-sq @ 95% = 7.8147 chi-sq @ 99% = 11.3449 The fitted line is log conc.= a + b(probit) where : a = 4.89 b = .88
The correlation coefficient of the initial line is .8660 LC50 fLC50 +95% CL -95% CL 1.34 4.99 6.68 .27
S fS +95% CL -95% CL 13.39 .24 3.18 56.41
(LC50 = 1,34) : Artinya, untuk mematikan 50 % dari total serangga yang ada dibutuhkan konsentrasi toksin dalam larutan bioinsektisida sebanyak 1,34 mg/L.
59
Lampiran 8. Hasil Analisis Ragam Uji F dan Uji Beda Nyata Terkecil Terhadap Perbedaan Formulasi Media, Perbedaan Waktu Kultivasi, Serta Interaksi Antara Keduanya Terhadap Jumlah Sel Hidup Pada Cairan Kultivasi (α = 0.05)
Formulasi
Media Ulangan
Waktu Fermentasi
Rata2 0 jam Rata2 30 jam Rata2 48 jam Rata2
A1 1 5.54 5.74 7.67 7.60 6.78 6.99 6.78 2 5.93 7.53 7.20 A2 1 5.78 5.81 7.96 7.94 7.51 7.53 7.09 2 5.85 7.92 7.56 A3 1 6.41 6.22 7.96 7.82 7.11 6.98 7.01 2 6.04 7.67 6.85 B1 1 5.48 5.76 7.51 7.55 7.11 7.20 6.83 2 6.04 7.59 7.28 B2 1 6.31 6.03 8.23 8.25 8.37 8.33 7.54 2 5.74 8.28 8.29 B3 1 6.54 6.29 7.99 7.93 8.56 8.66 7.63 2 6.04 7.88 8.76 C1 1 5.70 5.70 8.19 8.16 7.86 7.83 7.23 2 5.70 8.12 7.80 C2 1 6.34 6.15 7.87 7.79 7.79 7.66 7.20 2 5.95 7.70 7.53 C3 1 6.52 6.34 7.56 7.48 7.60 7.75 7.19 2 6.16 7.41 7.90 6.00 7.83 7.66 Tabel Anova
Sumber JK Db KT F hit P-value F α Formulasi Media 3.8906 8 0.48633 12.32245 0.00000 2.30531 Waktu Kultivasi 36.7188 2 18.35938 465.18709 0.00000 3.35413 Interaksi 3.5423 16 0.22139 5.60958 0.00005 2.03579 Galat 1.0656 27 0.03947 Total 45.2172 53 Keterangan :
Pada tingkat kepercayaan 95 % (α=0,05) menunjukkan bahwa perlakuan perbedaan formulasi media dan perbedaan waktu kultivasi berpengaruh secara nyata terhadap jumlah sel (TPC) pada cairan hasil kultivasi
60
UJI BEDA NYATA TERKECIL (LSD)
, α = 0,05
0.398
FORMULASI MEDIA
Nilai absolute perbedaan rata-rata
Formuulasi Media A1 A2 A3 B1 B2 B3 C1 C2 C3 A1 0.32 0.23 0.06 0.76 0.85 0.45 0.42 0.42 A2 0.09 0.26 0.44 0.53 0.13 0.10 0.10 A3 0.17 0.53 0.62 0.22 0.19 0.18 B1 0.70 0.79 0.39 0.36 0.36 B2 0.09 0.31 0.34 0.34 B3 0.40 0.43 0.44 C1 0.03 0.04 C2 0.01 C3 Keterangan WAKTU KULTIVASI
Nilai absolute perbedaan rata-rata
Waktu Fermentasi 0 Jam 30 Jam 48 Jam
0 Jam 1.83 1.65
30 Jam 0.18
48 Jam
Keterangan :
Tidak berbeda secara nyata Berbeda secara nyata Tidak berbeda secara nyata Berbeda secara nyata
61
INTERAKSI ANTARA FORMULASI MEDIA DENGAN WAKTU KULTIVASI
INTERAKSI A1 1 A1 2 A2 1 A2 2 A3 1 A3 2 B1 1 B1 2 B2 1 B2 2 B3 1 B3 2 C1 1 C1 2 C2 1 C2 2 C3 1 C3 2 A1 1 0.61 0.34 0.07 0.22 0.62 0.05 0.40 0.65 0.73 0.33 1.06 0.56 0.23 0.19 0.06 0.12 0.15 A1 2 0.95 0.54 0.83 0.01 0.55 0.21 1.26 1.34 0.94 1.67 1.16 0.84 0.79 0.67 0.49 0.76 A2 1 0.54 0.12 0.96 0.39 0.74 0.31 0.39 0.01 0.72 0.22 0.11 0.15 0.28 0.46 0.19 A2 2 0.29 0.55 0.01 0.33 0.72 0.80 0.40 1.13 0.63 0.30 0.26 0.13 0.05 0.22 A3 1 0.84 0.27 0.62 0.43 0.51 0.12 0.84 0.34 0.01 0.03 0.16 0.34 0.07 A3 2 0.57 0.22 1.27 1.35 0.95 1.68 1.18 0.85 0.81 0.68 0.50 0.77 B1 1 0.35 0.71 0.78 0.39 1.12 0.61 0.28 0.24 0.11 0.06 0.21 B1 2 1.06 1.13 0.74 1.46 0.96 0.63 0.59 0.46 0.29 0.56 B2 1 0.08 0.32 0.41 0.10 0.42 0.47 0.59 0.77 0.50 B2 2 0.40 0.33 0.17 0.50 0.54 0.67 0.85 0.58 B3 1 0.73 0.22 0.11 0.15 0.28 0.45 0.18 B3 2 0.50 0.83 0.87 1.00 1.18 0.91 C1 1 0.33 0.37 0.50 0.67 0.40 C1 2 0.04 0.17 0.35 0.08 C2 1 0.13 0.30 0.03 C2 2 0.18 0.09 C3 1 0.27 C3 2 Keterangan :
A1 1 : Formulasi media A1 untuk waktu kultivasi selama 30 jam A1 2 : Formulasi media A2 untuk waktu kultivasi selama 48 jam Tidak berbeda secara nyata
62
Lampiran 9. Hasil Analisis Ragam Uji F dan Uji Beda Nyata Terkecil Terhadap Perbedaan Formulasi Media, Perbedaan Waktu Kultivasi, Serta Interaksi Antara Keduanya Terhadap Jumlah Spora Hidup Pada Cairan Kultivasi (α = 0.05)
Formulasi
Media Ulangan
Waktu Fermentasi
Rata2 0 jam Rata2 30 jam Rata2 48 jam Rata2
A1 1 0.00 0.00 6.50 6.58 6.18 6.09 4.22 2 0.00 6.66 6.00 A2 1 0.00 0.00 6.04 6.12 6.28 6.34 4.15 2 0.00 6.20 6.40 A3 1 0.00 0.00 6.99 6.90 6.87 6.81 4.57 2 0.00 6.81 6.75 B1 1 0.00 0.00 6.73 6.51 6.58 6.59 4.37 2 0.00 6.28 6.60 B2 1 0.00 0.00 7.21 7.22 7.43 7.47 4.90 2 0.00 7.22 7.51 B3 1 0.00 0.00 6.99 6.87 6.98 6.97 4.61 2 0.00 6.75 6.95 C1 1 0.00 0.00 6.35 6.33 7.25 7.15 4.49 2 0.00 6.30 7.05 C2 1 0.00 0.00 7.27 7.21 6.60 6.39 4.53 2 0.00 7.14 6.18 C3 1 0.00 0.00 6.48 6.46 6.70 6.65 4.37 2 0.00 6.44 6.60 Rata-Rata 0.00 6.69 6.72 Tabel Anova
Sumber JK Db KT F hit P-value F α Formulasi Media 2.38772 8 0.29846 24.09921 0.00000 2.30531 Waktu Kultivasi 539.03924 2 269.51962 21762.05679 0.00000 3.35413 Interaksi 2.94215 16 0.18388 14.84756 0.00000 2.03579 Galat 0.33439 27 0.01238 Total 544.70351 53 Keterangan :
Pada tingkat kepercayaan 95 % (α=0,05) menunjukkan bahwa perlakuan perbedaan formulasi media dan perbedaan waktu kultivasi berpengaruh secara nyata terhadap jumlah spora (VSC) pada cairan hasil kultivasi
63
UJI BEDA NYATA TERKECIL (LSD)
, α = 0,05
0.223
FORMULASI MEDIA
Nilai absolute perbedaan rata-rata
Formuulasi Media A1 A2 A3 B1 B2 B3 C1 C2 C3 A1 0.07 0.35 0.14 0.67 0.39 0.27 0.31 0.15 A2 0.42 0.21 0.74 0.46 0.34 0.38 0.22 A3 0.21 0.32 0.04 0.08 0.04 0.20 B1 0.53 0.25 0.13 0.17 0.00 B2 0.28 0.40 0.36 0.53 B3 0.12 0.08 0.24 C1 0.04 0.12 C2 0.16 C3 Keterangan WAKTU KULTIVASI
Nilai absolute perbedaan rata-rata
Waktu Fermentasi 0 Jam 30 Jam 48 Jam
0 Jam 6.69 6.72
30 Jam 0.03
48 Jam
Keterangan :
Tidak berbeda secara nyata Berbeda secara nyata Tidak berbeda secara nyata Berbeda secara nyata
64
INTERAKSI ANTARA FORMULASI MEDIA DENGAN WAKTU KULTIVASI
INTERAKSI A1 1 A1 2 A2 1 A2 2 A3 1 A3 2 B1 1 B1 2 B2 1 B2 2 B3 1 B3 2 C1 1 C1 2 C2 1 C2 2 C3 1 C3 2 A1 1 0.49 0.46 0.24 0.32 0.23 0.07 0.01 0.64 0.89 0.30 0.39 0.25 0.57 0.63 0.19 0.12 0.07 A1 2 0.03 0.25 0.81 0.72 0.42 0.50 1.13 1.38 0.79 0.88 0.24 1.06 1.12 0.30 0.37 0.56 A2 1 0.25 0.78 0.69 0.38 0.47 1.09 1.35 0.75 0.84 0.20 1.03 1.08 0.27 0.34 0.53 A2 2 0.56 0.47 0.17 0.25 0.88 1.13 0.53 0.63 0.01 0.81 0.87 0.05 0.12 0.31 A3 1 0.09 0.40 0.31 0.32 0.57 0.03 0.06 0.58 0.25 0.30 0.51 0.44 0.25 A3 2 0.30 0.22 0.41 0.66 0.06 0.16 0.48 0.34 0.40 0.42 0.35 0.16 B1 1 0.09 0.71 0.96 0.37 0.46 0.18 0.64 0.70 0.12 0.05 0.15 B1 2 0.63 0.88 0.28 0.38 0.26 0.56 0.62 0.20 0.13 0.06 B2 1 0.25 0.34 0.25 0.89 0.07 0.01 0.83 0.76 0.57 B2 2 0.60 0.50 1.14 0.32 0.26 1.08 1.01 0.82 B3 1 0.09 0.55 0.28 0.33 0.48 0.42 0.22 B3 2 0.64 0.18 0.24 0.58 0.51 0.32 C1 1 0.82 0.88 0.06 0.13 0.32 C1 2 0.06 0.76 0.69 0.50 C2 1 0.82 0.75 0.56 C2 2 0.07 0.26 C3 1 0.19 C3 2 Keterangan :
A1 1 : Formulasi media A1 untuk waktu kultivasi selama 30 jam A1 2 : Formulasi media A2 untuk waktu kultivasi selama 48 jam Tidak berbeda secara nyata
65
Lampiran 10. Hasil Analisis Ragam Uji F dan Uji Beda Nyata Terkecil Terhadap Perbedaan Formulasi Media, Perbedaan Waktu Kultivasi, Serta Interaksi Antara Keduanya Terhadap Total Gula Pada Cairan Kultivasi (α = 0.05)
Formulasi
Media Ulangan
Waktu Fermentasi
Rata2 0 jam Rata2 30 jam Rata2 48 jam Rata2
A1 1 4.58 4.43 3.09 2.99 2.78 2.71 2.64 2 4.29 2.90 2.64 A2 1 4.70 4.39 2.88 2.93 2.63 2.56 2.49 2 4.07 2.98 2.49 A3 1 4.60 4.46 2.88 2.95 2.65 2.63 2.60 2 4.31 3.03 2.60 B1 1 4.66 4.64 3.71 3.28 2.85 2.81 2.77 2 4.61 2.84 2.77 B2 1 5.03 4.72 3.59 3.70 2.93 2.99 3.04 2 4.41 3.81 3.04 B3 1 4.94 4.73 3.76 3.71 2.70 2.74 2.78 2 4.51 3.66 2.78 C1 1 4.89 4.48 3.89 3.37 3.06 2.93 2.79 2 4.08 2.86 2.79 C2 1 4.87 4.47 3.99 3.86 2.98 3.02 3.06 2 4.07 3.74 3.06 C3 1 5.03 4.44 3.87 3.71 2.85 2.90 2.95 2 3.86 3.55 2.95 Rata-Rata 4.53 3.39 2.81 Tabel Anova
Sumber JK Db KT F hit. P-value F α Formulasi Medi 1.8111343 8 0.2263918 2.0034495 0.08475674 2.3053132 Waktu Kultivasi 27.5369761 2 13.7684880 121.8439573 0.00000000 3.3541308 Interaksi 1.0725052 16 0.0670316 0.5931946 0.86162929 2.0357904 Galat 3.0510268 27 0.1130010 Total 33.4716423 53 Keterangan :
Pada tingkat kepercayaan 95 % (α=0,05) menunjukkan bahwa perlakuan perbedaan waktu kultivasi berpengaruh secara nyata, sedangkan perbedaan formulasi media dan interaksi antara perbedaan formulasi media dan waktu kultivasi tidak berpengaruh secara nyata terhadap total gula pada cairan hasil kultivasi
66
UJI BEDA NYATA TERKECIL (LSD)
, α = 0,05
0.67424
FORMULASI MEDIA
Nilai absolute perbedaan rata-rata
Waktu Kultivasi 0 Jam 30 Jam 48 Jam
0 Jam 1.14 1.72
30 Jam 0.58
48 Jam
Keterangan :
Tidak berbeda secara nyata Berbeda secara nyata
67
Lampiran 11. Hasil Analisis Ragam Uji F dan Uji Beda Nyata Terkecil Terhadap Perbedaan Formulasi Media, Perbedaan Waktu Kultivasi, Serta Interaksi Antara Keduanya Terhadap Nilai pH