UJI NINHIDRIN - UJI KELARUTAN LIPID

UJI KUALITATIF LIPID

B. UJI KELARUTAN LIPID

2. UJI NINHIDRIN

Reaksi antara gugus asam amino bebas dengan ninhidrin (triketohidrinden hidrat).

Ninhydrin adalah agen pengoksidasi kuat dan di hadapannya, asam amino teroksidasi dan membebaskan amonia, CO2, aldehida yang sesuai dan ninhidrin yang tereduksi.

Amonia yang terbentuk akan bereaksi dengan ninhidrin dan produk tereduksinya (hidridantin) menghasilkan substrat biru diketohidrin (ungu ruhemann). Pada asam amino prolin, produk yang dihasilkan berbeda membentuk warna kuning cerah.

Asparagine yang memiliki gugus amida bebas menghasilkan produk berwarna cokelat.

Uji ini juga dapat diberikan oleh protein dan peptida. (Awasthi et al, 2013).

PRINSIP :

TUJUAN :

60 d. penjepit tabung e. pipet tetes

f. larutan Ninhydrin 0.2 % dilarutkan dalam acetone.

SAMPEL : Larutan Asam Amino 0.5%

PROSEDUR :

1. Tambahkan 2-5 tetes larutan ninhydrin solution pada 1 ml larutan sampel.

2. Campur larutan dan didihkan selama 5 menit.

3. Amati warna yang terbentuk pink, ungu or warna violet-blue.

4. Asam amino acid seperti proline and hydroxyproline menghasilkan kompleks warna yellow.

HASIL PERCOBAAN

Bahan Tabung 1 Tabung 2 Tabung 3 Tabung 4 Tabung 5

61 Lar. Ninhidrin

0.2%

Campur dan didihkan selama 5 menit.

Hasil :

PEMBAHASAN :

KESIMPULAN :

TTD Dosen / Asisten Dosen

63 3. UJI BIURET

Uji biuret mendeteksi adanya residu asam amino dari peptida, kandungan dua atau lebih residu asam amino digunakan untuk menentukan ada atau tidaknya protein.

Tes ini bergantung pada fakta bahwa residu asam amino membentuk kompleks berwarna dengan ion Cu⁺² dalam medium basa. Uji dilakukan terhadap zat-zat yang mengandung setidaknya dua gugus karbonil yang terikat langsung melalui satu atom karbon atau nitrogen. Dalam tes ini alkali CuSO4 akan bereaksi dengan senyawa yang mengandung dua atau lebih ikatan peptide dan memberikan kompleks berwarna ungu.

Semua protein harus menunjukkan hasil positif sedangkan asam amino sederhana harus memberikan hasil tes negative (Awasthi et al, 2013).

PRINSIP :

TUJUAN :

REAKSI :

ALAT DAN BAHAN :

a. water bath b. tabung reaksi c. rak tabung d. penjepit tabung e. pipet tetes

f. CuSO4.5H2O 1%

g. NaOH 40%

SAMPEL : Larutan protein 0.5% - bovine serum albumin &

casein dalam NaOH Larutan asam amino 0.5%

PROSEDUR :

1. Masukkan 1 ml larutan sampel ke dalam tabung dan tambahkan 0.5 mL NaOH, campur larutan.

2. Tambahkan 2-5 tetes larutan CuSO4

3. Amati warna yang ungu yang terbentuk dari peptide pada sampel

HASIL PERCOBAAN

PEMBAHASAN :

KESIMPULAN :

TTD Dosen / Asisten Dosen

67 4. UJI XANTOPROTEIN

Uji ini merespons asam amino aromatik, seperti phenyl alanine, tyrosine dan tryptophan. Adanya asam nitrat pekat, cincin fenil aromatik akan dinitrasi menghasilkan nitro-derivatif berwarna kuning. Pada pH basa warna berubah menjadi oranye karena ionisasi gugus fenolik. Protein yang mengandung asam amino aromatik juga memberikan respons positif terhadap tes ini (Awasthi et al, 2013).

PRINSIP :

TUJUAN :

REAKSI :

ALAT DAN BAHAN :

a. water bath b. tabung reaksi

68 c. rak tabung

d. penjepit tabung e. pipet tetes f. vortex g. HNO3 pekat h. NaOH 40% w/v

SAMPEL : Larutan asam amino 0.5% seperti tyrosine, glycine, tryptophan, phenylalanine, lysine dan lain lain.

PROSEDUR :

1. Masukkan 1 ml larutan sampel ke dalam tabung dan tambahkan beberapa tetes HNO3 pekat, campur larutan dengan vortex.

2. Didihkan tabung selama beberapa menit. Lalu dinginkan pada air mengalir 3. Tambahkan beberapa tetes NaOH, kocok. Amati warna yang terbentuk. Merah

orange menunjukkan adanya gugus aromatic pada sampel.

HASIL PERCOBAAN

Bahan Tabung 1 Tabung 2 Tabung 3 Tabung 4 Tabung 5

HNO3 pekat

Vortex, didihkan dengan waterbath NaOH 40 %

Campur dan amati Hasil :

PEMBAHASAN :

KESIMPULAN :

TTD Dosen / Asisten Dosen

71 5. UJI MILLON

Uji ini merespon asam amino fenolik seperti Tyrosine dan turunannya.

Senyawa dengan hidroksibenzena radikal bereaksi dengan pereaksi Millon membentuk kompleks berwarna merah. Pereaksi Millon adalah larutan sulfat merkuri dalam asam sulfat (Awasthi et al, 2013).

PRINSIP :

TUJUAN :

REAKSI :

ALAT DAN BAHAN :

a. water bath b. tabung reaksi

72 c. rak tabung

d. penjepit tabung e. pipet tetes f. vortex

g. Reagen Millon (15% W/V mercuric sulphate dalam asam sulfat 6 N) h. Sodium nitrite (5%W/V dalam air destilasi ( to be freshly prepared)

SAMPEL : Larutan asam amino

Larutan glycine, casein & bovine serum albumin 1mg/ml

PROSEDUR :

1. Masukkan 1 ml larutan sampel ke dalam tabung dan tambahkan beberapa tetes reagen Millon, campur larutan dengan vortex.

2. Didihkan tabung selama 3-5 menit. Lalu dinginkan pada air mengalir.

3. Tambahkan beberapa tetes sodium nitrite, kocok. Amati warna yang terbentuk.

Hasil positif reaction juga ditunjukkan pada sampel protein yang mengandung tyrosine.

HASIL PERCOBAAN

Bahan Tabung 1 Tabung 2 Tabung 3 Tabung 4 Tabung 5

reagen Millon

Vortex, didihkan dengan waterbath 3- 5 menit sodium nitrite

Campur dan amati Hasil :

PEMBAHASAN :

KESIMPULAN :

TTD Dosen / Asisten Dosen

75 6. UJI DENATURASI PROTEIN

Protein adalah polimer asam amino yang khas, karena dapat terdiri dari ratusan asam amino. Kelompok asam amino dapat berupa nonpolar, polar, bermuatan positif, atau bermuatan negatif. Struktur protein utama adalah untaian rantai asam amino, sedangkan struktur sekunder dan tersier protein ditentukan berdasarkan lipatan protein. Ini disebut konformasi asli dan biasanya keadaan di mana protein itu paling aktif dan fungsional. Protein disimpan dalam konformasi asli dengan kombinasi kekuatan: Ikatan hidrogen, interaksi ionik, jembatan disulfida, dan interaksi hidrofobik (Hobbs, 2013).

Mengubah konformasi protein baik sementara atau permanen dengan mengganggu kekuatan-kekuatan tersebut dikenal dengan denaturasi. Denaturasi menyebabkan hilangnya aktivitas protein. Karena konformasi asli biasanya adalah larut air, mengganggu struktur sekunder dan tersier menyebabkan perubahan kelarutan dan sering menghasilkan pembentukan padatan dalam larutan. Reagen atau kondisi yang dapat menyebabkan denaturasi disebut agen denaturasi; ini termasuk panas, perubahan pH, alkohol, dan garam logam berat (Hobbs, 2013). Uji yang dilakukan adalah Uji terhadap efek pemanasan, pH, ethanol 95%, lead(II) nitrate atau silver nitrate terhadap larutan albumin.

PRINSIP :

TUJUAN :

ALAT DAN BAHAN :

a. water bath b. tabung reaksi c. rak tabung d. penjepit tabung e. pipet tetes

SAMPEL : Albumin adalah protein dengan simple globular. Dapat dilarutkan dengan air dan salt solutions seperti isotonic saline (NaCl 0.9%)

PROSEDUR :

1. Siapkan larutan stok albumin dengan menambahkan satu putih telur ke dalam 100 mL air suling. Aduk sampai albumin larut.

2. Tempatkan 5 mL larutan albumen ke masing-masing dari enam tabung reaksi.

Beri label tabung, A, B1, B2, C dan D.

3. Perlakukan keempat larutan sebagai berikut:

- Kontrol: Diamkan pada suhu kamar. Ukur suhunya. Tentukan pH dengan kertas pH.

- Pengaruh panas : Panaskan Tabung A dalam water bath selama beberapa menit.

- Pengaruh perubahan pH : Dalam tabung B1, tambahkan 2 mL HCl 1M. Cek pH menggunakan strip tes pH. Dalam tabung B2, tambahkan 2 mL NaOH 10%. Cek pH menggunakan strip tes pH.

- Efek etanol dan timbal (II) nitrat atau perak nitrat : Dalam tabung C,

tambahkan 1 mL etanol 95%. Dalam tabung D, tambahkan 5-10 tetes timbal (II) nitrat 2% atau perak nitrat 2%.

4. Bandingkan setiap solusi pengujian dengan kontrol. Catat pengamatan Anda.

HASIL PERCOBAAN

KESIMPULAN :

TTD Dosen / Asisten Dosen

Dalam dokumen PENUNTUN PRAKTIKUM BIOKIMIA DASAR (Halaman 59-80)