Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol
Lumut Hati Mastigophora diclados (Bird. ex Web.) Nees
secara In Vivo
SKRIPSI
ENDAH PURNAMASARI
NIM: 108102000002
FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN
PROGRAM STUDI FARMASI
ii
Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol
Lumut Hati Mastigophora diclados (Bird. ex Web.) Nees
secara In Vivo
SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi
ENDAH PURNAMASARI
NIM: 108102000002
FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN
PROGRAM STUDI FARMASI
vi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Nama : Endah Purnamasari
Program Studi : Farmasi
Judul : Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol Lumut Hati
Mastigophora diclados (Bird. ex Web.) Nees Secara In Vivo
Peneletian ini dilakukan dengan tujuan untuk mengetahui aktivitas antiinflamasi dari ekstrak etanol lumut hati Mastigophora diclados (Bird. ex Web) Nees. Ekstraksi dilakukan menggunakan metode maserasi yang dipekatkan menggunakan vakum rotary evaporator. Ekstrak kental dengan berbagai variasi dosis 0,1 mg/KgBB, 1 mg/KgBB, 10 mg/KgBB, 100 mg/KgBB, 1000 mg/KgBB secara oral diberikan pada tikus putih jantan galur Sprague Dawley. Asetosal digunakan sebagai kontrol positif dengan dosis 135mg/KgBB. Penelitian ini menggunakan metode udem buatan pada telapak kaki tikus dengan induksi karagenan 1% sebanyak 0,2 ml sebagai zat pembuat udem. Dari hasil pengujian ekstrak etanol dari lumut hati M.diclados menunjukkan bahwa persen inhibisi udem maksimal yaitu pada jam keenam dari semua variasi dosis ekstrak tersebut. Pada uji ANOVA menunjukkan adanya perbedaan bermakna antara setiap dosis dengan kontrol negatif pada taraf uji 0,05 (ρ≤0,05) dan semua dosis ekstrak
terdapat perbedaan bermakna dengan kontrol positif (ρ≤0,05) terkecuali pada
dosis 0,1 mg/KgBB tidak terdapat perbedaan bermakna dengan kontrol positif
pada taraf uji 0,05 (ρ≥0,05). Dari semua variasi dosis pada penelitian ini, dosis tertinggi yang mampu menghambat udem yaitu dosis 100 mg/KgBB (79,55% pada jam keenam), sedangkan pada kontrol pembanding yaitu asetosal daya hambat udemnya berada dibawah yaitu (50,39% pada jam keenam).
vii UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Name : Endah Purnamasari
Program Study : Pharmacy
Title : The Antiinflammatory Effect of Ethanol Extract Liverwort Mastigophora diclados (Bird.ex Web.) Nees In Vivo
The research was conducted in order to determine the antiinflammatory activity of the ethanol extract of the liverwort Mastigophora diclados (Bird. ex Web.) Nees. Extraction was performed by using a maceration method which was concentrated of using a vacuum rotary evaporator. Variety doses of extract 0.1 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg, 100 mg/kg, 1000 mg/kg body weight are orally given to male albino rat strain Sprague Dawley. Aspirin was used as positive control at a dose of 135mg/Kg body weight. This study used hind paw edema method by the injection of carrageenan with 0.2 ml of 1 % as an edematogenic agent. The resulted showed that the maximal percent inhibition of edema was at the sixth hours of all the extracts dose variation. ANOVA analysis showed that there were significant differences between each dose of the extract with the negative control
(ρ≤0.05) and all doses of the extract are significant differences with the positive control (ρ ≤ 0.05), except at a dose of 0.1 mg / Kg body weight there was no significant difference in the positive control level test 0.05 (ρ ≥ 0.05). From all the variation of doses in this study, the highest dose that could inhibit edema was a dose of 100 mg / kg body weight (79.55% at the sixth hour), whereas the aspirin as positive control only inhibition at sixth hours on 50.39% .
viii UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Puji syukur saya panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa, karena atas
berkat dan rahmatnya saya dapat menyelesaikan penulisan skripsi ini. Penulisan skripsi ini dilakukan dalam rangka untuk memenuhi tugas akhir sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Program Studi Farmasi UIN Syarif Hidayatullah, Jakarta.
Saya menyadari bahwa, tanpa bantuan dan bimbingan dari berbagai pihak, dari masa perkuliahan sampai pada penyusunan skripsi ini sangatlah sulit bagi saya untuk menyelesaikan skripsi ini. Oleh karena itu, saya mengucapkan terima kasih kepada :
1. Ibu Ismiarni Komala, M.Sc., Ph.D, Apt selaku pembimbing pertama dan Ibu Eka Putri, M.Si, Apt selaku pembimbing kedua yang telah meluangkan waktu, tenaga, pikiran untuk membimbing dan mengarahkan, memberikan ilmu dan masukan saran, sejak proposal skripsi, pelaksanaan penelitian sampai penyusunan skripsi.
2. Bapak Prof. DR. (hc) dr. M.K Tadjudin Sp.And, selaku Dekan Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
3. Bapak Drs.Umar Mansur selaku Ketua Jurusan Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. 4. Bapak dan Ibu dosen yang telah memberikan ilmu dan pengetahuan hingga
penulis dapat menyelesaikan studi di jurusan Farmasi FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. Pak Suhendra selaku dosen matematika statistik yang telah membantu memberikan pengarahan dalam pengolahan data.
ix UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Fadillah, dan semua keluarga besar yang selalu memberikan dorongan moril,
materil, spiritual hingga selesainya skripsi ini, semoga segala amal dan jerih payah kalian semua mendapat balasan yang jauh lebih baik disisi Allah. 7. Buat sahabat-sahabatku, Aemsina, Dewanti, Fitri, Ade, sinthi, ikhsan, yuni,
dina, sivia,intan, dian, ayu,wiwin, pipit (unpad), ogi, nana, yang selalu memberikan masukan, tak bosan memberikan dukungan doa dan semangat serta mendengarkan keluhan,tangisan dan teriakan penulis dalam penyelesaian skripsi ini.
8. Teman-teman seperjuangan farmasi angkatan 2008 khususnya ALCOOLIQUE yang sama-sama berjuang bersama selama 4 tahun untuk menyelesaikan pendidikan ini.Teman-teman dari UNMA (candra, ma’ah, een) yang berjuang bersama dalam melakukan uji antiinflamasi.
9. Untuk kak juli yang telah membantu penulis dalam memberikan pengarahan dan nasehat. kak pia, kak eris, mba rani, kak liken, kak lisna, yang telah membantu dalam mempermudah soal persuratan dan hal-hal yang berhungan dengan lab.
10.Serta semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu yang turut membantu menyelesaikan skripsi ini.
Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih belum sempurna. Oleh karena itu kritik dan saran yang bersifat membangun sangat penulis harapkan guna tercapainya kesempurnaan skripsi ini.
Akhirnya, dengan segala kerendahan hati, penulis berharap semoga hasil penelitian ini dapat bermanfaat baik bagi kalangan akademis, khususnya bagi mahasiswa farmasi, masyarakat pada umumnya dan bagi dunia ilmu pengetahuan.
Jakarta, 14 Januari 2013
xi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Halaman
HALAMAN JUDUL ... .. ii
HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS ... .. iii
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ... .. iv
HALAMAN PENGESAHAN ... .. v
ABSTRAK ... .. vi
ABSTRACT ... .. vii
KATA PENGANTAR ... .. viii
HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH ... .. x
DAFTAR ISI ... .. xi
DAFTAR TABEL ... .. xiv
DAFTAR GAMBAR ... .. xv
DAFTAR LAMPIRAN ... .. xvi
BAB 1 PENDAHULUAN ... .. 1
1.1 Latar Belakang ... .. 1
1.2 Perumusan Masalah... .. 3
1.3 Tujuan Penelitian ... .. 3
1.4 Hipotesis ... .. 4
1.5 Manfaat Penelitian ... .. 4
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ... .. 5
2.1 Deskripsi Mastigophora diclados ... .. 5
2.1.1 Klasifikasi Tanaman ... .. 5
2.1.2 Sinonim Mastigophora diclados ... .. 5
2.1.3 Komposisi gelatin ... .. 5
2.1.4 Kandungan Kimia ... .. 5
2.1.5 Aktivitas Biologi ... .. 6
2.2 Simplisia ... .. 6
2.2.1 Pengertian Simplisia ... .. 6
xii UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
2.3.3 Freeze Drying ... .. 10
2.4 Inflamasi ... .. 10
2.4.1 Pengertian Inflamasi ... .. 10
2.4.2 Mekanisme terjadinya Inflamasi ... .. 11
2.4.3 Jenis Inflamasi ... .. 11
2.4.4 Obat Antiinflamasi ... .. 12
2.4.5 Beberapa metode uji antiinflamasi ... .. 13
2.5 Karagenan ... 14
2.6 Asam asetil salisilat ... .. 15
BAB 3 METODOLOGI PENELITIAN ... .. 17
3.1 Tempat dan waktu penelitian ... .. 17
3.2 Alat dan Bahan ... .. 17
3.2.1 Alat Penelitian ... .. 17
3.2.2 Bahan Penelitian ... .. 17
3.2.3 Bahan Kimia ... 17
3.2.4 Bahan Pereaksi ... 18
3.2.5 Hewan Percobaan ... 18
3.3 Prosedur Penelitian ... .. 18
3.3.1 Pengambilan sampel ... .. 18
3.3.2 Determinasi tanaman ... .. 18
3.3.3 Penyiapan bahan yang digunakan ... .. 19
3.3.4 Pembuatan sediaan ... 19
3.3.5 Percobaan Pendahuluan ... 20
3.3.6 Perencanaan dosis asam asetil salisilat ... 20
3.3.7 Penapisan fitokimia... 21
3.4 Uji Antiinflamasi ... .. 22
3.4.1 Aklimatisasi dan pengelompokkan Hewan Percobaan ... .. 22
xiii UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
4.1 Hasil Penelitian ... .. 25
4.1.1 Hasil Penapisan Fitokimia ... .. 25
4.1.2 Hasil Ekstraksi dari lumut hati M.diclados ... .. 25
4.1.3 Hasil uji antiinflamasi ... .. 25
4.2 Pembahasan ... .. 29
BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN ... .. 37
5.1 Kesimpulan ... .. 37
5.1 Saran ... .. 37
xiv UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Tabel ... . Halaman
3.1. Pembagian kelompok hewan uji antiinflamasi ... .. 23
4.1. Data hasil penapisan fitokia ... .. 25
4.2. Rata-rata volume udem ... .. 26
4.3. Rata-rata persen udem ... 27
xv UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Halaman
Gambar 2.1 Struktur asam asetil salisilat ... .. 15
Gambar 4.1 Grafik hubungan rata-rata volume udem terhadap waktu ... .. 26
Gambar 4.2 Grafik hubungan persen rata-rata udem terhadap waktu ... .. 27
xvi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Halaman
Lampiran 1 Lumut hati M.diclados ... .. 43
Lampiran 2 Perlakuan Hewan ... .. 44
Lampiran 3 Hasil uji antiinflamasi ... 45
Lampiran 4 Determinasi Lumut hati M.diclados... 46
Lampiran 5 Hasil Penapisan Fitokimia ... 47
Lampiran 6 Surat keterangan hewan uji ... 48
Lampiran 7 Proses Pembuatan Ekstrak ... 49
Lampiran 8 Aklimatisasi Hewan percobaan ... 50
Lampiran 9 Skema kerja antiinflamasi ... 51
Lampiran 10 Konversi dosis hewan (Laurance, 1964) ... 52
Lampiran 11 Perhitungan dosis ekstrak etanol lumut hati M.diclados ... 53
Lampiran 12. Perhitungan dosis asam asetil salisilat ... 55
Lampiran 13 Pengukuran volume udem telapak kaki setelah diinduksi karagenan .. 56
Lampiran14 Persentase udem telapak kaki setelah diinduksi karagenan ... 57
Lampiran 15 Persentase inhibisi udem telapak kaki setelah diinduksi karagenan .... 60
Lampiran 16 Perhitungan persen udem dan persen inhibisi ... 62
1 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
1.1LATAR BELAKANG
Tingginya keanekaragaman hayati, khususnya flora di Tanah Air kita sudah tidak disangsikan. Informasi kajian flora tingkat tinggi sudah banyak dipublikasikan, namun untuk kajian tingkat rendah seperti bryophyta sebagai salah satu komponen penunjang predikat negara megadiversiti, belum banyak diinformasikan (Immamudin, 2006).
Lumut merupakan tumbuhan tingkat rendah yang termasuk ke dalam divisi bryophyta. Pada umumnya tumbuhan lumut menyukai tempat-tempat yang basah dan lembab didataran rendah sampai dataran tinggi. Tumbuhan ini sering disebut sebagai tumbuhan pioneer atau tumbuhan perintis, karena lumut dapat tumbuh dengan berbagai kondisi pertumbuhan dimana tumbuhan tingkat tinggi tidak bisa tumbuh (Immamudin, 2006).
Lumut hati dengan beragam filum yang kecil, merupakan rumput-rumputan yang diperkirakan terdiri dari sekitar 5.000 spesies. Tanaman ini membentuk spora dan dapat tumbuh hampir di semua habitat yang tersedia, terutama di lokasi yang lembab (Ludwiczuk & Asakawa, 2010). Lumut hati dibedakan dari kelas-kelas tumbuhan lumut lainnya karena adanya minyak tubuh (oil bodies), yang mampu mensintesis senyawa yang larut lemak seperti asetogenin, terpenoid dan senyawa aromatik, sementara yang lainnya tidak. Lumut hati memiliki badan minyak (oil bodies) sebagai penanda yang sangat penting untuk klasifikasi lumut hati tersebut. Beberapa kandungan kimia dari lumut hati merupakan senyawa yang khas bagi kelas ini dan menunjukkan berbagai aktivitas biologis yang menarik, seperti antimikroba, sitotoksik, antioksidan dan sejumlah enzim yang bekerja sebagai inhibitor serta memiliki aktivitas yang merangsang apoptosis (Komala, 2010).
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Purwokerto Mastigophora hidup menempel pada batang pinus dan Agathis
pada ketinggian 800 m blok 55, (Haerida & Gradstein, 2011), hutan pegunungan Taman Nasional Lore Lindu Sulawesi Tengah Mastigophora diclados hidup di ketinggian tinggi (Gradstein &Culmsee, 2010), Pada batang pohon palm sepanjang jalan menuju kawah putih pada ketinggian 2050 m Gunung Patuha Bandung Jawa Barat (Gradstein et al, 2011).
Rasa nyeri dan peradangan merupakan gejala penyakit atau kerusakan yang paling sering terjadi yang disebabkan karena suatu kerusakan jaringan atau gangguan metabolisme jaringan yang diikuti dengan pembebasan dan pembentukan bahan mediator, seperti prostagladin, histamin, serotonin dan bradikinin (Tjay dan Raharja, 2007)
Obat-obatan antiinflamasi nonsteroid (AINS) merupakan salah satu kelompok obat yang banyak diresepkan dan juga digunakan tanpa resep dokter. Obat-obat ini merupakan suatu obat yang heterogen secara kimia (Gunawan, 2008). Mekanisme kerja obat-obat antiinflamasi ini dapat mempengaruhi proses sintesa prostagladin dengan jalan menghambat enzim siklooksigenase yang menyebabkan asam arakidonat tak jenuh tidak dapat membentuk endoperoksida yang merupakan pra zat dari prostagladin (Mustchler, 1991). Selain menimbulkan efek terapi yang sama obat-obat ini juga memiliki efek samping serupa. Efek samping yang paling sering terjadi adalah induksi tukak lambung atau tukak peptik yang kadang-kadang disertai anemia sekunder akibat peradangan saluran cerna (Gunawan, 2008).
Indonesia memiliki kekayaan keanekaragaman hayati yang luar biasa, yaitu sekitar 40.000 jenis tumbuhan, dari jumlah tersebut sekitar 1300 diantaranya digunakan sebagai obat tradisional (Rustam, et al., 2007). Baru-baru ini ada kecenderungan yang lebih besar pada obat alami atau tradisional yang berasal dari tanaman atau herbal karena toleransi yang lebih baik dan minimalnya efek samping obat (Manvi, et al., 2011).
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta herbertan. Senyawa-senyawa golongan fenolik seskuiterpenoid herbertan
dilaporkan memiliki aktivitas sitotoksik, antioksidan, dan antimikrobial. Antioksidan bekerja dapat menghambat radikal bebas yang diketahui sebagai mediator dari berbagai penyakit antara lain karsinogenesis, jantung koroner, inflamasi, artitis, diabetes dan penuaan (Ali et al, 2011)
Berdasarkan uraian diatas yang telah dilaporkan, maka diprediksikan bahwa tumbuhan lumut Mastigophora diclados yang tumbuh di Indonesia akan memiliki kandungan kimia yang hampir sama dengan Mastigophora diclados yang tumbuh di Tahiti dan juga berkemungkinan memiliki aktivitas sebagai antiinflamasi. Hal ini yang menjadi latar belakang penelitian mengenai uji efek antiinflamasi dari ekstrak etanol lumut hati Mastigophora diclados pada hewan coba tikus.
1.2PERUMUSAN MASALAH
1. Pada umunya antiinflamasi yang digunakan adalah berupa obat jadi yang berasal dari bahan kimia, yang terkadang banyak menimbulkan efek samping.
2. Banyak tanaman atau tumbuhan di indonesia yang dapat menghasilkan zat berkhasiat dan dapat dijadikan sebagai obat.
3. Salah satu tumbuhan yang dapat dijadikan obat adalah tumbuhan lumut hati
4. Tumbuhan lumut hati di indonesia belum banyak dilakukan penelitian.
1.3TUJUAN PENELITIAN
1. Untuk mengetahui daya hambat dari lumut hati M.diclados terhadap edema pada kaki tikus
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 1.4HIPOTESIS
Ekstrak etanol lumut hati Mastigophora diclados ( Brid. ex Web.) Nees memiliki aktivitas antiinflamasi yang dapat menghambat pembentukan edema pada kaki tikus.
1.5MANFAAT PENELITIAN
Secara Teoritis
Hasil penelitian ini dapat memberi masukan dalam pengembangan ilmu pengetahuan tentang tumbuhan lumut hati Mastigophora diclados yang ada di Indonesia dan digunakan sebagai antiinflamasi.
Secara Metodologi
Hasil penelitian ini dapat digunakan untuk mengetahui pengujian aktivitas antiinflamasi menggunakan metode induksi karagenan sebagai pembentuk edema pada kaki tikus.
Secara Aplikatif
1. Tumbuhan alam yang ada di Indonesia khususnya lumut hati sebagai bahan obat
5 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Mastigophora diclados
2.1.1. Klasifikasi Tanaman (Crandall-Stotler B; Stotler RE; Long DG, 2008) Klasifikasi tanaman mastigophora adalah sebagai berikut :
Kingdom : Plantae
Phylum : Marchantiophyta Class : Jungermanniopsida Order : Jungermanniales Suborder : Lophocoleineae Family : Mastigophoraceae Genus : Mastigophora Nees. Species : M. diclados (Brid.) Nees
2.1.2. Sinonim Mastigophora
M diclados f .conferta (nees)sciffin, M diclados f .nana (nees)sciffin, M diclados F.rhizobola (nees)sciffin, f. tenerior schiffin (Konrat, 2010).
2.1.3. Habitat
Pada batang pohon pinus dan agathis, batu – batuan lembab, dinding lereng pegunungan (Ida Haerida et al, 2011).
2.1.4. Kandungan Kimia
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta herbertanes, herbertane dimer, juga ditemukan pada mastigiphorenes A-D
(Asakawa et al, 1991.). Namun, spesies di Malaysia Barat tidak menghasilkan herbertanes, melainkan jenis trachylobane diterpenoids dari hasil diisolasi (Leong & Harrison, 1997). Koleksi Jepang menjabarkan herbertene dan -herbertenol dengan siklik diklorinasi bis-bibenzyls, dimana tidak ada diterpenoids dan dimer herbertane yang telah terdeteksi (Hashimoto et al, 2000.). Data ini menunjukkan bahwa setidaknya ada tiga ras geografis M. diclados di Asia; tipe bis-bibenzyl di Jepang, jenis mastigophorene di borneo (Malaysia Timur), dan jenis pimarane serta turunan pimarane trachylobane diterpenoid di Taiwan dan Malaysia Barat (Harinantenaina & Asakawa,2004) ( Agnieszka & Asakawa, 2010).
2.1.5. Aktivitas Biologis
M. diclados memiliki aktivitas sitotoksik terhadap HL-60 dan sel KB, antioksidan menggunakan pelarut DPPH dan aktivitas antimikrobial terhadap Bacillus subtilis (Komala, 2010 ; Komala, et al., 2010)
2.2. Simplisia
2.2.1 Pengertian Simplisia
Simplisia adalah bahan alam yang digunakan sebagai bahan obat dan belum mengalami pengolahan apapun juga, dan kecuali dinyatakan lain, berupa bahan yang telah dikeringkan. Simplisia dibedakan menjadi simplisia nabati, simplisia hewani dan simplisia pelikan (mineral).
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 2.3. Ekstrak
Ekstrak adalah sediaan kental yang diperoleh dengan mengekstraksi senyawa aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan. (Depkes RI, 2000).
Faktor yang berpengaruh pada mutu ekstrak adalah :
1. Faktor biologi
Mutu ekstrak dipengaruhi dari bahan asal (tumbuhan obat), dipandang secara khusus dari segi biologi yaitu identitas jenis, lokasi tumbuhan asal, periode pemanenan, penyimpanan bahan, umur tumbuhan dan bagian yang digunakan.
2. Faktor kimia
Mutu ekstrak dipengaruhi dari bahan asal (tumbuhan obat), dipandang secara khusus dari kandungan kimia, yaitu :
a. Faktor internal, seperti jenis senyawa aktif dalam bahan, komposisi kualitatif senyawa aktif, kadar total rata-rata senyawa aktif.
b. Faktor eksternal, seperti metode ekstraksi perbandingan ukuran alat ekstraksi, pelarut yang digunakan dalam ekstraksi, kandungan logam berat, ukuran kekerasan, dan kekeringan bahan (Depkes RI, 2000).
2.3.1 Ekstraksi
Ekstraksi adalah kegiatan penarikan kandungan kimia yang dapat larut sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair. (Depkes RI, 2000)
Kelarutan dan stabilitas senyawa pada simplisia terhadap pemanasan, udara, cahaya, logam berat dan derajat keasaman dipengaruhi olah struktur kimia yang berbeda-beda. (Depkes RI, 2000)
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta kulit akar susah diserap oleh pelarut, karena itu perlu diserbuk sampai halus.
Selain sifat fisik dan senyawa aktif dari simplisia, senyawa-senyawa yang terdapat dalam simplisia seperti protein, karbohidrat, lemak dan gula juga harus diperhatikan (Depkes RI, 2000).
2.3.2 Ekstraksi Dengan Penggunaan Pelarut
Dengan menggunakan metode penyarian atau pelarut dalam ekstraksi dapat dibedakan macam-macam cara ekstraksi diantaranya:
a. Cara Dingin 1. Maserasi
Maserasi ialah proses pengekstrakan simplisia dengan menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruangan (kamar). Secara teknologi termasuk ekstraksi dengan prinsip metode pencapaian konsentrasi pada keseimbangan. Maserasi kinetik berarti dilakukan pengadukan yang kontinyu (terus-menerus). Remaserasi berarti dilakukan pengulangan penambahan pelarut setelah dilakukan penyaringan maserat pertama, dan seterusnya. Cara ini dapat menarik zat-zat berkhasiat yang tahan pemanasan maupun yang tidak tahan pemanasan. (Depkes RI, 2000)
2. Perkolasi
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta b. Cara Panas
1. Refluks
Refluks merupakan ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik. Umumnya dilakukan pengulangan proses pada residu pertama sampai 3-5 kali sehingga dapat termasuk proses ekstraksi sempurna. (Depkes RI, 2000)
2. Soxhletasi
Soxhletasi ialah ekstraksi dengan menggunakan pelarut yang selalu baru yang umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinyu dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendinginan balik. (Depkes RI, 2000)
3. Digesti
Digesti merupakan maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinyu) pada temperatur yang lebih tinggi dari temperatur ruangan (kamar), yaitu secara umum dilakukan pada temperatur 40-50oC. (Depkes RI, 2000)
4. Infus
Infus adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas air mendidih, temperatur terukur 96oC-98o C selama waktu tertentu (15-20 menit). Infus pada umumnya digunakan untuk menarik atau mengekstraksi zat aktif yang larut dalam air dari bahan-bahan nabati. Hasil dari ekstrak ini akan menghasilkan zat aktif yang tidak stabil dan mudah tercemar oleh kuman dan kapang, sehingga ekstrak yang diperoleh dengan infus tidak boleh disimpan lebih dari 24 jam. (Depkes RI, 2000)
5. Dekok
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 2.3.3 Freeze Drying
Pengeringan-beku atau lyophilization adalah proses pengeringan dimana pelarut atau media suspensi yang dapat mengkristal pada temperatur rendah dan sesudahnya mensublimasi dari padat langsung ke fase uap. Pengeringan beku mengubah es atau air dalam fase amorf menjadi uap. Karena tekanan uap es rendah, maka volume uap menjadi besar. Tujuan pengeringan beku adalah untuk memproduksi suatu substansi dengan stabilitas yang baik dan tidak berubah setelah rekonstitusi dengan air, meskipun hal ini sangat tergantung juga pada langkah terakhir proses yaitu pengemasan dan kondisi penyimpanan.
Keuntungan dari proses pengeringan-beku adalah :
1. Pengeringan dengan suhu rendah dapat mengurangi penurunan produk sensitif – panas.
2. Produk cair dapat secara akurat terdosiskan.
3. Kandungan air dari produk akhir dapat dikontrol selama proses. 4. Produk obat dapat memiliki bentuk fisik yang menarik.
5. Produk obat dengan luas permukaan spesifik yang tinggi dengan cepat kembali (Oetjen dan Haseley, 2004)
2.4 Inflamasi
2.4.1 Pengertian Inflamasi
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Kemerahan, suhu yang meningkat, pembengkakan, nyeri,
dan hilangnya fungsi adalah tanda klasik dari inflamasi. Inflamasi dapat diprovokasi oleh berbagai agen berbahaya, bahan asing, toxines, infeksi, bahan kimia, patogen, reaksi kekebalan tubuh dan luka fisik (Sen et al, 2010).
2.4.2 Mekanisme Terjadinya Inflamasi
Proses inflamasi dimulai dari stimulus yang akan mengakibatkan kerusakan sel, sebagai reaksi terhadap kerusakan sel maka sel tersebut akan melepaskan beberapa fosfolipid yang diantaranya adalah asam arakidonat.Setelah asam arakidonat tersebut bebas akan diaktifkan oleh beberapa enzim, diantaranya siklooksigenase dan lipooksigenase. Enzim tersebut merubah asam arakidonat ke dalam bentuk yang tidak stabil (hidroperoksid dan endoperoksid) yang selanjutnya dimetabolisme menjadi leukotrin, prostaglandin, prostasiklin, dan tromboksan. Bagian prostaglandin dan leukotrin bertanggung jawab terhadap gejala-gejala peradangan (Katzung, 1998).
2.4.3 Jenis Inflamasi
Umumnya peradangan terbagi menjadi dua jenis yaitu a) peradangan akut dan b) peradangan kronis. Reaksi inflamasi terurai oleh mekanisme yang berbeda dan terjadi pada fase seperti:
a. fase akut : vasodilatasi lokal sementara dan Peningkatan permeabilitas kapiler
b. fase sub-akut : Infiltrasi atau leukosit dan fagositosis sel c. fase Kronis proliferatif : kerusakan jaringan dan fibrosis (Sen et
al, 2010).
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta plasma di lokasi yang terkena dampak, b) aktivasi intravaskular datar
atau memungkinkan, c) polymorph-nuklir neutrofil sebagai sel inflamasi. Ketika faktor-faktor risiko memperpanjang dan tidak dihapus, peradangan akut dan kemudian akan berubah menjadi peradangan kronis. Hal ini terjadi untuk durasi yang lebih lama dan terkait dengan adanya macrofagen, limfosit, sel darah proliferasi, fibrosis dan nekrosis jaringan. Para macrofagen menghasilkan sejumlah macam produk biologis aktif yang menyebabkan Kerusakan jaringan dan karakteristik fibrosis peradangan kronis (Sen et al, 2010).
2.4.4 Obat Antiinflamasi
Obat-obat antiinflamasi adalah golongan obat yang memiliki aktivitas menekan atau mengurangi peradangan. Aktivitas ini dapat dicapai melalui berbagai cara yaitu menghambat pelepasan prostaglandin dari sel-sel tempat pembentukannya. Berdasarkan mekanisme kerjanya, obat-obatan antiinflamasi terbagi dalam golongan steroid yang terutama bekerja dengan cara menghambat pelepasan prostaglandin dari sel-sel sumbernya dan golongan non steroid yang bekerja melalui mekanisme lain seperti inhibisi siklooksigenase yang berperan pada biosintesis prostaglandin (Setyarini, 2009).
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 2.4.5 Beberapa Metode Uji Antiinflamasi
1. Metode Pembentukan Edema Buatan
Metode ini berdasarkan pengukuran volume dari edema buatan. Volume edema diukur sebelum dan sesudah pemberian zat yang diuji. Banyak bahan-bahan radang yang telah digunakan untuk induksi edema yang meliputi ragi, formalin, dextran, telur albumin, kaolin dan polisakarida sulfat seperti karagenan. Di antara bahan-bahan induksi edema, karagenan telah ditemukan untuk menjadi bahan yang paling sesuai dan memberikan nilai input yang baik untuk anti-inflamasi (Parmar & prakash 2006).
2. Metode Pembentukan Eritema
Metode ini berdasarkan pengamatan secara visual terhadap eritema pada kulit hewan yang telah dicukur bulunya. Hewan percobaan dihilangkan bulu menggunakan suspensi barium sulfat. Dua puluh menit kemudian dibersihkan menggunakan air panas. Hari berikutnya senyawa uji disuspensikan dan setengah dosisnya diberikan 30 menit sebelum pemaparan UV. Setengah dosisnya lagi diberikan setelah 2 menit berjalan pemaparan UV. Eritema dibentuk akibat iritasi sinar UV berjarak 20 cm diatas marmot. Eritema dinilai 2 dan 4 jam setelah pemaparan (Vogel, 2002).
3. Metode Iritasi dengan Panas
bersama-UIN Syarif Hidayatullah Jakarta sama dengan albumin plasma sehingga jaringan yang meradang
kelihatan berwarna. Penilaian derajat inflamasi diketahui dengan mengukur luas radang akibat perembesan zat ke jaringan yang meradang. Pengukuran juga dapat dilakukan dengan menimbang edema yang terbentuk, dimana jaringan yang meradang dipotong kemudian ditimbang (Vogel, 2002).
4. Metode Pembentukan Kantong Granuloma
Metode ini berdasarkan pengukuran volume eksudat yang terbentuk di dalam kantong granuloma. Mula-mula benda terbentuk pellet yang terbuat dari kapas yang ditanam di bawah kulit abdomen tikus menembus lapisan linia alba. Respon yang terjadi berupa gejala iritasi, migrasi leukosit dan makrofag ke tempat radang yang mengakibatkan kerusakan jaringan dan timbul granuloma (Vogel, 2002).
5. Metode Induksi Oxazolon Edema Telinga Mencit.
Pada percobaan ini tikus telinga tikus diinduksi 0,01 ml 2% larutan oxazolon ke dalam telinga kanan. Inflamasi terjadi dalam 24 jam. Kemudian hewan dikorbankan dibawah anastesi lalu dibuat preparat dengan 8 mm dan perbedaan berat preparat menjadi indicator inflamasi udem (Vogel, 2002; Parmar, 2006).
2.5 Karagenan
Karagenan dikenal juga dengan nama carragenan, carragenin, carraghenates, chondrus extrax dan irish moss extrak. Karagenan merupakan suatu ekstrak kering ganggang laut merah (Rhodopyceae) yang diperoleh dari species Chondrus crispus (Sweetman, 2009).
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta respon yang lebih peka terhadap obat antiinflamasi dibanding
senyawa iritan lainnya (Siswanto dan Nurulita, 2005).
2.6 Asam Asetil Salisilat
Asam asetil salisilat yang lebih dikenal sebagai asetosal atau aspirin adalah analgesik antipiretik dan antiinflamasi yang sangat luas digunakan dan digolongkan dalam obat bebas. Selain sebagai prototip, obat ini merupakan standar dalam menilai efek obat sejenis (Gunawan, 2008).
Farmakodinamik:
Gambar 2.1. Asam Asetil Salisilat
Mekanisme Kerja
Asam asetil salisilat bekerja menghambat enzim siklooksigenase secara ireversibel (prostagladin sintetase), yang mengkatalisis perubahan asam arakidonat menjadi senyawa endoperoksida ; pada dosis yang tepat obat ini akan menurunkan pembentukan prostagladin maupun tronboksan A2, tetapi tidak leukotrien
(Gunawan, 2008; Katzung, 1998) Efek Antiinflamasi
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Efek Samping
17
3.1 Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilakukan di laboratorium Farmasi (Pharmacy Drug Research, Pharmacy Medicinal Chemistry, Pharmacy Natural Analysis, dan Animal House) Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta. Mulai dari bulan Mei sampai November 2012.
3.2 Alat dan Bahan Penelitian 3.2.1 Alat Penelitian
Alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi : neraca analitik (wiggen hauser), spuit injeksi suplantar dan peroral 1 mL dan 3 mL, stopwatch, timbangan hewan, blender, vacum rotari evaporator, freeze dryer, masker, pletismometer, kandang tikus, sonde, tissu gulung, lebel, spatel, elenmeyer, gelas ukur, sarung tangan, alumunium foil, lumpang dan stamfer, termometer, kertas saring, kapas.
3.2.2 Bahan Penelitian
Simplisia yang digunakan adalah lumut hati Mastigophora diclados (mastigophoraceae), yang diperoleh dari Gunung Slamet Purwokerto sebanyak 1 kg basah, simplisia kering 100,8 g, serbuk kering 98,7 g, yang digunakan dalam ekstraksi 90 g,warna hijau, bau khas aromatis.
3.2.3 Bahan Kimia
Bahan Antiinflamasi
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta jakarta, natrium karboksimetilselulosa (Na CMC) dari laboratorium
universitas pancasila, NaCl Fisiologis 0,9% dari Pharmacy Natural Analysis fakultas kedokteran dan ilmu kesehatan UIN Syarif Hidayatullah jakarta.
3.2.4 Bahan Pereaksi
Bahan pelarut untuk ekstraksi adalah etanol.
Bahan untuk penapisan fitokimia adalah kloroform, H2SO4 pekat, amonia
encer, etil asetat, FeCl3 0,1% , reagen mayer, reagen dragendroff, asam
klorida, aquadest.
3.2.5 Hewan Percobaan
Hewan percobaan yang digunakan dalam penelitian uji aktivitas antiinflamasi adalah tikus putih jantan Strain Sprague Dawley dengan berat 200 – 250 gram umur 2-3 bulan yang didapat di laboratorium farmakologi Universitas Indonesia, disimpan dalam kandang tikus (TOYORIKO), pada suhu ruang, lampu dalam keaadaan hidup selama 12 jam dan lampu keadaan mati selama 12 jam, diberikan makanan standar dan diberikan minum air.
3.3 Prosedur Penelitian 3.3.1 Pengambilan Sampel
Bahan yang digunakan adalah lumut hati Mastigophora diclados (Mastigophoraceae) yang diambil di batang pinus dan batang agathis pada ketinggian 800 m blok 55 , Gunung Slamet Purwokerto pada tanggal 21 April 2012 jam 11.30 WIB.
3.3.2 Determinasi Tanaman
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Cibinong (Lampiran 4).
3.3.3 Penyiapan Bahan yang Digunakan
a. Pengumpulan dan penyediaan simplisia
b. Lumut hati Mastigophora diclados disortasi basah, dicuci dengan air hingga bersih, ditiriskan agar bisa bebas dari air sisa cucian, dikering anginkan dalam ruangan, setelah kering dan bebas dari air, disortasi kering, ditimbang kemudian di giling menggunakan blender hingga menjadi serbuk.
3.3.4 Pembuatan Sediaan
1. Pembuatan Ekstrak Etanol Lumut Hati Mastigophora diclados Sebanyak 90 gram serbuk kering dari lumut hati Mastigophora diclados dimasukkan ke dalam wadah diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol sampai serbuk terendam oleh pelarut, disimpan ditempat yang gelap dan sesekali digoyang-goyangkan. Pelarut diganti setiap 3 hari sampai diperoleh filtrat yang bening. Kemudian filtrat disaring dan dipekatkan menggunakan rotary evaporator hingga diperoleh ekstrak kental, air yang tersisa dikentalkan menggunakan freeze dryer. dihitung hasil % kadar ekstrak dengan rumus :
% kadar ekstrak = Bobot ekstrak yang didapat x 100 % Bobot serbuk simplisia yang diekstraksi
2.Pembuatan Suspensi Asam asetil salisilat Untuk Dosis 135 mg/KgBB
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 3. Pembuatan larutan karagenan
Untuk membuat karagenan 1 % sebanyak 10 mL maka karagenan ditimbang sebanyak 100 mg kemudian dilarutkan dengan NaCl Fisiologis sampai 10 mL lalu diaduk samapai homogen.
3.3.5 Percobaan Pendahuluan
Percobaan pendahuluan dilakukan untuk mencari dosis yang mempunyai efek terhadap hewan percobaan. Dosis yang diberikan untuk percobaan pendahuluan adalah 10, 100, dan 1000 mg/kg BB. Dari hasil percobaan menunjukkan bahwa ketiga dosis tersebut mampu menunjukkan efek positif dan setelah di analisa secara statistik hasil hambat udem dari ketiga dosis belum menunjukkan perbedaan yang bermakna pada taraf uji statistik 0,05
(ρ≥0,05), maka dilakukan pengujian lagi dengan pengecilan dosis dibawah dosis 10 mg/KgBB, yaitu dosis 1 mg/KgBB dan dosis 0,1 mg/KgBB.
3.3.6 Perencanaan Dosis Asam asetil salisilat
Dosis Asam asetil salisilat :
Dosis lazim asam asetil salisilat untuk manusia adalah 325-650 mg untuk sekali pakai. Untuk dosis analgetik adalah 500 mg sekali pakai (Tjay & Rahardja, 2007). Dosis asam asetil salisilat sebagai antiinflamasi 2-3 x dosis analgetik (Tjay & Rahardja, 2007). Maka dosis untuk antiinflamasi (1000-1500) mg, sehingga dosis yang dapat diberikan pada tikus (200 g) menggunakan rumus tabel konversi dosis hewan adalah : (Laurence, 1964)
0,018 X (1000 – 1500) mg = (18 – 27 ) mg.
pada penelitian ini akan diambil dosis 27 mg / 200 gBB atau 135 mg/KgBB
keterangan :
0,018 = konversi dari dosis manusia ke dosis tikus (200 g)
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 1. Uji Antraquinon
Sejumlah ekstrak didihkan bersama asam sulfat (H2SO4) lalu disaring
selagi hangat. Filtrat yang dihasilkan ditambah dengan 5 mL kloroform dan dikocok. Lapisan kloroform dipipet dan dimasukkan kedalam tabung reaksi yang lain dan ditambahkan 1 mL ammonia. Perubahan warna yang terjadi pada larutan mengindikasikan adanya antraquinon
2. Uji Terpenoid :
Sejumlah ekstrak ditambahkan dengan 2 mL kloroform. Kemudian dengan hati-hati ditambahkan H2SO4 pekat (3
mL) sampai membentuk lapisan. Terbentuknya warna merah kecoklatan menunjukkan adanya terpenoid.
3. Uji Flavonoid :
Tiga metode yang digunakan untuk menguji flavonoid. Pertama, amonia encer (5 mL) ditambahkan ke sebagian filtrat encer dari ekstrak. kemudian asam sulfat pekat (1 mL) ditambahkan. Sebuah warna kuning yang hilang menunjukkan adanya flavonoid. Kedua, beberapa tetes larutan aluminium 1% ditambahkan ke sebagian dari filtrat. terbentuknya warna kuning menunjukkan adanya flavonoid. Ketiga, sebagian dari ekstrak dipanaskan dengan 10 mL etil asetat yang telah diuapkan selama 3 menit. Campuran kemudian disaring dan 4 mL filtrat dikocok dengan penambahan 1 mL larutan amonia encer. terbentuknya warna kuning menunjukkan adanya flavonoid.
4. Uji Saponin :
Sejumlah ekstrak ditambahkan 5 mL aquades dalam tabung reaksi. Larutan dikocok kuat dan diamati. Terbentuknya busa stabil menunjukkan adanya saponin.
5. Uji Fenolik :
Sejumlah ekstrak dalam 10 mL air dididihkan dalam tabung reaksi kemudian disaring. beberapa tetes besi klorida 0,1% ditambahkan dan diamati, terbentuknya warna hijau kecoklatan atau biru-hitam menunjukkan adanya fenolik.
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Ekstrak dilarutkan dalam asam klorida encer dan kemudian disaring.
a. Uji Mayer : Filtrat diberi reagen mayer. terbentuknya endapan berwarna kuning menunjukkan adanya alkaloid.
b. Uji Dragendroff : Filtrat diberikan reagen dragendroff, terbentuknya endapan merah menunjukkan adanya alkaloid.
3.4 Uji Antiinflamasi
3.4.1 Aklimatisasi dan pengelompokan hewan percobaan
Sebelum digunakan semua hewan percobaan (tikus jantan) dipelihara terlebih dahulu selama 3 minggu untuk menyesuaikan dengan lingkungan sekitar, mengontrol kesehatan dan berat badan serta menyeragamkan makanan. Hewan percobaan untuk uji pendahuluan dibagi menjadi 5 kelompok masing-masing terdiri dari 5 ekor.
Setelah mendapatkan hasil dari uji pendahuluan kemudian akan diteruskan uji antiinflamasi dengan mengacu kepada rumus fedrer yaitu:
(n-1) (t-1) ≥ 15
Keterangan : n = jumlah hewan percobaan perkelompok t = Jumlah kelompok
Rumus Fedrer untuk metode edema buatan pada telapak kaki tikus (Antiinflamasi) :
(n-1) (t-1) ≥ 15 (n-1) (7-1) ≥ 15 (n-1) (6) ≥ 15 6n – 6 ≥ 15
6n ≥ 21
n ≥ 3,5 ≈ 4
Dari hasil perhitungan ferdrer tikus yang digunakan tidak kurang dari 4ekor, namun pada uji aktivitas antiinflamasi digunakan 5 ekor tikus dalam setiap kelompoknya sesuai dengan syarat WHO.
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta ekor. Rinciannya sebagai berikut :
Tabel 3.1 Pembagian kelompok hewan uji Antiinflamasi
Kelompok Jumlah Perlakuan
1 5 Kontrol negatif, diberi Na CMC 0,5 %
2 5 Kontrol positif, diberi asetosal dalam Na CMC 0,5 % 3 5 Diberi sediaan ekstrak lumut hati Mastigophora
diclados dalam Na CMC 0,5 % dosis 1000 mg/KgBB 4 5 Diberi sediaan ekstrak lumut hati Mastigophora
diclados dalam Na CMC 0,5 % dosis 100 mg/KgBB 5 5 Diberi sediaan ekstrak lumut hati Mastigophora
diclados dalam Na CMC 0,5 % dosis 10 mg/KgBB 6 5 Diberi sediaan ekstrak lumut hati Mastigophora
diclados dalam Na CMC 0,5 % dosis 1 mg/KgBB 7 5 Diberi sediaan ekstrak lumut hati Mastigophora
diclados dalam Na CMC 0,5 % dosis 0,1 mg/KgBB
3.4.2 Uji Antiinflamasi dengan metode edema buatan pada telapak kaki tikus (Gulecha, et al, 2011).
1. Tikus dipuasakan kurang lebih selama 18 jam sebelum pengujian, minum tetap diberikan (Rustam, et al, 2017).
2. Tikus ditimbang dan dikelompokan secara acak yaitu : kelopok kontrol negatif, kelompok kontrol positif, dan kelompok uji ekstrak lumut hati Mastigophota diclados.
3. Kaki belakang setiap tikus yang akan diinduksi diberi tanda menggunkaan spidol, pada saat pemasukan kaki ke dalam cairan raksa selalu sama.
4. Setelah diberi tanda volume kaki setiap tikus diukur dan dinyatakan sebagai volume kaki dasar. Pada setiap pengukuran, tinggi cairan pada alat dicatat sebelum dan sesudah pengukuran.
5. Pada kelompok kontrol negatif diberikan Na CMC 0,5%, pada kelompok kontrol positif diberi suspensi asam asetil salisilat dalam Na CMC 0,5%, dan pada kelompok uji diberi zat uji ekstrak dalam Na CMC 0,5% sesuai dosis yang telah direncanakan secara oral.
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 7. Setelah 1 jam, volume kaki tikus diukur dengan menggunakan alat
pletismometer setiap satu jam selama 6 jam setelah diinduksi dengan karagenan (Parmar & prakash, 2006).
8. Ukur volume edema telapak kaki masing-masing tikus.
9. Hitung presentase edema dan presentase inhibisi pembentukan edema dengan rumus (Rustam et al, 2007; Swathy et al, 2010)
% Edema = ( Vt-Vo ) X 100% Vo
% Inhibisi Udem = (a – b ) x 100 % a
Keterangan : Vt = Volume telapak untuk setiap kelompok pada waktu t Vo = Volume telapak yg diperoleh untuk setiap kelompok
sebelum perlakuan apapun
a = % udem pada kelompok hewan kontrol b = % udem pada kelompok perlakuan
3.4.3 Analisi Data
25 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 4.1HASIL PENELITIAN
4.1.1 Penapisan Fitokimia Ekstrak lumut hati Mastigophora diclados Tabel 4.1 Data hasil penapisan fitokimia
Pengujian Ekstrak lumut hati
Mastigophora diclados
Antraquinon -
Terpenoid +
Flavonoid -
Alkaloid -
Saponin +
Fenolik +
4.1.2 Hasil Ekstraksi dari Lumut Hati Mastigophora diclados
Dari 90 g lumut hati Mastigophora diclados yang diekstraksi diperoleh ekstrak kental 6 g. Jadi rendemen yang didapat adalah 6,7 %.
4.1.3 Hasil Uji Antiinflamasi
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Tabel 4.2 Rata-rata Volume Udem (mL)
Kelompok Rata-rata volume udem (mL) ± SD tiap 1 jam selama 6 jam
0 1 2 3 4 5 6
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta b. Rata-rata persen udem telapak kaki tikus setelah diinduksi karagenan pada
masing-masing perlakuan
Tabel 4.3 Rata-rata Persen Udem
Kelompok Rata-rata persen udem ± SD tiap 1 jam selama 6 jam
0 1 2 3 4 5 6 Kontrol positif 0±0 183,33±
55,28
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta c. Rata-rata persen inhibisi udem telapak kaki tikus pada masing-masing
perlakuan
Tabel 4.4 Rata-rata Persen Inhibisi Udem
Kelompok Persen inhibisi udem ± SD tiap 1 jam selama 6 jam
0 1 2 3 4 5 6
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
4.2PEMBAHASAN
Pada penelitian uji efek antiinflamasi digunakan ekstrak kental etanol dari lumut hati Mastigophora diclados, lumut tersebut diperoleh dari Gunung Slamet Purwokerto pada ketinggian 800 m blok 55 yang hidup di batang pinus dan batang agathis. Sebelum dilakukan uji, lumut hati Mastigophora diclados terlebih dahulu dilakukan determinasi untuk mengidentifikasi kebenaran simplisia, dan hasilnya menunjukkan bahwa simplisia yang digunakan adalah lumut hati jenis Mastigophora diclados (Bird. ex Web.) Nees dari suku Mastigophoraceae (Lampiran 4).
Proses pembuatan ekstrak kental lumut hati Mastigophora diclados (Bird. ex Web.) Nees dilakukan dengan metode maserasi yaitu dengan cara merendam serbuk simplisia menggunakan pelarut organik etanol 70 % yang disimpan di tempat yang gelap dan sesekali digoyang-goyangkan. Pelarut diganti setiap 3 hari sampai diperoleh filtrat yang bening. Kemudian filtrat disaring dan dipekatkan menggunakan vakum rotary evaporator sehingga diperoleh ekstrak. Metode ini digunakan karena metode yang sederhana, mudah dilakukan, dan metode yang umum digunakan dalam proses ekstraksi. Karena ekstrak yang dihasilkan belum terlalu kental masih terdapat kandungan air didalamnya maka dilakukan freeze drying, tujuan dilakukan freeze drying yaitu untuk menghilangkan pelarut air dari padatan terlarut dengan tetap mempertahankan senyawa yang ada.
Pemakaian etanol 70% hasil destilasi sebagai pelarut karena etanol 70% dapat melarutkan senyawa organik dalam tumbuhan baik yang bersifat polar, semi polar, maupun non polar. Disamping itu etanol 70% mempunyai titik didih yang rendah (78,40C) sehingga mudah diuapkan, mempunyai harga yang relatif rendah, aman digunakan dan mudah mendapatkannya.
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta peka dibandingkan dengan induktor lain pada metode pembentukan udem buatan,
selain itu pembentukan udem dengan karagenan tidak menimbulkan kerusakan permanen pada jaringan sekitar inflamasi. Induktor udem ini akan menginduksi cedera sel melalui pelepasan mediator yang mengawali proses inflamasi. Pada awalnya masih terjadi adaptasi untuk melepaskan mediator inflamasi. Pada tahap ini pelepasan mediator masih belum maksimal. Pada saat terjadi pelepasan mediator maksimal, volum udem mencapai maksimal dan keadaan ini dapat bertahan sampai 6 jam dan berangsur berkurang dalam 24 jam (Siswanto dan Nurlita, 2005). Dalam penelitian ini menggunakan 0,2 mL suspensi karagenan 1% pada telapak kaki tikus secara intrakutan (Rustam, et al, 2007), karena lebih terlihat volum udem yang terbentuk pada telapak kaki tikus yang telah diinduksi. Pada saat pengukuran volume udem menggunakan alat pletismometer hal-hal yang harus diperhatikan adalah volume air raksa harus sama pada setiap kali pengukuran, tanda pada pergelangan kaki tikus harus jelas dan dipastikan pada saat mencelup telapak kaki tikus harus tercelup sempurna sampai tanda batas yang telah ditentukan, serta ketelitian saat pengukuran pada alat pletismometer . Hal ini bertujuan agar mendapatkan data pengukuran yang selalu konstan pada tiap waktu dan dalam kondisi yang sama.
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta oral. Kelompok kontrol positif diberi pembanding suspensi asetosal per oral
dengan dosis 135mg/KgBB. Kemudian dilakukan uji pendahuluan pada kelompok dosis rendah (10 mg/KgBB), dosis sedang (100 mg/KgBB), dan dosis tinggi (1000 mg/KgBB). Karena hasil persen inhibisi dari ketiga dosis tersebut tidak terdapat perbedaan yang bermakna yang telah di analisa secara statistik pada taraf
0,05 (ρ≥0,05), maka dilakukan lagi uji dengan pengecilan dosis diperkecil
dibawah dosis rendah (10 mg/KgBB) yaitu dosis 1 mg/KgBB dan dosis 0,1 mg/KgBB.
Kontrol positif sebagai pembanding yang digunakan dalam penelitian ini adalah asam asetil salisilat yang lebih dikenal sebagai asetosal obat ini dipilih karena merupakan obat yang paling banyak digunakan sebagai analgetik, antipiretik dan antiinflamasi dan digolongkan kedalam obat bebas, serta pada pemberian oral sebagian salisilat dapat diabsorpsi dengan cepat dalam bentuk utuh dilambung, tetapi sebagian besar di usus halus bagian atas. Kadar tertinggi dicapai kira-kira 2 jam setelah pemberian (Gunawan, 2008).
Pengukuran volume udem pada telapak kaki kiri tikus dilakukan setiap 1 jam selama 6 jam setelah telapak kaki kiri belakang tikus diberikan induksi karagenan (Lampiran 13). Persentase udem dihitung sesuai dengan data volume udem yang terbentuk setiap jamnya dan dosis uji yang digunakan (Lampiran 16). Persentase penghambatan udem dihitung juga sesuai dengan persen radang yang terbentuk setiap jamnya dan dosis uji yang digunakan (Lampiran 16). Pada penelitian ini, volume udem maksimal telapak kaki belakang tikus rata-rata terjadi pada jam ke 4 dan kemudian berangsur menurun pada jam ke 5 dan ke 6 setelah diinduksi karagenan 1 % sebanyak 0,2 mL. Hal ini mungkin disebabkan karena absorbsi karagenan cepat dalam tubuh sehingga efek radang sudah mulai menurun.
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta menunjukkan kemampuan dalam menghambat udem terbesar pada jam keenam
yaitu 76,60 %. Dari ketiga dosis yang telah diuji kemampuan dalam menghambat udem ketiganya belum terdapat perbedaan yang bermakna antara ketiga dosis tersebut, maka selanjutnya dilakukan uji dengan memperkecil dosis dibawah dosis 10 mg/KgBB yaitu dosis 1 mg/KgBB dan 0,1 mg/KgBB. Dosis 1 mg/KgBB mampu menghambat udem sebesar 62,85 % pada jam keenam, sedangakan pada dosis 0,1 mg/KgBB menunjukkan kemampuan menghambatnya sebesar 45,09 % pada jam keenam. Dikarenakan dari semua ke 5 dosis uji sudah terlihat adanya perbedaan yang bermakna untuk masing-masing dosis, kontrol positif, dan kontrol negatif pada persen hambat udem maka tidak dilakukan penyempitan dosis lagi. Bila dilihat secara keseluruhan kelompok kontrol positif hanya mampu menunjukkan persen hambat udem terbesar 50,39 % yang kemampuan menghambat udem berada dibawah atau lebih kecil dari dosis uji 1 mg/KgBB akan tetapi daya hambat kontrol positif lebih besar dari dosis 0,1 mg/KgBB.
Dari semua dosis uji yang digunakan menghasilkan kemampuan dalam menghambat udem mulai dari dosis 0,1 mg/KgBB sampai dosis 100 mg/KgBB menunjukkan peningkatan persen hambat udemnya, terlihat jelas bahwa ekstrak etanol lumut hati Mastigophora diclados dosis 100 mg/KgBB memiliki nilai persen penghambatan udem yang paling tinggi dari pada perlakuan yang lainnya, kemudian diikuti oleh dosis 1000 mg/KgBB. Seharusnya dengan meningkatnya dosis atau konsentrasi, maka aktivitas antiinflamasi akan menunjukkan adanya peningkatan. Tetapi ternyata pada dosis 1000 mg/KgBB justru terjadi penurunan aktivitas antiinflamasinya. Hal tersebut disebabkan memang terdapat beberapa jenis obat dalam dosis tinggi justru menyebabkan pelepasan histamin secara langsung dari mast cell sehingga mengakibatkan pembuluh darah menjadi permeabel terhadap cairan plasma dan menimbulkan proses peradangan (Fitriyani, et al, 2011). Maka dimungkinkan pada ekstrak lumut hati Mastigophora diclados ini mengandung senyawa yang mampu mengakibatkan hal tersebut.
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta dilakukan dengan menggunakan metode kolmogorov smirnovz untuk melihat
distribusi data persen penghambatan udem telapak kaki belakang tikus pada jam ke 1, jam ke 2, jam k 3, jam ke 4, jam ke 5 dan jam ke 6 (Lampiran 17), menunjukkan semua kelompok perlakuan terdistribusi normal, terkecuali pada perlakuan jam ke 2 tidak terdistribusi normal. Kemudian dilanjutkan uji homogenitas dengan metode leneve untuk melihat data persen penghambatan udem telapak kaki belakang tikus homogen atau tidaknya, hasilnya menunjukkan
bahwa data seluruh kelompok uji tidak homogen (ρ ≤ 0,05 ). Karena syarat
ANOVA tidak terpenuhi maka dilanjutkan dengan uji Kruskal Wallis. dan dilanjutkan kembali uji BNT (beda nyata terkecil) dengan metode LSD (Lampiran 17).
Pada jam ke 1, kelompok kontrol negatif berbeda secara bermakna dengan kelompok kontrol positif dan seluruh kelompok uji dosis 0,1, 1, 10, 100, 1000
mg/Kg pada taraf uji 0,05 (ρ≤0,05). Kelompok kontrol positif berbeda secara
bermakna dengan seluruh kelompok dosis uji terkecuai dengan kelompok dosis 0,1 mg/Kg tidak terdapat perbedaan secara bermakna pada taraf uji 0,05. Kelompok dosis 1 mg/Kg tidak berbeda bermakna dengan dosis 10 dan 1000
mg/KgBB pada taraf uji 0,05 (ρ≥0,05). Dosis 10 mg/KgBB tidak berbeda
bermakna dengan dosis 1, 100,dan 1000 mg/KgBB pada taraf uji 0,05. Dosis 100 mg/KgBB tidak berbeda bermakna dengan dosis 10 dan 1000 mg/Kg. Dosis 1000 mg/KgBB tidak berbeda bermakna dengan dosis 1, 10, dan 100 mg/KgBB pada taraf uji 0,05.
Pada Jam kedua, kelompok kontrol negatif berbeda secara bermakna dengan kelompok kontrol positif dan seluruh kelompok uji dosis 0,1, 1, 10, 100,
1000 mg/Kg pada taraf uji 0,05 (ρ≤0,05). Kelompok kontrol positif berbeda
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Pada jam ketiga, kelompok kontrol negatif berbeda secara bermakna
dengan kelompok kontrol positif dan seluruh kelompok uji dosis 0,1, 1, 10, 100,
1000 mg/Kg pada taraf uji 0,05 (ρ≤0,05). Kelompok dosis 1 mg/KgBB tidak berbeda bermakna dengan dosis 10 dan 1000 mg/KgBB pada taraf uji 0,05. Kelompok dosis 10 mg/KgBB tidak berbeda bermakna dengan dosis 1, 100 dan 1000 mg/KgBB pada taraf uji 0,05. Kelompok dosis 100 mg/KgBB tidak berbeda bermakna dengan dosis 10 dan 1000 mg/KgBB pada taraf uji 0,05. Kelompok dosis 1000 tidak berbeda bermakna dengan dosis 1, 10 dan 100 mg/KgBB pada taraf uji 0,05
Pada jam keempat, kelompok kontrol negatif berbeda secara bermakna dengan kelompok kontrol positif dan seluruh kelompok uji dosis 0,1, 1, 10, 100, 1000 mg/Kg pada taraf uji 0,05. Kelompok kontrol positif berbeda secara bermakna dengan seluruh kelompok dosis uji terkecuai dengan kelompok dosis 0,1 mg/Kg tidak terdapat perbedaan secara bermakna pada taraf uji 0,05. Kelompok dosis 1 mg/KgBB tidak berbeda bermakna dengan dosis 10,100 dan 1000 mg/KgBB pada taraf uji 0,05. Kelompok dosis 10 mg/KgBB tidak berbeda bermakna dengan dosis 1, 100 dan 1000 mg/KgBB pada taraf uji 0,05
Pada jam kelima, kelompok kontrol negatif berbeda secara bermakna dengan kelompok kontrol positif dan seluruh kelompok uji dosis 0,1, 1, 10, 100, 1000 mg/Kg pada taraf uji 0,05. Kelompok kontrol positif berbeda secara bermakna dengan seluruh kelompok dosis uji terkecuai dengan kelompok dosis 1 mg/Kg tidak terdapat perbedaan secara bermakna pada taraf uji 0,05. Kelompok dosis 10 mg/KgBB tidak berbeda bermak.na dengan dosis 100 dan 1000 mg/KgBB pada taraf uji 0,05.
Pada jam keenam, kelompok kontrol negatif berbeda secara bermakna dengan kelompok kontrol positif dan seluruh kelompok uji dosis 0,1, 1, 10, 100,
1000 mg/Kg pada taraf uji 0,05 (ρ≤0,05). Kelompok kontrol positif berbeda
secara bermakna dengan seluruh kelompok dosis uji terkecuai dengan kelompok dosis 0,1 mg/Kg tidak terdapat perbedaan secara bermakna pada taraf uji 0,05
(ρ≥0,05). Kelompok dosis 0,1 mg/Kg tidak berbeda bermakna dengan kontrol positif pada taraf uji 0,05 (ρ≥0,05). Kelompok dosis 1 mg/Kg berbeda secara
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta (ρ≤0,05). Kelompok dosis 10 mg/Kg tidak berbeda bermakna dengan dosis 100
dan 1000mg/KgBB pada taraf uji 0,05 (ρ≥0,05).
37 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta BAB 5
KESIMPULAN DAN SARAN 5.1 KESIMPULAN
Dari hasil penelitian yang telah dilakukan dapat diambil beberapa kesimpulan sebagai berikut :
1. Ekstrak etanol 70 % dari lumut hati Mastigophora diclados (Bird. ex Web.) Nees dengan dosis 0,1 mg/KgBB, 1mg/KgBB, 10 mg/KgBB, 100 mg/KgBB, 1000 mg/KgBB dapat menghambat udem pada telapak kaki tikus yang telah diinduksi oleh karagenan secara signifikan (p ≤ 0,05) dengan kontrol negatif, dan semua variasi dosis uji memiliki perbedaan secara bermakna terhadap kontrol positif (asetosal) pada taraf uji 0,05 (p ≤ 0,05) terkecuali dengan dosis 0,1 mg/KgBB tidak terdapat perbedaan yang bermakna pada taraf uji 0,05 (p ≥ 0,05)
2. Dosis 100 mg/KgBB memiliki daya hambat tertinggi sebesar 79,55 % dari semua dosis uji dan kontrol positif yaitu asetosal. Dengan demikian hasil penelitian ini menunjukkan bahwa lumut hati M.diclados mempunyai potensi sebagai antiinflamasi.
5.2 SARAN
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta DAFTAR PUSTAKA
Ali, M., et al., “Phytochemical screening, antioxidant and analgesic activities of Croton argyratus ethanolic extracts” Journal of Medicinal Plants Research Vol. 6 (21), pp. 3724-3731, 9 june, 2012
Ayoola, GA., et al., “Phytochemical Screening and Antioxidan Activities of Some Selected Medicinal Plants Used for Malaria Therapy in Shouthwestrn Nigeria”, Tropical Journal of Pharmaceutical Research, September 2008; 7 (3): 1019-1024
Asakawa, Y. 2000. Recent Advance in Phytocemistry of Bryophytes – Acetogenins Terpenoid and Bis (bibenzil )s from Selected Japans,Taiwanes,New Zeland, Argebtina and European Liverwort. Phytocemistry 56(2001) 297-312. 31 agustus 2000
Crandall-Stotler B, Stotler RE, Long DG. (2008) Morphology and classification of the Marchantiophyta. In Bryophyte Biology, Goffinet B and Shaw AJ. (Eds). Cambridge University Press, Cambridge, 1-54.
Departemen Kesehatan RI. 2000. Parameter Standard Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Jakarta: Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan.
Fitriyani, A., Winarti, L., Muslichah, S., & Nuri., “Uji Antiinflamasi Ekstrak Metanol Daun Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav ) Pada Tikus Putih “ Majalah Obat Tradisional, 16(1), 34 – 42, 2011
Gulecha, V., et al., “ Screening of Ficus religiosa leaves fractions for analgesic and anti-inflamantory activities”, Indian J Pharmacol. 2011 Nov-Dec; 43 (6): 662-666
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Gradstein et al. 2011. Bryophytes of Mount Patuha, West Java, Indonesia .
Reinwardtia, A journal on Taxonomic Botany Plant sociology and ecology Vol 13, No 2, pp: 107 – 123I
Green, P., Solbritt, R.D., William , M.I., Holly, J.S., Frederick, J.P., Joh, D.L. Sex Steroid Regulation of the Inflammatory Response : Sympathoadrenal Dependence in the Female Rat. The Journal of Neuroscience, 19 (10), May 15, 1999 : 4082-4089
Gunawan, S.G., Nafrialdi, R.S., & Elysabeth. 2008. Farmakologi dan Terapi Edisi 5. Jakarta: Departemen Farmakologi dan Terapeutik Fakultas Kedokteran UI.
Heras, B., A. Navarro, M.J.D. Guerra, P. Bermejo, A. Castrillo, L. Bosca, and A. Villar. 1999. Inhibition of NOS-2 expression in macrophages through the inactivation of NF-KB by andalusol. British Journal of Pharmacology 128: 605-612.
Hidayati, N.A., Listyawati, S., Setyawan, A.D., Kandungan Kimia dan Uji Antiinflamasi Ekstrak Etanol Lantana camara L. pada Tikus Putih (Rattus norvegicus L.) Jantan Bioteknologi 5 (1): 10-17, Mei 2008, ISSN: 0216-6887
Ida, H., dan Gradstein, S.R . 2011. Liverworts and hornworts of Mt. Slamet, Cebtral Java (indonesia). Hikobia 16: 61-66
Immamudin, H., Jenie, U.A., Suryana, N., Damayanti, L., Supriadi, H., dan Utomo, T. 2006. Koleksi Bryophyta Taman Lumut Krbun Raya Cibodas Vol II No. 4.LIPI UPT Balai Konservasi Tumbuhan Kebun Raya Cibodas.
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Komala, I., 2010. Phytochemical Studies on the Selected Indonesian, Japanase &
Tahitian Liverworth 2. Desertasi. Fakultas pharmaceutical science, Tokushima Bunri University.
Komala, I., Ito, T., Nagashima, F. 2010. Cytotoxic,Rradical Scavenging, and Antimicrobial Activities of Sesquiterpenoids from Tahitian Liverworth Mastigophora diclados (Brid). Nees (Mastigophoracee). J .Nat. Med (2010) 64:417-422
Laurence D.R., and Bacharach, A.L. 1964. Evaluation Of Drug Activities Pharmacometrics. Academic Press. London and New York.
Ludviczuk Agnieska And Asakawa Yoshinori. 2010. Chemosystematics of Selected Liverwort Collected in Borneo. Tropical Bryology 31: 33-42, 2010 Faculty of Pharmaceutical Sciences, Tokushima Bunri University, Yamashiro-cho; Tokushima 770-8514, Japan
Lieber, C.S., and Leo, M.A. 1999. Alcohol, Vitamint A and β Carotene : Adverse Interactions, Icluding hepatotoxicity and carcinogenicity. The American Journal of Clinical Nutrition 69: 1071-1085
Manvi, F.V., Nanjawade, B.K., dan Singh, S. Pharmacological Sreening of Combined Extract of Annova Squamosa and Nigella Sativa. Pharmacology, Vol 2, 2011.
Mustchler, E. 1991. Dinamika Obat Buku Ajar Farmakologi dan Toksikologi edisi 5, diterjemahkan oleh Widianto, M.B. dan A.S, Ranti, Penerbit ITB. Jakarta
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Parmar, N.S. & Prakash, Shiv. 2006. Screening Methods in Pharmacology. India :
Alpha Science International Ltd.
Rustam, E., Atmasari, I., dan Yanwirasti. 2007. “Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol Kunyit (Curcuma domestica Val.) Pada Tikus Putih Jantan Galur Wistar”, Jurnal Sains dan Teknologi Farmasi Vol. 12, No. 2, 2007, halaman 112-115
Santoso, S. 2007. Menguasai Statistik di Era Informasi dengan SPSS 15. Jakarta : PT Elex Media Komputindo Kelompok Gramedia
Sen, S., et al,. Analgesic and anti-inflammatory herbs: a potential source of modern medicine. IJPSR, 2010; Vol. 1 (11): 32-44 ISSN: 0975-8232
Setyarini, Holida. 2009. Uji Daya Antiinflamasi Gel Ekstrak Etanol Jahe 10% (Zingiber officinale roscoe) Yang Diberikan Topikal Terhadap Udem Kaki Tikus Yang Diinduksi Karagenin. Surakarta: Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Siswanto, A., dan Nurulita N. A., 2005. Daya Antiinflamasi Infus Daun Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa Scheff. Boerl) pada Tikus Putih (Rattus Norvegicus) Jantan, Prosiding Seminar Nasional TOI XXVII, 177-181, Batu 15-16 Maret 2005.
Suhendi, A., Nurcahyanti, Muhtadi, dan Sutrisna, EM. Aktivitas antihiperurisemia ekstrak air jinten hitam (Coleus ambonicus Lour) pada mencit jantan galur balb-c dan standardisasinya. Majalah Farmasi Indonesia, 22(2), 77-84, 2011
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Sweetman, S.C. 2009. Martindale 36th Edition The Complete Drug Reference.
London: Pharmaceutical Press.
Tjay, Tan H., Kirana Rahardja. 2007. Obat-obat Penting : Khasiat, Penggunaan dan Efek-efek sampignya, edisi keenam. PT Elexmedia Komputindo Kelompok Gramedia, Jakarta
Lampiran 1.Gambar Lumut Hati Mastigophora diclados (Bird. ex Web.) Nees
Lampiran 2. Perlakuan hewan uji pada saat penelitian
Pelaksanaan Sonde
Penyuntikan karagenan
Lampiran 3. Hasil Uji Antiinflamasi
Telapak kaki tikus sebelum diinduksi karagenan
Udem telapak kaki tikus pada jam ke 5 setelah pemberian karagenan 0,2 ml
1% (Kontrol (-) )
Udem telapak kaki tikus pada jam ke 6 dengan pemberian dosis 100
mg/KgBB
Udem telapak kaki tikus pada jam ke 6 dengan pemberian asetosal
Lampiran 5. Hasil Penapisan Fitokimia
Sebelum dit ambah Sesudah dit ambah H2S04 pekat H2S04 pekat
Terpenoid (+)
Fenolik (+)
Saponin (+)
Sebelum penamba- Sesudah Penamba- han ammonia encer an ammonia encer 1 mL 1 mL
Flavonoid (-)
Lampiran 6. Surat Keterangan Hewan Uji
Lampiran 7. Proses Pembuatan Ekstrak
Lumut hati Mastigophora diclados sebanyak 1kg basah
Determinasi Tanaman
Sortasi Basah
Dicuci dengan Air Bersih
Diangin anginkan
Sortasi Kering
Lumut hati Mastigophora diclados diblender hingga menjadi serbuk
Pembuatan Ekstrak:
Serbuk kering sebanyak 90 g dimaserasi dengan Etanol 70% hasil destilasi disimpan ditempat yang gelap dan sesekali digoyang-goyangkan. pelarut diganti setiap 3 hari dan disaring sampai diperoleh filtrat yang bening.
Filtrat dipekatkan menggunakan vakum rotary evaporator, hasil ekstrak yang masih terdapat kandungan air dikentalkan menggunakan freeze dryer
Lampiran 8. Aklimatisasi Hewan Percobaan
Disiapkan 35 ekor tikus putih jantan
Dikelompokkan secara acak menjadi 7 kelompok
Diaklimitasi selama ± 3 minggu
5 ekor kontrol Negatif
5 ekor kontrol Positif 5 ekor Dosis 1000 mg/Kg
5 ekor Dosis 100 mg/Kg
5 ekor Dosis 10 mg/Kg
Lampiran 9. Skema Kerja Antiinflamasi
35 ekor tikus dibagi menjadi 7 kelompok
Timbang berat badan
Ukur volume awal telapak kaki belakang tikus
Masing-masing disuntikan larutan karagenan 1% sebanyak 0.2 mL
Ukur volume telapak kaki belakang tikus setiap 1 jam selama 6 jam
