Karakterisasi molekul saliva nyamuk Anopheles sundaicus strain local sebagai target potensial dalam pembuatan Transmission Blocking Vaccine (TBV) melawan malaria

(1)

aft

'suk

2OOg

u

LF.

2008

)A

ig,frv

KESEHATAN

LAPORAN

PENELITIAN HIBAH

BERSAING

Karakterisasi Molekul

Saliva

Nya rnu

k

An

op h el es s an d ai c u.s

Strain

Lokal

sebagai

Target

Potensial

dalam

Pe m b u a t

an

r

r a n s m

f#*ff;"y'tr'

v

u c c i n e

(rB

',

dr.

Yunita

Armiyanti,

M.Kes

DR.

rer.

nat.

Kartika

Senjarini

S.Si.,

M.Si.

LINIVERSITAS

JEMBER

Desember 2009

)IDANAI

DIPA LTNIVERSITAS JEMBER

NoMoR:

0 1 7 5. 0/0 23 -0 42

txy

I zo0g

(2)

HALAMAN

PENGESAHAN

LAPORAN

AKHIR

I

'

Judul Penelitian

:

Karakterisasi

molekul

saliva nyamuk Anopheles sundaicus strain

local

sebagai

target potensial dalam

pembuatan Transmission

Blocking Vaccine

(TBV)

melawan malaria 2. Ketua Peneliti

a

Nama Lengkap

b. Jenis Kelamin

c. NIP

d. Jabatan Fungsional

e" Jabatan Struktural t-. Bidang Keahlian g.Fakultas/Jurusan h.Perguruan Tinggi i.Tim Peneliti

dr. Yunita Armiyanti, M.Kes. Perempuan

1974A604 200112

2

002 Asisten

Ahli

Parasitologi Kedokteran

Universitas Jember

i.

Pendanaan dan Jangka Waktu Penelitian:

a- Jangka waktu yang

diusulkan

:

3 tahun

b. Biaya total yang

diusulkan

: Rp 149.640.000 c. Biaya yang disetujui

tahun

1

:

a- _{Jumlah biaya yang diajukan ke}

Dikti

b. Jumlah biaya tahun ke 1

Suharyanto, Sp.KK(K)

303

I

001

149.640.000 49.885.000

Jember, 4 Desember 2009

Ketua Peneliti,

dr. Yunita Armiyanti, M.Kes NrP. 197406042001t2

2

002

:Rp

No Nama Bidang

Keahlian

Fakultas/

Jurusan

Perguruan

Tinssi

DR. rer. nat. Kartika

Senjarini S.Si., M.Si.

Mikrobiologi

MIPA/BIOLOGI

LINEJ

tyk

igEt@.hli,

D ek'a1 _{:f+{ifr1ta$,:K€dokteran}

-.1.-':'- , r',.r-/l ;'

, Ir. Dr.

(3)

RINGKASAN

\talaria

sampai saat masih merupakan masalah kesehatan yg utama baik di dunia mauprm

di

lndonesia. Diperkirakan 300-500

juta

orang

di

dunia terinfeksi malaria setiap tahun rian hampir 3

juta

merupakan kasus yang fatal. Berbagai usaha telah dilaksanakan untuk rnenekan penyebaran penyakit

ini

diantaranya dengan pembuatan vaksin malaria, namun hasilnya belum

optimal.

Vaksin yang tepat untuk pencegahan penyakit malaria adalah \ ang mencakup pencegahan

untuk

siklus pre-eritrositik, siklus eritrositik

dan proses

transmisi.

Perkembangan

penelitian

yang

terbaru

menunjukkan

saiiva

nyamuk

mengandung bahan

yang bersifak imunogenik

sehingga dapat dimanfaatkan sebagai

r-aksin

yang

dapat

menghambat

transmisi

(Transmission-Blocking Vaccine

(TBV)).

Penelitian

ini

bertujuan

untuk

melakukan

karakterisasi

molekuler dan

fungsional komponen saliva nyamuk Anopheles sundaicus yang bertanggung

jawab

sebagai faktor

imunomodulator sebagai target potensial dalam pengembangan TBV.

Telah berhasil clilakukan isolasi

salivary gland

(SG) dari

A.

sun'daicars. SG kemudian diekstraksi untuk mendapatkan

RNA

sebagai templat untuk pembuatan pustaka

cDNA

SG -4. sundaicus. Lebih jauh _{lagi telah}_dilakukan_{SDS PAGE untuk melihat}

profil

_protein

kasar SG guna deteksi awal keberadaan imunomodulator. Salivar-v Grand Extract

diambil

dari kelenjar nyamuk

A.

sundaicus yang ditangkap langsung dari lapangan secara landing tollectiott.

RNA

SG A. sundaiczs diisolasi dari 80 pasangan salivary gland pairs nyamuk

lretina

dewasa

menggunakan

Micro-FastTrack

nRNA

isolation

for

(Invitrogen,

San Diego,

CA,

USA). Isolasi

RNA

belum menunjukkan signal

positif

dimungkinkan karena

jumlah

_sampel_SG_{yang terbatas,}_{nalnun demikian}_isolasi

RNA dari

_{spesies Anopheles}

lainnya berhasil dilakukan

dengan menggunakan metode

Trizol

dengan perlakukan DEPC pada larutan-larutan yang digunakan. Oleh karena itu untuk penelitian selanjutnya

perlu

dilakukan sampling

kembali

A.

sundaicus

dan isolasi SG yang

kemudian dilanjutkan dengan isolasi

RNA

dengan menggunakan metode

Trizol

seperli pada kedua

(4)

SI]MMARY

\falaria

is

a

mosquito-borne disease

of

world-wide

concem as

well

as

in

lndonesia

causing 1.5

to 2.7 millian

people

dying

each year.

Many

attempts

to

overcome this

diasease have been conducted. The complexity

of

malaria parasite

life

cycle making the development

of

anti-malaiavaccine is a

little bit

complicated. The ideal malaria vaccine sEategy should

include

several stage

of

parasit

life

cycles

during infection

i.e.

pre-erithrocytic, erithrocytic and transmission. Recently,

it

has been showed that mosquitoes salivary contains components which are immunogenic, thus

it

would be very potential to

sen'e

as targets

for the

development

of

Transrnission-Blocking Vaccine

(TBV).

The

objective

of

this

research was

to

moleculary and functionally characteize the salivary components

from

salivary gland

of A.

sundaicus

which

are

responsible

as

a imms1s1116dulatory factor as a potential target for the development of TBV.

klivary

gland

(SG)

of A.

sundaicas has been isolated

from

the mosquitoes

following

landing collection. SG was then extracted

to

collect

mRNA

as template

for

RT-PCR to conskuct

cDNA

library. Furthermore, SDS-PAGE was also conducted to elucidate crude protein

profile

of

Salivary Gland Extract (SGE) for preliminary detection

of

the existing

of

immunomodulator proteins. Using Micro-FastTrack ruKNA isolation /rir (Invitrogen, San Diego,

CA, USA)

showed negative result. Therefore,

it

was decided

to

change the

rnethods

using Trizol

reagen.

Since

the limitation

of

SG

from

A.

sundaicus, the

optimation proceclure

was

conducted

using SG frorn

other Anopheles species

i.e.

,4.

maanlahs and A. aconitus. Using Trizol reagen and DEPC treated solution for isolatin

of

R-\A

gave

positive results

with

high yield

of

RNA

concentration

(>

500 ndpl).

Therefore

it

was suggested

to

use

this

method instead

of

using

mRNA

kit

for

further

I'solation of

RNA

from

A.

sundaicus. Protein

profile

investigation showed that there were Protein bands corresponding

with

the putative irnmunomodulatory proteins

which

are

previousely publislied from Anopheles Salivary Glands. This indicated the possibility

of

the existance of imunomodulatory factors from SG of A. sundaicus.