VALIDASI PORCINE DETECTION KIT PADA ANALISIS
CEMARAN BABI DALAM PRODUK DAGING SAPI
LUTHFAN EKA SETIAWAN
DEPARTEMEN ILMU DAN TEKNOLOGI PANGAN FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR
PERNYATAAN MENGENAI SKRIPSI DAN
SUMBER INFORMASI SERTA PELIMPAHAN HAK CIPTA
Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi berjudul Validasi Porcine Detection Kit pada Analisis Cemaran Babi dalam Produk Daging Sapi adalah benar karya saya dengan arahan dari dosen pembimbing dan belum diajukan dalam bentuk apa pun kepada perguruan tinggi mana pun. Sumber informasi yang berasal atau dikutip dari karya yang diterbitkan maupun tidak diterbitkan dari penulis lain telah disebutkan dalam teks dan dicantumkan dalam Daftar Pustaka di bagian akhir skripsi ini.
Dengan ini saya melimpahkan hak cipta dari karya tulis saya kepada Institut Pertanian Bogor dan LPPOM MUI.
Bogor, Juli 2013
Luthfan Eka Setiawan
ABSTRAK
LUTHFAN EKA SETIAWAN. Validasi Porcine Detection Kit pada Analisis Cemaran Babi dalam Produk Daging Sapi. Dibimbing oleh BUDIATMAN SATIAWIHARDJA dan PURWANTININGSIH SUGITA.
Penambahan daging babi ke dalam adonan bakso dan pencampuran daging babi dengan sapi telah menjadi pemalsuan pangan yang umum ditemukan. Strip uji untuk mendeteksi cemaran daging babi dalam pangan telah dikembangkan. Prosedur validasi diperlukan untuk mengukur parameter kinerja strip uji tersebut. Validasi porcine detection kit dilakukan dengan kurva parameter kinerja. Raw porcine meat detection kit dan processed porcine meat detection kit cenderung menghasilkan kesalahan pada konsentrasi daging babi dalam daging sapi (b/b) 0,0095% hingga 0,0295% dan 0,215% hingga 0,5%. Kedua jenis strip uji memiliki sensitivity rate dan specificity rate yang sama sebesar 0,95. Batas deteksi dari kedua jenis strip uji berturut-turut sebesar 0,0295% dan 0,5%. Nilai batas deteksi raw porcine meat detection kit lebih rendah dibanding nilai yang diklaim oleh produsen. Hal ini tidak dianggap sebagai suatu gangguan karena dalam kasus pengujian substansi yang berbahaya atau tidak boleh ada dalam suatu sampel, nilai kesalahan negatif harus dikontrol bahkan diperkecil bila memungkinkan. Kata kunci : halal, kurva parameter kinerja, porcine detection kit, validasi
ABSTRACT
LUTHFAN EKA SETIAWAN. Validation of Porcine Detection Kit on Pork Contamination Analysis in Beef Products. Supervised by BUDIATMAN SATIAWIHARDJA and PURWANTININGSIH SUGITA.
Addition of pork into beef meatball mix and mixing pork with fresh beef have become common adulterations although the demand of halal food product has increased rapidly. A test kit for detection of pork meat in food products has been introduced, however, validation procedures must be conducted to reassure the performance parameters of the test kit. Validation of porcine detection kit has been conducted by means of performance characteristic curve. The result showed that raw porcine meat detection kit and processed porcine meat detection kit tend to give unreliable results in the concentration region between 0,0095%-0,0295% and 0,215%-0,5% of pork in beef (w/w), respectively. The results also showed that the sensitivity and specificity rate of the two test kit were the same, namely 0,95. The detection limit for raw and processed porcine meat detection kits were 0,0295% and 0,5%, respectively. The detection limit of raw porcine meat detection kit showed a lower value compared to the detection limit claimed by the manufacturer. These cannot be considered an inconvenience because, in case of hazardous substances or any contaminant, the false negative rate must be controlled and, in many cases, minimized.
Skripsi
sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Teknologi Pertanian
pada
Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan
VALIDASI PORCINE DETECTION KIT PADA ANALISIS
CEMARAN BABI DALAM PRODUK DAGING SAPI
DEPARTEMEN ILMU DAN TEKNOLOGI PANGAN FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR
2013
Judul Skripsi : Validasi Porcine Detection Kit pada Analisis Cemaran Babi dalam Produk Daging Sapi
Nama : Luthfan Eka Setiawan NIM : F24090078
Disetujui oleh
Diketahui oleh
Tanggal Lulus:
Dr Ir Budiatman Satiawihardja, MSc Pembimbing Akademik
Prof Dr Purwantiningsih Sugita, MS Pembimbing Lapang
PRAKATA
Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT yang telah memberikan rahmat dan karunianya sehingga karya ilmiah ini berhasil diselesaikan.Tema yang dipilih dalam kegiatan magang yang dilaksanakan sejak bulan Februari 2013 ini ialah validasi metode analisis, dengan judul Validasi Porcine Detection Kit pada Analisis Cemaran Babi dalam Produk Daging Sapi.
Pada kesempatan ini penulis mengucapkan terimakasih kepada:
1. Ayahanda Alm. Ridwan dan Ibunda Lilik Afifah, serta adik-adik tercinta, Maulidiah Dwi Kurniawati dan Wildan Aditya Affandi.Terima kasih atas doa, kasih sayang, dan dukungannya.
2. Dr. Ir. Budiatman Satiawihardja, MSc. selaku dosen pembimbing dan Prof. Dr. Purwantiningsih Sugita, MS selaku pembimbing lapang yang telah banyak memberikan arahan, bimbingan, dan evaluasi kepada penulis dalam menyelesaikan skripsi ini.
3. Dr. Ir. Joko Hermanianto selaku penguji yang telah memberikan evaluasi dan masukan kepada penulis.
4. Ir. Lukmanul Hakim selaku direktur LPPOM MUI dan Ir. Sumunar Jati selaku wakil direktur LPPOM MUI yang telah bersedia menerima penulis untuk melaksanakan kegiatan magang.
5. Kak Heryani dan seluruh staf Bidang Penelitian dan Pengkajian Ilmiah LPPOM MUI yang telah banyak membantu dalam proses pengambilan data. 6. Sahabat yang selalu menemani hari-hari di IPB dalam suka maupun duka,
Jian Septian, Akhmad Fahmi Hikmatiyar, Aditya Arga Kusuma serta semua sahabat terdekat yang tak dapat disebutkan satu persatu.
7. Keluarga besar ITP 46 dan HIMITEPA, terimakasih atas hari-hari menyenangkannya.
8. Keluarga besar MP IPB yang telah memberikan banyak pengalaman baru selama masa perkuliahan.
9. Sahabat-sahabat di Wisma Tidar, Masrukhin, Maulana, Chandra, Cholil, Ari, Yonas, dan Zaim, yang telah memberikan dorongan dan semangat bagi penulis serta semua sahabat yang telah memberikan inspirasi dan dukungannya selama menimba ilmu di IPB.
10.Adinda Siti Hazar, terimakasih sudah menjadi alasan sekaligus bagian dalam perjalanan menjemput gelar sarjana.
11.Semua pihak yang telah membantu dalam penelitian dan penulisan skripsi ini yang tidak dapat disebutkan satu persatu.
Semoga karya ilmiah ini bermanfaat dan dapat dijadikan acuan para pembaca dalam melakukan validasi metode analisis kualitatif di masa yang akan datang.
Bogor, Juli 2013
DAFTAR ISI
DAFTAR TABEL viii
DAFTAR GAMBAR viii
DAFTAR LAMPIRAN viii
PENDAHULUAN 1
Latar Belakang 1
Tujuan Penelitian 2
Manfaat Penelitian 2
METODE 3
Waktu dan Lokasi Penelitian 3
Bahan 3
Alat 3
Prosedur Percobaan 3
Prosedur Analisis Data 4
HASIL DAN PEMBAHASAN 5
Hasil 5
Pembahasan 8
SIMPULAN DAN SARAN 11
Simpulan 11
Saran 11
DAFTAR PUSTAKA 12
LAMPIRAN 13
DAFTAR TABEL
1 Data hasil uji raw porcine meat detection kit. 5
2 Data hasil uji processed porcine meat detection kit. 6
DAFTAR GAMBAR
1 Kurva parameter kinerja raw porcine meat detection kit. 7 2 Kurva parameter kinerja analisis processed porcine meat detection kit. 7
DAFTAR LAMPIRAN
PENDAHULUAN
Latar Belakang
Umat muslim diwajibkan untuk mengonsumsi hanya makanan dan minuman yang halal dan thayyib. Hal tersebut tertulis dalam QS. Al-Baqarah: 168 yang artinya “Hai sekalian umat manusia makanlah dari apa yang ada di bumi ini secara halal dan baik dan janganlah kalian ikuti langkah-langkah setan, sesungguhnya ia adalah musuh yang nyata bagi kalian”. Kewajiban ini tentunya menjadi sebuah kebutuhan yang harus dipenuhi oleh setiap muslim terutama yang berkaitan dengan konsumsi makanan dan minuman dalam kehidupan sehari-hari. Adanya kewajiban mengonsumsi pangan halal selanjutnya menjadi sebuah peluang pasar bagi industri pangan untuk memproduksi pangan yang terjamin kehalalannya sehingga dapat diterima secara luas oleh semua kalangan, termasuk umat muslim.
Pangan halal saat ini menjadi salah satu pusat perhatian dari para pelaku industri pangan dan pemerintah di Indonesia. Hal ini terutama disebabkan tingginya jumlah penduduk muslim di Indonesia. Menurut Badan Pusat Statistik (BPS), penduduk muslim di Indonesia pada tahun 2010 mencapai 207.176.162 jiwa dari total 237.641.236 jiwa penduduk Indonesia. Tingginya jumlah penduduk muslim di Indonesia berimplikasi pada tingginya permintaan akan produk pangan yang terjamin mutu halalnya. Hal ini dapat dilihat dari tingginya jumlah sertifikat halal yang telah dikeluarkan LPPOM MUI yaitu sebanyak 5.896 sertifikat halal dengan jumlah produk mencapai 97.794 item dari 3.561 perusahaan sejak tahun 2005 hingga Desember 2011 (LPPOM MUI 2012). Sebagai perbandingan, pasar produk halal dunia selama satu dekade terakhir telah tumbuh cepat dan mencapai nilai transaksi US$ 632 miliar per tahun dengan angka pertumbuhan sekitar 17% setiap tahun (LPPOM MUI 2012).
2
Berbagai metode analisis telah dikembangkan untuk mempermudah deteksi cemaran daging babi dalam produk pangan dengan memanfaatkan kemajuan perkembangan biologi molekuler. Metode analisis yang telah dilakukan untuk mendeteksi adanya unsur babi dalam makanan contohnya adalah kromatografi gas untuk analisis asam lemak, imunodifusi ganda atau ouchterlony dan SDS-PAGE untuk analisis protein. Namun, ketiga metode ini hanya dapat dilakukan pada bahan pangan yang belum mengalami pemasakan atau mengalami perlakuan di atas suhu 50 oC (Roswiem 2000). Metode yang saat ini menjadi salah satu metode dengan ketelitian tinggi adalah metode Polymerase Chain Reaction (PCR) yang memanfaatkan DNA dan dapat digunakan untuk produk daging yang telah dimasak atau diproses (Carnegie et al.1997 dalam Maryatni 2000). Metode-metode tersebut sayangnya masih memiliki beberapa kelemahan, terutama terkait biaya untuk reagen dan instrumen yang mahal serta tidak dapat dilakukan secara praktis di lapangan.
Metode baru yang dapat digunakan saat ini adalah penggunaan perangkat deteksi babi atau porcine detection kit. Porcine detection kit dikembangkan berdasarkan prinsip-prinsip imunokromatografi dengan mengadsorpsi beberapa jenis antibodi pada permukaan strip uji yang akan terikat khusus dengan antigen spesifik babi (PerkinElmer 2011). Metode ini dapat menjadi salah satu solusi untuk mengatasi masalah ketidakpraktisan yang ada pada metode-metode konvensional sebab metode ini hanya memerlukan alat dan reagen dalam jumlah yang kecil.
LPPOM MUI telah menggunakan porcine detection kit untuk keperluan analisis sampel hasil audit, terutama sampel daging dan produk olahannya. Parameter-parameter kinerja dari porcine detection kit telah dijelaskan oleh produsen dari perangkat deteksi ini. Meski begitu, validasi terhadap metode analisis ini tetap perlu dilakukan guna memastikan kesesuaian antara parameter-parameter kinerja dari metode analisis dengan penggunaannya.
Tujuan Penelitian
Kegiatan magang ini bertujuan untuk mengukur parameter-parameter kinerja metode analisis kualitatif pada perangkat deteksi cemaran daging babi dalam produk daging di Lembaga Pengkajian Pangan, Obat-obatan, dan Kosmetika Majelis Ulama Indonesia (LPPOM MUI).
Manfaat Penelitian
Kegiatan magang diharapkan dapat memberikan dampak positif khususnya bagi LPPOM MUI dalam bentuk evaluasi parameter kinerja dari instrumen
3
METODE
Waktu dan Lokasi Penelitian
Penelitian dilakukan selama 5 bulan (Februari – Juni 2013) di laboratorium Bidang Penelitian dan Pengkajian Ilmiah Lembaga Pengkajian Pangan, Obat-obatan dan Kosmetika Majelis Ulama Indonesia (LPPOM MUI) Kampus IPB Baranangsiang Bogor.
Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daging sapi, daging babi, tepung tapioka, es batu, garam, dan reagen ekstraksi PerkinElmer porcine detection kit.
Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah neraca analitik, kantung plastik, penggiling daging, bowl chopper, panci, tusuk gigi, sudip, stopwatch, dan PerkinElmer porcine detection kit test strip jenis raw dan processed. Program
Curve Expert Professional 1.6.8 digunakan untuk data fitting hasil uji positif. Program Minitab 16 digunakan untuk mengolah data menjadi kurva parameter kinerja analisis.
Prosedur Percobaan
Prosedur percobaan yang dilakukan dalam penelitian ini terdiri dari dua tahap. Tahap pertama adalah preparasi sampel dan tahap kedua adalah pengujian sampel dengan porcine detection kit.
1. Preparasi sampel
Sampel daging sapi untuk penelitian ini didapatkan dengan membeli daging sapi yang sudah bersertifikat halal dari supermarket. Sampel daging babi didapatkan dengan membeli daging babi di Pasar Bogor. Preparasi sampel dilakukan secara berbeda untuk dua jenis strip uji porcine detection kit, yaitu raw porcine meat detection kit dan processed porcine meat detection kit.
4
kemudian dimasukkan dalam kantung plastik dan disimpan di lemari pendingin pada suhu -20 oC.
Preparasi sampel untuk processed porcine meat detection kit dilakukan melalui simulasi pembuatan bakso sapi. Daging sapi terlebih dahulu digiling bersama garam dan es batu. Tepung tapioka ditambahkan paling akhir dengan perbandingan tepung tapioka dibanding daging sebesar 1 : 3. Adonan bakso kemudian dibagi dan ditimbang menjadi delapan bagian sesuai konsentrasi
spiking daging babi. Spiking daging babi dilakukan dengan konsentrasi 0,1%, 0,2%, 0,3%, 0,4%, 0,5%, 0,7%, 0,9%, dan 1,1% (b/b). Campuran ini masing-masing di rebus dalam air 60 oC dan dilanjutkan dengan perebusan pada air bersuhu 100 oC. Sampel bakso kemudian disimpan dalam lemari pendingin pada suhu -20 oC.
2. Pengujian sampel dengan porcine detection kit
Thawing terlebih dahulu dilakukan untuk sampel beku. Sampel kemudian diaduk dalam bowl chopper hingga homogen. Sebanyak 1 gram sampel diambil menggunakan tusuk gigi lalu dimasukkan dalam botol vial berisi 3 ml cairan ekstraksi. Botol vial berisi sampel ini kemudian dikocok selama 1 menit hingga sampel nampak larut dalam cairan ekstraksi. Strip uji dimasukkan sesuai kategori sampel yang akan diuji. Strip uji raw porcine meat detection kit untuk sampel daging mentah dan strip uji processed porcine meat detection kit untuk sampel daging yang sudah diolah. Salah satu ujung strip uji dicelupkan ke dalam botol vial berisi sampel dan cairan ekstraksi. Larutan sampel dibiarkan mengalir ke atas melalui strip uji hingga mencapai ujung bawah patch bertanda panah. Strip uji diangkat lalu diletakkan pada permukaan datar dan tidak menyerap cairan. Strip uji diamati hingga 15 menit dan didokumentasikan dengan pengambilan gambar. Waktu tempuh hingga mencapai hasil uji positif dicatat dalam lembar hasil analisis. Hasil uji positif ditandai munculnya garis merah pada positive test line
dan control test line pada strip uji. Hasil uji negatif ditandai dengan munculnya garis merah hanya pada control test line pada strip. Hasil uji dianggap tidak valid jika tidak muncul garis pada kedua test line atau garis merah hanya muncul pada
positive test line. Pengamatan dilanjutkan hingga menit ke-25 untuk menentukan keputusan terhadap hasil uji yang muncul dan mendokumentasikan hasil yang diperoleh. Strip uji kemudian dipindahkan ke lembar hasil analisis.
Prosedur Analisis Data
5 Data hasil uji positif yang telah didapat kemudian diolah dengan program
Curve Expert Professional 1.6.8 untuk mengetahui bentuk dan fungsi kurva yang sesuai dengan plot data. Konsentrasi sampel dimasukkan sebagai prediktor (sumbu x) dan hasil uji positif dimasukkan sebagai respons (sumbu y). Program selanjutnya akan menampilkan bentuk kurva, fungsi, skor, nilai regresi, dan nilai korelasi kurva. Pengolahan data kemudian dilakukan dengan program Minitab 16 menggunakan fungsi kurva yang telah didapat dari hasil data fitting. Kurva karakteristik kinerja didapatkan dengan menempatkan hasil uji ke dalam fungsi kurva sigmoid yang didapat dari hasil data fitting. Probabilitas akan terjadinya kesalahan positif (α) dan kesalahan negatif (β) yang dapat diterima ditetapkan sebesar 5%. Nilai ini ditetapkan pada grafik sebagai garis horizontal α = 5% dan 100-β = 95%. Parameter kinerja analisis selanjutnya dapat dihitung setelah probabilitas galat ini ditetapkan.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil
Tabel 1 menunjukkan hasil positif mulai ditemukan pada konsentrasi 0,015%. Hasil uji positif secara konsisten mulai didapat pada konsentrasi 0,03%. Sampel pada konsentrasi 0,015% hingga 0,025% diperbanyak untuk mengonfirmasi hasil uji karena didapat hasil positif dan negatif.
Tabel 1 Data hasil uji raw porcine meat detection kit.
Konsentrasi Analis 1 Analis 2 Probabilitas
Positif
Probabilitas Negatif
0,001% − − − − 0 100
0,005% − − − − 0 100
0,009% − − − − 0 100
0,015% + − − + 37,5 62,5
− − − +
0,02% + − − - 62,5 37,5
+ + + +
0,025% − + + + 87,5 12,5
+ + + +
0,03% + + + + 100 0
0,04% + + + + 100 0
6
Tabel 2 menunjukkan hasil positif dari pengujian menggunakan processed porcine meat detection kit mulai muncul pada konsentrasi 0,3%. Langkah konfirmasi hasil uji ulangan pertama kemudian dilakukan dengan menurunkan rentang konsentrasi menjadi 0,1% dan menambah ulangan sampel pada konsentrasi 0,2%, 0,3%, dan 0,4%. Hasil uji positif mulai nampak secara konsisten pada konsentrasi 0,4%.
Tabel 2 Data hasil uji processed porcine meat detection kit.
Konsentrasi (%) Analis 1 Analis 2 Probabilitas
Positif kinerja analisis processed porcine meat detection kit berturut-turut disajikan dalam Gambar 1 dan Gambar 2. Parameter kinerja analisis yang dapat diukur menggunakan kurva parameter kinerja analisis meliputi daerah ketidakpercayaan, batas deteksi, sensitivity rate, dan specificity rate.
7
Gambar 1 Kurva parameter kinerja raw porcine meat detection kit.
Parameter yang dapat ditentukan selanjutnya adalah sensitivity rate dan
specificity rate. Sensitivity rate saat kurva berpotongan dengan garis probabilitas kesalahan negatif (β) pada konsentrasi 0,0295% adalah 0,95. Specificity rate saat kurva berpotongan dengan garis probabilitas kesalahan positif (α) pada
Gambar 2 Kurva parameter kinerja analisis processed porcine meat detection kit.
Daerah ketidakpercayaan dari processed porcine meat detection kit juga ditentukan oleh batas atas dan batas bawahnya. Batas atas daerah ketidakpercayaan ditentukan dari nilai konsentrasi di mana garis 100-β melintasi kurva. Nilai konsentrasi ini diketahui sebesar 0,5 % pada Gambar 2. Batas bawah daerah ketidakpercayaan ditentukan dari nilai konsentrasi saat garis α melintasi kurva. Nilai konsentrasi ini diketahui sebesar 0,215% pada Gambar 2. Daerah ketidakpercayaan diketahui berada di antara konsentrasi 0,215% dan 0,5%.
8
Parameter batas deteksi bisa diketahui dari batas atas daerah ketidakpercayaan. Batas deteksi dari metode processed porcine meat detection kit adalah 0,5%.
Parameter metode processed porcine meat detection kit yang dapat ditentukan selanjutnya adalah sensitivity rate dan specificity rate. Sensitivity rate
saat kurva berpotongan dengan garis probabilitas kesalahan negatif (β) pada konsentrasi 0,5% adalah 0,95. Specificity rate saat kurva berpotongan dengan garis probabilitas kesalahan positif (α) pada konsentrasi 0,215% adalah 0,95.
Pembahasan
Metode analisis kualitatif adalah metode analisis yang menghasilkan respons berupa keberadaan atau ketiadaan suatu analit baik yang terdeteksi secara langsung maupun tidak langsung pada sejumlah tertentu sampel (Feldsine et al.
2002). Definisi tersebut memberikan kesimpulan bahwa metode analisis kualitatif digunakan untuk mengetahui jika suatu sampel mengandung satu atau lebih analit spesifik. Hasil dari analisis kualitatif dalam hal ini berupa data biner yang menyatakan hasil positif atau negatif. Trullols (2006) menyatakan bahwa keberadaan atau ketiadaan analit dalam sampel tidak terukur secara absolut namun terukur pada suatu konsentrasi analit yang spesifik. Dengan kata lain, analit dapat terukur jika jumlahnya memenuhi suatu limit konsentrasi.
Trullols (2006) mengklasifisikan metode analisis kualitatif ke dalam dua jenis metode. Metode kualitatif berbasis deteksi sensori menggunakan indra manusia untuk merekam dan menginterpretasikan respons analisis. Metode kualitatif berbasis deteksi instrumen menggunakan respons instrumental untuk menentukan apakah analit berada di atas atau di bawah tingkat konsentrasi tertentu. Metode analisis porcine detection kit dalam hal ini termasuk dalam metode kualitatif berbasis deteksi sensori sebab interpretasi hasil berupa munculnya strip uji positif dilakukan secara langsung oleh analis menggunakan indra penglihatan.
Validasi metode analisis merupakan suatu tindakan penilaian terhadap parameter tertentu berdasarkan percobaan laboratorium untuk membuktikan bahwa parameter tersebut memenuhi persyaratan untuk penggunaannya (Harmita 2004). Hal ini sejalan dengan definisi EURACHEM (1998) yang menyatakan bahwa validasi metode merupakan proses untuk menetapkan persyaratan analisis dan mengonfirmasi jika kinerja metode telah sesuai dengan syarat penggunaannya. EURACHEM (1998) juga menyatakan bahwa validasi metode perlu dilakukan saat ada metode baru yang dikembangkan, ada revisi yang dilakukan terhadap metode lama akibat munculnya masalah baru, adanya perubahan yang terjadi pada suatu metode seiring waktu, serta metode lama digunakan pada laboratorium atau analit yang berbeda.
9 mengajukan alternatif langkah validasi dengan cara mengukur parameter kinerja analisis kualitatif menggunakan tabel kontingensi, teorema Bayes, uji hipotesis statistik, dan kurva parameter kinerja. Penggunaan masing-masing metode terutama tergantung pada tipe deteksi terhadap respons dan jumlah analisis yang ingin dilakukan oleh analis.
Menurut Trullols et al. (2004), metode yang sesuai untuk langkah validasi metode analisis kualitatif berbasis deteksi sensori seperti halnya porcine detection kit adalah metode kurva karakteristik kinerja. Keuntungan yang didapat dari penggunaan metode ini adalah banyaknya informasi yang didapat dari kurva yang dihasilkan. Kurva karakteristik kinerja memungkinkan perhitungan specificity rate
dan sensitivity rate, batas deteksi, serta daerah ketidakpercayaan dengan cara yang sederhana. Kekurangan dari metode ini adalah banyaknya jumlah sampel pada setiap tingkat konsentrasi yang dibutuhkan untuk membuat kurva yang representatif.
Salah satu parameter kinerja analisis yang sangat penting adalah ketidakpastian pengukuran yang disebabkan adanya kesalahan acak. Pada kasus metode analisis yang menghasilkan respons biner, ketidakpastian tidak dapat dinyatakan dalam bentuk standar deviasi. Ketidakpastian pengukuran dalam konteks ini akan lebih tepat jika dinyatakan sebagai probabilitas munculnya hasil uji yang salah sehingga untuk membedakannya Trullols et. al. (2004) menggunakan istilah unreliability atau ketidakpercayaan. Kesalahan pengujian dapat berupa kesalahan positif ataupun negatif sehingga ketidakpercayaan dinyatakan dalam bentuk daerah yang batas-batasnya merupakan tingkat konsentrasi dengan probabilitas untuk mendapatkan respons yang salah telah ditetapkan oleh analis, umumnya sebesar 5%. Istilah lain dari daerah ketidakpercayaan adalah jarak kerja yang didefinisikan sebagai wilayah di mana hasil analisis akan memiliki ketidakpastian yang dapat diterima (Prichard dan Barwick 2007).
Metode raw porcine meat detection kit memiliki daerah ketidakpercayaan pada rentang konsentrasi 0,0095% hingga 0,0295%. Hal ini menunjukkan bahwa metode raw porcine meat detection kit memiliki kecenderungan untuk menghasilkan kesalahan positif atau kesalahan negatif pada hasil uji yang didapat dari rentang konsentrasi 0,0095% hingga 0,0295%. Hal yang sama juga berlaku untuk metode processed porcine meat detection kit yang daerah ketidakpercayaannya terletak pada rentang konsentrasi 0,215% hingga 0,5%. Metode processed porcine meat detection kit memiliki kecenderungan untuk menghasilkan kesalahan positif atau kesalahan negatif pada hasil uji yang didapat dari rentang konsentrasi 0,215% hingga 0,5%.
10
ketidakpercayaan, yaitu probabilitas dari nilai konsentrasi saat kurva karakteristik kinerja analisis berpotongan dengan garis probabilitas kesalahan negatif (β).
Sensitivity rate raw porcine meat detection kit saat kurva berpotongan dengan garis probabilitas kesalahan negatif (β) pada konsentrasi 0,0295% adalah 0,95. Nilai ini berarti bahwa metode raw porcine meat detection kit memiliki kemungkinan sebesar 0,05 atau 5% untuk menghasilkan kesalahan negatif saat dilakukan pengujian pada konsentrasi 0,0295%. Sensitivity rateprocessed porcine meat detection kit saat kurva berpotongan dengan garis probabilitas kesalahan negatif (β) pada konsentrasi 0,5% adalah 0,95. Nilai ini juga berarti bahwa metode
processed porcine meat detection kit memiliki kemungkinan sebesar 0,05 atau 5% untuk menghasilkan kesalahan negatif saat dilakukan pengujian pada konsentrasi 0,5%.
Trullols et. al. (2004) dan Feldsine et al. (2002) menyatakan bahwa spesifisitas dalam konteks analisis kualitatif adalah kemampuan suatu pengujian untuk mendeteksi sampel yang sejatinya negatif sebagai negatif. Feldsine et al.
(2002) juga menambahkan bahwa parameter yang berasosiasi dengan spesifisitas adalah specificity rate yang didefinisikan sebagai probabilitas bahwa metode akan menggolongkan suatu sampel yang diketahui negatif sebagai negatif pada konsentrasi tertentu. Menurut Trullols et al. (2004), parameter specificity rate juga berhubungan dengan batas bawah dari daerah ketidakpercayaan, yaitu probabilitas dari nilai konsentrasi saat kurva karakteristik kinerja analisis berpotongan dengan garis probabilitas kesalahan positif (α).
Berdasarkan definisi tersebut, maka specificity rate dari kedua jenis strip uji dapat ditentukan. Specificity rate raw porcine meat detection kit saat kurva berpotongan dengan garis probabilitas kesalahan positif (α) pada konsentrasi 0,0095% adalah 0,95. Nilai ini berarti metode raw porcine meat detection kit
memiliki kemungkinan sebesar 0,05 atau 5% untuk menghasilkan kesalahan positif dalam pengujian pada konsentrasi 0,0095%. Specificity rate processed porcine meat detection kit saat kurva berpotongan dengan garis probabilitas kesalahan positif (α) pada konsentrasi 0,215% adalah 0,95. Nilai ini berarti metode raw porcine meat detection kit memiliki kemungkinan sebesar 0,05 atau 5% untuk menghasilkan kesalahan positif dalam pengujian pada konsentrasi 0,215%.
Batas deteksi adalah konsentrasi analit terendah yang masih dapat terdeteksi sebagai positif dalam matriks yang diuji (Boison 2000). Definisi tersebut menurut Trullols (2006), dapat diartikan bahwa probabilitas kesalahan yang harus dipertimbangkan hanyalah probabilitas kesalahan negatif (galat tipe β). Probabilitas kesalahan positif (galat tipe α) tidak menjadi pertimbangan dalam kasus ini sebab semua sampel harus menghasilkan hasil uji positif pada tingkat konsentrasi yang lebih tinggi dari batas deteksi. Oleh karena itu, parameter batas deteksi bisa diketahui dari batas atas daerah ketidakpercayaan.
11 cemaran daging babi dalam daging sapi (Sumartini et al. 2002) dan Real Time PCR dapat mendeteksi 0,01% hingga 0,05% daging babi dalam daging sapi yang diproses (Jonker et al. 2008).
Nilai batas deteksi dari raw porcine meat detection kit lebih rendah dibanding spesifikasi yang diklaim oleh produsen strip uji. Hal ini menunjukkan metode raw porcine meat detection kit cenderung menghasilkan kesalahan positif jika pengujian dilakukan pada konsentrasi 0,0295% hingga 0,05%. Produsen strip uji menyatakan secara langsung bahwa batas deteksi ditetapkan sebesar 0,05% agar prosedur yang dilakukan oleh pengguna strip uji dapat secara pasti menghasilkan hasil uji positif tanpa adanya kesalahan negatif. Pernyataan ini sesuai dengan definisi dari Valcarcel (2000) yang telah disebutkan sebelumnya.Nilai batas deteksi yang lebih rendah menurut Trullols et. al. (2004) tidak dianggap sebagai suatu gangguan karena dalam kasus pengujian substansi yang berbahaya atau tidak boleh ada dalam suatu sampel, nilai kesalahan negatif harus dikontrol bahkan diperkecil bila memungkinkan.
SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan
Parameter kinerja analisis dari raw porcine meat detection kit dan processed porcine meat detection kit telah diukur menggunakan metode kurva parameter kinerja analisis. Daerah ketidakpercayaan menunjukkan bahwa raw porcine meat detection kit cenderung menghasilkan kesalahan pada rentang konsentrasi 0,0095% hingga 0,0295% sedangkan processed porcine meat detection kit
cenderung menghasilkan kesalahan pada rentang konsentrasi 0,215% hingga 0,5%. Sensitivity rate kedua jenis strip uji menunjukkan bahwa kedua strip uji memiliki kemungkinan untuk menghasilkan kesalahan negatif sebesar 5% jika dilakukan pengujian dengan konsentrasi yang lebih tinggi dari batas atas daerah ketidakpercayaannya. Specificity rate kedua jenis strip uji menunjukkan bahwa kedua strip uji memiliki kemungkinan untuk menghasilkan kesalahan positif sebesar 5% jika dilakukan pengujian dengan konsentrasi yang lebih kecil dari batas bawah daerah ketidakpercayaannya. Batas deteksi processed porcine meat detection kit telah sesuai dengan nilai yang diklaim oleh produsen strip uji. Batas deteksi raw porcine meat detection kit lebih rendah dibandingkan dengan nilai yang diklaim oleh produsen strip uji. Hal ini tidak dianggap sebagai suatu gangguan karena dalam kasus pengujian substansi yang berbahaya atau tidak boleh ada dalam suatu sampel, nilai kesalahan negatif harus dikontrol bahkan diperkecil bila memungkinkan.
Saran
12
terhadap jenis-jenis daging yang lain. Langkah konfirmasi menggunakan metode deteksi seperti PCR dan HPLC juga perlu dilakukan.
DAFTAR PUSTAKA
[EURACHEM]. 1998. The Fitness for Purpose of Analytical Methods. Teddington (UK): LGC Ltd.
[LPPOM MUI] Lembaga Pengkajian Pangan, Obat-obatan, dan Kosmetika Majelis Ulama Indonesia. 2012. Indonesian Halal Directory 2012-2013. Bogor (ID): LPPOM MUI.
[PerkinElmer]. 2011. Porcine Detection Kit Product Note. Madison (US): PerkinElmer, Inc.
Boison JO. 2000. Current issues in regulatory chemistry. Kay J.F., MacNeil J.D., dan O’Rangers JJ. (Ed). AOAC International. 159-170.
Carnegie PR, Mills K, dan O’Brien PA. 1997. Novel DNA technologies for identification of individual animals and species used in processed meat products. Di dalam : Upaya mendeteksi adanya daging babi dalam makanan melalui uji DNA. 2000. [skripsi]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Dawson MT, Powell R, dan Gannon F. 1996. Gene technology. Di dalam : Upaya mendeteksi adanya daging babi dalam makanan melalui uji DNA. 2000. [skripsi]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Feldsine P, Abeyta C, dan Andrews W. 2002. AOAC international methods committee guidelines for validation of qualitative and quantitative microbiological official methods of analysis. J AOAC Int. 85(5):1187-1200. Harmita. 2004. Petunjuk pelaksanaan validasi metode dan cara perhitungannya.
Majalah Ilmu Kefarmasian. 6(3):117-135.
Jonker KM, Tilburg HC, Gele HA, dan De Boer E. 2008. Species identification in meat products using real-time PCR. Food Additives and Contaminants. 25:
Roswiem PA. 2000. Sejauh Mana Analisis di Laboratorium dapat Mendeteksi Makanan Haram. Diskusi Terbatas Satu Hari Analisis Komponen Tidak Halal dalam Makanan. P3KT. Serpong (ID): LIPI.
Sumartini S, Zuas O, Julismardiany R, dan Susilawati E. 2002. Aplikasi ELISA Kit untuk mendeteksi adanya daging babi dalam makanan. Prosiding Seminar Tantangan Penelitian Kimia. Seminar Himpunan Kimia Indonesia; 2002 Mei 28-29; Serpong, Indonesia. Serpong (ID): Pusat Penelitian Kimia LIPI.
13 Trullols E, Ruisanchez I, Rius FX, Odena M, dan Feliu MT. 2004. Validation of
qualitative analytical methods. J AOAC Int. 23:137-145.
Trullols E. 2006. Validation of qualitative analytical methods. [disertasi]. Tarragona (ES): Universitat Roviro I Virgili.
Valcarcel M. 2000. Principles of Analytical Chemistry. New York (US): Springer.
LAMPIRAN
Lampiran 1 Hasil data fitting raw porcine meat detection kit. Overview Correlation Coeff. (r) : 0.997596 Coeff. of Determination : 0.995199
DOF : 5
AICC : -52.483577
Parameters
Value Std Error Range (95% confidence)
a -0.011787 0.026062 -0.078782 to 0.055207
b 0.000001 0.000000 -0.000000 to 0.000000
c 1.029280 0.032029 0.946947 to 1.111612
d 4.649840 0.666041 2.937727 to 6.361953
14
DOF : 4
AICC : -48.734621
Parameters
Value Std Error Range (95% confidence)
a -0.010707 0.025044 -0.080241 to 0.058827
b 0.000497 0.000431 -0.000698 to 0.001693
c 1.011359 0.018310 0.960523 to 1.062194
d 6.962913 0.792556 4.762423 to 9.163402
Covariance Matrix
a b c d
a 0.621551 -0.003273 -0.042243 7.480327
b -0.003273 0.000184 0.003779 -0.333978
c -0.042243 0.003779 0.332211 -6.168602
d 7.480327 -0.333978 -6.168602 622.471145
15
RIWAYAT HIDUP
Penulis bernama lengkap Luthfan Eka Setiawan. Lahir di Jember pada tanggal 18 Agustus 1991 dari ayah Alm. Ridwan dan ibu Lilik Afifah, sebagai anak pertama dari tiga bersaudara. Penulis memulai jenjang pendidikan formal di SD Negeri Garahan 1 dan lulus pada tahun 2003. Kemudian penulis melanjutkan pendidikan di SMP Negeri 1 Silo dan lulus pada tahun 2006. Penulis melanjutkan pendidikan di SMA Negeri 1 Jember dan lulus pada tahun 2009. Pada tahun yang sama, penulis diterima di Institut Pertanian Bogor melalui jalur USMI pada mayor Teknologi Pangan, Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi Pertanian. Selama menjalani studi di IPB penulis aktif dalam berbagai kepanitiaan dan lembaga kemahasiswaan. Kepanitiaan yang pernah diikuti diantaranya adalah HACCP IX (Ketua Divisi Logstran), PLASMA (Staf Divisi Logstran), Kejuaraan Merpati Putih IPB OPEN 2012 (Ketua Divisi Liaison Officer). Penulis menjabat sebagai Ketua Divisi Kaderisasi dan Internal Unit Kegiatan Mahasiswa Merpati Putih IPB pada tahun 2009-2011.
