KARYA TULIS AKHIR
UJI PRO-APOPTOSIS EKSTRAK TEH HIJAU (Camellia sinensis (L.)OK.) TERHADAP PENINGKATAN KEMATIAN DAN EKSPRESI CASPASE-3
PADA CELL LINE KANKER SERVIKS (HeLa Cells)
Oleh:
INDRO CATUR RAHARJO 201010330311069
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG FAKULTAS KEDOKTERAN
LEMBAR PENGESAHAN
LAPORAN HASIL PENELITIAN Telah disetujui sebagai hasil penelitian
untuk memenuhi persyaratan Pendidikan Sarjana Fakultas Kedokteran
Universitas Muhammadiyah Malang Tanggal : 4 Februari 2014
Pembimbing I,
dr. Moch. Ma’roef, Sp. OG. NIP. 1130501414
Pembimbing II,
dr. Desy Andari
Mengetahui,
Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Malang Dekan,
LEMBAR PENGUJIAN
Karya Tulis Akhir oleh Indro Catur Raharjo ini telah diuji dan dipertahankan di depan tim penguji
pada hari Selasa, tangal 19 Februari 2014
Tim Penguji
dr. Moch. Ma’roef, Sp. OG. , Ketua
dr. Alfa Sylvestris, Sp. M. , Anggota
KATA PENGANTAR
Segala puji hanya bagi Allah SWT karena hanya dengan limpahan rahmat serta karunia‐Nya penulis mampu menyelesaikan tugas akhir yang berjudul “Uji Pro‐Apoptosis Ekstrak Teh Hijau (Camellia Sinensis (L.)Ok.) Terhadap Peningkatan Kematian Dan Ekspresi Caspase‐3 Pada Cell Line Kanker Serviks (Hela Cells)”
Dengan terselesaikannya tugas akhir ini, penulis mengucapkan terimakasih kepada:
1. dr. Irma Suswati, M.Kes. selaku Dekan Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Malang yang telah memberi saya kesempatan menuntut ilmu di Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Malang.
2. dr. Alfa Sylvestris Sp.M, selaku penguji yang telah memberikan saran perbaikan untuk tugas akhir ini.
3. dr. Moch. Ma’roef Sp.OG, selaku pembimbing I yang telah memberi bimbingan, saran, dan masukan sehingga saya dapat menyelesaikan tugas akhir ini.
4. dr. Desy Andari, selaku pembimbing II yang dengan sabar membimbing dan senantiasa memberi semangat, sehingga saya dapat menyelesaikan tugas akhir ini.
5. Orang tua saya, Bapak Rahmat dan Ibu Supami, yang telah memberi dukungan moral dan materil serta untaian doa yang tak henti dalam penyelesaian tugas akhir ini.
7. Mr. Joost Van Grieken for giving me mentally and financially support also always listened to the ups and downs during this research process.
8. Tim laboratorium biomedik FK UMM (mbak fat, mas nyono, pak joko, mas miftah, pak kus) dan FK UB (mbak tarina, mbak nia, mbak dian). 9. Mas didit, pak yon, bu endah, mas faisal yang berkenan aku repotkan. 10.Betty Rachma, thanks for being my partner in crime for almost 2 years.
And yet become my “Last Choice”!!!
11.Ai Indah Ika, thanks a lot for letting me to “stole” everything inside your brain since the beginning. You are always my “knowledge provider”. 12.Yusrin dan Wira yang selalu menghilangkan stress pembuatan tugas akhir
dengan senandung penghalau sendu di studio. Keep singing our heart! 13.Teman-teman kontrakan: Oyek (Malik), Alay (Kukuh), Mbah (Wildan),
Semok (Iqbal), Cimeng (Genio), Brengos (Agung), Choirin Nur, Takbir, Rahardian, Juna dan Demas yang selalu berbagi ilmu setiap ujian UTB, UAB, maupun Skill OSCE serta seluruh keluarga besar angkatan 2010 yang sudah saya anggap seperti keluarga saya sendiri.
14.Semua pihak yang telah membantu dalam menyelesaikan tugas akhir ini yang tidak dapat saya sebutkan satu persatu.
Penulis menyadari bahwa penulisan ini masih jauh dari sempurna, oleh karena itu penulis tetap membuka diri untuk kritik dan saran yang membangun. Akhirnya, semoga tugas akhir ini dapat bermanfaat.
Malang, 21 Februari 2014
ABSTRAK
Raharjo, Indro Catur. 2014, Uji Pro‐Apoptosis Ekstrak Teh Hijau (Camellia Sinensis (L.)Ok.) Terhadap Peningkatan Kematian Dan Ekspresi Caspase‐3 Pada Cell Line Kanker Serviks (Hela Cells), Tugas Akhir, Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Malang. Pembimbing: (1) Moch. Ma’roef (2) Desy Andari.
Latar Belakang : Kanker serviks di Indonesia menduduki peringkat kedua setelah kanker payudara dan menyebabkan 50% kematian dari total penderita kanker serviks. Untuk mengobati kanker serviks biaya yang diperlukan cukup besar sehingga perlu pengobatan alternatif lewat herbal. Teh hijau mengandung quercetin dan EGCG yang mampu menginduksi apoptosis lewat penghambatan siklus pembelahan sel dan meningkatkan protein pro‐apoptosis.
Tujuan : Untuk membuktikan efek pro‐apoptosis ekstrak teh hijau (Camellia sinensis (L.)OK.) terhadap cell line kanker serviks (HeLa Cells).
Metode : Penelitian eksperimental dengan The Post Test Only Control Group Design, menggunakan 4 kelompok: (1) kontrol, (2) perlakuan dosis 0,1 mg/ml, (3) perlakuan dosis 1 mg/ml, dan (4) perlakuan dosis 10 mg/ml. Analisis data menggunakan uji One‐ Way ANOVA, HSD Tukey 5%, korelasi Pearson, dan regresi linier.
Hasil dan Diskusi : semua dosis ekstrak teh hijau mampu meningkatkan kematian sel dan ekspresi caspase‐3 aktif secara bermakna (ANOVA p<0,05) dengan signifikansi 0,000. Uji korelasi Pearson dengan signifikansi 0,000 (p < 0,05) menunjukkan terdapat hubungan antara dosis ekstrak teh hijau dengan peningkatan sel mati dan ekspresi caspase‐3, kekuatan korelasi sangat kuat arah positif.
Kesimpulan : Ekstrak teh hijau dapat meningkatkan kematian dan ekspresi caspase‐3 pada cell line kanker serviks (Hela Cells).
ABSTRACT
Raharjo, Indro Catur. 2014, Pro‐Apoptosis Assay of Green Tea Extract (Camellia Sinensis (L.) Ok.) to Increase Cell Death and Expression of Caspase‐3 on Cervical Cancer Cell Line (HeLa Cells). Final Assignment, Faculty of Medicine University of Muhammadiyah Malang. Supervisors: (1) Moch. Ma’roef (2) Desy Andari.
Background : Cervical cancer in Indonesia is second rank after breast cancer and causes 50% of the total patients with cervical cancer. To treat cervical cancer requires sufficiently large cost so that need for alternative treatment through herbal medicine. Green tea contains of quercetin and EGCG that are able to induce apoptosis through inhibition of the cell division cycle and increase proteins pro‐apoptosis.
Result and Discussion : All doses of green tea extract could significantly increase cell death and the expression of activated caspase‐3 (ANOVA p <0.05) with a significance of 0.000. Pearson correlation test with a significance of 0.000 (p <0.05) showed a significant relationship between the dose of green tea extract with an increase in cell death and the expression of caspase‐3, the strength of the correlation is very strong with positive direction.
Conclusion : Green tea extract may increase cell death and the expression of caspase‐3 in cervical cancer cell line (HeLa Cells).
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ... i
LEMBAR PENGESAHAN ... ii
LEMBAR PENGUJIAN ... iii
KATA PENGANTAR ... iv
ABSTRAK ... vi
ABSTRACT ... vii
DAFTAR ISI ... viii
DAFTAR GAMBAR ... xii
DAFTAR TABEL xiii DAFTAR GRAFIK ... xiv
DAFTAR SINGKATAN ... xv
DAFTAR LAMPIRAN ... xvi
BAB 1 PENDAHULUAN ... 1
1.1. Latar Belakang ... 1
1.2. Rumusan Masalah ... 3
1.3. Tujuan Penelitian ... 3
1.3.1. Tujuan Umum ... 3
1.3.2. Tujuan Khusus ... 3
1.4. Manfaat Penelitian ... 4
1.4.1. Manfaat Akademis ... 4
1.4.2. Manfaat Klinis ... 4
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ... 5
2.1.1. Jenis Teh ... 5
2.1.2. Teh Hijau ... 5
2.1.3. Taksonomi Tumbuhan Teh ... 6
2.1.4. Morfologi ... 7
2.1.5. Nama ... 7
2.1.5.1. Sinonim ... 7
2.1.5.2. Nama Daerah ... 7
2.1.5.3. Nama Asing ... 7
2.1.6. Habitat dan Distribusi Geografis ... 7
2.1.7. Kandungan Kimia Teh Hijau ... 8
2.1.8. Quercetin ... 8
2.1.9. Epigallocathechin-3-gallate (EGCG) ... 9
2.2. Kanker Serviks ... 10
2.2.1. Definisi ... 10
2.2.2. Gambaran Histopatologi Kanker Serviks ... 10
2.2.3. Epidemiologi ... 12
2.2.5.4. Penggunaan Kontrasepsi Oral ... 17
2.2.5.5. Aktivitas Seksual ... 18
2.2.5.6. Tingkat Sosial Ekonomi ... 18
2.2.5.7. Tingkat Paritas ... 18
2.2.6. Patogenesis ... 19
2.2.7. Patofisiologi ... 20
2.2.8. Manifestasi Klinis ... 21
2.2.9. Diagnosis ... 21
2.2.10.Stadium, Terapi dan Prognosis ... 22
2.3. Apoptosis ... 24
2.3.2. Jalur Intrinsik ... 26
2.3.3. Jalur Ekstrinsik ... 27
2.3.4. Endoplasmic Reticulum (ER) Stress-Induced Apoptosis ... 27
2.3.5. Caspase-3 ... 28
2.4. Mekanisme Quercetin dan Epigallocathechin-3-gallate (EGCG) sebagai proapoptosis ... 29
2.5. HeLa Cells ... 31
BAB 3 KERANGKA KONSEPTUAL DAN HIPOTESIS ... 32
3.1. Kerangka Konsep ... 32
3.2. Hipotesis ... 34
BAB 4 METODE PENELITIAN ... 35
4.1. Rancangan Penelitian ... 35
4.2. Tempat dan Waktu Penelitian ... 35
4.3. Populasi dan Sampel Penelitian ... 36
4.3.1. Teknik Sampling ... 36
4.3.2. Estimasi Besar Sampel ... 36
4.3.3. Estimasi Pengulangan Penelitian ... 36
4.4. Karakteristik Sampel Penelitian ... 37
4.5. Variabel dan Definisi Operasional ... 37
4.5.1. Variabel Penelitian ... 37
4.5.2. Definisi Operasional Variabel ... 37
4.6. Dasar Penentuan Dosis Ekstrak Teh Hijau ... 39
4.7. Bahan dan Instrumen Penelitian ... 39
4.7.1. Kultur Sel HeLa ... 39
4.7.2. Ekstraksi Teh Hijau ... 40
4.7.3. Uji Kematian Sel dengan MTT Assay ... 41
4.7.4. Uji Imunohistokimia caspase-3 ... 41
4.8. Prosedur Penelitian ... 42
4.8.1. Kultur Sel HeLa ... 42
4.8.2. Ekstraksi Teh Hijau ... 44
4.8.4. Perlakuan dan Kontrol ... 46
4.8.5. Analisis Kematian Sel dengan Menggunakan MTT Assay ... 46
4.8.6. Pengecatan Imunohistokimia caspase-3 ... 47
4.9. Alur Penelitian ... 49
4.10.Analisis Data ... 50
BAB 5 HASIL PENELITIAN DAN ANALISIS DATA ... 52
5.1. Hasil Penelitian ... 52
5.1.1. Hasil Uji Kematian Sel dengan MTT Assay ... 52
5.1.2. Hasil Pengecatan Imunohistokimia Caspase-3 ... 53
5.2. Analisis Data ... 55
5.2.1. Uji Normalitas dan Homogenitas ... 55
5.2.2. Uji One-Way ANOVA ... 55
5.2.3. Uji Post Hoc Tukey 5% ... 55
5.2.4. Uji Korelasi Pearson ... 56
5.2.5. Uji Regresi Linier ... 57
BAB 6 PEMBAHASAN ... 59
BAB 7 KESIMPULAN DAN SARAN ... 65
7.1. Kesimpulan ... 65
7.2. Saran ... 66
DAFTAR PUSTAKA ... 67
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Tanaman Teh Hijau ... 6
Gambar 2.2 Struktur Kimia Quercetin ... 9
Gambar 2.3 Struktur Kimia Epigallocatechin-3-gallate ... 10
Gambar 2.4 Struktur Lapisan-Lapisan Epitel Serviks Normal ... 11
Gambar 2.5 Gambar Histopatologi Sel-Sel Serviks ... 12
Gambar 2.6 Human Papilloma Virus ... 14
Gambar 2.7 Grafik Hubungan Umur dengan Insiden dan Prevalensi Kanker Serviks ... 17
Gambar 2.8 Patogenesis Kanker Serviks ... 20
Gambar 2.9 Mikroanatomi Displasia ... 22
Gambar 2.10 Dua Jalur Umum Apoptosis ... 25
Gambar 2.11 Perbedaan Imunohistokimia dan Imunofluoresens pada Caspase-3 ... 29
Gambar 2.12 Gambaran Sel HeLa dengan Menggunakan Mikroskop dengan Pengecatan Imunohistologi Caspase-3 ... 31
DAFTAR TABEL
Tabel 2.1 Tipe Human Papilloma Virus dan Manifestasi Klinis yang
Ditimbulkan ... 15
Tabel 2.2 Tipe Genom Human Papilloma Virus dan Fungsinya ... 15
Tabel 2.3 Stadium FIGO, Terapi, Prognosis Selama 5 Tahun pada
Kanker Serviks ... 23
Tabel 5.1 Hasil Tingkat Absorbansi MTT Assay yang Dibaca dengan
ELISA Reader ... 52
Tabel 5.2 Hasil Prosentase Perhitungan Jumlah Sel yang
Mengekspresikan Caspase-3 dibandingkan dengan Sel yang Tidak Mengekspresikan Caspase-3 ... 54
Tabel 5.3 Analisis Post Hoc Multiple Comparison MTT Assay ... 55
Tabel 5.4 Analisis Post Hoc Multiple Comparison Ekspresi Caspase-3 .... 56
Tabel 5.5 Analisis Korelasi Pearson Uji Kematian Sel ... 56
DAFTAR GRAFIK
Grafik 5.1 Hasil Rata-Rata Tingkat Absorbansi MTT Assay terhadap
Berbagai Konsentrasi Ekstrak Teh Hijau ... 52
Grafik 5.2 Hasil Rata-Rata Prosentase Jumlah Sel yang Mengekspresikan Caspase-3 dibandingka dengan sel yang Tidak
Mengekspresikan Caspase-3 ... 54
Grafik 5.3 Grafik Linier Data Kematian Sel dengan Persamaan Y =
0,045X + 0,147 ... 59
DAFTAR SINGKATAN
AIF : Apoptosis Inducing Factor ANOVA : Analysis of Variance
APAF-1 : Apoptotic protease activating factor-1
Bax : Bcl-2 Antagonist X
Bcl-2 : B-cell CLL/lymphoma 2
Bid : BH3 Interacting Domain
Caspase : Cysteinyl aspartate-specific protease CIN : Cervical intraepithelial neoplasia DAB : 3,3'-diaminobenzidine
DISC : Death-inducing signaling complex DNA : Deoxyribo Nucleic Acid
DR : Death Receptor
EGCG : Epigallocatechin-3-gallate FADD : Fas-associated death domain
FBS : Fetal bovine serum
HGSIL : High Grade Cervical Dysplasia HPV : Human Papillomavirus
IC50 : Inhibition Concentration 50%
LGSIL : Low Grade Squamous Intraepitheliel Lesion TP53 : Tumor-supressor Protein 53
PBS : Phosphate buffer saline
pRb : Retinoblastoma protein
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1 Surat Keterangan Determinasi Tanaman Teh Dinas Kesehatan
Provinsi Jawa Timur UPT Materia Medica Kota Batu ... 75
Lampiran 2 Surat Keterangan Identifikasi Tanaman Teh UPT Balai Konservasi Tumbuhan Kebun Raya Purwodadi ... 76
Lampiran 3 Hasil Uji GCMS (Gas Chromatography Mass Spectrophotometer) Ekstrak Teh Hijau di Laboratorium Kimia Fakultas MIPA Universitas Brawijaya Malang ... 77
Lampiran 4 Hasil Uji LCMS (Liquid Chromatography Mass Spectrophotometer) Ekstrak Teh Hijau di Politeknik Negeri Malang Jurusan Teknik Kimia ... 82
Lampiran 5 Ethical Clearance di Fakultas Kedokteran Brawijaya Malang .... 84
Lampiran 6 Uji Normalitas ... 85
Lampiran 7 Uji Homogenitas ... 86
Lampiran 8 Uji One-Way ANOVA ... 87
Lampiran 9 Post Hoc Test ... 88
Lampiran 10 Homogeneous Subset Tukey 5% ... 89
Lampiran 11 Uji Korelasi Pearson ... 90
Lampiran 12 Uji Regresi Linier ... 91
DAFTAR PUSTAKA
Alabsi, A. M., Ali, R., Ali, A. M., Harun, H., Al-Dubai, S. A., Ganasegeran, K., et al. (2013). Induction of Caspase-9, Biochemical Assessment and Morphological Changes Caused by Apoptosis in Cancer Cells Treated with Goniothalamin Extracted from Goniothalamus macrophyllus. Asian Pacific Journal of Cancer Prevention , 14 (11), 6273-6280.
American Cancer Society. (2011). Cervical Cancer Key Statistic. Retrieved
February 9, 2013, from
http://www.cancer.org/cancer/cervicalcancer/detailedguide/cervical-cancer-key-statistics
Aziz, M. F. (2009). Gynecological Cancer in Indonesia. J Gynecol Oncol , 20 (1), 8-10.
Baghel, S. S., Shrivastava, N., Baghel, R. S., Agrawal, P., & Rajput, S. (2012). A Review of Quercetin : Antioxidant and Anticancer Properties. World Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences , 1 (1), 146-160.
Bekkers, R. (2003). Clinical Value of High Risk HPV detection in the Management of Cervical Intraepithelial Neoplasia. International Journal of Cancer .
Blazquez, S., Sirvent, J. J., Olona, M., Aguilar, C., Pelegri, A., Garcia, J. F., et al. (2006). Caspase-3 and Caspase-6 in Ductal Breast Carcinoma: a Descriptive Study. Journal of Histology and Histopathology , 21, 1321-1329.
Blumenthal, P. D., & McIntosh, N. (2005). Cervical Cancer Prevention : Guideline for Low-Resource Settings. Jhpiego .
Braun, S., Reimer, D., Strobi, I., Wieland, U., Wiesbauer, P., Muller-Holzner, E., et al. (2011). Fatal Invasive Cervical Cancer Secondary to Untreated Cervical Dysplasia: A Case Report. Journal of Medical Case Reports , 5 (1), 316-320.
Breast and Cervical Cancer Control Program. (2007). Cost of Advance Stage. Michigan.
Chakraborty, S., Kundu, T., Dey, S., Bhattacharya, R. K., Siddiqi, M., & Roy, M. Therapeutic Efficacy of Temozolomide in Orthotopic Mouse Glioblastoma Models. Cancer Letters , 302, 100-108.
Ciesielska, U., Nowinska, K., Podhorska-Okolow, M., & Dziegiel, P. (2012). The Role of human Papillomavirus in the Malignant Transformation of Cervix Epithelial Cells and the Importance of Vaccination Against this Virus. Advance Clinical Experiment Medicine , 21 (2), 235-244.
College of American Pathologist. (2010). Cervical Cancer: Cervical Squamous
Cell Carcinoma. Retrieved January 27, 2013, from
http://www.cap.org/apps/docs/reference/myBiopsy/cervicalsquamous.pdf Das, C. M., Shah, N., Ghori, A., Khursheed, F., & Zaheen, Z. (2013). Prevalence and Risk Factors for Cervical Intraepithelial Neoplasia in Patients Attending Gynecological Outpatient Departement of Tertiary Care Hospital. Journal LUMHS , 12 (1), 44-48.
DeVita, V. T. (2005). Principle and Practise of Oncology. London, England: Lippincot William and Wilkins.
Dinas Kesehatan Provinsi Jawa Timur-UPT Materia Medica. (2013, April 13). Surat Determinasi Tanaman Teh No: 074/097/A/101.8/2013. Batu, East Java, Indonesia.
Duzgunes, N. (2012). Methods in Enzymology. San Diego: Academic Press. Etienne-Selloum, N. (2013). Polyphenolic Compounds Targating p53-Family
Tumor Supressors: Current Progress and Challenges, Future Aspects of Tumor Supressor Gene. Journal of Medical Oncology .
Faridah, M., Rohana, T., Rohani, A., Malina, O., & Norashiqin, M. (2013). Risk Factors Associated with Cervical Carcinoma Among Women in Malaysia Oncology Ward: A Case Control Study. Scottish Journal of Arts, Social SCiences and Scientific Studies , 14 (1), 1-14.
Ghosh, I., Ghosh, P., Bharti, A. C., Mandal, R., Biswas, J., & Basu, P. (2012). Prevalence of Hman Papillomavirus and Co-Existent Sexually Transmitted Infections Among Female Sex Workers, Men Having Sex with Men and Injectable Drug ABusers from Eastern India. Asian Pacific Journal of Cancer Prevention , 13 (3), 799-802.
Gibellini, L., Pinti, M., Nasi, M., Montagna, J. P., Biasi, S., Roat, E., et al. (2011). Quercetin and Cancer Chemoprevention. Journal of Evidence-Based Complimentary and Alternative Medicine , 1-15.
Globocan. (2008). Cancer (Online). Retrieved January 27, 2013, from http://globocan.iarc.fr/factsheets/populations/factsheet.asp?uno=756 Gomez, D. T., & Santos, J. L. (2007). Human Papillomavirus Infection and
Cervical Cancer: Pathogenesis and Epidemiology. Formatex Journal , 680-688.
Gosslau, A., & Chen, K. Y. (2004). Neutraceuticals, Apoptosis, and Disease Prevention. Journal of Nutrition , 20 (1), 95-102.
Gramza-Michalowska, A., & Regula, J. (2007). Use of Tea Extract (Camellia sinensis) in Jelly Candies as Polyphenols Sources in Human Diet. Asia Pacific Journal of Clinical Nutrition , 16 (1), 43-46.
Granado-Serrano, A. B., Martin, M. A., Bravo, L., Goya, L., & Ramos, S. (2006). Quercetin Induces Apoptosis via Caspase Activation, Regulation of BCL-2, And Inhibition of PI-3-Kinasw/Akt and ERK Pathways in Human Hepatoma Cell Line (HepG2). The Journal of Nutrition (136), 2715-2721.
Hasan, H. (2009). Cervical Cancer : Current and Emerging Trends in Detection and Treatment. New York: Rosen Publishing.
Hellner, K., Mar, J., Fang, F., Quackenbush, J., & Munger, K. (2009). HPV 16 E7 Oncogene Expression in Normal Human Epithelial Cells Causes Molecular Changes Indicative of an Epithelial to Mesenchymal Transition. Journal of Virology , 391, 57-63.
Henderson. (2001). Three-dimensional odel of Human Papilloma Virus. Retrieved
March 4, 2013, from
http://www.prn.org/index.php/provider_resources/prn_art/human_papillo mavirus_virus_hpv_3_d_model/
in Wufeng, a High Incidence Region in China. Asian Pasific Journal of Cancer Prevention , 13 (10), 5299-5302.
Jung, A. C. (2013). Can Liberating p53 from E6 Free Patients from HPV-Related Head and Neck Tumors? Cell Cycle News and Views , 12 (6), 868-869. Kapeu, A. S., Luostarinen, T., Jellum, E., Dillner, J., Hakama, M., Koskela, P., et
al. (2009). Is Smoking an Independent Risk Factor for Invasive Cervical Cancer? A Nested Case-Control Study Within Nordic Biobanks. American Journal of Epidemiology , 169 (4), 480-488.
Karamanou, M., Agapitos, E., Kousoulis, A., & Androutsos, G. (2010). From The Humble Wart to HPV : A Fascinating Strory throughout Centuries. Oncology Review , 4, 133-135.
Kobayashi, T., Masumoto, J., Tada, T., Nomiyama, T., Hongo, K., & Nakayama, J. (2007). Prognostic Significance of The Immunohistochemical Staining of Cleaved Caspase-3, an Activated Form of Caspase-3, in Gliomas. Journal of Clinical Cancer Research , 13, 3868-3874.
Kuhar, M., Imran, S., & Singh, N. (2007). Curcumin and Quercetin Combined with Cisplatin to Induce Apoptosis in Human Laryngeal Carcinoma Hep-2 Cells trhough the Mitochondrial Pathway. Journal of Cancer Molecules , 3 (4), 121-128.
Landry, J., Pyl, P. T., Rausch, T., Zichner, T., Tekkedil, M. M., Stutz, A. M., et al. (2013, March 11). The genomic and Transcriptomic Landscape of HeLa Cell Line. Journal of Genes and Genomes , 1-22.
Lax, S. (2011). Histopathology of Cervical Precursor Lesions and Cancer. Acta Dermatoven , 20 (3), 125-133.
Ledy, G., Catalina, O., Azacena, L., & Catalina, R. (2012). Free Radical Scavenging and Cytotoxic Activity of Five Commercial Standardized Extracts (Red Wine, Green Tea, Pine Bark, Polygonum and Pomegranate). African Journal of Biotechnology , 11 (102), 16725-16730.
Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia-UPT Balai Konservasi Tumbuhan Kebun Raya Purwodadi. (2013, April 18). Surat Keterangan Indentifikasi No. 0640/IPH.3.04/HM/IV/2013. Purwodadi, East Java, Indonesia.
Lopez-Lazaro, M., Calderon-Montano, J. M., Burgos-Moron, E., & Austin, C. A. (2011). Green Tea Constituents (-)-Epigallocatechin-3-Gallate (EGCG) and Gallic Acid Induce Topoisomerase I- and topoisomerase II-DNA Complexes in Cells Mediated by Pyrogallol-Induced Hydrogen Peroxide. Mutagenesis , 26 (4), 489-498.
Ludovici, M., & Bigagli, E. (2009). Biomarkers of Induced Active and Passive Smoking Damage. International Journal of Environmental Research and Public Health , 6, 874-888.
Martin-Hirsch, M., Pierre, L., & Wood, N. J. (2011). Cervical Cancer and Its Facts. Journal of Clinical Evidence , 7, 818-823.
Melino, G., Bernassola, F., Ranalli, M., Yee, K., Zong, W. X., Corazzaro, M., et al. (2004). p73 Induces Apoptosis via PUMA Transactivation and Bax Mitochondrial Translocation. The Journal of Biological Chemistry , 279, 8076-8083.
Min, L. S. (2013). Novel Non-Apoptotic Pathway of Caspase-3 Activation During Mild Oxidative Stress. National University of Singapore, Integrative Sciences and Engineering. Singapore: National University of Singapore. Mutch, D. G. (2009). The New FIGO Staging System for Cancers of The Vulva,
Cervix, Endometrium and Sarcomas. Journal Gynecologic Oncology , 115, 325-328.
Namita, P., Mukesh, R., & Vijay, K. J. (2012). Camellia sinensis (Green Tea): A Review. Global Journal of Pharmacology , 6 (2), 52-59.
Natphopsuk, S., Settheetham-Ishida, W., Sinawat, S., Pientong, C., Yuenyao, P., & Ishida, T. (2012). Risk Factors for Cervical Cancer in Northeastern Thailand: Detailed Analysis of Sexual and Smoking Behaviour. Asian Pacific Journal of Cancer Prevention , 13 (11), 5489-5495.
Pervaiz, U., Khan, A., Khan, N. M., Khan, M. Z., Ikramulhaq, Khan, Q., et al. (2009). The Role of National Tea Research Institute in Tea Production. Sarhad Journal of Agriculture , 25 (2), 349-353.
Qiao, Y., Cao, J., Xie, L., & Shi, X. (2009). Cell Growth Inhibition ang Gene Expression Regulation by (-)-Epigallocatechin-3-gallate in Human Cervical Cancer Cells. Archives of Pharmacal Research , 32 (9), 1309-1315.
Conference on Computer Engineering and Application. New South Wales: IEEE Computer Society.
Raish, M., Husain, S. Z., Bae, S. M., Han, S. J., Park, C. H., Shin, J. C., et al. (2010). Photodynamic Therapy in Combination with Green Tea Polyphenol EGCG Enhances Antitumor Efficacy in Human Papillomavirus 16 (E6/E7) Immortalized Tumor Cells. The Journal of Applied Research , 10 (2), 58-67.
Rastogi, R. P., Richa, & Sinha, R. P. (2009). Apoptosis: Molecular Mechanisms and Pathogenicity. EXCLI Journal , 8, 155-181.
Rodriguez, R. (2011). Oncogenic Potential of Human Papilloma Virus (HPV) and Its Relation with Cervical Cancer. Journal of Virology , 8, 269-278. Schramm, L. (2013). Going Green: The Role of The Green Tea Component
EGCG in Chemoprevention. Journal of Carcinogenesis & Mutagenesis , 4 (2), 1-6.
Seville, L. L., Shah, N., Westwell, A. D., & Chan, W. C. (2005). Modulationn of pRb/E2F Functions in The Regulation of Cell Cycle and in Cancer. Journal of Current Cancer Drug Targets , 5, 159-170.
Singh, G. K., Azuine, R. E., & Siahpush, M. (2012). Global Inequalities in Cervical Cancer Incidence and Mortality are Linked to Deprivation, Low Socioeconomic Status, and Human Development. International Journal of MCH and AIDS , 1 (1), 17-30.
Stanley, M. (2008). Immunobiology of HPV and HPV Vaccines. Journal of Gynecologic Oncology , 109, 15-21.
Subramanian, S. (2010). Cost of Cervical Cancer reatment: Implications for Providing Coverage to Low-Income Women Under The medicaid Expansion for Cancer Care. Women Health Issues , 20 (6), 400-405. Supranto, J. (2000). Teknik Sampling untuk Survei dan Eksperimen. Jakarta,
Indonesia: Penerbit PT Rineka Cipta.
Tierney, B., Westin, S. N., Schlumbrecht, M. P., & Ramirez, P. T. (2010). Early Cervical Neoplasia: Advances in Screening and Treatment Modalities. Clinical Advances in Hematology & Oncology , 8 (8), 547-555.
U.S Cancer Statistics Working Group. (2013). United States Cancer Statistics : 1999-2010 Incidence and Mortality Web-based Report. Atlanta: Departement of Health and Human Services, Center for Disease Control and Prevention, and National Cancer Institute.
Ulug, M., Turk, M., Oguztuzun, S., Menemen, Y., & Kahraman, G. (2011). Apoptotic and Necrotic Effects of Carboxylated Quercetin/Polyethylenimine Complex on HeLa Cells. African Journal of Pharmacy and Pharmacology , 5 (7), 894-902.
Vesco, K. K., Whitlock, E. P., Eder, M., Burda, B. U., Sengel, C. A., & Lutz, K. (2011). Risk Factors and Other Epidemiologic Considerations for Cervical Cancer Screening: A Narrative Review for the U.S. Preventive Services Task Force. Annals of Internal Medicine , 155 (10), 698-706. Vet, J., Kooijman, J., Henderson, F., Aziz, F., Purwoto, G., Susanto, H., et al.
(2012). Single Visit Approach of Cervical Cancer Screening: See and Treat in Indonesia. British Jounal of Cancer , 107 (5), 772-777.
Wang, C., & Youle, R. J. (2009). The Role of Mitochondria in Apoptosis. The Annual Review of Genetics , 43, 95-118.
Wang, L.-F., Kim, D.-M., & Lee, C. Y. (2000). Effect of Heat Processing and Storage on Flavanols and Sensory Qualities of Green Tea Beverage. Jornal of Agriculture Food Chemical , 48 (9), 4227-4232.
Wei, Y., Fan, T., & Yu, M. (2008). Inhibitor of Apoptosis Proteins and Apoptosis. Acta Biochim Biophys Sin , 40 (4), 278-288.
Weinberg, R. (2007). The Biology of Cancer. New York, United States: Garland Sciences, Taylor & Francis Group.
Wong, R. S. (2011). Apoptosis in Cancer: from Pathogenesis to Treatment. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research , 30 (1), 87-100.
World Health Organization. (2010). Cancer. Retrieved January 23, 2013, from http://www.who.int/topics/cancer/en/
Yuan, J., & Li, J. (2008). Caspases in Apoptosis and Beyond. Oncogene Journal , 27, 6194-6206.
Zaveri, N. T. (2006). Green Tea and Its Polyphenolic Catechins: Medicinal Uses in Cancer and Non Cancer Applications. Life Sciences (78), 2073-2080. Zeng, X.-T., Xiong, P.-A., Wang, F., Li, C.-Y., Yao, J., & Guo, Y. (2012).
1
BAB 1
PENDAHULUAN
1.1. Latar Belakang
Kanker serviks adalah tumor ganas primer yang berasal dari metaplasia epitel
di daerah squamocollumnar junction yaitu peralihan mukosa vagina dan mukosa
kanalis servikalis (Hasan, 2009). Seperti halnya sel kanker lain, sel-sel kanker pada
serviks memiliki ciri khas yaitu pertumbuhan dan penyebaran sel yang abnormal,
persisten dan tidak terkendali yang juga mampu menginvasi dan merusak sel normal
di sekitarnya sehingga mengganggu fungsi dari sel yang masih normal (World Health
Organization, 2010). Berdasarkan data dari Center for Disease Control (CDC) pada
tahun 2010 menyebutkan bahwa di Amerika Serikat sebanyak 11.818 wanita telah
terdiagnosis kanker serviks dan 3.939 diantaranya meninggal karena kanker serviks
(U.S Cancer Statistics Working Group, 2013). Pada tahun 2007, penderita kanker
serviks di Indonesia sebesar 3.112 dengan insiden stage III sebanyak 1.392 wanita
(44,7%) dan stage IV sebanyak 177 wanita (5,7 %) (Aziz, 2009). Penelitian lain
yang dilakukan oleh Vet et al. di Indonesia tahun 2012, menunjukkan bahwa pada
22.040 perempuan diantaranya telah terdiagnosis dengan Cervical Intraepithelial
Neoplasia I (CIN I) sebanyak 58,7 % dan CIN II sebesar 29,27% (Vet, et al., 2012).
Oleh karena itu diperlukan terapi-terapi yang sesuai untuk mengurangi angka
kematian akibat kanker serviks.
Terapi kanker serviks selama ini masih sebatas terapi bedah, kemoterapi,
radioterapi dan terapi paliatif. Tetapi penggunaan terapi-terapi tersebut juga banyak
menimbulkan efek samping, misalnya neurotoksik, ototoksik, mual, muntah dan
nefrotoksik (Martin-Hirsch, Pierre, & Wood, 2011). Selain memberikan efek samping
2
diperoleh dari The North Carolina Medicaid menunjukkan bahwa biaya yang
dikeluarkan seorang pasien setelah 6 bulan terdiagnosis adalah sebesar $ 3.807 atau
sekitar lebih dari 36 juta rupiah untuk carsinoma in situ (Subramanian, 2010) dan
data dari Breast and Cervical Cancer Control Program (BCCCP) di Michigan
menunjukkan biaya sebesar $ 24.280 atau sekitar lebih dari 230 juta rupiah per pasien
jika terdiagnosis pada kanker stadium lanjut (Breast and Cervical Cancer Control
Program, 2007).
Beberapa penelitian deskriptif maupun eksperimental pada manusia dan
hewan coba menunjukkan bahwa mengonsumsi teh bisa mengurangi resiko kanker.
Teh merupakan minuman dari seduhan pucuk daun Camellia sinensis (L.)OK. yang
paling banyak diminum setelah air putih. Teh hijau merupakan teh tanpa fermentasi
yang memiliki senyawa polifenol dan flavonoid terbanyak jika dibandingkan dengan
teh hitam dan oolong tea (Cabrera, Artacho, & Gimenez, 2006). Beberapa kandungan
yang terdapat dalam teh sebagai antikanker meliputi senyawa polifenol yaitu
epigallocatechin-3-gallate dan quercetin (Zaveri, 2006). Kedua senyawa tersebut
mampu menjadi antikarsinogenik dengan menekan ekspresi onkogen E6 dan E7 dari
Human Papilloma Virus, menghambat inaktivasi p53, meningkatkan translokasi Bax
ke mitokondria, meningkatkan ekspresi caspase 9 dan caspase 3 serta menyebabkan
pemberhentian siklus pembelahan sel pada fase G1-S dan G2-M sehingga terjadi
peningkatanapoptosis (Granado-Serrano, et al, 2006; Qiao, et al, 2009). Selain itu
keduanya mampu meningkatkan efikasi dari terapi kanker yang sudah ada seperti
cisplatin, photodynamic, dan temozolomide (Kuhar, Imran, & Singh, 2007; Raish, et
3
Berdasarkan data-data diatas, peneliti tertarik untuk membuktikan ekstrak teh
hijau (Camellia sinensis (L.)OK.) sebagai proapoptosis melalui peningkatan kematian
sel dan ekspresi caspase 3 pada cell line kanker serviks (HeLa cell).
1.2. Rumusan Masalah
Apakah ekstrak teh hijau (Camellia sinensis (L.)OK.) dapat meningkatkan
kematian sel dan ekspresi caspase-3 pada cell line kanker serviks (HeLa Cell) melalui
peningkatan apoptosis (proapoptosis)?
1.3. Tujuan Penelitian
1.3.1. Tujuan Umum
Untuk membuktikan efek pro-apoptosis ekstrak teh hijau
(Camellia sinensis (L.)OK.) terhadap cell line kanker serviks (HeLa Cells)
1.3.2. Tujuan Khusus
a. Untuk mengetahui pengaruh ekstrak teh hijau (Camellia sinensis
(L.)OK.) terhadap peningkatan kematian sel cell line kanker
serviks (HeLa Cells).
b. Untuk mengetahui pengaruh ekstrak teh hijau (Camellia sinensis
(L.)OK.) terhadap peningkatan prosentase jumlah cell line kanker
serviks (HeLa Cells) yang mengekspresikan caspase-3.
c. Untuk mengetahui perbandingan dosis ekstrak teh hijau yang
mampu meningkatkan kematian sel dan ekspresi caspase-3 pada
cell line kanker serviks (HeLa Cell) setelah pemberian ekstrak
daun teh hijau (Camellia sinensis (L.)OK.)
1.4. Manfaat Penelitian
4
Dapat digunakan sebagai salah satu dasar penelitian lebih lanjut
terutama tentang manfaat ekstrak teh hijau (Camellia sinensis (L.)OK.)
sebagai proapoptosis terhadap peningkatan kematian sel dan
peningkatan ekspresi caspase-3 pada cell line kanker serviks (HeLa
Cells).
1.4.2. Manfaat Klinis
Dapat memberikan informasi bahwa ekstrak teh hijau dapat dijadikan
sebagai modal terapi adjuvant kanker serviks sehingga teh hijau tidak
hanya dianggap sebagai minuman sehari-hari.
