BAB I BAB I
PENDAHULUAN PENDAHULUAN 1.1
1.1 Latar BelakangLatar Belakang
Mikroba di alam hampir terdapat di semua tempat. Masuknya mikroba ke Mikroba di alam hampir terdapat di semua tempat. Masuknya mikroba ke dalam jaringan tubuh, kemudian berkembang biak dan menimbulkan gejala penyakit dalam jaringan tubuh, kemudian berkembang biak dan menimbulkan gejala penyakit disebut infeksi. Bakteri adalah organisme yang paling banyak jumlahnya dan lebih disebut infeksi. Bakteri adalah organisme yang paling banyak jumlahnya dan lebih tersebar luas dibandingkan makhluk hidup yang lain. Bakteri memiliki ratusan ribu tersebar luas dibandingkan makhluk hidup yang lain. Bakteri memiliki ratusan ribu spesies yang hidup di darat hingga lautan dan pada tempat-tempat yang ekstrim. spesies yang hidup di darat hingga lautan dan pada tempat-tempat yang ekstrim. Bakteri ada yang menguntungkan tetapi ada pula yang merugikan. Bakteri memiliki Bakteri ada yang menguntungkan tetapi ada pula yang merugikan. Bakteri memiliki ciri-ciri yang membedakannya dengan makhluk hidup yang lain. Bakteri adalah ciri-ciri yang membedakannya dengan makhluk hidup yang lain. Bakteri adalah organisme uniselluler dan prokariot serta umumnya tidak memiliki klorofil dan organisme uniselluler dan prokariot serta umumnya tidak memiliki klorofil dan berukuran renik atau mikroskopik.
berukuran renik atau mikroskopik.
Bakteri terdapat ditempat dimana manusia hidup. Terdapat pada udara yang Bakteri terdapat ditempat dimana manusia hidup. Terdapat pada udara yang kita hirup, pada makanan yang kita makan, juga terdapat pada permukaan kulit, pada kita hirup, pada makanan yang kita makan, juga terdapat pada permukaan kulit, pada jari
jari tangan, tangan, pada pada rambut, rambut, dalam dalam rongga rongga mulut, mulut, usus, usus, dalam dalam saluran saluran pernafasan pernafasan dandan pada seluruh
pada seluruh permukaan permukaan yang terbuka yang terbuka dan diandan dianggap sebagggap sebagai flora ai flora normal. normal. Salah satuSalah satu jenis bakteri
jenis bakteri adalahadalah Vibrio choleraeVibrio cholerae dimana bakteri ini merupakan bakteri berbentuk dimana bakteri ini merupakan bakteri berbentuk batang
batang bengkok bengkok seperti kseperti koma dan oma dan berukuran 2berukuran 2 -4-4m. Pada tahun 1883, Robert Kochm. Pada tahun 1883, Robert Koch berhasil
berhasil mengisolasimengisolasi Vibrio choleraeVibrio cholerae dari saluran cerna penderita kolera dandari saluran cerna penderita kolera dan membuktikan bahwa spesies ini merupakan penyebab penyakit kolera.
membuktikan bahwa spesies ini merupakan penyebab penyakit kolera.
Penyakit kolera (cholera) adalah penyakit infeksi saluran usus bersifat akut Penyakit kolera (cholera) adalah penyakit infeksi saluran usus bersifat akut yang disebabkan oleh bakteri
yang disebabkan oleh bakteri Vibrio cholerae, bakteri ini masuk ke dalam tubuhVibrio cholerae, bakteri ini masuk ke dalam tubuh seseorang melalui makanan atau minuman yang terkontaminasi. Bakteri tersebut seseorang melalui makanan atau minuman yang terkontaminasi. Bakteri tersebut mengeluarkan enterotoksin (racunnya) pada saluran usus sehingga terjadilah diare mengeluarkan enterotoksin (racunnya) pada saluran usus sehingga terjadilah diare (diarrhoea) disertai muntah yang akut dan hebat, akibatnya seseorang dalam waktu (diarrhoea) disertai muntah yang akut dan hebat, akibatnya seseorang dalam waktu hanya beberapa hari kehilangan banyak cairan tubuh dan masuk pada kondisi hanya beberapa hari kehilangan banyak cairan tubuh dan masuk pada kondisi dehidrasi.
dehidrasi.
Diagnosa ditegakkan dengan mengisolasi
Diagnosa ditegakkan dengan mengisolasi Vibrio choleraeVibrio cholerae dari serogrup O1dari serogrup O1 atau O139 dari tinja. Jika fasilitas laboratorium tidak tersedia, media transport carry atau O139 dari tinja. Jika fasilitas laboratorium tidak tersedia, media transport carry and blair dapat digunakan untuk membawa atau menyimpan spesimen apus dubur and blair dapat digunakan untuk membawa atau menyimpan spesimen apus dubur
(Rectal Swab). Berdasarkan uraian di atas penting untuk kita mengetahui teknik (Rectal Swab). Berdasarkan uraian di atas penting untuk kita mengetahui teknik pemeriksaan bakteri
pemeriksaan bakteriVibrio choleraeVibrio choleraemenggunakan sampel rectal swab.menggunakan sampel rectal swab.
1.2
1.2 Rumusan MasalahRumusan Masalah 1.2.1
1.2.1 Bagaimana teknik pemeriksaan bakteriBagaimana teknik pemeriksaan bakteri Vibrio choleraeVibrio cholerae dari sampeldari sampel rectal swab pada media
rectal swab pada media Thiosulfate Citrate Bile Salt SucroseThiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose (TCBS)(TCBS) agar?
agar? 1.2.2
1.2.2 Bagaimana hasil pemeriksaan bakteriBagaimana hasil pemeriksaan bakteri Vibrio choleraeVibrio cholerae dari sampeldari sampel rectal swab pada media
rectal swab pada media Thiosulfate Citrate Bile Salt SucroseThiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose (TCBS)(TCBS) agar?
agar? 1.3
1.3 TujuanTujuan 1.3.1
1.3.1 Untuk mengetahui teknik pemeriksaan bakteriUntuk mengetahui teknik pemeriksaan bakteri Vibrio choleraeVibrio cholerae daridari sampel rectal swab pada media
sampel rectal swab pada media Thiosulfate Citrate Bile Salt SucroseThiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose (TCBS).
(TCBS). 1.3.2
1.3.2 Untuk mengetahui hasil pemeriksaan bakteriUntuk mengetahui hasil pemeriksaan bakteri Vibrio choleraeVibrio cholerae daridari sampel rectal swab pada media
sampel rectal swab pada media Thiosulfate Citrate Bile Salt SucroseThiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose (TCBS) agar.
(TCBS) agar. 1.4
1.4 ManfaatManfaat
Adapun manfaat dari penelitian ini adalah : Adapun manfaat dari penelitian ini adalah :
1.4.1
1.4.1 Manfaat praktis :Manfaat praktis :
Sebagai sarana informasi untuk mengetahui bagaimana teknik Sebagai sarana informasi untuk mengetahui bagaimana teknik pemeriksaan
pemeriksaan bakteribakteri Vibrio choleraeVibrio cholerae melalui pemeriksaan sampelmelalui pemeriksaan sampel rectal swab pada media
rectal swab pada media Thiosulfate Citrate Bile Salt SucroseThiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose (TCBS)(TCBS) agar.
agar. 1.4.2
1.4.2 Manfaat Manfaat teoritis teoritis ::
Dengan pembuatan laporan ini diharapkan dapat bermanfaat sebagai Dengan pembuatan laporan ini diharapkan dapat bermanfaat sebagai tambahan referensi di bidang mikrobiologi khususnya mengenai tambahan referensi di bidang mikrobiologi khususnya mengenai pemeriksaan bakteri
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Vibr io cholerae 2.1.1 Morfologi
Vibrio choleraemerupakan bakteri gram negatif, berbentuk basil (batang) dan bersifat motil (dapat bergerak), memiliki struktur antogenik dari antigen flagelar H dan antigen somatik O, gamma- proteobacteria, mesofilik dan kemoorganotrof, berhabitat alami di lingkungan akuatik dan umumnya berasosiasi dengan eukariot. Spesies Vibriokerap dikaitkan dengan sifat patogenisitasnya pada manusia, terutama V. choleraepenyebab penyakit kolera di negara berkembang yang memiliki keterbatasan akan air bersih dan memiliki sanitasi yang buruk. V.choleraeditemukan pertama kali oleh ahli anatomi dari Italia bernama Filippo Pacini pada tahun 1854. Namun, penemuan awal ini baru
dikenal luas setelah Robert Koch, yang mempelajari penyakit kolera di Mesir, pada tahun 1883 berhasil membuktikan bahwa bakteri tersebut adalah penyebab kolera (Wikipedia, 2013).
Gambar Vi brio colerae
(http://adhinningtyasrachmawati.blogspot.com/2011/03/tugas-mata-kuliah-dasar- pemberantasan.html)
Kingdom : Bacteria
Phylum : Proteobacteria
Class : Gamma Proteobacteria Ordo : Vibrionales
Famili : Vibrionaceae Genus : Vibrio
Spesies :Vibrio cholerae
Morfologi dari bakteri Vibrio cholera adalah bakteri ini bersifat gram negatif (-) , fakultatif anaerobik, bentuk sel batang dengan ukuran panjang antara 2-3 µm, menghasilkan katalase dan oksidase ,dan bergerak dengan satu flagel pada ujung sel. Tidak memiliki kapsul dan tidak berspora (Anonim, 2012).
2.1.2 Kolera
Kolera adalah penyakit infeksi yang terjadi di saluran pencernaan yang disebabkan oleh bakteri gram negativeVibrio cholera. Kolera adalah penyakit infeksi yang disebabkan oleh Vibrio cholerae dengan manifestasi diare disertai muntah yang akut dan hebat akibat enterotoksin yang dihasilkan bakteri tersebut. Bentuk manifestasi klinisnya yang khas adalah dehidrasi, berlanjut dengan renjatan hipovolemik dan asidosis metabolik yang terjadi dalam waktu yang sangat singkat akibat diare sekretorik dan dapat berakhir dengan kematian bila tak ditanggulangi dengan adekuat. Kolera dapat menyebar sebagai penyakit endemik, epidemik atau pandemik (Soemarsono, 2006).
Penyakit kolera (cholera) adalah penyakit infeksi saluran usus bersifat akut yang disebabkan oleh bakteri Vibrio cholerae, bakteri ini masuk kedalam tubuh seseorang melalui makanan atau minuman yang terkontaminasi. Bakteri tersebut mengeluarkan enterotoksin (racunnya) pada saluran usus sehingga terjadilah diare (diarrhoea) disertai muntah yang akut dan hebat, akibatnya seseorang dalam waktu hanya beberapa hari kehilangan banyak cairan tubuh dan masuk pada kondisi dehidrasi (Dunia Kesehatan, 2008).
Gejala dan tanda penyakit kolera adalah dimana pada orang yang feacesnya ditemukan bakteri kolera mungkin selama 1-2 minggu belum merasakan keluhan berarti, Tetapi saat terjadinya serangan infeksi maka tiba-tiba terjadi diare dan muntah dengan kondisi cukup serius sebagai serangan akut yang menyebabkan samarnya jenis diare yg dialami (Dunia Kesehatan, 20 08).
Akan tetapi pada penderita penyakit kolera ada beberapa hal tanda dan gejala yang ditampakkan, antara lain ialah (Dunia Kesehatan, 2008) :
1. Diare yang encer dan berlimpah tanpa didahului oleh rasa mulas atau tenesmus.
2. Feaces atau kotoran (tinja) yang semula berwarna dan berbau berubah menjadi cairan putih keruh (seperti air cucian beras) tanpa bau busuk ataupun amis, tetapi seperti manis yang menusuk.
3. Feaces (cairan) yang menyerupai air cucian beras ini bila diendapkan akan mengeluarkan gumpalan-gumpalan putih.
4. Diare terjadi berkali-kali dan dalam jumlah yang cuku p banyak
5. Terjadinya muntah setelah didahului dengan diare yang terjadi, penderita tidaklah merasakan mual sebelumnya.
6. Kejang otot perut bisa juga dirasakan dengan disertai nyeri yang hebat.
7. Banyaknya cairan yang keluar akan menyebabkan terjadinya dehidrasi dengan tanda-tandanya seperti ; detak jantung cepat, mulut kering, lemah fisik, mata cekung, hypotensi dan lain-lain yang bila tidak segera mendapatkan penangan pengganti cairan tubuh yang hilang dapat mengakibatkan kematian.
2.1.3 Patogenitas dan Patologi
V. cholerae adalah bakteri patogen terhadap manusia. Jika mediator adalah makanan sebanyak 102-104 organisme diperlukan, karena kapasitas bufer yang cukup dari makanan. Beberapa pengobatan dapat menurunkan kadar asam dalam perut membuat seseorang lebih sensitif terhadap infeksiV. Cholerae (Nophie,
Kolera bukan merupakan infeksi yang invasif. Tidak mencapai aliran darah tetapi tetap di dalam saluran usus.V. Cholerae yang virulen menempel pada mikrovili permukaan sel epitelial. Disana mereka akan memperbanyak dan melepaskan racun kolera (Nophie, 2013).
Toksin dari V. cholerae ditularkan melalui jalur oral. Bila Vibrio berhasil lolos dari pertahanan primer dalam mulut dan tertelan, bakteri ini akan cepat terbunuh dalam asam lambung. Bila Vibrio dapat selamat melalui asam lambung, maka ia akan berkembang di usus halus, ini merupakan medium yang menguntungkan baginya. Untuk hidup dan memperbanyak diri. Jumlahnya bisa mencapai10 per ml cairan tinja. Langkah awal dari pathogenesis terjadinya kolera yaitu menempelnya vibrio pada mukosa usus halus. Penempelan ini dapat terjadi karena adanya membrane protein terluar membrane danadhesion flagella (Nophie, 2013).
Vibrio cholerae merupakan bakteri non-invasif, pathogenesis yang mendasari terjadinya penyakit ini disebabkan oleh enterotoxin yang dihasilkan V. cholerae yang menyebabkan hilangnya cairan dan elektrolit yang massif yang disebabkan oleh kerja toxin pada sel epitel usus halus, terutama pada jejunum (Nophie, 2013).
Enterotoxinadalah suatu protein, yang tahan panas dan tak tahan asam, resisten terhadap tripsin tapi dirusak oleh protease. Patologi penyakit ini dihubungkan denganenterotoksinyang dihasilkan V.cholerae.Toksin Choleramempunyai sub unit A (bersifat toksin) dan sub unit B yang berikatan dengan sel.Sub unit B akan berikatan dengan reseptor GM1, yang terdapat pada sel epitel usus halus. Sub unit A kemudian dapat masuk menembus membrane sel epitel. Sub unit ini memiliki aktifitas Adenosine diphospate (ADP) ribosyltransferase dan menyebabkantransfer ADP ribosedari nicotinamide-adenine dinucleotide (NAD)ke sebuah guanosine triphospate (GTP) binding proteinyang mengatur aktifitasadenilat siklase. Hal ini menyebabkan peningkatan produksicAMP , yang menghambat absorbs NaCl dan merangsang
ekskresi klorida, yang menyebabkan hilangnya air, kalium dan bikarbonat (Nophie, 2013).
Beberapa toxin yang berperan (Nophie, 2013) :
1. Zonula occludens toxin (Zot)meningkatkan permeabilitas mukosa usus halus dengan mempengaruhi struktur tight junction interseluler.
2. Accessory cholera exotoxin (Ace)ditemukan pada tahun 1993 dan diketahui meningkatkan transport ion trans membrane.
2.2 Media Biakan
Media adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat makanan (nutrisi) yang diperlukan mikroorganisme untuk pertumbuhannya. Syarat media yaitu (Hada, 2011) :
1. Media harus mengandung semua nutrisi yang mudah digunakan oleh mikroba 2. Media harus mempunyai tekanan osmosa, tegangan permukaan dan pH yang
sesuai dengan pertumbuhannya
3. Media tidak mengandung zat penghambat kecuali yang sengaja ditambahkan pada media selektif atau one purpose media
4. Media harus steril
5. Temperatur atau suhunya sesuai
Klasifikasi Media (Hada, 2011) antara lain : 1. Media berdasarkan konsistensi yaitu :
a. Media padat
Media yang mengandung agar 15% sehingga setelah dingin media menjadi padat. Contohnya : Urea, KIA, Citrat, TSIA
b. Media setengah padat
Media yang mengandung agar 0,3-0,4% sehingga menjadi sedikit kenyal, tidak padat, tidak begitu cair. Media semisolid dibuat dengan tujuan supaya pertumbuhan mikroba dapat menyebar ke seluruh media tetapi tidak mengalami percampuran sempurna jika tergoyang. Contohnya: SIM, Carry and Blair
Media yang tidak mengandung agar, contohnya adalah NB (Nutrient Broth), LB (Lactose Broth), TSB (Trypticase Soy Broth).
2. Media berdasarkan susunan kimia yaitu (Hada, 2011) : a. Media sintesis
Media yang komposisi zat kimianya diketahui jenis dan takarannya secara pasti, misalnya Glucose Agar, Mac Conkey Agar.
b. Media semi sintesis
Media yang sebagian komposisinya diketahui secara pasti, misanya PDA (Potato Dextrose Agar) yang mengandung agar, dekstrosa dan ekstrak kentang. Untuk bahan ekstrak kentang, kita tidak dapat mengetahui secara detail tentang komposisi senyawa penyusunnya.
c. Media non sintesis
Media yang dibuat dengan komposisi yang tidak dapat diketahui secara pasti dan biasanya langsung diekstrak dari bahan dasarnya, misalnya
Tomato Juice Agar, Brain Heart Infusion Agar, Pan creatic Extract. 3. Media berdasarkan fungsi yaitu (Hada, 2011):
a. Media selektif/penghambat
Media yang selain mengandung nutrisi juga ditambah suatu zat tertentu sehingga media tersebut dapat menekan pertumbuhan mikroba lain dan merangsang pertumbuhan mikroba yang diinginkan. Contohnya adalah TCBS,Thayer Martin,SS,BSA
b. Media diperkaya (enrichment)
Media diperkaya adalah media yang mengandung komponen dasar untuk pertumbuhan mikroba dan ditambah komponen kompleks seperti
darah,serum, kuning telur. Media diperkaya juga bersifat selektif untuk mikroba tertentu. Misalnya Blood Tellurite Agar, Bile Agar, Serum Agar. c. Media identifikasi
Media ini bertujuan untuk mengidentifikasi mikroba dari bakteri lainnya yang sama-sama tumbuh dalam media perbenihan berdasar karakter
spesifik yang ditunjukkan pada media diferensial,misalnya TSIA , media uji biokimia.
d. Media penyubur
Media yang menguntungkan pertumbuhan mikroorganisme tertentu karena mengandung bahan-bahan tambahan ataupun bahan penghambat yang menekan tumbuhnya kompetitor. Jenis media ini juga bertujuan untuk meningkatkan jumlah mikroorganisme yang diduga terlalu sedikit dalam bahan sampel, sehingga akan mudah untuk dihitung atau dianalisa lebih lanjut. Misalnya APW 1%,KPD,BHI.
2.3 Sifat Biakan Vibr io cholera
Untuk melakukan isolasi Vibrio, dapat menggunakan media Thiosulfate-Citrate Bile Salts Agar (TCBS) yang merupakan media selektif untuk isolasi dan pemurnianVibrio cholera. Vibrio mampu menggunakan sukrosa sebagai sumber karbon akan berwarna kuning, sedangkan yang lainnya berwarna hijau. Akan tetapi terdapat beberapa mikroba yang juga dapat tumbuh pada media ini, seperti Staphylococcus, Flavobacterium, Pseudoalteromonas, dan Shewanella. Sedangkan untuk perbanyakanVibrio cholerae, dapat digunakan media Alkaline Peptone Water (APW) yang memiliki pH relatif tinggi, yaitu berkisar 8.4 dan mengandung NaCl sebesar 1-2%. Adapun pertumbuhan optimum Vibrio adalah pada suhu berkisar antara 20-350C (Anonim, 2012).
Vibrio cholerae membentuk koloni yang konveks, halus, bulat, opak, dan bergranula pada sinar cahaya. Vibrio cholera tumbuh dengan baik pada suhu 370C. Pada berbagai pembenihan, termasuk pembenihan khusus yang mengandung garam-garam mineral dan asparagin sebagai sumber karbon dan nitrogen. Vibrio cholera tumbuh baik pada media Thiosulfate-Citrate Bile Salts Agar (TCBS), yang akan menghasilkan koloni berwarna kuning. Bersifat oksidase positif. Ciri khasnya, organisme ini tumbuh pada pH (8,5
–
9,5) dan dengan cepat dibunuh oleh asam. Oleh karena itu, biakan yang mengandung karbohidrat yang dapat diragikan akan cepat menjadi steril (Anonim, 2012).BAB III
METODE PENELITIAN
3.1 Waktu dan Tempat
Praktikum ini dilakukan melalui 3 (tiga) tahap sebagai b erikut :
No. Hari / Tanggal Kegiatan Tempat
1. Rabu / 5 Juni 2013
Pembuatan media TCBS agar, TSI Agar, Simmons Citrate Agar dan SIM
Lab. Bakteriologi Jurusan Analis Kesehatan, Poltekkes Denpasar 2. Rabu / 12 Juni 2013
Penanaman sampel rectal swab pada media TCBS agar
Lab. Bakteriologi Jurusan Analis Kesehatan , Poltekkes Denpasar 3. Kamis / 15 Juni 2013
Pengamatan Spesimen rectal swab pada media TCBS agar setelah diinkubasi 1x 24 jam
Lab. Bakteriologi Jurusan Analis Kesehatan, Poltekkes Denpasar
3.2 Alat dan Bahan : a. Alat :
2. Lampu spiritus 3. Pinset 4. Aluminium foil 5. Spatel/sendok 6. Neraca Analitik 7. Plate
8. Tabung reaksi 10 ml dan 15 ml 9. Pipet ukur 5 ml 10. Ball pipet 11. Gelas ukur 250 ml 12. Batang pengaduk 13. Gelas beaker 50 ml 14. Kompor listrik 15. Autoclave 16. Kapas lemak 17. Lap 18. Tissue b. Bahan :
1. Sampel rectal swab
2. Bubuk TCBS OXOID CM 0333
3. Bubuk Sulfite Indole Motility OXOID 4. Bubuk Simmons Citrate Agar OXOID 5. Bubuk Triple Sugar Iron Agar OXOID 6. Aquades steril
3.3 Prosedur Kerja :
a. Pembuatan Media TCBS
1. Ditimbang 17.6 gr bubuk TCBS OXOID CM0333 dalam gelas beaker dengan menggunakan neraca analitik
2. Dimasukkan ke dalam erlenmeyer yang sudah berisi 200 ml aquades steril.
3. Diaduk sampai larut sempurna
4. Erlenmeyer ditutup rapat dengan alumunium foil
5. Dipanaskan sampai larut sempurna (sampai mendidih) dengan menggunakan kompor listrik.
6. Ditunggu hingga suhu media 40-45oC. 7. Dituangkan media ke dalam plate. 8. Media siap digunakan.
Pengerjaan dilakukan dengan alat-alat yang steril.
b. Pembuatan Media TSI Agar
1. Dipersiapkan alat dan bahan yang diperlukan, lalu diberi label erlenmeyer dan tabung reaksi yang akan digunakan.
2. Ditimbang bubuk media TSI sebanyak 3,9 g dengan neraca analitik.
3. Dilarutkan dengan 60 ml aquadest di dalam erlenmeyer sambil diaduk hingga homogen.
4. Ditutup dengan kapas berlemak, lalu dipanaskan dengan kompor listrik hingga media larut sempurna.
5. Dipipet media TSI dengan pipet ukur sebanyak 5 ml, dimasukkan ke dalam tabung reaksi lalu ditutup dengan kapas lemak
6. Media disterilisasi dengan autoclave pada suhu 121oC selama 15 menit.
7. Media dalam tabung reaksi diletakkan pada posisi slant, dibiarkan hingga memadat.
8. Media TSI Agar siap digunakan.
1. Dipersiapkan alat dan bahan yang diperlukan, lalu diberi label erlenmeyer dan tabung reaksi yang akan digunakan.
2. Ditimbang bubuk media SIM sebanyak 1,8 gram dengan neraca analitik.
3. Dilarutkan dengan 60 ml aquadest di dalam erlenmeyer sambil diaduk hingga homogen.
4. Ditutup dengan kapas berlemak, lalu dipanaskan dengan kompor listrik hingga media larut sempurna.
5. Dipipet media SIM dengan pipet ukur sebanyak 5 ml, dimasukkan ke dalam tabung reaksi lalu ditutup dengan kapas lemak.
6. Media disterilisasi dengan autoclave pada suhu 121 0C selama 15 menit.
7. Media SIM siap digunakan.
d. Pembuatan Media Simmons Citrate Agar
1. Disiapkan alat dan bahan yang diperlukan, lalu diberi label erlenmeyer dan tabung reaksi yang akan digunakan.
2. Ditimbang bubuk media Simmons Citrate Agar sebanyak 3,25 g dengan neraca analitik.
3. Dilarutkan dengan aquadest sebanyak 50 ml di dalam erlenmeyer sambil diaduk hingga homogen.
4. Ditutup dengan kapas berlemak, lalu dipanaskan dengan kompor listrik hingga media larut sempurna.
5. Dipipet media Simmons Citrate dengan pipet ukur sebanyak 5 ml lalu dimasukkan kedalam tabung reaksi.
6. Media disterilisasi dengan autoclave pada suhu 121 0C selama 15 menit.
7. Media diletakkan pada posisi slant, dibiarkan hingga memadat. 8. Media simmons citrate agar siap digunakan.
e. Penanaman Sampel Rektal Swab ke Dalam Media TCBS Agar :
1. Alat dan bahan yang diperlukan disiapkan terlebih dahulu
2. Media TCBS agar plate diberi label sesuai nama pasien dan tanggal penanaman.
3. Api Bunsen dinyalakan
4. Lidi kapas yang berisi specimen rectal swab diambil dari dalam botol fial dengan menggunakan pinset lalu dioleskan satu titik pada media TCBS agar.
5. Olesan tersebut kemudian diratakan dengan cara digores menggunakan ose disposible pada media TCBS Agar dengan teknik 4 kuadran.
6. Media TCBS yang telah dioleskan specimen rectal swab diinkubasi mengguakan incubator selama 1 x 24 jam pada suhu 37oC
f. Pembacaan hasil penanaman
1. Alat dan bahan yang diperlukan disiapkan terlebih dahulu 2. Spesimen yang telah diinkubasi diambil dari incubator
3. Media TCBS diamati, dicatat apakah terbentuk pertumbuhan koloni dan diamati ciri-ciri morfologi koloni yang terbentuk secara makroskopis.
3.4 Skema Langkah Kerja Pemeriksaan Vibr io cholera dari Sampel Rectal Swab
Media TCBS Agar, TSI Agar, SIM, dan Simmons Citrate Agar disiapkan untuk media penanaman dan sebagai media uji
biokimia
Media TCBS yang telah dioleskan specimen rectal swab diinkubasi selama 1 x 24 jam pada suhu 37oC
Media diamati secara makroskopis Penanaman sampel pada media
BAB IV
HASIL PENGAMATAN DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Pengamatan
SAMPEL I
Sampel Gambar Keterangan
Sampel 1a, 1b, dan 1 c
- Hasil pengamatan pada media TCBS, tidak terdapat koloni bakteri yang tumbuh.
- Interpretasi : ( - )
SAMPEL 2
Sampel Gambar Keterangan
Sampel 2a, 2b, dan 2c
- Hasil pengamatan pada media TCBS, tidak terdapat koloni bakteri yang tumbuh.
SAMPEL 3
Sampel Gambar Keterangan
Sampel 3a, 3b
- Hasil pengamatan pada media TCBS, tidak terdapat koloni bakteri yang tumbuh
- Interpretasi : ( - )
4.2 Pembahasan
Vibrio cholerae merupakan bakteri gram negatif, berbentuk basil (batang) dan bersifat motil (dapat bergerak), memiliki struktur antogenik dari antigen flagelar H dan antigen somatik O, gamma-proteobacteria, mesofilik dan kemoorganotrof, berhabitat alami di lingkungan akuatik dan umumnya berasosiasi dengan eukariot.
Vibrio cholerae mempunyai ciri-ciri yaitu berwarna kuning, datar, diameter 2-3 mm, warna media berubah menjadi kuning. Karakteristik biokimia adalah mempunyai sifat fermentatif, katalase, oksidase, methyl red dan H2S,
glukosa, laktosa, galaktosa dan manitol positif. Sedangkan sellobiosa, fruktosa, bersifat negatif.
Bakteri Vibrioumumnya memerlukan faktor pertumbuhan yang relatif sedehana dan dapat tumbuh dengan baik dalam media yang mengandung garam mineral dan asparagin sebagai sumber karbon dan nitrogen. Beberapa media
pertumbuhan yang sering digunakan adalah Alkaline Taurocholate Tellurite Agar (ATTA) danThiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose(TCBS) agar.
Vibrio choleraetidak tahan asam dan hidup pada pH optimum 8,5-9,5. Suhu pertumbuhan optimum 370C. Koloni Vibrio cholerae berbentuk cembung, bulat, halus, dan tampak bergranul. Spesies ini meragi laktosa dan manosa tanpa menghasilkan gas. Dalam media pepton, bakteri ini akan membentuk indol, yang dengan asam sulfat akan membentuk warna merah.
Pada praktikum, pemeriksaan bakteri Vibrio dilakukan pada sampel rectal swab yang telah disimpan dan media yang digunakan sebagai media pertumbuhannya adalah media Thiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose Agar
(TCBS). Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Agar (TCBS) merupakan media selektif untuk isolasi dan pemurnian Vibrio. Vibrio mampu menggunakan sukrosa sebagai sumber karbon akan berwarna kuning, sedangkan yang lainnya berwarna hijau. Akan tetapi terdapat beberapa mikroba yang juga dapat tumbuh pada media ini, seperti Staphylococcus, Flavobacterium, Pseudoalteromonas,
and Shewanella. Adapun pertumbuhan optimum Vibrio adalah pada suhu berkisar antara 20- 35oC.
Pemeriksaan dinyatakan positif Vibrio cholerae apabila pada media Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Agar (TCBS) ditemukan koloni sedang sampai besar, berwarna kuning, jernih, smooth, keping, tepinya tipis, dilingkari oleh zona yang berwarna kuning. Adapula koloninya yang berwarna hijau.
Dalam penanaman sampel rectal swab ke media TCBS, sampel lidi kapas pada media carry and blair diambil dengan pinset secara aseptik lalu dioleskan pada agar TCBS. Metode yang digunakan dalam penanaman sampel ini adalah metode cawan gores (streak plate). Penanaman dilakukan dengan cara menghapuskan kapas rectal swab yang telah berisi sampel pada permukaan media dengan membentuk satu lingkaran hapusan pada bagian pinggir media. Kemudian dengan menggunakan ose, hapusan diteruskan ke seluruh bagian media menggunakan teknik penggoresan empat kuadran. Penanaman dilakukan dengan teknik tersebut bertujuan untuk memperkecil adanya pertumbuhan
bakteri yang menumpuk pada media sehingga tidak mempersulit dalam pengamatan koloni bakteri yang tumbuh karena pada praktikum sebelum-sebelumnya dimana penanaman bakteri dilakukan dengan menghapuskan kapas rectal swab ke seluruh bagian permukaan media yang mana dihasilkan pertumbuhan koloni bakteri yang sangat banyak dan bertumpuk sehingga mempersulit pengamatan. Media yang telah diinokulasi kemudian diinkubasi pada inkubator pada suhu 37oC selama 1 x 24 jam.
Hal yang perlu diperhatikan dalam penanaman sampel antara lain : 1. Penanaman sampel ke dalam media TCBS harus dilakukan secara aseptis.
Pengerjaan dilakukan di dekat api bunsen dan dengan APD lengkap.
2. Dalam penanaman, sampel diambil secara aseptis dari media carry and blair dengan pengerjaaan di dekat api bunsen. Lidi kapas diambil dengan pinset dan saat penggoresan juga dilakukan dekat api bunsen.
Setelah proses inkubasi media selama 1 x 24 jam, pengamatan terhadap pertumbuhan bakteri pada media dilakukan. Dari hasil pengamatan secara makroskopis terhadap pertumbuhan koloni sampel rectal swab pada media
Thiosulfate Citrate Bile Salts Agar (TCBS) yang diinkubasi selama 1x24 jam diperoleh hasil negatif terhadap bakteriVibrio cholerae. Pertumbuhan sampel 1, 2, dan 3 pada media Thiosulfate Citrate Bile Salts Agar (TCBS) tidak menunjukkan adanya ciri-ciri pertumbuhan koloniVibrio cholera. Media tampak sama seperti media sebelum penanaman bakteri dilakuakan, dimana tidak terdapat adanya pertumbuhan bakteri sama sekali.
Hal tersebut dapat dipengaruhi oleh beberapa hal seperti :
1. Pertumbuhan bakteri Vibrio cholerae pada media agar secara optimal, tumbuh pada hari ketiga setelah penanaman. Pada praktikum hanya dilakukan inkubasi selama 1 x 24 jam karena waktu praktikum yang tidak mendukung sehingga bakteri kemungkinan belum tumbuh secara optimal pada media.
2. Sampel rectal swab yang diperiksa pada pemeriksaan Vibrio cholera ini merupakan sampel yang telah disimpan pada jangka waktu tertentu pada
kulkas dan sampel ini telah pernah diuji sebelumnya dengan metode gores. Dari kondisi ini kemungkinan sampel yang diuji sudah tidak stabil.
3. Dari teknik penggoresan, ose yang digunakan untuk menggoreskan/menginokulasikan sampel rectal swab sebelumnya didesinfeksi dengan alkohol 70% dan langsung digunakan. Desinfeksi ini mungkin saja masih menyisakan alkohol pada ose, sehingga bakteri yang diinokulasikan tidak dapat tumbuh.
BAB V
PENUTUP
5.1 Simpulan
1. Pemeriksaan bakteri Vibrio cholera dapat dilakukan dengan sampel rectal swab. Pemeriksaa dilakukan melalui pembiakan/penanaman sampel rectal swab pada media selektif Vibrio cholera yaitu media Thiosulfate Citrate Bile Salt Agar (TCBS Agar), yang kemudian diikuti dengan melakukan serangkaian uji biokimia dengan media SIM, TSI Agar dan mediaSimmons Citrate Agar untuk mendukung/konfirmasi bakteri Vibrio cholera melalui uji sifat-sifat dan bakteri yang tumbuh pada media TCBS.
2. Dari pemeriksaanVibrio cholera yang dilakukan pada sampel rectal swab X diperoleh hasil negative, dimana tidak terjadi pertumbuhan bakteri Vibrio cholera pada media selektif TCBS setelah dilakukan inkubasi pada incubator selama 1 x 24 jam pada suhu 37oC.
5.2 Saran
Dalam pelaksanaan praktikum ini sebaiknya praktikan selalu mengutamakan kebersihan dan kesterilan alat yang digunakan. Pemeriksaan bakteri Vibrio cholera hendaknya dilakukan dengan sampel yang terjaga stabilitasnya sehingga diperoleh hasil pemeriksaan yang akurat. Serta pengerjaan dilakukan secara aseptis sehingga tidak terjadi kontaminasi yang nantinya akan berpengaruh terhadap hasil pemeriksaan sampel.
DAFTAR PUSTAKA
Anonim. 2010. Pemeriksaan Rectal Swab. Diakses di :
http://www.scribd.com/doc/45639174/Bakteri-Uas-Pemeriksaan-Rectal-Swab. Diakses pada : Minggu, 13 Mei 2012
Anonim. 2011. Isolasi Mikroorganisme. Diakses di :
http://healthtecnical.blogspot.com/ Diakses pada : Minggu, 13 Mei 2012
Dyane. 2011. Vibrio cholera. Diakses di :
http://dyanelekkodhog.blogspot.com/2011/06/vibrio-cholera.html. Diakses pada : Minggu, 13 Mei 2012
Food Info. 2009. Vibrio Cholerae. Diakses di :
http://www.food-info.net/id/bact/vichol.htm. Diakses pada : Selasa, 22 Mei 2012
Haruya, Ryumaki. TT. Virus Vibrio. Diakses di :
http://ml.scribd.com/doc/57215311/virus-vibrio. Diakses pada : Minggu, 13 Mei 2012
Info Penyakit. 2007. Penyakit Kolera. Diakses di :
http://www.infopenyakit.com/2007/12/penyakit-kolera-cholera.html. Diakses pada : Selasa, 22 Mei 2012
Lesmana, Murad. 2004. Perkembangan Mutakhir Infeksi Kolera. Diakses di : http://www.univmed.org/wp-content/uploads/2011/02/MURAD.pdf. Jurusan Kedokteran Trisakti. Diakses pada : Selasa, 22 Mei 2012
Putri, Ayu Niti Rahayu. 2010. Pemeriksaan Rectal Swab. Diakses di : http://www.scribd.com/doc/50851666/LAPORAN-BAKTERIO. Diakses pada :
Minggu, 13 Mei 2012
Wikipedia. Diakses di : http://id.wikipedia.org/wiki/Vibrio_cholerae. Diakses pada: Minggu, 13 Mei 2012
Wikipedia. Diakses di : http://id.wikipedia.org/wiki/Kolera. Diakses pada : Selasa, 22 Mei 2012.
LAPORAN PRAKTIKUM BAKTERIOLOGI
Pemeriksaan Bakteri
Vi bri o choler ae
dari Sampel Rectal Swab
KELOMPOK III :
Luh Made Ari Mas Purnamasari
(P07134011005)
Ni Wayan Febi Suantari
(P07134011009)
Ni Luh Arnitasari
(P07134011011)
Ni Luh Komang Ita Purnama Sari
(P07134011029)
I Putu Mahendra
(P07134011033)
KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA
POLITEKNIK KESEHATAN DENPASAR
JURUSAN ANALIS KESEHATAN
2013
1. 2. 3. 4. 5.LEMBAR PENGESAHAN
Denpasar, 20 Juni 2013
1. Luh Made Ari Mas Purnamasari 1...
2. Ni Wayan Febi Suantari 2...
3. Ni Luh Arnitasari 3...
4. Ni Luh Komang Ita Purnama Sari 4...
5. I Putu Mahendra 5...
Penanggungjawab Pembimbing I
Mata Kuliah Bakteriologi
