RESPONSI PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI 20 Juni 2014
Waktu: 90 menit
Keterangan: Jawablah pertanyaan di bawah ini dengan jawaban singkat dan jelas! (*) coret yang salah
1. Bakteri Escherichia coli merupakan bakteri Gram negatif berbentuk batang dimana dengan pengecatan Gram akan berwarna : merah sedangkan bakteri Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram positif yang berbentuk coccus bergerombol dan dalam pengecatan Gram menunjukkan warna: biru
2. Proses fiksasi pada pengecatan Gram, dilakukan dengan cara pemanasan di atas lampu Bunsen dan bertujuan untuk : (a) melekatkan sel mikroba ke slide dan (b) mematikan mikroba uji
3. Cat Gram C berisi aseton dan etanol 96% digunakan untuk tujuan mencuci warna ungu (kompleks kristal violet-yod) dari bakteri Gram negatif
4. Safranin adalah komponen utama dari cat Gram D merupakan pewarna yang bersifat counterstain, differential karena digunakan untuk mengidentifikasi / membedakan bakteri Gram negative dari bakteri Gram positif
5. Media padat dibuat dengan menambahkan Agar ke media cair sebanyak 1.5 - 2 %
6. Media Czapex dox termasuk media kompleks. Benar/Salah*. Alasan: Media complex adalah media yang mengandung berbagai sumber karbon (missal: glukosa), air, sumber asam amino dan nitrogen (misal : beef extract, yeast extract, tumbuhan atau kultur protein yang komposisinya tidak diketahui secara pasti). Czapex dox tidak mengandung beef extract, yeast extract, tumbuhan atau kultur protein
7. Penambahan substansi berikut dapat mengubah chemically defined media menjadi complex media. (Lingkari huruf didepan opsi benar)
a. biotin (suatu vitamin) b. K2HPO4 c. Beef extract
d. Yeast extract e. Dextrosa
Alasan: Chemically defined media adalah media pertumbuhan mikroba yang komposisinya secara kimiawi sudah diketahui secara pasti. Penambahan beef extract, yeast extract, tumbuhan atau kultur protein yang komposisinya tidak diketahui secara pasti akan membuat media tersebut dikategorikan menjadi media kompleks
8. Menumbuhkan mikroba menggunakan media cair memiliki kerugian yaitu : Bakteri yang ditumbuhkan pada media cair tidak memperlihatkan karakteristik khusus (missal: bentuk, warna, ukuran koloni) yang memudahkan identifikasi, sehingga ontaminasi pada kultur mikroba dalam media cair akan sulit untuk diketahui.
9. Pada proses pemindahan mikroba dengan teknik aseptis, setelah selesai dipindahkan sumbat/tutup tabung tidak bermasalah apabila tertukar. Benar / Salah*.
Alasan: dapat menyebabkan kontaminasi silang
10. Media yang mengandung Vitamin dan asam-asam amino disterilkan dengan cara : dilewatkan membran filter (sterilisasi menggunakan filter, dengan pori membrane berdiameter 0.2-0.22 µm) Alasan : apabila menggunakan autoklaf maka panas dan tekanan tinggi autoklaf akan merusak vitamin, enzim dan asam amino yang terkandung dalam media. Penggunaan filter dengan ukuran pori 0.2-0.22 µm mampu menyaring bakteri dan fungi sehingga media terbebas dari kontaminasi fungi dan bakteri.
11. Yang disebut dengan waktu sterilisasi/sterilization time/autoclave time adalah waktu pada saat autoklaf mencapai suhu 121˚C dan tekanan 1.5 atm, dan dipertahankan selama lebih kurang 15-20 menit.
12. Pada saat menumbuhkan mikroba pada media padat, piring petri harus diinkubasikan terbalik. Benar / Salah*. Alasan: untuk mencegah kontaminasi yang berasal dari uap air yang menempel di tutup piring petri yang terbentuk selama proses kondensasi. Dengan membalik posisi piring petri saat inkubasi, mikroba pada media tidak akan tertetesi oleh embun/air yeng terbentuk dari proses kondensasi.
13. Metode uji aktivitas anti mikroba difusi padat dilakukan dengan tujuan : mengetahui ada/tidaknya aktivitas antimikroba dari suatu senyawa uji (uji kualitatif).
15. Kelebihan metode bioautografi kontak dibanding metode bioatografi overlay adalah lebih murah karena bioautografi kontak hanya memerlukan 1 lapis Agar (bioatugrafi overlay
memerlukan base Agar dan Top Agar) dan hasilnya dapat langsung diamati tanpa memerlukan
penyemprotan dengan garam tetrazolium MTT.
16. KHM adalah kadar hambat minimum, kadar terkecil yang menunjukkan penghambatan pertumbuhan mikroba dan ditentukan dengan cara visual dengan melihat tabung dengan kadar terkecil yang tampak jernih tanpa pertumbuhan mikroba (dari seri pengenceran sampel uji
pada tabung yang telah dibuat dengan menambahkan mikroba uji dan diinkubasi). Sedangkan
KBM adalah kadar bunuh minimum, kadar terkecil yang menunjukkan aktivitas membunuh mikroba dan ditentukan dengan cara menggoreskan suspensi/larutan dari tabung terduga KHM ke atas media padat dan diinkubasi. Hasil berupa tidak adanya pertumbuhan mikroba dari hasil goresan menunjukkan bahwa kadar terduga KHM merupakan KBM karena tidak satupun mikroba dapat tumbuh.
17. Tabel 1. Data tingkat pertumbuhan bakteri dalam penentuan nilai KHM dan KBM sampel Kadar sampel (µg/ml) Pengamatan 1
18. Dalam penentuan nilai angka lempeng total produk jamu tradisional, dilakukan dengan cara sebagai berikut: sebanyak 1 Gram sampel disuspensikan ke dalam 10 ml ASA, kemudian dibuat pengenceran sehingga konsentrasi sampel 10-1-10-3. Masing-masing tingkat pegenceran, diambil 1 ml dan diinokulasikan dalam media kemudian diinkubasi selama 24 jam dan dihitung jumlah koloni bakteri yang tampak. Hasil penghitungan koloni bakteri terdapat pada tabel 2.
Tabel 2. Jumlah koloni bakteri terhitung pada penentuan nilai angka lempeng total Konsentrasi sampel Cawan 1 Cawan 2
10-1 Tidak terhitung Tidak terhitung
10-2 305 300
Angka Lempeng Total sampel adalah jumlah koloni rata-rata = [(305 + 300)/2] x 102 = 30250
dari pengenceran 102 : Bila pada cawan petri dari kedua tingkat pengenceran yang berurutan
menunjukkan jumlah antara 30 – 300 koloni, maka dihitung jumlah koloni dan dikalikan faktor pengencer kemudian diambil angka rata-rata. Jika pada tingkat pengenceran yang lebih tinggi didapati koloni yang lebih besar dua kali jumlah koloni pada pengenceran dibawahnya, maka dipilih tingkat pengenceran terendah
19. Berdasarkan nilai angka lempeng totalnya, menurut panduan dari Departemen Kesehatan jamu tersebut (soal no 18) memenuhi / tidak memenuhi syarat* karena Jumlah angka lempeng total memenuhi aturan Departemen Kesehatan jika kurang dari 106
20. Pada saat melakukan assay aktivitas antimikroba, kontrol apa saja yang harus disertakan dalam uji? Kontrol media, kontrol pelarut dari sampel, kontrol positif (kontrol antimikroba), kontrol negatif Alasan: Kontrol media untuk menentukan apakah media yang digunakan terkontaminasi/tidak. Kontrol pelarut dilakukan untuk memastikan bahwa aktivitas antimikroba adalah murni karena kemampuan antimikroba sampel dan bukan akibat pengaruh pelarut. Kontrol antimikroba adalah sebagai patokan/standar senyawa yang secara positif memiliki kemampuan antimikroba dan kontrol negative (mikroba dalam media pertumbuhan) sebagai patokan/standar pertumbuhan normal mikroba tanpa adanya pengaruh dari senyawa uji yang mungkin memiliki aktivitas antimikroba.
21. Lengkapilah keterangan mengenai perbedaan teknik streak plate (cawan gores), pour plate (cawan tuang) dan spread plate (cawan sebar) pada tabel berikut ini :
Streak plate Pour plate Spread plate
Letak koloni Dipermukaan media Diseluruh bagian
22. Salah satu cara untuk menentukan jumlah sel dalam suatu kultur bakteri adalah dengan membuat seri pengenceran (serial dilution). Hal ini dikarenakan : jumlah bakteri dalam kultur asli biasanya akan sangat tinggi dan menyulitkan perhitungan jumlah koloni
23. Dari suatu seri pengenceran, tabung pertama berisi suspensi bakteri dengan pengenceran 10-1. Dari tabung pertama diambil sebanyak 100 ul, dimasukkan kedalam tabung kedua dan ditambahkan 900 ul air suling. Faktor pengenceran pada tabung kedua adalah sebesar 10 2
Apabila pengenceran ini dilanjutkan hingga tabung ke lima, maka faktor pengenceran pada tabung ke lima adalah sebesar 10 5
24. Pada skrining primer fungi penghasil antibiotik, media yang digunakan perlu ditambahkan antibiotik antibakteri : streptomysin/kloramfenikol/eritromisin dll dengan tujuan untuk menghindari kontaminasi bakteri dan memungkinkan hanya jamur yang tumbuh
