Deteksi Metilasi Asam Propanoat,2-trimetilsililOksi Trimetilsilil Ester HAsil Derivatisasi 8OHdG dengan GC-=MS.

(1)

DETEKSI METILASI- ASAM PROPANOAT, 2- TRIMETILSILIL

OKSI TRIMETILSILIL ESTER

HASIL DERIVATISASI 8OHDG DENGAN GC-MS

Suaniti, NM1_{., Wrasiati, L.P}2_{., Astitiasih, I.A.R}1_{., Sukmaningsih, A.A.S.A}3_. 1_{Jurusan Kimia FMIPA,}2_{Teknologi Industri Pertanian FTP,}3_{Jurusan Biologi FMIPA}

Universitas Udayana,

Kampus Bukit Jimbaran Badung, Bali e-mail:suanitisr@yahoo.com

ABSTRAK

Kerusakan oksidatif terjadi karena DNA (Deoksiribosa Nukleic Acid) termetilasi dan sebagai marker adalah 8 hidroksi 2 deoksiguanosin (8OHdG) merupakan senyawa dengan rumus molekul C10H13N5O5, dan berat molekul 283,24 g/mol. Salah satu pengotor yang

terdeteksi adalah sebagai asam propanoat atau trimetil silil ester setelah mengalami derivatisasi dengan N,O-Bis (trimetilsilil) asetamida (BSTFA). Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui fragmentasi senyawa asam propanoat trimetilsilil ester. Metode penelitian yang digunakan adalah observasional study dengan cara membandingkan fragmen ion dalam hasil spektrometri massa. Waktu retensi asam propanoat muncul pada 8,27 menit pada pemisahan dengan kromatografi gas dan hasil fragmentasi yang diperoleh dalam penelitian ini dengan puncak dasar adalah m/z 233 (M+). Fragmen spesifik metil muncul pada m/z 219 sebagai M-CH3. fragmen lainnya adalah m/z 191,147, 117, 73, 45.

Kata kunci Asam propanoat, 8OHdG, GC-MS

PENDAHULUAN

(2)

pentosa, dan ikatan fosfat, yang dalam spektrometri massa akan terlihat salah satunya sebagai M+_-CH

3. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui fragmentasi senyawa asam propanoat

trimetilsilil ester.

METODE PENELITIAN

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah 8Hidroksi 2 Deoksiguanosin (8OHdG) standar, Bis (trimetilsilil) trifluoroacetamida (BSTFA), Kolom Solid Phase Extraction(SPE) (Gambar 1). metanol, KH2PO4, pH 7,5, asetonitril (CH3CN), kafein sebagai

standar internal.

Kolom SPE di kalibrasi dengan 10 mL metanol, 10 mL air, dan 10 mL 5 mM KH2PO4, pH 7 (bufer A). Selanjutnya kolom dicuci dengan 3 mL buffer A dan 8OHdG dan

dielusi dengan 3 mL metanol 15% dalam buffer A. Eluat kemudian dicampur dengan 6 mL CH3CN dan disentrifuge 2000g selama 5 menit dan diuapkan sampai kering di bawah vakum

pada 39-40o_{C, residu dilarutkan dengan 0,5 mL metanol (Surong}_{et al}_{., 2001).}

Gambar 1. Solid phase extraction

. Standar 8OHdG dalam metanol tersebut diderivatisasi dengan campuran 50 µL BSTFA dan CH3CN (2:1,v/v) serta ditambahkan 250 µg kafein dalam 1 mL CH3CN kemudian

dipanaskan selama 30 menit pada 100o_{C. Selanjutnya dianalisis dengan GC-MS seperti}

(3)

Gambar 2. Insreumentasi GC-MS

HASIL DAN PEMBAHASAN

Kromatogram pemisahan 8OHdG hasil derivatisasi dengan bis trimetilsilil trifluoro asetamida dan standar internal kafein dengan kromatografi gas spektrometri massa menunjukkan bahwa senyawa 8OHdG secara spesifik muncul pada waktu retensi 7,07 dan 28,47 menit sedangkan kafein sebagai standar internal muncul pada waktu retensi 19,31.

Puncak lainnya adalah puncak asam propanoat muncul pada waktu retensi 8,267 menit.. Hal ini menunjukkan bahwa 8OHdG yang tidak volatil berhasil dianalisis dengan GC-MS, walaupun muncul beberapa hasil samping.seperti asam propanoat. Menurut Rohman, 2007 bahwa derivat silil ini digunakan untuk analisis sampel yang bersifat polar yang tidak mudah menguap, dengan urutan reaktivitas gugus-gugus penerima silil adalah sebagai berikut: alkohol > fenol > asam karboksilat > amina > amida.

Metilasi ditunjukkan oleh terdeteksi senyawa asam propanoat trimetilsilil ester pada waktu retensi 8,267 dengan rumus molekul C9H23O3Si2 dan berat molekul 235. Fragmentasi

muncul dengan m/z 234, 219, 191, 147, 117,73, dan 45 berturut-turut adalah M+_{, M}+_-CH 3,

M+_-C

3H8, M+-C6H16, M+-C8H22, M+-SiC3H9, dan M+-C3H9. Hal ini didukung oleh penelitian

Lin et al., 2004 Sehingga (M+_-CH

3) muncul dalam kromatogram 8OHdG dengan standar

(4)

Gambar 3.

KESIMPULAN

Waktu Retensi asam propanoat trimetilsilil ester muncul pada 8,267 menit, sebagai hasil samping atau pengotor hasil derivatisasi 8 Hidroksi 2 Deoksiguanosin dengan bis trimetilsilil trifluoroacetamida.

Kemungkinan rumus molekul adalah C9H23O3Si2 sebagai hasil dari spektrometri massa,

(5)

UCAPAN TERIMAKASIH

Terima kasih kepada Rektor Universitas Udayana, Lembaga Penelitian dan Pengabdian Kepada Masyarakat atas dana penelitian yang diberikan untuk penelitian ini melalui penelitian Hibah Unggulan Udayana 2012. Ucapan terima kasih kepada berbagai pihak yang telah membantu terlaksananya penelitian ini sehingga berhasil dengan baik.

DAFTAR PUSTAKA

Lin, H.S., Jenner, A.M., Ong, C.N., Hijang, S.H., Whiteman, M., and Halliwell, B. 2004. A High-throughput and sensitive methodology for the quantification of urinary 8-hidroxy-2 deoxyguanosine: measurement with gas chromatography-mass spectrometry after single solid-phase extraction. Journal Biochem. Britain. 380:541-548.

Rohman, A. (Pengantar Sudjadi). 2007. Kimia Farmasi Analisis. Pustaka Pelajar. Yogyakarta. E-mail:pustakapelajar@telkom.net. ISBN: 978-979-1277-57-0