PENGEMBANGAN METODE STANDARDISASI
TABLET EKSTRAK KURKUMIN DENGAN METODE
FINGERPRINT
KLT-SPEKTROFOTODENSITOMETRI
SKRIPSI
I GUSTI LANANG BAGUS WIRAJAYA
1208505075
JURUSAN FARMASI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS UDAYANA
ii
PENGEMBANGAN METODE STANDARDISASI
TABLET EKSTRAK KURKUMIN DENGAN METODE
FINGERPRINT
KLT-SPEKTROFOTODENSITOMETRI
SKRIPSI
Skripsi ini diajukan sebagai syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm) di Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana
Oleh
I GUSTI LANANG BAGUS WIRAJAYA
1208505075
Menyetujui:
Mengesahkan:
Ketua Jurusan Farmasi
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
(Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt.)
NIP. 196804201994021001 Pembimbing I
(L. P. Mirah Kusuma Dewi, SF.,M.Sc.,Apt.)
NIP. 197809012008122001
Pembimbing II
(Ni Made Pitri Susanti, S.Farm., M.Si., Apt.)
iii
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa, karena atas berkat rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Pengembangan Metode Standardisasi Tablet Ekstrak Kurkumin Dengan
Metode Fingerprint KLT-Spektrofotodensitometri” tepat pada waktunya. Penyusunan skripsi ini tidak terlepas dari dukungan, saran, dan bimbingan dari berbagai pihak. Maka dari itu, pada kesempatan ini penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada:
1. L. P. Mirah Kusuma Dewi, SF.,M.Sc.,Apt. selaku dosen pembimbing I yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat, bimbingan dan saran dengan sabar selama penulis mengikuti pendidikan di Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana, khususnya dalam penyusunan skripsi.
2. Ni Made Pitri Susanti, S.Farm., M.Si., Apt. selaku dosen pembimbing II yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat, bimbingan dan saran selama penulis mengikuti pendidikan di Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana, khususnya dalam penyusunan skripsi.
3. Drs. Ida Bagus Made Suaskara, M. Si selaku Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.
iv
5. Seluruh dosen dan staf pegawai di Jurusan Farmasi Fakultas MIPA Universitas Udayana yang telah memberikan bantuan kepada penulis selama penyusunan skripsi.
6. Drs. I Gusti Ngurah Anom dan I Gusti Ayu Ngurah Ratnawati, selaku ayah dan ibu tercinta yang telah mengasuh dan membesarkan penulis, membimbing, memberikan doa, cinta, dan motivasi kepada penulis, adik kandung penulis yaitu I Gusti Ngurah Bagus Citapranata yang selalu memberikan motivasi dan dukungan dalam penyusunan skripsi.
7. Teman-teman analisis, Analisis 2012 (Vanadium Spectra), Ibu Nova, dan Ibu Dwi selaku staf Laboratorium Forensik Lembaga Sains dan Kriminologi Universitas Udayana yang memberikan bantuan, semangat dan doa dalam penyusunan skripsi.
8. Seluruh anggota tim profiling, Wiwik, Risma, Purnama, Anggi, Nila, Cokti yang selalu saling mendukung sebagai tim kerja yang solid. Keluarga besar geng buaya dan glure, serta teman terdekat, khususnya Shaine, Krisnawan, Yudi, Eka Fitri, Agastya, Sanjaya, Widiangga, Dipa yang selalu memberikan dukungan, motivasi, doa dan semangat dalam penyusunan skripsi ini.
9. Seluruh teman-teman farmasi angkatan 2012 (Dioscuri Hygeia) atas segala dukungan dan motivasi kepada penulis dalam penyusunan skripsi ini.
v
Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih kurang dari sempurna. Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak yang bersifat membangun sehingga di waktu yang akan datang dapat menjadi lebih baik. Penulis berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak yang memerlukan.
Bukit Jimbaran, Juni 2016
vi
1.3. Tujuan Penelitian ... 4
1.4. Manfaat Penelitian ... 4
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA ... 5
2.1. Marker Kurkuminoid ... 5
2.2. Metode Ekstraksi ... 7
2.2.1 Metode Ekstraksi dengan Sonikasi ... 8
2.2.2 Pelarut Metanol ... 8
2.3. Kromatografi Fingerprint ... 8
vii
2.3.2 Parameter Kromatogram ... 10
2.4. Analisis Kurkumin dengan Metode KLT-Spektrofotodensitometri ... 12
2.5. Validasi Metode Analisis... 13
2.6. Analisis Data... 18
2.6.1 Fungsi Cosinus ... 18
2.6.2 Cross Corelation Function ... 19
2.6.3 Uji Reprodusibilitas Spektrum Kurkumin ... 20
BAB III. METODE PENELITIAN... 21
3.1. Rancangan Penelitian ... 21
3.2. Lokasi dan Waktu Penelitian ... 21
3.3. Alat dan Bahan ... 22
3.3.1 Alat Penelitian ... 22
3.3.2 Bahan Penelitian... 22
3.4. Prosedur Penelitian ... 22
3.4.1 Preparasi Sampel ... 22
3.4.2 Preparasi Larutan Standar dan Pembuatan Kurva Kalibrasi ... 23
3.4.3 Pemilihan Sistem Kromatografi Lapis Tipis ... 23
3.4.4 Optimasi Volume Penotolan Larutan Sampel ... 24
3.4.5 Validasi Metode KLT-Spektrofotodensitometri ... 24
3.4.6 Analisis kualitatif dan Kuantitatif Kurkumin pada Tablet dengan Metode KLT-Spektrofotodensitometri... 27
3.4.7 Analisis Data ... 27
viii
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ... 31
4.1. Deskripsi Sampel ... 31
4.1.1. Tempat Pengambilan Sampel ... 31
4.2. Optimasi Volume Penotolan Larutan Sampel ... 31
4.3. Validasi Metode Analisis... 34
4.3.1. Kekhasan (Spesifisitas) ... 35
4.3.2. Akurasi ... 36
4.3.3. Linieritas ... 37
4.3.4. Presisi ... 38
4.3.5. LOD dan LOQ ... 39
4.4. Analisis Kromatografi Fingerprint Tablet Kurkumin ... 40
4.4.1. Tampilan Visual Plat... 40
4.4.2. Data Kromatogram dan Spektrum UV-Vis... 42
4.5. Variasi Fingerprint ... 44
4.5.1. Variasi Fingerprint akibat Perbedaan Batch... 44
4.5.2. Variasi Spektrum Insitu akibat Variasi Batch Sampel Tablet ... 45
4.6. Penetapan Kadar Kurkumin dalam Sampel Tablet ... 46
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ... 21
5.1. Kesimpulan ... 49
5.2. Saran ... 49
DAFTAR PUSTAKA ... 50
ix
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 3.1 Pengelompokan AUC Puncak Berdasarkan Nilai Rf ... 28
Tabel 4.1 Hasil Uji Optimasi Volume Penotolan... 31
Tabel 4.2 Pengelompokan Nilai Rf dan AUC ... 33
Tabel 4.3 Hasil Uji Kemurnian Spektrum Kurkumin ... 35
Tabel 4.4 Hasil Uji Perolehan Kembali Analit ... 36
Tabel 4.5 Hasil Uji Presisi Intraday dan Interday ... 39
Tabel 4.6 Pengamatan Warna Tampilan Visual Plat ... 41
x
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 2.1. Struktur kimia kurkumin ... 6
Gambar 2.2. KLT fingerprint kurkumin ekstrak Curcuma longa L dengan fase diam Si-60GF254 dan fase gerak CHCl3:C6H6:MeOH (80:15:5), dideteksi dengan UV366 nm ... 6
Gambar 2.3. Spektra standar kurkumin dengan sampel kurkumin pada pemisahan menggunakan KLT dengan fase diam berupa plat silika gel aluminium 60 F254 dan fase gerak toluen : kloroform : metanol (5:4:1), dideteksi pada panjang gelombang 430 nm ... 6
Gambar 2.4. Kromatogram kurkumin dalam ekstrak metanol ... 7
Gambar 2.5. Perhitungan Tailling Factor (Tf) ... 11
Gambar 3.1. Skema umum penelitian ... 30
Gambar 4.1. Kromatrogram ekstrak metanol tablet kurkumin dengan volume penotolan 5 µL (A), 10 µL (B), 15 µL (C) dan standar (D) ... 32
Gambar 4.2. Kurva linieritas kurkumin ... 38
Gambar 4.3. Tampilan visual plat (1 : standar, 2 : sampel, A : pengamatan dibawah sinar matahari, B : pengamatan UV254, C : pengamatan UV366) ... 40
xi
Gambar 4.5. Spektrum tiap puncak pada kromatogram ekstrak metanol tablet kurkumin ... 43 Gambar 4.6. Spektrum senyawa standar kurkumin (A), dan spektrum sampel tablet kurkumin (B) ... 43 Gambar 4.7. Korelasi spektrum sampel tablet kurkumin pada 3 batch yang
xii
DAFTAR SINGKATAN
AUC : Area Under Curve
C : Cosinus
HPLC : High Performance Liquid Chromatography
ICH : International Conference on Harmonisation
IR : Infrared
KLT : Kromatografi Lapis Tipis KV : Koefisien Variasi
LOD : Limit of Detection
LOQ : Limit of Quantification
Rf : Redentation of Factor
Rs : Resolusi
RSD : Relatif Standar Deviasi SD : Standar Deviasi
Tf : Tailling Factor
TLC : Thin Layer Chromatography
UNODC : United Nation Ofice on Drug and Crime
UV : Ultraviolet
xiii
DAFTAR ISTILAH
Adsorpsi : Suatu proses yang terjadi ketika suatu fluida, cairan maupun gas, terikat kepada suatu padatan atau cairan dan akhirnya membentuk suatu lapisan tipis atau film pada permukaannya.
Kemometrik : Disiplin ilmu kimia yang menggunakan matematika dan metode statistic untuk memberikan informasi kimia melalui analisis data kimia.
Kontrol kualitas : Suatu kegiatan untuk memelihara dan meningkatkan suatu produk salah satunya aspek keselamatan melalui proses penelitian.
Kromatografi Fingerprint : Prosedur untuk menunjukkan informasi kimia berupa kromatogram yang digunakan untuk evaluasi dan kontrol kualitas sampel dengan kandungan multikomponen
Kromatografi : Suatu metode pemisahan senyawa-senyawa terlarut oleh proses migrasi pada dua fase yang berbeda, perbedaan mobilitas senyawa disebabkan oleh adanya perbedaan afinitas pada dua fase.
xiv
Simplisia : Bahan alamiah yang digunakan sebagai obat yang belum mengalami pengolahan apapun juga dan kecuali dinyatakan lain simplisia merupakan bahan yang dikeringkan.
Spektrum : Perbandingan massa per muatan (m/z) terhadap kelimpahan dari suatu senyawa.
xv
ABSTRAK
Kurkumin merupakan salah satu komponen bioaktif utama pada spesies
curcuma termasuk kunyit (Curcuma longa L) yang telah dimanfaatkan sebagai
obat herbal. Tablet ekstrak kurkumin sebagai obat herbal memerlukan standardisasi untuk menjamin identitas komponen kimianya. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan metode yang sensitif, cepat dan akurat yang dapat digunakan untuk standardisasi tablet ekstrak kurkumin dalam penilaian mutu obat herbal.
Ekstraksi dilakukan dengan sonikasi menggunakan pelarut metanol. Pemisahan menggunakan sistem KLT-Spektrofotodensitometri tervalidasi. Sampel hasil ekstraksi ditotolkan pada plat silika gel 60 GF254, dielusi dengan
kloroform P dan metanol P (95:5) v/v. Plat diamati dengan sinar matahari, UV254
nm, UV366 nm dan dipindai dengan TLC Scanner 3 (CAMAG) pada panjang
gelombang 210 nm. Tiap bercak dibuat spektrumnya pada panjang gelombang 200-700 nm dan dilakukan penetapan kadar kurkumin menggunakan persamaan regresi linier yang diperoleh dari larutan seri. Analisis data dilakukan dengan menggunakan fungsi kosinus dan cross correlation function.
Seluruh parameter validasi telah memenuhi persyaratan validasi, yaitu nilai spesifisitas > 0,95; presisi dengan nilai KV < 2%; linieritas dengan nilai r 0,9991; LOD dan LOQ masing-masing 11,67 ng dan 30,19 ng; rata-rata persen perolehan kembali dengan rentang 101,04-103,04%. Analisis fungsi kosinus menghasilkan nilai kosinus dengan rentang 96,38-99,95 dan analisis cross correlation function menghasilkan nilai dengan rentang 0,9963-1. Kadar kurkumin yang diperoleh berada pada rentang 1,331-1,342 mg dengan kadar rata-rata sebesar 1,334 mg dan nilai KV 0,385%. Metode KLT-Spektrofotodensitometri dapat digunakan untuk standardisasi tablet ekstrak kurkumin dalam penilaian mutu obat herbal.
xvi
ABSTRACT
Curcumin is one of the main bioactive component of the curcuma species including turmeric (Curcuma longa L) which has been used as an herbal medicine. Curcumin extract tablet as an herbal medicine requires standardization to guarantee the identity of its chemical components. This study aims to find a method that is sensitive, rapid and accurate which can be used to curcumin extract tablet standardization in the quality assessment of herbal medicine.
Extraction was done by sonication using methanol. Separation was used TLC-Spectrophotodensitometry. Sample was spotted on silica gel 60 GF254 plate, eluted with chloroform P: methanol P (95: 5) v/v. Plate was observed with sunlight, UV254nm and UV366nm then scanned with TLC scanner 3 (CAMAG) at
wavelength of 210 nm. Spectrums were made for every spots at wavelength from 200 to 700 nm and the assay curcumin using the linear regression equation derived from the series solution. Data analysis was performed use the cosine function and cross-correlation function.
All parameter validation had appropriate the requirements of the validity which is a specificity > 0,95; precision with KV value < 2%; linearity with r value = 0,9991; LOD and LOQ respectively 11,67 ng and 30,19 ng; average recovery in the range of 101,04 to 103,04%. The cosine function value with a range from 96,38 to 99,95 and the cross-correlation function value with a range from 0,9963 to 1. Curcumin were obtained in the range from 1,331 to 1,342 mg with an average of 1,334 mg and value of KV 0,385%. TLC-Spectrophotodensitometry method can be used to standardization of curcumin extract tablets in the quality assessment of herbal medicine.
